TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y TRƯƠNG THỊ THANH MAI THỰC HIỆN TIÊU BẢN MÔ ĐỘNG VẬT: THỰC QUẢN, RUỘT NON, RUỘT GIÀ, GAN, DẠ DÀY TUYẾN VÀ DẠ DÀY CƠ Luận văn tốt nghiệp Ngành: THÚ Y Cần Thơ, 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Luận văn tốt nghiệp Ngành: THÚ Y THỰC HIỆN TIÊU BẢN MÔ ĐỘNG VẬT: THỰC QUẢN, RUỘT NON, RUỘT GIÀ, GAN, DẠ DÀY TUYẾN VÀ DẠ DÀY CƠ Cán hướng dẫn: ThS. LÊ HOÀNG SĨ Sinh viên thực hiện: TRƯƠNG THỊ THANH MAI MSSV: 3092625 Lớp: Thú Y K35 Cần Thơ, 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài: “Thực tiêu mô động vật: thực quản, ruột non, ruột già, gan, dày tuyến dày cơ”. Sinh viên thực hiện: Trương Thị Thanh Mai, lớp Thú Y K35. Địa điểm: phòng thí nghiệm Mô Động Vật, Bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ. Thời gian thực hiện: từ tháng năm 2013 đến tháng 11 năm 2013. Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2013 Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2013 Duyệt Bộ Môn Duyệt Cán Bộ Hướng Dẫn Lê Hoàng Sĩ Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2013 Duyệt Khoa Nông Nghiệp & SHƯD i LỜI CẢM TẠ Qua năm tháng học tập, phấn đấu thân nhận động viên giúp đỡ người, hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Tôi xin: Thành kính biết ơn! Cha mẹ - người sinh thành, dưỡng dục, không quản ngại khó khăn nuôi khôn lớn tạo điều kiện thuận lợi động viên suốt thời gian qua. Xin chân thành biết ơn! Thầy Lê Hoàng Sĩ thầy Trần Hiền Nhơn dành thời gian quý báu, tận tình dìu dắt, giúp đỡ suốt thời gian làm luận văn tốt nghiệp. Cô Nguyễn Thu Tâm, cố vấn học tập nhắc nhở động viên suốt thời gian học tập trường. Quý Thầy, Cô Bộ môn Thú Y Bộ môn Chăn Nuôi tận tình truyền đạt kiến thức kinh nghiệm vô quý báu với suốt thời gian qua. Xin chân thành cảm ơn! Tất bạn bè lớp Thú Y khóa 35 bên suốt năm tháng giảng đường Đại học. Cuối cùng, xin nói lời cảm ơn đến Hội Đồng dành thời gian đọc xem xét đề tài tốt nghiệp này. Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2013 Trương Thị Thanh Mai ii MỤC LỤC Trang duyệt i Lời cảm tạ . ii Mục lục iii Danh mục hình . v Tóm lược . vi Chương ĐẶT VẤN ĐỀ . Chương CƠ SỞ LÝ LUẬN . 2.1 Tổng quan phương pháp thực tiêu hiển vi 2.2 Cấu tạo vi thể chung ống tiêu hóa . 2.3 Cấu tạo vi thể thực quản, ruột non, ruột già gan thỏ . 2.3.1 Thực quản (Esophagus) 2.3.2 Ruột non (Small intestine) 2.3.3 Ruột già (Large intestine) . 11 2.3.4 Gan (Liver) . 11 2.4 Cấu tạo vi thể dày gia cầm thủy cầm . 14 2.4.1 Dạ dày tuyến (Proventriulus or Glandular Stomach) . 14 2.4.2 Dạ dày (Gizzard of Muscular Stomach) 15 Chương PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Phương Pháp . 16 3.1.1 Địa điểm thực 16 3.1.2 Dụng cụ, trang thiết bị, hóa chất . 16 3.2 Phương Pháp Tiến Hành 16 3.2.1 Lấy mẫu 16 3.2.2 Cố định mẫu 16 3.2.3 Lấy mẫu nhỏ . 17 3.2.4 Rửa mẫu 17 3.2.5 Khử nước 18 3.2.6 Tẩm dung môi trung gian . 18 3.2.7 Tẩm paraffin . 18 3.2.8 Đúc khuôn. 19 iii 3.2.9 Cắt mẫu . 20 3.2.10 Tải hấp mẫu 21 3.2.11 Nhuộm mẫu 22 3.2.12 Dán lamelle dán nhãn 23 3.3 Tiêu chuẩn đánh giá tiêu 24 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 25 4.1 Thực quản . 26 4.2 Ruột non . 28 4.3 Ruột già 29 4.4 Gan . 32 4.5 Dạ dày tuyến . 34 4.6 Dạ dày 35 4.7 Ưu điểm khuyết điểm 37 4.7.1 Ưu điểm 37 4.7.2 Khuyết điểm 37 4.7.3 Khắc phục . 37 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 39 5.1 Kết luận 39 5.2. Đề nghị 39 Tài liệu tham khảo 40 Phụ chương . 41 iv DANH MỤC HÌNH Hình 1. Khuôn Leuckart 20 Hình 2. Máy cắt vi mẫu . 20 Hình 3. Sơ đồ quy trình nhuộm mẫu . 22 Hình 4. Tiêu vi thể thực quản (X10) 25 Hình 5. Tiêu vi thể thực quản (X40) 26 Hình 6. Tiêu vi thể tá tràng (X10) 27 Hình 7. Tiêu vi thể không-hồi tràng (X10) 28 Hình 8. Tiêu vi thể không-hồi tràng (X40) 28 Hình 9. Tiêu vi thể tá tràng (X40) 29 Hình 10. Tiêu vi thể ruột già (X10) 30 Hình 11. Tiêu vi thể ruột già (X40) 31 Hình 12. Tiêu vi thể gan (X10) 31 Hình 13. Tiêu vi thể gan (X40) 32 Hình 14. Tiêu vi thể gan (X40) 32 Hình 15. Tiêu vi thể dày tuyến (X4) 33 Hình 16. Tiêu vi thể dày tuyến (X10) 34 Hình 17. Tiêu vi thể dày tuyến (X40) 34 Hình 18. Tiêu vi thể dày (X10) . 35 Hình 19. Tiêu vi thể dày (X40) . 36 v TÓM LƯỢC Với đề tài “thực tiêu mô động vật: thực quản, ruột non, ruột già, gan, dày tuyến dày cơ” nhằm tạo tiêu vi thể. Những tiêu vi thể quan sát mức tế bào. Trong thời gian thực từ tháng đến tháng 11 năm 2013, phòng thí nghiệm mô động vật, khoa Nông Nghiệp & SHƯD, Đại học Cần Thơ, thực 328 lame chọn 244 lame tiêu hoàn chỉnh. Trong có 31 tiêu thực quản, 42 tiêu ruột già, 42 tiêu ruột non, 55 tiêu gan, 44 tiêu dày tuyến 30 tiêu dày cơ. Qua đó, nắm quy trình thực rút số đặc điểm riêng mẫu so với quy trình chung. Tìm thứ tự thời gian cố định mẫu thích hợp cho loại tổ chức sau: gan, thực quản, dày tuyến thời gian cố định mẫu 24 giờ; ruột già, ruột non, dày thời gian cố định mẫu lâu khoảng 36-48 giờ. vi Chương ĐẶT VẤN ĐỀ Sinh vật hoạt động cách linh hoạt nhờ phối hợp nhịp nhàng hệ quan thể. Trong đó, hệ quan thể có cấu tạo chức khác nên quan có cấu trúc khác nhau. Trong ngành Y nói chung ngành Thú Y nói riêng việc tìm hiểu mức độ gây hại bên sinh lý bất thường thể việc nghiên cứu mức độ cấp tế bào quan trọng. Để nghiên cứu bất thường mô bệnh trước tiên phải nắm rõ cấu trúc mô bình thường. Xuất phát từ lý phân công môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ, tiến hành thực đề tài: “Thực tiêu mô động vật: thực quản, ruột non, ruột già, gan, dày tuyến dày cơ”. Mục tiêu đề tài nhằm:  Đọc mô tả mặt tổ chức học tiêu thực bao gồm: thực quản, ruột non, ruột già, gan ống tiêu hóa thỏ dày tuyến, dày vịt.  Thực tiêu hiển vi có chất lượng phục vụ cho học tập, giảng dạy nghiên cứu. Chương CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Tổng quan phương pháp thực tiêu hiển vi Muốn nghiên cứu cấu trúc tế bào mô kính hiển vi thiếu. Muốn sử dụng kính hiển vi ta phải có tiêu (thiết đồ phiến đồ) có độ dày thích hợp cho phép quan sát kính hiển vi. Có nhiều phương pháp làm tiêu để nghiên cứu phương pháp làm tiêu hiển vi cố định nhuộm màu phương pháp phổ biến dùng xét nghiệm mẫu bệnh so với mẫu đối chứng. Phương pháp làm tiêu cố định nhuộm màu Thực tiêu hiển vi cố định phương pháp tiêu cắt lát nhuộm kép Hematoxylin Eosin Y. Phương pháp nhằm tạo mảnh cắt mỏng, suốt mô quan, cho phép quan sát kính hiển vi. Thêm vào tiêu nhuộm thuốc nhuộm đặc hiệu, phần tiêu có màu khác giúp cho việc quan sát dễ dàng. Tiêu hiển vi cố định thực theo phương pháp phải qua nhiều giai đoạn. Phải thực tốt tất giai đoạn đảm bảo thu tiêu có chất lượng, giai đoạn thực không tốt tiêu thu không đạt chất lượng. Tóm lược quy trình thực sau:  Lấy mẫu Trong phương pháp này, lấy mẫu bước có mục đích lấy tế bào, mô quan thể sống hay chết. Bước lấy mẫu có ý nghĩa to lớn. Vì thực phải tuân thủ số quy tắc sau: - Mẫu phải tươi. - Động tác lấy mẫu phải nhẹ nhàng, tránh gây biến đổi tác nhân học. - Không dùng kẹp phẫu tích kẹp vào vùng cần nghiên cứu, không bóp mạnh, không rửa mẫu. - Khi cắt phải dùng dao sắc cắt theo hướng (đối với mẫu lớn). 4.2 Ruột Non Thực đạt 42 tiêu hoàn chỉnh. Quan sát tiêu vi thể từ gồm: Lớp biểu mô: thuộc loại biểu mô phủ đơn trụ Lớp đệm: tổ chức liên kết thưa có nhiều sợi lưới. Lớp niêm: trơn tạo thành. Lớp hạ niêm mạc: tạo tổ chức liên kết. Lớp cơ: trơn tạo thành chia thành lớp, bên lớp vòng bên lớp dọc. Lớp vỏ ngoài: lớp mô liên kết. Biểu mô phủ đơn trụ Tuyến Lieberkiin Tuyến Brunner Tổ chức liên kết Hình 6. Tiêu vi thể tá tràng (X10) 28 Biểu mô phủ đơn trụ Tuyến Lieberkiin Tổ chức liên kết Lớp trơn Hình 7. Tiêu vi thể không - hồi tràng (X10) Biểu mô phủ đơn trụ Tuyến Lieberkiin Tổ chức liên kết Lớp trơn Hình 8. Tiêu vi thể không – hồi tràng (X40) 29 Lớp biểu mô phủ đơn trụ Tuyến Lieberkiin Tuyến Brunner Lớp trơn Hình 9. Tiêu vi thể tá tràng (X40) 30 4.3 Ruột già Thực đạt 42 tiêu hoàn chỉnh. Quan sát tiêu vi thể từ gồm: Lớp biểu mô: thuộc loại biểu mô phủ đơn trụ xen lẫn tế bào hình đài. Lớp đệm: tổ chức liên kết có mô bạch huyết phong phú. Lớp niêm: trơn tạo thành. Lớp hạ niêm mạc: tạo tổ chức liên kết chứa mô bạch huyết. Lớp cơ: trơn tạo thành. Lớp vỏ ngoài: lớp mô liên kết. Biểu mô phủ đơn trụ Tuyến Lieberkiin Lớp Tổ chức liên kết Hình 10. Tiêu vi thể ruột già (X10) 31 Biểu mô phủ đơn trụ Tuyến Lieberkiin Cơ trơn Hình 11. Tiêu vi thể ruột già (X40) 4.4 Gan Thực đạt 55 tiêu hoàn chỉnh. Quan sát tiêu vi thể từ gồm: Tĩnh mạch gan Tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy Ống dẫn mật Hình 12. Tiêu vi thể gan (X10) 32 Ống dẫn mật Động mạch gan Nang bạch huyết Ống dẫn mật Tĩnh mạch cửa gan Bè Remark Hồng cầu Hình 13. Tiêu vi thể gan (X40) Bè Remark Tĩnh mạch trung tâm Mao mạch Hình 14. Tiêu vi thể gan (X40) 33 4.5 Dạ Dày Tuyến Thực đạt 44 tiêu hoàn chỉnh. Quan sát tiêu vi thể từ gồm: Lớp biểu mô: thuộc loại biểu mô phủ đơn trụ. Lớp đệm: tổ chức liên kết. Lớp niêm: trơn tạo thành. Lớp cơ: trơn tạo thành. Lớp vỏ ngoài: tổ chức liên kết. Biểu mô phủ đơn trụ Tổ chức liên kết Cơ trơn Túi tuyến Lòng túi tuyến Tổ chức liên kết Lớp Hình 15. Tiêu vi thể dày tuyến (X4) 34 Biểu mô phủ đơn trụ Tổ chức liên kết Cơ trơn Ống tuyến Lòng túi tuyến Hình 16. Tiêu vi thể dày tuyến (X10) . Biểu mô phủ đơn trụ Tổ chức liên kết Lòng túi tuyến Ống tuyến Lớp trơn Hình 17. Tiêu vi thể dày tuyến (X40) 35 4.6 Dạ Dày Cơ Thực đạt 30 tiêu hoàn chỉnh. Quan sát tiêu vi thể dày từ gồm: Lớp biểu mô: thuộc loại biểu mô phủ hóa sừng cứng. Lớp biểu mô tuyến: gồm ống tuyến thẳng đứng, ống tuyến đơn xếp thành nhóm 10-20 tuyến. Lớp hạ niêm mạc: tổ chức liên kết có xen lẫn với sợi gân. Lớp cơ: lớp trơn dày, xen kẽ với trơn chồi gân đâm vào. Lớp biểu mô phủ hóa sừng Biểu mô tuyến Ống tuyến Chồi gân Tổ chức liên kết Lớp Hình 18. Tiêu vi thể dày (X10) 36 Biểu mô tuyến Chồi gân Ống tuyến Hình 19. Tiêu vi thể dày (X40) 4.7 Thuận lợi khó khăn 4.7.1 Thuận lợi Qui trình thực tiêu đơn giản, dễ tiến hành. Mẫu bắt màu tốt, có tương phản màu rõ rệt: nhân màu tím tế bào chất màu hồng. Các lớp tổ chức phân biệt kính hiển vi quang học. 4.7.2 Khó khăn Thiếu kinh nghiệm, kỹ năng. Các thiết bị, máy móc hư hỏng máy tẩm paraffin, máy xử lý mẫu. 4.7.3 Khắc phục Đối với paraffin cần phải lọc qua giấy lọc nhiều lần tốt (khoảng 5-10 lần) để loại hết tạp chất có lẫn đó. Thời gian ngâm formol: tổ chức dai, dày ống tiêu hóa cần có thời gian ngâm formol lâu (khoảng 36-48 giờ). 37 Ở gian đoạn ngâm cồn phải ngâm từ nồng độ thấp tới nồng độ cao (70 °, 80°, 90°, 100°, 100°), không nên rút ngắn thời gian cách ngâm cồn có nồng độ cao từ đầu ngâm cồn có nồng độ cao làm tổ chức bị co rúm lại. Thời gian ngâm xylen: tổ chức dai dày cần có thời gian ngâm xylen lâu hơn. Có thể ngâm từ 90 đến 120 phút để xylen ngấm vào mẫu loại cồn mẫu. Thời gian tẩm paraffin: thời gian tẩm paraffin, thời gian tẩm lâu tốt. Mỗi lọ ngâm khoảng 3-4 giờ. Khi paraffin ngấm vào mẫu hoàn toàn loại hết xylen có mẫu. Nhiệt độ thích hợp để tẩm paraffin 5565°C, nhiệt độ 55°C tốc độ paraffin ngấm vào mẫu thấp, nhiệt độ cao phá hủy tổ chức. Để tiết kiệm thời gian lúc đúc khuôn, kim loại ta linh động xếp hai mẫu lúc. Đối với thời gian nhuộm mẫu: tùy vào tổ chức khác có thời gian nhuộm khác không thiết phải giống xác thời gian quy trình nhuộm, tổ chức khác bắt màu khác nhau. Nếu tiêu bắt màu nhạt nên tăng thời gian ngâm Hematoxylin hay Eosin. Khi chuyển lame từ lọ nhuộm sang lọ nhuộm khác phải lau lame giấy thấm nhằm hạn chế trộn lẫn hóa chất với nhau. Theo dõi thường xuyên thay hóa chất tránh lãng phí. Trung bình nhuộm khoảng 50-60 lame tiến hành thay hóa chất lần. Nếu điều kiện không đủ trang thiết bị sử dụng số dụng cụ thủ công để thay như: sử dụng thùng carton bóng đèn dây tóc (60100W) để thay máy lọc tẩm paraffin. Tùy vào diện tích thùng carton mà sử dụng bóng đèn dây tóc hợp lý để nhiệt độ thùng khoảng 55-65°C. 38 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết Luận Bằng phương pháp tiêu cắt lát nhuộm kép Hematoxylin Eosin Y, mục tiêu đề tài “thực tiêu mô động vật: thực quản, ruột non, ruột già, gan, dày tuyến dày cơ” thực hoàn chỉnh. Đã khảo sát phương pháp thực tiêu hiển vi cố định mô động vật thỏ, vịt tìm thứ tự thời gian cố định mẫu thích hợp cho loại tổ chức sau: gan, thực quản, dày tuyến thời gian cố định mẫu 24 giờ; ruột già, ruột non, dày thời gian cố định mẫu lâu khoảng 36-48 giờ. Thời gian ngâm xylen dày lâu khoảng 60 phút/lọ, thực quản, ruột non, ruột già, gan, dày tuyến thời gian ngâm quy trình chung 45 phút/ lọ. Tiêu làm đáp ứng yêu cầu quan sát cấu trúc mô học, phục vụ tốt cho nhu cầu học tập, giảng dạy nghiên cứu. 5.2. Đề Nghị Cần trang bị lại thiết bị hư hỏng máy lọc tẩm paraffin, máy xử lý mẫu máy cắt vi mẫu để phục vụ cho việc nghiên cứu học tập thuận lợi dễ dàng hơn. Thực thêm tiêu vi thể loài khác để so sánh khác biệt. 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Dương Thị Kim Lan, 2010. Thực tiêu vi thể ống tiêu hóa thỏ. Luận văn tốt nghiệp Đại học Cần Thơ. 2. Lăng Ngọc Huỳnh, 2007. Cơ thể gia súc A. Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng. Đại học Cần Thơ 3. Lâm Thị Thu Hương, 2005. Mô phôi gia súc. Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh. 4. Cần Thơ. Lê Hoàng Sĩ, Phan Ngọc Anh, 2000. Tổ chức học động vật. Đại học 5. Mariano S.H.Di Fiore, 1974. Altas of human histology. Lea & Febger. Philadelphia. P396 – 409. 6. Nguyễn Hoàng Phương, 1994. Phương pháp thực tiêu mô động vật. Luận văn tốt nghiệp Đại học Cần Thơ. 7. Nguyễn Như Hiền Vũ Xuân Dũng, 2007. Sinh học thể. Nhà xuất Giáo Dục. 8. Nguyễn Thị Hồng Diễm, 2010. Thực tiêu mô động vật ống tiêu hóa vịt. Luận văn tốt nghiệp Đại học Cần Thơ. 9. Nguyễn Văn Minh, 2011. Đề tài đánh giá chất lượng kỹ thuật vi thể tiêu nhuộm Hematoxylin – Eosin số sở giải phẫu bệnh địa bàn Hà Nội. Luận văn tốt nghiệp trường Đại học Y Hà Nội. 10. Nguyễn Xuân Hoạt Phạm Đức Lộ, 1980.Tổ chức học – Phôi thai học. Nhà xuất Đại học Trung học chuyên nghiệp Hà Nội. 11. Phạm Phan Địch Trịnh Bình, 1998. Mô học. Nhà xuất Y học. 12. Trương Đình Kiệt Phan Chiến Thắng, 1991. Mô học. Trường Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh. 13. Vũ Công Hòe, 1967. Kỹ thuật kính hiển vi thông thường. Nhà xuất Y học Hà Nội. 40 PHỤ CHƯƠNG Bảng 1: Trở ngại, nguyên nhân khắc phục đúc mẫu Trở ngại Block vỡ có nhiều hạt Khắc phục Nguyên nhân Paraffin xấu, không tinh khiết Thay lọc thật kỹ paraffin Mẫu bật khỏi block cắt, block có khí Thao tác đúc khuôn chậm Đúc lại mẫu, thao tác nhanh Mẫu khó cắt hay vỡ mảnh Paraffin cứng Thay paraffin khác mềm Tổ chức bị co rúm lại Nhiệt độ, ẩm độ Paraffin cao 650C Loại bỏ mẫu Khó cắt, tổ chức bị tước Paraffin chưa thấm hoàn toàn Tẩm lại paraffin lâu hơn, xơ vào tổ chức, chưa loại hết cồn loại bỏ mẫu xylen có mẫu dự trữ Bảng 2: Trở ngại, nguyên nhân khắc phục cắt mẫu Trở ngại Nguyên nhân Khắc phục Các mảnh cắt có độ dài không Điều chỉnh máy cắt với tốc độ không thích hợp Mảnh cắt bị cuộn lại không xếp thành băng Mặt trên, khuôn mẫu lưỡi dao không song song Tăng giảm tốc độ quay máy cắt. Điều chỉnh độ dày, mỏng máy cắt độ nghiêng lưỡi dao Điều chỉnh khuôn mẫu Mảnh cắt bị rách, thủng Mẫu bị nứt, vụn nát Dao cắt bị lục, mẻ, dơ Mẫu nước, nhiệt độ paraffin lúc tẩm cao, tốc độ tay quay không phù hợp Mảnh cắt bị vết cưa dính vào dao Paraffin mềm, nhiệt độ phòng nóng Mảnh cắt dính lại khuôn mẫu Dao dơ, độ nghiêng dao chưa đủ 41 cho mặt cắt song song lưỡi dao Lau lưỡi dao thay lưỡi dao Chú ý nồng độ thời gian ngâm cồn nhiệt độ tủ sấy lúc tẩm paraffin Cắt dày hơn, điều chỉnh nhiệt độ máy lạnh xuống Thay dao mới, kiểm tra độ nghiêng dao Bảng 3: Trở ngại, nguyên nhân cách khắc phục tải, hấp nhuộm mẫu Trở ngại Mẫu bị gấp nếp Nguyên nhân Khắc phục Nước chậu tải không đủ nóng Tăng nhiệt độ chậu tải Mẫu bị rách Mẫu bị tuột lúc nhuộm Nhiệt độ nước cao Thêm nước lạnh vào chậu tải Mạnh tay lúc nhuộm Thao tác nhuộm phải chậm, nhẹ nhàng Công Thức Pha Một Số Hóa Chất  Formol trung tính 10% Formalin (37-40%) 100 ml Nước cất 900 ml Sodium phosphat monobasie 4g Sodium phosphat dibasi 6,5g Phẩm nhuộm Hematoxylin: Có nhiều cách pha Hematoxylin, tùy cách nhuộm mà chọn cách pha thuốc. Ở xin trình bày cách pha chế thuốc nhuộm theo Harris: Tinh thể Hematoxylin 5g Cồn tuyệt đối 50 ml Phèn chua 100 g Nước cất 1000 ml Moreuride oxyde 2,5 g Cách pha chế Hematoxylin theo Harris với bước tiến hành sau: Hòa tan Hematoxylin cồn phèn chua nước cất đun sôi, mang khỏi bếp trộn hai dung dịch lại. Đun sôi nhanh không phút, khuấy đều, tắt lửa cho Moreuride oxyde vào từ từ, khuấy đều, đun nhỏ lửa dung dịch có màu tím đậm. 42 Mang khỏi bếp cho vào nước lạnh để làm lạnh nhanh, dung dịch nguội lại lọc trước dùng. Lưu ý: Hematoxylin biến chất (có cặn, nâu đỏ) kết tủa màu nâu đen bên tế bào nhuộm. Để kiểm tra xem dung dịch Hematoxylin có bị loãng biến chất hay không cách nhỏ vài giọt Hematoxylin vào nước ấm, thấy giọt phẩm nhuộm có màu đỏ lúc sau chuyển sang màu tím xanh phẩm nhuộm loãng biến chất phải loại bỏ. Nếu nhỏ giọt phẩm nhuộm vào có màu tím xanh sử dụng (Nguyễn Hoàng Phương, 1994).  Phẩm nhuộm Eosin: Eosin dự trữ: Eosin Y 4g Nước cất 20 ml Hòa tan thêm cồn 95° 80 ml Eosin nhuộm: Eosin dự trữ phần Cồn 80o phần Hòa tan vào cho thêm 0.5 ml acide acetic đậm đặc cho 100 ml dung dịch trước dùng. Chú ý : lắc kỹ Eosin nước cho tan hoàn toàn pha vào cồn. 43 [...]... gồm: Tiêu bản vi thể trên thỏ gồm: thực quản (31 tiêu bản) , ruột non (42 tiêu bản) , ruột già (42 tiêu bản) , gan (55 tiêu bản) Tiêu bản vi thể trên vịt gồm: dạ dày tuyến (44 tiêu bản) , dạ dày cơ (30 tiêu bản) 25 4.1 Thực Quản Thực hiện đạt 31 tiêu bản hoàn chỉnh Quan sát tiêu bản vi thể từ trong ra ngoài gồm: Lớp biểu mô: thuộc loại biểu mô kép lát không sừng hóa Lớp đệm: là tổ chức liên kết thưa Lớp cơ. .. áo cơ: là tổ chức cơ trơn vòng trong, lớp cơ ngoài sắp xếp hỗn loạn - Lớp ngoài: là tổ chức liên kết 2.4 Cấu tạo vi thể dạ dày của gia cầm và thủy cầm Có hai phần: dạ dày tuyến và dạ dày cơ 2.4.1 Dạ dày tuyến (Proventriulus or Glandular Stomach) Thon nhỏ, to hơn thực quản một ít, nằm bên trái của mặt phẳng giữa, là một túi hình bầu dục dài Thành dạ dày tuyến tương đối dày, niêm mạc lót trong của dạ dày. .. 2.4.2 Dạ dày cơ (Gizzard of Muscular Stomach) Dạ dày cơ nối với dạ dày tuyến bởi một eo hẹp, nằm giữa vùng bụng Dạ dày cơ nằm giữa hai thùy của gan và một phần bên cạnh thùy trái của gan Dạ dày cơ giống như một khối cầu dẹp, được bao quanh giống như hai kính lồi, lớp cơ màu đỏ nâu, dày, chắc, khỏe Bề mặt được che phủ bởi một lớp gân chắc, sáng bóng Gân dày ở trung tâm và gân mỏng tại mép của dạ dày cơ. .. Lớp biểu mô: do tổ chức biểu mô hình thành Biểu mô lợp bề mặt niêm mạc thay đổi tùy thuộc chức năng của từng đoạn: biểu mô phủ kép lát không sừng hóa ở miệng, thực quản và hậu môn; biểu mô đơn trụ ở dạ dày và ruột 7 - Lớp đệm: là tổ chức liên kết nằm dưới biểu mô Ở vài đoạn ống tiêu hóa lớp đệm bị chia thành hai phần bởi cơ niêm Trong lớp đệm có chứa tuyến như tuyến dạ dày, tuyến ruột, … - Lớp cơ niêm:... nhờn thực quản, tuyến tá tràng,… Lớp áo giữa (Tunica muscularie) Do tổ chức cơ hình thành gọi là lớp áo cơ Đoạn từ dạ dày trở về miệng đa số là cơ vân, còn từ dạ dày trở xuống đa số là cơ trơn Áo này được chia làm hai lớp: lớp cơ vòng phía trong và cơ dọc phía ngoài Lớp áo ngoài (Tunica serosa) Là một màng bọc tạo bởi mô liên kết thưa 2.3 Cấu tạo vi thể thực quản, ruột non, ruột già và gan thỏ 2.3.1 Thực. .. những sợi cơ trơn Lớp cơ: chia thành 2 lớp, bên trong là lớp cơ vòng và bên ngoài là lớp cơ dọc Lớp vỏ ngoài: là lớp mô liên kết thưa Biểu mô phủ kép lát Tổ chức liên kết Lớp cơ trơn Tuyến thực quản Lớp cơ vòng Lớp cơ dọc Tổ chức liên kết Hình 4 Tiêu bản vi thể của thực quản (X10) 26 Biểu mô phủ kép lát Tổ chức liên kêt Mạch máu Cơ trơn Tuyến thực quản Tổ chức liên kết Lớp cơ trơn Hình 5 Tiêu bản vi thể... lamelle cần thực hiện nhanh để tránh sự xâm nhập của hơi nước trong không khí vào mô Đánh số hiệu ghi rõ thông tin về tiêu bản hiển vi vừa hoàn thành (Phạm Phan Địch và Trịnh Bình, 1998) 2.2 Cấu tạo vi thể chung của ống tiêu hóa Về mặt đại thể, hệ thống ống tiêu hóa bao gồm các thành phần: miệng, hầu, thực quản, dạ dày, ruột non, ruột già và hậu môn Đoạn ống từ thực quản xuống ruột già gọi là ống tiêu hóa... niêm mạc ở thực quản có nhiều tuyến thực quản chính thức Tuyến thực quản chính thức là những tuyến giống với tuyến nước bọt nhỏ và nhầy (Trương Đình Kiệt và Phan Chiến Thắng, 1991) Lớp cơ Một phần tư trên là cơ vân tiếp với các cơ ở hầu Ở phần tư tiếp theo, cơ trơn xuất hiện cùng với cơ vân, dần dần nhiều lên và chiếm đa số, đến hai phần tư dưới thực quản chỉ còn cơ trơn nối tiếp với dạ dày Lớp vỏ... túi tuyến đơn tập hợp lại thành những thùy tuyến Các thùy tuyến này làm cho thành của dạ dày tuyến dày lên Các thùy tuyến có những ống dẫn đến bề mặt của biểu mô phủ đơn trụ Tổ chức liên kết: có 2 dạng là dạng phân bố lỏng lẻo giữa các thùy tuyến và dạng khác là rắn chắc gần như bao trùm các thùy tuyến Lớp áo giữa Lớp áo giữa do cơ trơn tạo thành gồm: lớp cơ dọc ở trong, lớp cơ vòng ở giữa, lớp cơ dọc... tĩnh mạch gan và ống dẫn mật Mẫu dạ dày vịt: - Dạ dày tuyến: lấy ở đoạn giữa dạ dày tuyến 1cm - Dạ dày cơ: lấy ở nơi có cơ nhiều, chia thành hai phần cơ và phần hóa sừng với kích thước 0.5cm x 0.5cm x 1cm Tiếp tục cố định mẫu trong formol 10%, thời gian cố định khoảng 24 giờ nhưng thời gian này còn tùy thuộc vận tốc xuyên thấm, vận tốc cố định của dung dịch, nhiệt độ môi trường, độ dày và cấu trúc mẫu… . 3.2.5 Khử nước 18 3.2.6 Tẩm dung môi trung gian 18 3.2.7 Tẩm paraffin 18 3.2.8 Đúc khuôn. 19 iv 3.2 .9 Cắt mẫu 20 3.2.10 Tải và hấp mẫu 21 3.2.11 Nhuộm mẫu 22 3.2.12 Dán lamelle và dán nhãn. Ruột già 29 4.4 Gan 32 4.5 Dạ dày tuyến 34 4.6 Dạ dày cơ 35 4.7 Ưu điểm và khuyết điểm 37 4.7.1 Ưu điểm 37 4.7.2 Khuyết điểm 37 4.7.3 Khắc phục 37 Chương 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 39 5.1 Kết. 4.7.2 Khuyết điểm 37 4.7.3 Khắc phục 37 Chương 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 39 5.1 Kết luận 39 5.2. Đề nghị 39 Tài liệu tham khảo 40 Phụ chương 41 v DANH MỤC HÌNH Hình 1. Khuôn Leuckart 20