TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG PHẠM THÀNH KHẢI THỰC HIỆN TIÊU BẢN MÔ ĐỘNG VẬT: TUYẾN GIÁP TRẠNG, LÁCH, HẠCH LÂM BA RUỘT, TUYẾN THƯỢNG THẬN VÀ BUỒNG TRỨNG TRÊN THỎ, TỤY TẠNG TRÊN VỊT, TUYẾN FABRICIUS TRÊN GÀ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y Cần Thơ, 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y Tên đề tài: THỰC HIỆN TIÊU BẢN MÔ ĐỘNG VẬT: TUYẾN GIÁP TRẠNG, LÁCH, HẠCH LÂM BA RUỘT, TUYẾN THƯỢNG THẬN VÀ BUỒNG TRỨNG TRÊN THỎ, TỤY TẠNG TRÊN VỊT, TUYẾN FABRICIUS TRÊN GÀ Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiên: ThS. LÊ HOÀNG SĨ PHẠM THÀNH KHẢI MSSV: 3092617 Lớp: Thú Y K35 Cần Thơ, 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài: “Thực tiêu mô động vật: tuyến giáp trạng, lách, hạch lâm ba ruột, tuyến thượng thận buồng trứng thỏ, tụy tạng vịt, tuyến Fabricius gà”. Do sinh viên Phạm Thành Khải lớp Thú Y Khóa 35 thực phòng thí nghiệm mô học thuộc môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại học Cần Thơ thực từ tháng 09 năm 2013 đến tháng 11 năm 2013. Cần Thơ, ngày . tháng .năm Cần Thơ, ngày . tháng .năm Duyệt Bộ môn Cán hướng dẫn Lê Hoàng Sĩ Cần Thơ, ngày . tháng .năm Duyệt khoa Nông Nghiệp & SHƯD i LỜI CẢM TẠ Đầu tiên xin gởi lời cảm ơn chân thành đến thầy Lê Hoàng Sĩ thầy Trần Hiền Nhơn. Nhờ quan tâm, động viên, giúp đỡ tân tình dẫn hai thầy giúp thực tốt đề tài này. Xin cảm ơn cha mẹ, gia đình bạn bè ủng hộ, động viên, giúp đỡ suốt thời gian học tập. Xin cảm ơn toàn thể quý thầy cô trường Đại Học Cần Thơ nói chung tất quý thầy cô thuộc môn Thú y nói riêng. Những người thầy, người cô truyền dạy cho kiến thức vô quý giá suốt thời gian theo học trường. Xin kính chúc tất dồi sức khỏe, thành đạt gặp nhiều may mắn sống. Xin chân thành cảm ơn! ii MỤC LỤC Trang duyệt .i Lời cảm tạ . ii Mục lục iii Danh mục hình .v Tóm luợc vi Chương 1: ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 2: CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1. Một số khái niệm mô học 2.1.1. Mô học .2 2.1.2. Tế bào 2.1.3. Mô 2.1.3.1. Biểu mô 2.1.3.2. Tổ chức liên kết 2.1.3.3. Tổ chức .4 2.1.3.4. Tổ chức thần kinh .4 2.2. Cấu tạo vi thể số tuyến 2.2.1. Tuyến giáp trạng .4 2.2.2. Hạch lâm ba 2.2.3. Lách .6 2.3.3.1. Vị trí chức lách .6 2.2.3.2. Cấu tạo .6 2.2.4. Tuyến thượng thận 2.2.4.1. Vỏ thượng thận 2.2.4.2. Tủy thượng thận .8 2.2.5. Tụy tạng .8 2.2.5.1. Cấu tạo .8 2.2.5.2. Phần ngoại tiết 2.2.5.3. Phần nội tiết .9 2.2.6. Tuyến Fabricius 10 2.2.7. Buồng trứng (noãn sào) 11 2.3. Nguyên tắc phuơng pháp thực tiêu hiển vi . 13 2.3.1 Lấy mẫu 13 2.3.2 Cố định 13 2.3.3 Khử nước 15 2.3.4 Tẩm dung môi trung gian paraffin . 15 2.3.5 Tẩm paraffin 15 2.3.6 Đúc khuôn 15 2.3.7 Cắt lát mỏng . 16 2.3.8 Tải tiêu lên lame. 16 2.3.9 Nhuộm kép Hematoxyline-Eosin Y 16 2.3.10 Dán lamelle: . 17 Chương 3:PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 18 3.1. Phương tiện 18 3.1.1. Địa điểm thực .18 3.1.2. Dụng cụ, trang thiết bị, hóa chất . 18 iii 3.2. Phương pháp tiến hành .18 3.2.1. Lấy mẫu . 18 3.2.2. Cố định mẫu . 18 3.2.3. Lấy mẫu nhỏ . 18 3.2.4. Rửa mẫu . 19 3.2.5. Khử nước . 19 3.2.6. Tẩm dung môi trung gian 19 3.2.7. Tẩm paraffin . 20 3.2.7. Đúc khuôn. . 20 3.2.8.1. Chuẩn bị . 20 3.2.8.2. Tiến hành . 20 3.2.9 Cắt mẫu . 20 3.2.9.1. Chuẩn bị . 20 3.2.9.2. Tiến hành . 21 3.2.10. Tải – hấp mẫu . 21 3.2.10.1. Chuẩn bị 21 3.2.10.2. Tiến hành . 21 3.2.11. Nhuộm mẫu 22 3.2.11.1. Chuẩn bị lọ hóa chất lọ nhuộm .22 3.2.11.2. Sơ đồ tiến hành .22 3.2.12. Dán lamelle – Dán nhãn 23 3.2.12.1. Cố định mẫu keo Canada balsam . 23 3.2.12.2. Dán nhãn 23 3.2.13 Đánh giá chất lượng tiêu . 24 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 25 4.1. Tuyến giáp trạng 25 4.2. Lách .26 4.3. Tuyến thuợng thận . 27 4.4. Tuỵ tạng . 29 4.5. Hạch lâm ba . 30 4.6. Buồng trứng . 32 4.7 Tuyến Fabricius 33 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 37 Tài liệu tham khảo 38 Phụ chương 39 iv DANH MỤC HÌNH Hình 1: Tuyến giáp trạng . Hình 2. Tiêu vi thể lách . Hình 3. Tiêu vi thể tuyến thượng thận. Hình 4. tiêu vi thể tụy tạng 10 Hình 5: tiêu vi thể tuyến Fabricius . 10 Hình 6. Máy cắt vi mẫu 21 Hình 7. Sơ đồ quy trình nhuộm mẫu . 22 Hình 8. Tiêu vi thể tuyến giáp trạng cắt ngang (X40) 25 Hình 9. Tiêu mao mạch quanh nang tuyến tuyến giáp trạng (X40) . 25 Hình 10. Tiêu vi thể lách cắt ngang (X4) . 26 Hình 11. Tiêu vi thể lách cắt ngan (X10) . 26 Hình 12. Tiêu tuyến thượng thận cắt ngang (X10) . 27 Hình 13. Tiêu vi thể vùng cung tuyến thượng thận cắt ngang (X40) 27 Hình 14. Tiêu vi thể vùng dậu tuyến thượng thận cắt ngang (X40) 27 Hình 15. Tiêu vi thể vùng lưới tuyến thượng thận cắt ngang (X40) 28 Hình 16. Tiêu vi thể tủy thượng thận cắt ngang (X10) . 28 Hình 17. Tiêu vi thể tụy tạng cắt ngang (X40) . 29 Hình 18. Tiêu vi thể ống dẫn lớn tụy tạng cắt ngang (X40) 29 Hình 19. Tiêu vi thể động mạch tĩnh mạch tụy tạng (X40) 29 Hình 20. Tiêu vi thể tụy tạng cắt ngang (X40) . 30 Hình 21. Tiêu vi thể hạch lâm ba cắt ngang (X10) . 30 Hình 22. Tiêu vi thể hạt lâm ba hạch lâm ba (X40) . 31 Hình 23. Tiêu thể vi thể miền tủy hạch lâm ba (X40) . 31 Hình 24. Tiêu vi thể buồng trứng cắt dọc (X4) 32 Hình 25. Tiêu vi thể nang noãn sơ cấp phát triển (X40) . 32 Hình 26. Tiêu nang noãn chín buồng trứng cắt dọc (X4) 32 Hình 27. Tiêu vi thể lớp vỏ nang trứng chín (X10) 33 Hình 28. Tiêu vi thể tuyến Fabricius (X4) . 33 Hình 29. Tiêu vi thể tuyến Fabricius (X40) . 33 Hình 30. Làm tan paraffin bếp điện lọc paraffin thùng carton. . 35 v TÓM LƯỢC Với đề tài “Thực tiêu mô động vật: tuyến giáp trạng, lách, hạch lâm ba ruột, tuyến thượng thận buồng trứng thỏ, tụy tạng vịt, tuyến Fabricius gà” tạo tiêu vi thể. Những tiêu quan sát mức cấu tạo tế bào. Trong thời gian từ tháng 09 đến tháng 11 năm 2013, phòng thí nghiệm mô học thuộc môn Thú Y - Khoa Nông nghiệp & SHƯD - Đại học Cần Thơ trang thiết bị hóa chất cần thiết, thực 450 lame tiêu chọn 323 lame tiêu hoàn chỉnh. Trong tiêu mô: tuyến giáp trạng 46 tiêu bản, tuyến thượng thận 37 tiêu bản, lách 49 tiêu bản, hạch lâm ba ruột 43 tiêu bản, tụy tạng 33 tiêu bản, buồng trứng 63 tiêu bản, tuyến Fabricius 52 tiêu bản. Qua rút học kinh nghiệm việc thực tiêu vi thể số đặc điểm riêng mẫu so với quy trình chung. Như tẩm paraffin nên chon paraffin non, lọc tẩm paraffin thùng carton. vi Chương ĐẶT VẤN ĐỀ Cơ thể người động vật thể thống nhất, toàn vẹn hoàn chỉnh. Bất kỳ cấu tạo đảm nhận chức định, ngược lại chức cấu tạo thực hiện, để phù hợp với điều kiện sống. Trong thực tiễn thú y, để tìm hiểu rõ mức độ gây thiệt hại, tổn thương mắc bệnh, chế sinh bệnh,… loại bệnh thể vật nuôi việc khảo sát mức độ tế bào bỏ qua. Nhưng ta muốn khảo sát mức độ tế bào mô bệnh, trước hết ta phải khảo sát mức độ tế bào mô bình thường. Xuất phát từ lý phân công môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp Sinh Học ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ, tiến hành thực đề tài: “Thực tiêu mô động vật: tuyến giáp trạng, lách, hạch lâm ba ruột, tuyến thượng thận buồng trứng thỏ, tụy tạng vịt, tuyến Fabricius gà”. Mục tiêu đề tài: Đọc mô tả mặc tổ chức học tiêu thực bao gồm: tuyến giáp trạng, hạch lâm ba, lách, buồng trứng, tụy tạng, tuyến Fabricius. Thực tiêu mô để phục vụ cho công tác nghiên cứu, giảng dạy học tập. Chương CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1. MỘT SỐ KHÁI NIỆM VỀ MÔ HỌC 2.1.1. Mô học Là khoa học cấu tạo hiển vi siêu hiển vi tất quan, máy thể động vật. 2.1.2. Tế bào Là đơn vị phương diện cấu tạo hoạt động thể sinh vật. Tế bào có hình thái, số lượng, kích thước thay đổi tùy theo loài gia súc. 2.1.3. Mô Là hợp thành tế bào có cấu tạo hình thái chức giống nhau. Có nhóm tổ chức thể động vật: - Biểu mô - Mô liên kết - Mô - Mô thần kinh 2.1.3.1. Biểu mô Là nhóm tế bào bao phủ mặt thể hay lót bên ống, xoang thể sinh vật. Biểu mô phân hóa cao độ tạo thành tuyến. Cấu tạo chung biểu mô - Biểu mô gồm hay nhiều lớp tế bào xếp khít vào nhau. - Dưới lớp biểu mô lớp màng đáy. - Dưới lớp màng đáy tổ chức liên kết mềm. - Biểu mô diện hai mặt khô ướt thể. Nhiệm vụ: - Biểu mô bảo vệ thể hay máy không bị tác động ngoại cảnh làm tổn thương, bị tổn thương chúng phát triển, hàn gắn lại được. - Biểu mô phủ số quan có khả hấp thụ số chất, như: biểu mô ruột, biểu mô bàng quang,… - Biểu mô phủ tuyến tiết số chất giúp cho trình sinh trưởng, phát dục trao đổi chất thể. Đó biểu mô tuyến nội tiết ngoại tiết. Phân loại biểu mô: dựa vào chức cấu trúc người ta chia biểu mô làm hai loại biểu mô phủ biểu mô tuyến. Nang tuyến ngoại tiết Ống Boll Cơ trơn Hình 20. Tiêu vi thể tụy tạng cắt ngang (X40) Quan sát tiêu vi thể tụy tạng từ vào ta nhận thấy: - Vỏ bọc bao lấy tuyến: tổ chức liên kết mềm. - Ống dẫn bao lấy tổ chức liên kết. - Nang tuyến ngoại tiết: có hình chùm nho, bao quanh tuyến trơn. - Ống Boll nối với nang tuyến ngoại tiết. - Đảo langerhans: tập hợp tế bào bao quanh nang tuyến ngoại tiết. - Mỗi tuyến có động mạch tĩnh mạch. 4.5. HẠCH LÂM BA Xoang miền tủy Tổ chức liên kết Hạt lâm ba Hạt lâm ba Trung tâm sinh trưởng Tĩnh mạch Thừng nang Xoang miền vỏ Hình 21. Tiêu vi thể hạch lâm ba cắt ngang (X10) 30 Miền vỏ Hạt lâm ba Trung tâm sinh trưởng Xoang miền vỏ Hình 22. Tiêu vi thể hạt lâm ba hạch lâm ba (X40) Miền tủy Mao quản Thừng nang Xoang miền tủy Hình 23. Tiêu thể vi thể miền tủy hạch lâm ba (X40) Quan sát từ vào có cấu tạo: - Bên bao bọc tổ chức liên kết. - Vỏ có lẫn trơn - Hạch lâm ba gồm miền miền vỏ miền tủy: + Miền vỏ: có nhiều hạt lâm ba xếp thành hàng to nhỏ khác nhau. + Miền tủy: chứa nhiều thừng nang. - Hạt lâm ba riêng lẻ tụ thành đám. - Phần lâm ba tụ tập thừa xen với tổ chức lưới hạch có màu sáng gọi xoang lâm ba. Có hai loại xoang: xoang miền vỏ xoang miền tủy. 31 4.6. BUỒNG TRỨNG Nang noãn thứ cấp Lớp biểu mô phủ Nang noãn nguyên thủy Miền vỏ buồng trứng Miền tủy Nang noãn thứ cấp Mạch quản Hình 24. Tiêu vi thể buồng trứng cắt dọc (X4) Tế bào nang Hình 25. Tiêu vi thể nang noãn sơ cấp phát triển (X40) Màng phóng xạ Noãn Dịch nang Lớp vỏ nang noãn Hình 26. Tiêu nang noãn chín buồng trứng cắt dọc (X4) 32 Noãn bào Màng phóng xạ Lớp hạt Lớp vỏ Hình 27. Tiêu vi thể lớp vỏ nang trứng chín (X10) Quan sát tiên từ vào có cấu tạo sau: - Bên ngoài: lớp biểu mô mầm, gồm tế bào hình hộp. - Miền vỏ chiếm phần lớn buồng trứng, gồm: đám nang noãn nguyên thủy, nang noãn sơ cấp, nang noãn thứ cấp, nang noãn chín. - Nang noãn chín có lớp vỏ: lớp hạt lớp vỏ ngoài. - Miền tủy: gồm mao quản, tổ chức liên kết. 4.7 TUYẾN FABRICIUS Biểu mô phủ đơn trụ Lớp Hạt lâm ba Vùng trung tâm sinh trưởng Hình 28. Tiêu vi thể tuyến Fabricius (X4) Mao quản Biểu mô phủ đơn Vùng vỏ túi tuyến Vùng tủy túi tuyến Lớp đệm Hình 29. Tiêu vi thể tuyến Fabricius (X40) Quan sát tiêu từ ta thấy: 33 - Biểu mô phủ: biểu mô đơn trụ. - Các hạt lâm ba nằm biểu mô xen vào mao quản. - Lớp đệm bao quanh lấy hạt lâm ba, tổ chức liên kết. - Lớp cơ: bao bọc lớp trơn. MỘT SỐ NGUYÊN NHÂN LÀM TIÊU BẢN KHÔNG ĐẠT YÊU CẦU: Tiêu bị rách: dao không sắc, mẻ, dơ hay nước chậu tải nóng. Tiêu bị nếp gấp: nước chậu tải không đủ nóng. Tiêu bị sọc: tốc độ cắt không hay dao không sắc. Ăn màu không tương phản màu nhân với màu tế bào chất. MỘT SỐ LƯU Ý KHI THỰC HIỆN TIÊU BẢN Tùy vào tổ chức mà ta có thời gian ngâm hóa chất khác nhau: - Thời gian ngâm formol: mẫu có tổ chức dai dày thời gian ngâm formol lâu bình thường. Ta ngâm từ 24-48 giờ. - Thời gian ngâm xylen: mẫu có tổ chức dai dày thời gian ngâm xylen lâu bình thường. Ta ngâm 90 phút đến 120 phút xylen ngấm vào tổ chức hoàn toàn loại bỏ hết cồn. Đối với giai đoạn khử nước lưu mẫu cồn 700 đến 12 giờ. Đối với việc lọc paraffin: paraffin có lẫn nhiều tạp chất nên ta phải lọc nhiều lần (5-10 lần). Ta lọc paraffin nhiều lần tốt paraffin tinh khiết khả loại hoàn toàn xylen khỏi mẫu cao. Mặt khác đúc mẫu, paraffin không bị rạn nức. Khi tẩm paraffin ta chọn paraffin non để tẩm tốt nhất. Do tinh thể paraffin non nhỏ tinh thể paraffin già nên dễ len vào tổ chức hơn, làm cho mẫu tẩm hoàn toàn paraffin. Đối với giai đoạn nhuộm mẫu: tổ chức khác bắt màu khác nhau. Tùy theo tổ chức mà ta có thời gian ngâm khác nhau, không thiết phải giống xác thời gian qui trình nhuộm. Nếu tiêu bắt màu lợt ta nên tăng thời gian ngâm Hematoxylin hay Eosin cho tiêu có độ tương phản màu rõ nhất. Đối với màu Hematoxylin thời gian ngâm khoảng phút 30 giây đến phút 30 giây, Eosin thời gian ngâm nên từ 20 đến 25 phút tốt nhất. Nếu tiêu không ăn màu thuốc nhuộm, cần coi lại phẩm chất thuốc nhuộm để lâu ngày cần phải pha thuốc nhuộm khác. Ngoài ra, tiêu không ăn màu Eosin cần bổ xung thêm acid acetic vào, với lượng 0,5ml vào 100ml Eosin nhuộm. Cần phải theo dõi thường xuyên thay hóa chất tránh lãng phí. Trung bình nhuộm khoảng 50- 60 lame tiến hành thay hóa chất lần 34 * Thuận lợi khó khăn trình thực tiêu bản: Thuận lợi Quy trình đơn giản dễ thực hiện. Mẫu bắt màu tốt, có tương phản màu rõ rệt: nhân màu tím tế bào chất màu hồng. Các lớp tổ chức phân biệt kính hiển vi quang học. Khó khăn Thiếu nhiều thiết bị máy tẩm lọc paraffin, khử nước,… nên gặp nhiều khó khăn thực hiện. CÁCH KHẮC PHỤC KHUYẾT ĐIỂM Do thiếu máy lọc paraffin, nên trước lọc cần phải làm tan chảy paraffin trước. Bằng cách bỏ paraffin cần lọc vào cốc thủy tinh đun cách thủy bếp điện. Sau đó, đưa vào thùng carton gắn đèn dây tóc loại 60 100W, tùy theo kích thước thùng mà gắn hay bóng đèn nhiều hơn. Hình 30. Làm tan paraffin bếp điện lọc paraffin thùng carton. Chú ý: làm tan chảy paraffin bếp điện lọc paraffin thùng carton: - Nên để cốc paraffin vào nước trước đun. Vì để cốc paraffin vào nước sôi cốc dễ bể. - Ban đầu ta đun cho nước (đã bỏ cốc paraffin vào) thật sôi, sau giảm nhiệt độ nước lại, nhiệt độ nước khoảng 60 – 700C dừng lại. - Khi đun cần phải cốc paraffin nghiêng (bằng cách để kẹp đáy cốc), đun lượng sinh đáy nồi đẩy cốc paraffin lên làm ngã bể cốc. Cần phải để cốc paraffin cho đụng đáy nồi, cốc paraffin không ngã. - Thời gian tan chảy paraffin tùy thuộc vào bề mặt nước nồi bề mặt paraffin cốc. Nếu bề mặt paraffin cốc cao bề mặt nước nồi thời gian làm chảy paraffin cốc dài để bề mặt paraffin gần với bề mặt nước nồi. 35 - Khi tẩm mẫu với paraffin thùng không để gần bóng đèn nhiệt độ cao (trên 700C), làm chín mẫu ảnh hưởng đến cắt mẫu sau, cần phải để xa bóng đèn có nhiệt độ cốc paraffin từ 55 – 600C tốt nhất. 36 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN Bằng phương pháp tiêu cắt lát nhuộm kép Hematoxylin Eosin Y, mục tiêu đề tài “Thực tiêu mô động vật: tuyến giáp trạng, lách, hạch lâm ba ruột, tuyến thượng thận buồng trứng thỏ, tụy tạng vịt, tuyến Fabricius gà” thực hoàn chỉnh. Cắt nhuộm tất 450 lame tiêu chọn 323 tiêu hoàn chỉnh theo yêu cầu. Trong tiêu mô: tuyến giáp trạng 46 tiêu bản, tuyến thượng thận 37 tiêu bản, lách 49 tiêu bản, hạch lâm ba ruột 43 tiêu bản, tụy tạng 33 tiêu bản, buồng trứng 63 tiêu bản, tuyến Fabricius 52 tiêu bản. Đã khảo sát phương pháp thực tiêu hiển vi cố định mô động vật, gồm: tuyến giáp trạng, tuyến thượng thận, lách, hạch lâm ba ruột, buồng trứng thỏ, tụy tạng vịt, tuyến Fabricius gà. Tiêu làm đáp ứng yêu cầu quan sát cấu trúc mô học, phục vụ tốt cho nhu cầu học tập, giảng dạy nghiên cứu. ĐỀ NGHỊ Thực thêm tiêu vi thể mô giống loài khác để so sánh giống khác tiêu mô. Cần có thêm thiết bị quy trình tiên tiến để rút ngắn thời gian thực tiêu bản. 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Nguyễn Xuân Hoạt Phạm Đức Lộ. 1980. Tổ chức học phôi thai học. Nhà xuất Đại học trung học chuyên nghiệp. Hà Nội. 2. Phan Thanh Trúc. 2010. Thực số tiêu bản: hạch màng treo ruột, bàng quang, dịch hoàng, mào tinh tuyến mang tay thỏ. Luận văn tốt nghiệp Đại học Cần Thơ. 3. Nguyễn Văn Minh. 2011. Đề tài đánh giá chất lượng kỷ thuật vi thể tiêu nhuộm Hematoxylin – Eosin số sở giải phẩu bệnh địa bàn Hà Nội. Luận văn tốt nghiệp trường Đại học Y Hà Nội. 4. Lâm Thị Thu Hương. 2005. Mô phôi gia súc. Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh. 5. Phạm Phan Địch Trịnh Bình. 2002. Mô học. Nhà xuất Y học. Hà Nội. 6. Vũ Công Hòe. 1967. Kỹ thuật kính hiển vi thông thường. Nhà xuất Y học Hà Nội. 7. Mariano S.H.D Fiore. 1974. Atlas of human histoslogy. Leu & Febger Philadenphia. 38 PHỤ CHƯƠNG Túi tuyến Chất keo Tổ chức liên kết Tế bào tuyến Mao quản Hình. Tiêu vi thể tuyến giáp trạng (X40) Tủy đỏ Động mạch trung tâm Tổ chức liên kêt Tủy trắng Hình. Tiêu vi thể lách (X4) 39 Tế bào vùng cung Vùng cung Mao mạch Vùng dậu Cột tế bào Vùng lưới Tế bào vùng lưới Hình. Tiêu vi thể vỏ thượng thận (X40) Miền vỏ Hạt lâm ba Miền tủy Hình. Tiêu vi thể hạch lâm ba ruột (X4) 40 MỘT SỐ TIÊU BẢN VI THỂ CỦA TỤY TẠNG 41 Biểu mô mầm Nang noãn chín Nang noãn thứ cấp Nang noãn sơ cấp Nang noãn nguyên thủy Hình. Tiêu vi thể buông trứng (X4) Lớp Biểu mô phủ đơn trụ Túi tuyến Trung tâm sinh trưởng Hình. Vi thể tuyến Fabricius (X10) 42 Bảng 1. Trở ngại, nguyên nhân cách khắc phục đúc mẫu Trở ngại Nguyên nhân Khắc phục Block vỡ có nhiều hạt Paraffin xấu, không tinh khiết Thay lọc thật kỹ paraffin Mẫu bật khỏi block cắt, block có khí Thao tác đúc khuôn chậm Đúc lại mẫu, thao tác nhanh Mẫu khó cắt hay vỡ mảnh Paraffin cứng Thay paraffin khác mềm Tổ chức bị co rúm lại Nhiệt độ tẩm Paraffin cao 65oC Loại bỏ mẫu Khó cắt, tổ chức bị tước xơ Paraffin chưa thấm hoàn toàn vào tổ chức, chưa loại hết cồn xylen Tẩm lại paraffin lâu hơn, loại bỏ mẫu có mẫu dự trữ Bảng 2. Trở ngại, nguyên nhân cách khắc phục cắt mẫu Trở ngại Nguyên nhân Khắc phục Các mảnh cắt có độ dài không Điều chỉnh máy cắt với tốc độ không thích hợp Tăng giảm tốc độ quay máy cắt. Điều chỉnh độ dày, mỏng máy cắt độ nghiêng lưỡi dao Mảnh cắt bị cuộn lại không xếp thành băng Mặt trên, khuôn mẫu lưỡi dao không song song Điều chỉnh khuôn mẫu cho mặt cắt song song lưỡi dao Mảnh căt rách, thủng Dao cắt bị lục, mẻ, dơ Lau lưỡi dao thay lưỡi dao Mẫu bị nứt, vụn nát Mẫu nước, nhiệt độ paraffin lúc tẩm cao, tốc độ tay quay không phù hợp Chú ý nồng độ thời gian ngâm cồn nhiệt độ tủ sấy lúc tẩm paraffin Mảnh căt bị vết cưa dính vào dao mềm, Paraffin mêm, phòng nóng độ Cắt dày hơn, điêu điều chỉnh Căt nhiệt độ máy lạnh xuống Mảnh căt dính lại khuôn mẫu Dao dơ, độ nghiêng dao chưa đủ Thay dao mới, kiêm tra độ nghiêng dao bị nhiệt 43 Bảng 3. Trở ngại, nguyên nhân cách khắc phục tải, hấp nhuộm mẫu Trở ngại Nguyên nhân Mẫu bị gấp nếp Nước châu tải Tăng nhiệt độ chậu không đủ nóng tải Mẫu bị rách Nhiệt độ nước cao Bị tuột mẫu lúc Mạnh tay nhuộm nhuộm Khắc phục Giảm nhiệt độ chậu tải cách thêm nước lạnh vào lúc Thao tác nhuộm phải châm, nhẹ nhàng Công thức pha chế Formol trung tính 10%: - Formalin (37 – 40%) - Nước cắt - Sodium phosphat monobasie 100 ml 900 ml 4g - Sodium phosphat dibasie 6,5 g Cách pha thuốc nhuộm kỹ thuật nhuộm kép (HematoxylineEosin Y): Thuốc nhuộm Hematoxyline: - Tinh thể Hematoxyline 5g - Cồn tuyệt đối 50ml - Phèn chua 100g - Nước cất 1000 ml - Moreuride oxyde 2,5g Cách pha chế Hematoxylin theo Harris với bước tiến hành sau: - Hòa tan Hematoxylin cồn phèn chua nước cất đun sôi, mang khỏi bếp trộn hai dung dịch lại. - Đun sôi nhanh không phút, khuấy đều, tắt lửa cho Moreuride oxyde vào từ từ, khuấy đều, đun nhỏ lửa dung dịch có màu tím đậm. - Mang khỏi bếp cho vào nước lạnh để làm lạnh nhanh, dung dịch nguội lại lọc trước dùng. Lưu ý: Hematoxylin biến chất (có cặn, nâu đỏ) kết tủa màu nâu đen bên tế bào nhuộm. Để kiểm tra xem dung dịch Hematoxylin có bị loãng biến chất hay không cách nhỏ vài giọt Hematoxylin vào nước 44 ấm, thấy giọt phẩm nhuộm có màu đỏ lúc sau chuyển sang màu tím xanh phẩm nhuộm loãng biến chất phải loại bỏ. Nếu nhỏ giọt phẩm nhuộm vào có màu tím xanh sử dụng (Nguyễn Hoàng Phương, 1994). Thuốc nhuộm Eosin: Eosin dự trữ: - Eosin Y 4g - Nước cất 20ml - Hòa tan thêm cồn 80ml Eosin nhuộm: - Eosin dự trữ phần - Cồn 80o phần - Hòa tan vào cho thêm 0.5 ml acide acetic đậm đặc cho 100 ml dung dịch trước dùng. Chú ý : Lắc kỹ Eosin nước cho tan hoàn toàn pha vào cồn. 45 [...]... Trong đó tiêu bản mô: tuyến giáp trạng là 46 tiêu bản, tuyến thượng thận là 37 tiêu bản, lách là 49 tiêu bản, hạch lâm ba ruột là 43 tiêu bản, tụy tạng là 33 tiêu bản, buồng trứng là 63 tiêu bản, tuyến Fabricius là 52 tiêu bản 4.1 TUYẾN GIÁP TRẠNG Tế bào chính Tổ chức liên kêt Chất keo Đám tế bào quanh tuyến Nang tuyến Hình 8 Tiêu bản vi thể của tuyến giáp trạng cắt ngang (X40) Mao mạch Hình 9 Tiêu bản. .. (http://instruction.cvhs.okstate.edu/histology/HistologyReference/HRLymframe.htm) 2.2.4 Tuyến thượng thận Tuyến thượng thận là một tuyến phức hợp, hình thành do sự kết hợp của hai tuyến khác nhau về nguồn gốc cũng như chức năng, gồm: vỏ thượng thận và tuỷ thuợng thận Ở thỏ tuyến thượng thận là một cơ quan đôi nằm phía trước hai quả thận, có hình như hạt đậu Cấu tạo: Hình 3 Tiêu bản vi thể của tuyến thượng thận (http://www.lab.anhb.uwa.edu.au/mb140/corepages/endocrines/endocrin.htm)... tế bào Hình 14 Tiêu bản vi thể vùng dậu của tuyến thượng thận cắt ngang (X40) 27 Tế bào vùng lưới Mao mạch Hồng cầu Hình 15 Tiêu bản vi thể vùng lưới của tuyến thượng thận cắt ngang (X40) Xoang tĩnh mạch Tĩnh mạch Hình 16 Tiêu bản vi thể của tủy thượng thận cắt ngang (X10) Quan sát tiêu bản vi thể từ ngoài vào trong ta thấy: - Tổ chức liên kết: bao bọc bên ngoài tuyến - Lớp vỏ thượng thận: + Vùng cung:... pháp làm tiêu bản để nghiên cứu bao gồm: phương pháp xét nghiệm tươi; phương pháp làm tiêu bản cố định và nhuộm màu;… Trong các phương pháp trên, phương pháp làm tiêu bản hiển vi cố định và nhuộm màu là phương pháp phổ biến dùng trong xét nghiệm mẫu bệnh so với mẫu đối chứng Phương pháp làm tiêu bản cố định và nhuộm màu: + Thực hiện tiêu bản hiển vi cố định bằng phương pháp tiêu bản cắt lát và nhuộm... quanh nang tuyến của tuyến giáp trạng (X40) Quan sát tiêu bản mô tuyến giáp trạng từ ngoài vào trong ta nhận thấy: - Tổ chức liên kết: bao quanh nang tuyến - Nang tuyến có hình trứng hoặc tròn, được bao bọc bởi lớp biểu mô đơn hộp 25 - Tế bào chính chiếm tỉ lệ lớn trong nang tuyến - Chất keo được chứa đầy trong nang tuyến - Đám tế bào quanh tuyến: do đám tế bào nang tuyến tiết hết chất keo và bị xẹp... trúc và màu sắc rõ ràng tương phản - Tốt: tiêu bản cắt mỏng đều,không gấp, không rách xước, màu của nhân và bào tương rõ nét, tương phản…(Nguyễn Văn Minh, 2011) 24 Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Trong quá trình thực hiện tiêu bản mô vi thể trên thỏ, vịt, gà tôi đã đúc được tất cả là 87 khối mẫu và có 21 khối mẫu hoàn chỉnh Cắt và nhuộm được tất cả là 450 lame tiêu bản trong đó chọn ra 323 tiêu bản hoàn... gọi là tế bào nguyên lâm ba, có cả tương bào Hạt lâm ba ở riêng lẻ (nang kín lâm ba ở thành ruột), hoặc thành màng (màng payer), hoặc xếp chung quanh hạch lâm ba Phần lâm ba tụ tập thưa, ít, nằm xen kẽ với tổ chức lưới của hạch tạo thành xoang lâm ba Ở miền vỏ gọi là xoang miền vỏ và miền tủy gọi là xoang miền tủy Xoang miền tủy có các cột tế bào thừng nang và những tế bào hạch lâm ba (bào tương chiếm... tiến vào trong lách - Tủy trắng: gồm các tế bào lympho tập trung thành đám như hạt lâm ba, và có động mạch trung tâm - Tủy đỏ: gồm nhiều tế bào máu và xoang tĩnh mạch 26 4.3 TUYẾN THƯỢNG THẬN Tổ chức liên kết Vùng cung Vùng dậu Lớp vỏ Vùng lưới Xoang tĩnh mạch Lớp tủy Hình 12 Tiêu bản tuyến thượng thận cắt ngang (X10) Tế bào vùng cung Mao mạch Hình 13 Tiêu bản vi thể vùng cung của tuyến thượng thận. .. đích muốn quan sát Lách, tụy tạng và hạch lâm ba ruột thì cắt như trên Còn với buồng trứng thì kích thước vừa đủ không cần cắt nhỏ, chỉ cần loại bỏ những tổ chức xung quanh không cần thiết 18 Đối với tuyến giáp trạng, tuyến thượng thận, tuyến Fabricius thì chỉ cần cắt làm đôi là được Tiếp tục cố định mẫu bằng formol 10% thời gian cố định là 24 giờ nhưng thời gian này còn tùy thuộc vào nồng độ dung dịch,... (http://www.lab.anhb.uwa.edu.au/mb140/corepages/endocrines/endocrin.htm) - Bao ngoài tuyến là mô liên kết có chứa nhiều sợi cơ trơn xen lẫn sợi keo 7 - Nhu mô tuyến gồm hai phần: vỏ thượng thận chiếm phần ngoài của tuyến, tủy thượng thận chiếm phần trong 2.2.4.1 Vỏ thượng thận Khá dày, có màu vàng, về phía trong hơi nâu khi xem bằng mắt thường Vỏ thượng thận gồm có ba vùng (vùng dưới lớp bao vỏ có hiện tượng phân bào cảm nhiễm): - Vùng . 3.2.4. Rửa mẫu 19 3.2.5. Khử nước 19 3.2.6. Tẩm dung môi trung gian 19 3.2 .7. Tẩm paraffin 20 3.2 .7. Đúc khuôn. 20 3.2.8.1. Chuẩn bị 20 3.2.8.2. Tiến hành 20 3.2 .9 Cắt mẫu 20 3.2 .9. 1. Chuẩn. Tuyến thuợng thận 27 4.4. Tuỵ tạng 29 4.5. Hạch lâm ba 30 4.6. Buồng trứng 32 4 .7 Tuyến Fabricius 33 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 37 Tài liệu tham khảo 38 Phụ chương 39 . Hình 17. Tiêu bản vi thể tụy tạng cắt ngang (X40) 29 Hình 18. Tiêu bản vi thể ống dẫn lớn của tụy tạng cắt ngang (X40) 29 Hình 19. Tiêu bản vi thể động mạch và tĩnh mạch của tụy tạng (X40) 29 Hình