BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT ĐẶC TÍNH VI KHUẨN NỘI SINH CÂY LÚA TRỒNG TRÊN ĐẤT Ở HUYỆN SƠN HÒA, TỈNH PHÚ YÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Gs. Ts. CAO NGỌC ĐIỆP SINH VIÊN THỰC HIỆN TRẦN HẢI MY MSSV: 3092490 LỚP: CNSH TT K35 Cần Thơ, Tháng 11/2013 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƢỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN (ký tên) (ký tên) Cao Ngọc Điệp Trần Hải My DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN …………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (ký tên) LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành cảm ơn: Gs. Ts. Cao Ngọc Điệp Ths. Văn Thị Phương Như tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm, góp ý giúp đỡ suốt trình thực luận văn tốt nghiệp đại học này. Ban Lãnh đạo Viện nghiên cứu phát triển công nghệ sinh học, trường Đại học Cần Thơ tạo điều kiện thuận lợi để học tập thực luận văn. Quý thầy cô Viện nghiên cứu phát triển công nghệ sinh học, trường Đại học Cần Thơ tận tình giảng dạy truyền đạt kiến thức cho suốt trình học tập. Chị Nguyễn Thị Xuân Mỵ chị Trần Thị Giang - cán phòng thí nghiệm vi sinh vật đất vi sinh vật môi trường Viện nghiên cứu phát triển công nghệ sinh học, trường Đại học Cần Thơ nhiệt tình dẫn, giúp đỡ hỗ trợ thiết bị, dụng cụ hóa chất giúp thực tốt luận văn. Tập thể lớp Công nghệ sinh học tiên tiến khóa 35 anh chị em phòng thí nghiệm vi sinh vật đất vi sinh vật môi trường giúp đỡ chia sẻ khó khăn trình học tập thực luận văn. Cuối lời, xin gửi lời cảm ơn đến Cha, Mẹ, người thân bạn bè ủng hộ, động viên giúp đỡ suốt thời gian học tập thực luận văn tốt nghiệp đại học này. Xin chân thành cảm ơn sâu sắc đến quan tâm giúp đỡ quý báo này! TÓM LƢỢC Hai mươi sáu dòng vi khuẩn nội sinh phân lập môi trường RMR từ rễ thân mẫu lúa thu địa điểm thuộc huyện Sơn Hòa, tỉnh Phú Yên. Tất dòng vi khuẩn thuộc Gram âm, tế bào có dạng hình que có khả chuyển động. Kết khảo sát cho thấy tất dòng vi khuẩn có khả cố định đạm, hòa tan lân khó tan sinh tổng hợp IAA, trừ dòng SH22 SH26 khả tổng hợp IAA điều kiện tryptophan. Trong đó, lượng NH4+ cao dòng SH22 tổng hợp (4,175 µg/ml) sau ngày chủng, dòng SH4 hòa tan lượng P2O5 cao (196,188 µg/ml) ngày thứ 15 dòng SH9 sinh tổng hợp lượng IAA cao (13,333 µg/ml) ngày thứ sau chủng môi trường RMR không bổ sung tryptophan dòng SH16 lại tổng hợp IAA cao (19,250 µg/ml) ngày thứ môi trường có bổ sung tryptophan. Trong 26 dòng vi khuẩn phân lập được, tám dòng vi khuẩn nội sinh có đặc tính tốt nhất, dòng khả cố định đạm tốt đồng thời có khả hòa tan lân cao tổng hợp IAA tốt so với dòng khác SH9, SH15, SH16 SH18 dòng SH4, SH6, SH7 SH17 có khả hòa tan lân cao tất dòng vi khuẩn phân lập được. Từ khóa: lúa, cố định đạm, hòa tan lân, huyện Sơn Hòa, IAA, vi khuẩn nội sinh i MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM TẠ . TÓM LƢỢC i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG iv DANH SÁCH HÌNH v TỪ VIẾT TẮT vi CHƢƠNG 1. GIỚI THIỆU . 1.1. Đặt vấn đề 1.2. Mục tiêu đề tài . 2.1. Sơ lƣợc lúa 2.1.1. Đặc điểm sinh vật học lúa . 2.1.2. Nhu cầu dinh dưỡng lúa . 2.2. Khát quát vi khuẩn nội sinh . 2.2.1. Giới thiệu . 2.2.2. Các nhóm vi khuẩn nội sinh thực vật không thuộc họ đậu 2.2.3. Một số đặc tính vi khuẩn nội sinh 14 2.3. Địa lý điều kiện tự nhiên huyện Sơn Hòa, tỉnh Phú Yên 18 CHƢƠNG 3. PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 20 3.1. Thời gian địa điểm nghiên cứu 20 3.2. Phƣơng tiện nghiên cứu 20 3.2.1. Dụng cụ, thiết bị 20 3.2.2. Nguyên vật liệu 20 3.2.3. Hóa chất 20 3.3. Phƣơng pháp nghiên cứu 24 3.3.1. Phương pháp thu thập, xử lý mẫu phân lập dòng vi khuẩn . 24 3.3.2. Quan sát hình thái đo kích thước khuẩn lạc . 25 ii 3.3.3. Quan sát hình dạng khả chuyển động vi khuẩn . 25 3.3.4. Xác địnhđặc tính dòng vi khuẩn nội sinh . 26 3.3.5. Phương pháp xử lý số liệu . 31 CHƢƠNG 4.KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 4.1. Phân lập đặc điểm dòng vi khuẩn nội sinh phân lập 32 4.1.1. Phân lập vi khuẩn 32 4.1.2. Đặc điểm dòng vi khuẩn phân lập 34 4.3. Khả hòa tan lân khó tan dòng vi khuẩn . 41 4.4. Khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn 44 CHƢƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 51 5.1. Kết luận . 51 5.2. Đề nghị . 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 52 PHỤ LỤC . Phụ lục 1: Các hình ảnh Phụ lục 2: Kết khả tổng hợp đạm dòng vi khuẩn . Phụ lục 3: Kết khả hòa tan lân dòng vi khuẩn Phụ lục 4: Kết khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn . 1. Kết khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn môi trƣờng RMR không bổ sung tryptophan . 2. Kết khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn môi trƣờng RMR có bổ sung tryptophan . iii DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 1: Thành phần môi trường RMR (Elbeltagy et al., 2001) 21 Bảng 2: Thành phần môi trường Burk không đạm (Park et al., 2005) . 22 Bảng 3: Thành phần môi trường NBRIP lỏng (Nautiyal, 1999) 23 Bảng 4: Thành phần dãy đường chuẩn NH 4+ . 27 Bảng 5: Thành phần dãy đường chuẩn P2O5 29 Bảng 6: Thành phần dãy đường chuẩn IAA . 30 Bảng 7: Nguồn gốc dòng vi khuẩn phân lập môi trường RMR . 33 Bảng 8: Đặc điểm dòng vi khuẩn phân lập môi trường RMR . 35 Bảng 9: Tỷ lệ phần trăm đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn phân lập . 36 Bảng 10: Khả tổng hợp NH4+ dòng vi khuẩn phân lập môi trường RMR sau ngày, ngày, ngày ngày chủng . 40 Bảng 11: Khả hòa tan lân dòng vi khuẩn phân lập môi trường RMR sau ngày, 10 ngày, 15 ngày 20 ngày chủng 43 Bảng 12: Khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn nuôi môi trường RMR bổ sung tryptophan sau ngày, ngày, ngày ngày chủng 46 Bảng 13: Khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn nuôi môi trường RMR có bổ sung tryptophan sau ngày, ngày, ngày ngày chủng 48 iv DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 1: Cây lúa (*Nguồn: http://tiennong.vn/vn/ct/cay-lua_4.aspx, ngày 17/07/2013) . Hình 2: Tổng quát lộ trình sinh tổng hợp IAA vi khuẩn (Spaepen et al., 2007) . 17 Hình 3: Vòng pellicle xuất cách mặt môi trường RMR bán đặc 0,5 cm 34 Hình 4: Đặc điểm số khuẩn lạc phân lập môi trường RMR 37 Hình 5: Lượng đạm tổng hợp trung bình tất dòng vi khuẩn theo ngày sau chủng . 41 Hình 6: Lượng lân hòa tan trung bình tất dòng vi khuẩn theo ngày sau chủng 44 Hình 7: Lượng IAA tổng hợp trung bình dòng vi khuẩn nuôi môi trường RMR không bổ sung tryptophan theo ngày sau chủng . 47 Hình 8: Lượng IAA tổng hợp trung bình tất dòng vi khuẩn nuôi môi trường RMR có bổ sung tryptophan theo ngày sau chủng 49 Hình 9: Lượng IAA tổng hợp trung bình 26 dòng vi khuẩn phân lập nuôi môi trường RMR bổ sung tryptophan có bổ sung tryptophan . 49 v TỪ VIẾT TẮT IAA Indole-3-acetic acid IAAld Indole-3-acetaldehyde IAM Indole-3-acetamide IPA Indole-3-pyruvate IPDC Indole-3-pyruvate decarboxylase LSD Least Significant Difference Test N Nitrogen NBRIP National Botanical Research Institute's Phosphate growth medium P Phosphor RMR Rennie Medium supplemented with Rice and malate vi Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường ĐHCT CHƢƠNG 1. GIỚI THIỆU 1.1. Đặt vấn đề Lúa (Oryza sativa L.) loại ngũ cốc quan trọng giới nguồn lương thực 50% dân số giới (Gyaneshwar et al., 2001). Với nhu cầu lúa gạo ngày tăng, sản lượng chất lượng lúa gạo phải tăng để đáp ứng nhu cầu đó. Để đạt sản lượng mong muốn, nông dân sử dụng lượng lớn phân bón hóa học thuốc trừ sâu canh tác lúa. Khoảng 60% phân đạm hóa học sử dụng để bón cho ngũ cốc, khoảng 10% sử dụng cho sản xuất lúa gạo. Tuy nhiên, trồng sử dụng 50% lượng phân bón này. Việc sử dụng không hiệu phân đạm góp phần làm ô nhiễm nitrat đất nước ngầm, dẫn đến ảnh hưởng tiêu cực tới sức khỏe người phát triển nông nghiệp bền vững. Hơn nữa, sản xuất phân đạm đòi hỏi lượng nhiều gấp sáu lần so với lượng cần thiết để tạo phân lân phân kali (Da Silva et al., 1978). Ngoài đạm, lân nguyên tố dinh dưỡng trồng, có tác dụng thúc đẩy phát triển tăng khả chống chịu trồng. Thiếu lân, suất trồng bị giảm sút, cung cấp đủ đạm (Nguyễn Minh Hưng, 2007). Tuy nhiên, phần lớn lân đất dạng vô khó tan hữu mà trồng hấp thụ được. Nguồn bổ sung chủ yếu phân lân vô phân lân hóa học theo Premono et al. (1996) trồng hấp thu 0,1% lượng lân bón vào, phần lớn lượng lân lại chuyển thành dạng khó tan phải nhờ đến vi sinh vật chuyển hóa thành dạng lân dễ tan để trồng hấp thụ. Để giảm nhu cầu sử dụng phân bón hóa học, vi khuẩn nội sinh thực vật đóng vai trò quan trọng. Nhiều nghiên cứu cho thấy vi khuẩn nội sinh tìm thấy rễ, vùng rễ, thân nhiều loại trồng lúa, khóm, ngô, mía, sài đất,… có nhiều đặc tính khả cố định đạm, hòa tan lân khó tan, sinh tổng hợp hormone tăng trưởng thực vật. Tiềm ứng dụng vi khuẩn nội sinh thực vật có đặc tính tốt sản xuất phân bón sinh học canh tác lúa số loại trồng khác lớn biện pháp hiệu để tăng suất trồng, giảm lượng phân bón hóa học giảm tác động xấu phân hóa học gây cho đất, cải thiện nông nghiệp bảo vệ môi trường. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Bảng 29: Hàm lƣợng lân (µg/ml) đƣợc vi khuẩn hòa tan ngày 15 SH1 SH2 Hàm lƣợng lân hòa tan (µg/ml) Tổng Trung I II III cộng bình (TC) 37,719 37,274 36,978 111,970 37,323 46,311 46,904 46,459 139,674 46,558 SH3 SH4 50,459 50,607 196,237 196,533 49,867 195,793 150,933 588,563 50,311 2546,137 196,188 38508,975 2561,110 38625,351 2486,684 22780,871 38334,739 346406,361 SH5 SH6 52,830 53,126 111,793 112,089 52,830 111,348 158,785 335,230 52,928 2790,970 111,743 12497,584 2822,364 12563,919 2790,970 25212,735 12398,410 112378,905 10 SH7 SH8 SH9 SH10 141,126 140,978 54,311 54,756 32,681 32,089 51,644 51,348 141,719 55,052 32,830 52,089 423,822 164,119 97,600 155,081 141,274 19916,527 54,706 2949,697 32,533 1068,079 51,694 2667,149 19874,734 2998,171 1029,697 2636,632 20084,138 179625,276 3030,706 26934,888 1077,785 9525,760 2713,252 24050,266 11 SH11 73,867 74,311 74,163 222,341 74,114 5456,284 5522,141 5500,145 49435,405 12 13 14 SH12 SH13 SH14 48,978 49,126 100,237 100,681 60,237 60,681 49,422 100,978 60,978 147,526 301,896 181,896 49,175 2398,823 100,632 10047,464 60,632 3628,501 2413,357 10136,761 3682,242 2442,556 10196,512 3718,289 21763,899 91141,374 33086,263 15 16 SH15 SH16 33,570 85,422 33,719 85,719 34,311 85,867 101,600 257,007 33,867 85,669 1126,970 7296,956 1136,938 7347,664 1177,252 7373,084 10322,560 66052,807 17 18 19 20 21 22 23 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 110,607 111,348 50,459 50,607 56,681 57,274 40,681 40,978 35,348 35,793 86,015 86,015 54,607 55,052 110,904 49,867 56,978 40,533 35,496 86,163 54,904 332,859 150,933 170,933 122,193 106,637 258,193 164,563 110,953 12233,999 50,311 2546,137 56,978 3212,790 40,731 1654,983 35,546 1249,492 86,064 7398,548 54,854 2981,969 12398,410 2561,110 3280,320 1679,178 1281,110 7398,548 3030,706 12299,631 110795,286 2486,684 22780,871 3246,467 29218,204 1642,951 14931,030 1259,987 11371,458 7424,056 66663,415 3014,417 27080,969 24 25 26 SH24 SH25 SH26 51,052 44,237 44,533 51,200 44,681 44,681 152,859 133,304 134,193 50,953 44,435 44,731 2561,110 1970,045 2023,000 2621,440 1996,435 1996,435 Dòng STT vi khuẩn 50,607 44,385 44,978 Bình phƣơng (BP) BP (I) BP (II) BP (III) BP (TC) 1422,687 2144,719 1389,357 2199,957 1367,356 2158,463 12537,364 19508,847 2606,292 1956,915 1983,218 Bảng 30: Bảng ANOVA hàm lƣợng lân hòa tan dòng vi khuẩn ngày 15 Nguồn Nghiệm thức (NT) Sai số Tổng cộng CF = 355348,501; Độ tự (df) 25 52 77 Tổng bình phƣơng (SS) 108900,931 5,209 108906,140 Trung bình bình phƣơng (MS) 4356,037 0,100 CV (%) = 0,469; F bảng F tính 43485,427 5% 1% 1,74 2,18 LSD.01 = 0,687 23365,953 17769,877 18007,652 Bảng 31: Hàm lƣợng lân (µg/ml) đƣợc vi khuẩn hòa tan ngày 20 Dòng STT vi khuẩn 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 SH1 SH2 SH3 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 Hàm lƣợng lân hòa tan (µg/ml) Tổng Trung I II III cộng bình (TC) 32,791 33,256 32,946 98,992 32,997 44,574 44,884 45,349 134,806 44,935 Bình phƣơng (BP) BP (I) BP (II) BP (III) BP (TC) 1075,230 1986,810 1105,949 2014,548 1085,422 2056,517 9799,465 18172,712 39,302 39,147 39,457 150,620 150,000 150,775 117,907 451,395 39,302 1544,673 150,465 22686,431 1532,510 22500,000 1556,884 13902,055 22733,159 203757,761 50,775 51,550 51,085 108,760 108,140 108,915 153,411 325,814 51,137 2578,120 108,605 11828,670 2657,442 11694,159 2609,705 23534,890 11862,418 106154,732 141,628 141,163 141,628 52,326 52,946 52,636 30,620 30,930 31,395 41,163 40,698 40,853 424,419 157,907 92,946 122,713 141,473 20058,464 52,636 2737,966 30,982 937,594 40,904 1694,375 19926,933 2803,251 956,679 1656,301 20058,464 180131,152 2770,513 24934,613 985,668 8638,910 1668,944 15058,524 65,659 65,504 65,504 196,667 65,556 4311,093 4290,758 4290,758 38677,778 44,264 59,457 60,388 42,558 59,302 60,698 43,798 59,147 60,853 130,620 177,907 181,938 43,540 59,302 60,646 1959,263 3535,178 3646,662 1811,195 3516,766 3684,208 1918,304 3498,402 3703,053 17061,625 31650,892 33101,430 34,031 81,783 34,496 82,093 34,186 82,248 102,713 246,124 34,238 82,041 1158,109 6688,450 1189,983 6739,264 1168,686 6764,744 10549,997 60577,039 98,527 21,628 48,295 31,550 34,341 77,132 43,333 98,062 21,938 48,450 31,240 34,496 77,907 43,023 98,372 21,783 47,674 30,620 33,721 78,062 43,798 294,961 65,349 144,419 93,411 102,558 233,101 130,155 98,320 21,783 48,140 31,137 34,186 77,700 43,385 9707,596 467,766 2332,366 995,427 1179,310 5949,312 1877,778 9616,159 481,275 2347,365 975,957 1189,983 6069,497 1851,001 9677,069 474,497 2272,850 937,594 1137,101 6093,678 1918,304 87002,133 4270,471 20856,733 8725,587 10518,172 54335,971 16940,334 35,891 24,419 23,488 36,047 24,419 22,868 35,891 25,194 23,643 107,829 74,031 70,000 35,943 24,677 23,333 1288,198 596,268 551,704 1299,351 596,268 522,955 1288,198 634,727 559,011 11627,192 5480,590 4900,000 Bảng 32: Bảng ANOVA hàm lƣợng lân hòa tan dòng vi khuẩn ngày 20 Nguồn Nghiệm thức (NT) Sai số Tổng cộng CF = 251839,084; Độ tự (df) 25 52 77 Tổng bình phƣơng (SS) 88281,169 6,987 88288,156 CV (%) = 0,645; Trung bình bình phƣơng (MS) 3531,247 0,134 F bảng F tính 26281,830 LSD.01 = 0,796 5% 1% 1,74 2,18 Bảng 33: Hàm lƣợng lân (µg/ml) đƣợc vi khuẩn hòa tan ngày Dòng vi khuẩn STT SH1 SH2 SH3 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 Hàm lƣợng lân hòa tan (µg/ml) Tổng cộng Bình phƣơng Trung bình 525,554 659,347 711,360 2084,848 690,421 1328,022 1751,038 843,235 463,865 573,453 857,503 553,874 1241,886 670,881 439,248 955,482 1274,110 457,053 638,278 429,222 436,850 1064,958 534,123 473,403 444,780 450,649 276206,563 434738,621 506033,209 4346593,201 476680,757 1763641,974 3066134,990 711045,761 215170,913 328848,327 735310,901 306776,849 1542279,917 450081,786 192939,035 912944,918 1623357,558 208897,772 407398,408 184231,119 190837,925 1134135,775 285287,585 224110,158 197829,380 203084,884 43,796 54,946 59,280 173,737 57,535 110,668 145,920 70,270 38,655 47,788 71,459 46,156 103,490 55,907 36,604 79,623 106,176 38,088 53,190 35,768 36,404 88,747 44,510 39,450 37,065 37,554 Bảng 34: Hàm lƣợng lân khó tan (µg/ml) đƣợc vi khuẩn hòa tan thời điểm Thời điểm Hàm lƣợng lân hòa tan (µg/ml) Tổng cộng Trung bình Bình phƣơng Ngày 4010,341 51,415 16082832,9 Ngày 10 6846,299 87,773 46871812,9 Ngày 15 Ngày 20 5264,711 4432,093 67,496 56,822 27717183,1 19643448,6 Bảng 35: Bảng ANOVA hàm lƣợng lân hòa tan dòng vi khuẩn Nguồn Nghiệm thức (NT) Vi khuẩn (VK) Thời điểm (TĐ) Tương tác VK x TĐ Sai số Tổng cộng CF = 1353987,384; LSD.01 (VK) = 1,002; Độ tự (df) 103 25 75 208 311 Tổng bình phƣơng (SS) 487576,07 389729,14 60311,044 37535,886 188,96466 487765,03 CV (%) = 1,447 LSD.01 (TĐ) = 0,393; Trung bình bình phƣơng (MS) 4733,7482 15589,166 20103,681 500,47847 0,9084839 F bảng F tính 5210,60212 17159,5393 22128,8247 550,894146 LSD.01 (VK x TĐ) = 2,005 5% 1% 1,32 1,57 2,65 1,35 1,48 1,88 3,88 1,63 Phụ lục 4: Kết khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn 1. Kết khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn môi trƣờng RMR không bổ sung tryptophan Bảng 36: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc vi khuẩn tổng hợp ngày STT Dòng vi khuẩn 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 SH1 SH2 SH3 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 Hàm lƣợng IAA tổng hợp (µg/ml) Tổng Trung I II III cộng bình (TC) 7,873 7,873 7,346 23,092 7,697 6,412 6,412 6,149 18,972 6,324 4,255 3,992 4,255 12,502 4,167 5,867 5,867 6,130 17,865 5,955 6,294 6,031 6,294 18,618 6,206 3,254 3,517 3,517 10,288 3,429 1,233 1,233 1,496 3,963 1,321 10,471 10,471 10,208 31,150 10,383 12,395 12,395 12,921 37,711 12,570 9,703 9,703 10,026 29,432 9,811 6,397 6,397 5,870 18,663 6,221 0,289 0,237 0,289 0,816 0,272 0,553 0,289 0,553 1,395 0,465 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 5,553 6,342 5,553 17,447 5,816 7,116 7,380 7,380 21,876 7,292 0,553 0,553 0,289 1,395 0,465 3,711 3,184 3,184 10,079 3,360 0,026 0,289 0,026 0,342 0,114 0,553 0,289 0,289 1,132 0,377 0,816 0,816 0,553 2,184 0,728 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,026 0,026 0,026 0,079 0,026 0,289 0,026 0,026 0,342 0,114 1,079 1,079 0,816 2,974 0,991 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 Bình phƣơng (BP) BP (I) BP (III) BP (II) BP (TC) 61,979 61,979 53,969 533,224 41,110 41,110 37,804 359,932 18,105 15,935 18,105 156,295 34,424 34,424 37,581 319,151 39,611 36,368 39,611 346,629 10,587 12,369 12,369 105,836 1,521 1,521 2,239 15,704 109,641 109,641 104,199 970,306 153,630 153,630 166,954 1422,084 94,142 94,142 100,527 866,221 40,916 40,916 34,460 348,320 0,084 0,056 0,084 0,666 0,305 0,084 0,305 1,945 0,000 0,000 0,000 0,000 30,832 40,222 30,832 304,411 50,644 54,459 54,459 478,545 0,305 0,305 0,084 1,945 13,768 10,139 10,139 101,585 0,001 0,084 0,001 0,117 0,305 0,084 0,084 1,280 0,666 0,666 0,305 4,771 0,000 0,000 0,000 0,000 0,001 0,001 0,001 0,006 0,084 0,001 0,001 0,117 1,164 1,164 0,666 8,843 0,000 0,000 0,000 0,000 Bảng 37: Bảng ANOVA hàm lƣợng IAA tổng hợp dòng vi khuẩn ngày Nghiệm thức (NT) Độ tự (df) 25 Tổng bình phƣơng (SS) 1094,170 Trung bình bình phƣơng (MS) 43,767 Sai số 52 1,918 0,037 Tổng cộng 77 1096,088 Nguồn CF = 1021,808; CV (%) = 5,307; F bảng F tính 1186,337 LSD.01 = 0,417 5% 1% 1,74 2,18 Bảng 38: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc vi khuẩn tổng hợp ngày STT Dòng vi khuẩn 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 SH1 SH2 SH3 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 Hàm lƣợng IAA tổng hợp (µg/ml) Tổng Trung I II III cộng bình (TC) 8,750 8,750 8,500 26,000 8,667 2,500 2,750 2,750 8,000 2,667 2,750 3,000 2,750 8,500 2,833 8,250 8,500 9,000 25,750 8,583 9,500 9,250 9,500 28,250 9,417 4,750 4,750 5,250 14,750 4,917 2,000 1,750 2,000 5,750 1,917 11,250 11,000 11,250 33,500 11,167 13,250 13,500 13,250 40,000 13,333 10,250 10,000 10,000 30,250 10,083 7,500 7,750 7,000 22,250 7,417 3,250 3,250 3,500 10,000 3,333 2,500 2,500 2,250 7,250 2,417 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 7,500 7,000 7,500 22,000 7,333 5,583 5,833 5,333 16,750 5,583 4,500 4,500 4,750 13,750 4,583 6,250 5,750 5,500 17,500 5,833 0,750 0,500 0,750 2,000 0,667 0,500 0,500 0,750 1,750 0,583 1,250 1,000 1,250 3,500 1,167 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,750 0,500 0,750 2,000 0,667 1,500 1,500 1,250 4,250 1,417 1,500 1,500 1,750 4,750 1,583 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 Bình phƣơng (BP) BP (I) BP (II) BP (III) BP (TC) 76,563 76,563 6,250 7,563 7,563 9,000 68,063 72,250 90,250 85,563 22,563 22,563 4,000 3,063 126,563 121,000 175,563 182,250 105,063 100,000 56,250 60,063 10,563 10,563 6,250 6,250 0,000 0,000 56,250 49,000 31,174 34,028 20,250 20,250 39,063 33,063 0,563 0,250 0,250 0,250 1,563 1,000 0,000 0,000 0,563 0,250 2,250 2,250 2,250 2,250 0,000 0,000 72,250 7,563 7,563 81,000 90,250 27,563 4,000 126,563 175,563 100,000 49,000 12,250 5,063 0,000 56,250 28,444 22,563 30,250 0,563 0,563 1,563 0,000 0,563 1,563 3,063 0,000 676,000 64,000 72,250 663,063 798,063 217,563 33,063 1122,250 1600,000 915,063 495,063 100,000 52,563 0,000 484,000 280,562 189,063 306,250 4,000 3,063 12,250 0,000 4,000 18,063 22,563 0,000 Bảng 39: Bảng ANOVA hàm lƣợng IAA tổng hợp dòng vi khuẩn ngày Nghiệm thức (NT) Độ tự (df) 25 Tổng bình phƣơng (SS) 1153,837 Trung bình bình phƣơng (MS) 46,153 Sai số Tổng cộng 52 77 2,042 1155,878 0,039 Nguồn CF = 1557,080; CV (%) = 4,435; F bảng F tính 1175,500 LSD.01 = 0,430 5% 1% 1,74 2,18 Bảng 40: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc vi khuẩn tổng hợp ngày STT Dòng vi khuẩn 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 SH1 SH2 SH3 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 Hàm lƣợng IAA tổng hợp (µg/ml) Tổng Trung I II III cộng bình (TC) 11,571 11,571 11,333 34,476 11,492 2,643 2,643 2,405 7,690 2,563 2,405 2,405 2,643 7,452 2,484 3,595 3,595 3,833 11,024 3,675 7,762 7,762 7,524 23,048 7,683 10,143 9,905 9,905 29,952 9,984 10,976 10,976 10,738 32,690 10,897 10,500 10,500 10,738 31,738 10,579 11,929 11,929 11,690 35,548 11,849 11,810 11,571 11,810 35,190 11,730 5,143 4,905 5,143 15,190 5,063 2,167 2,167 1,929 6,262 2,087 0,738 0,738 0,976 2,452 0,817 0,500 0,500 0,619 1,619 0,540 4,071 4,071 3,833 11,976 3,992 3,357 3,595 3,357 10,310 3,437 2,643 2,643 2,881 8,167 2,722 4,786 4,548 4,310 13,643 4,548 0,738 0,738 0,738 2,214 0,738 1,214 0,976 1,214 3,405 1,135 1,095 1,095 0,857 3,048 1,016 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,738 0,738 0,738 2,214 0,738 1,214 1,452 1,452 4,119 1,373 2,881 3,357 3,119 9,357 3,119 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 Bình phƣơng (BP) BP (I) BP (II) BP (III) BP (TC) 133,898 6,985 5,783 12,926 60,247 102,878 120,477 110,250 142,291 139,465 26,449 4,694 0,545 0,250 16,577 11,270 6,985 22,903 0,545 1,474 1,200 0,000 0,545 1,474 8,300 0,000 133,898 6,985 5,783 12,926 60,247 98,104 120,477 110,250 142,291 133,898 24,057 4,694 0,545 0,250 16,577 12,926 6,985 20,681 0,545 0,953 1,200 0,000 0,545 2,109 11,270 0,000 128,444 5,783 6,985 14,694 56,608 98,104 115,307 115,307 136,667 139,465 26,449 3,719 0,953 0,383 14,694 11,270 8,300 18,572 0,545 1,474 0,735 0,000 0,545 2,109 9,728 0,000 1188,608 59,143 55,538 121,524 531,193 897,145 1068,667 1007,307 1263,633 1238,370 230,751 39,211 6,014 2,621 143,429 106,286 66,694 186,128 4,903 11,592 9,288 0,000 4,903 16,967 87,556 0,000 Bảng 41: Bảng ANOVA hàm lƣợng IAA tổng hợp dòng vi khuẩn ngày Nguồn Nghiệm thức (NT) Sai số Tổng cộng CF = 1506,436; Độ tự (df) 25 52 77 Tổng bình phƣơng (SS) 1276,054 0,954 1277,009 CV (%) = 3,083; Trung bình bình phƣơng (MS) 51,042 0,018 F bảng F tính 2781,384 LSD.01 = 0,294 5% 1% 1,74 2,18 Bảng 42: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc vi khuẩn tổng hợp ngày STT Dòng vi khuẩn 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 SH1 SH2 SH3 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 Hàm lƣợng IAA tổng hợp (µg/ml) Tổng Trung I II III cộng bình (TC) 3,073 2,829 3,073 8,976 2,992 1,854 1,610 1,854 5,317 1,772 1,366 1,366 1,122 3,854 1,285 3,317 3,561 3,317 10,195 3,398 2,264 2,264 2,020 6,547 2,182 6,244 6,000 6,000 18,244 6,081 3,660 3,416 3,172 10,248 3,416 5,268 5,024 5,268 15,561 5,187 8,195 8,683 8,439 25,317 8,439 1,984 2,228 1,984 6,197 2,066 1,179 1,666 1,666 4,511 1,504 1,610 1,366 1,366 4,341 1,447 0,390 0,390 0,146 0,927 0,309 0,390 0,146 0,146 0,683 0,228 3,805 3,561 3,317 10,683 3,561 2,098 2,341 2,829 7,268 2,423 0,878 0,878 1,122 2,878 0,959 4,049 3,561 4,049 11,659 3,886 0,390 0,390 0,146 0,927 0,309 0,146 0,146 0,390 0,683 0,228 0,878 0,878 0,634 2,390 0,797 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,146 0,146 0,146 0,439 0,146 1,122 1,122 1,366 3,610 1,203 2,585 3,073 2,585 8,244 2,748 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 Bình phƣơng (BP) BP (I) BP (II) BP (III) BP (TC) 9,444 3,436 1,866 11,003 5,124 38,986 13,395 27,755 67,160 3,938 1,389 2,591 0,152 0,152 14,477 4,400 0,771 16,393 0,152 0,021 0,771 0,000 0,021 1,259 6,684 0,000 8,005 2,591 1,866 12,681 5,124 36,000 11,669 25,244 75,393 4,966 2,777 1,866 0,152 0,021 12,681 5,482 0,771 12,681 0,152 0,021 0,771 0,000 0,021 1,259 9,444 0,000 9,444 3,436 1,259 11,003 4,080 36,000 10,063 27,755 71,217 3,938 2,777 1,866 0,021 0,021 11,003 8,005 1,259 16,393 0,021 0,152 0,402 0,000 0,021 1,866 6,684 0,000 80,562 28,271 14,851 103,941 42,866 332,840 105,024 242,144 640,954 38,406 20,350 18,848 0,859 0,466 114,125 52,828 8,283 135,921 0,859 0,466 5,713 0,000 0,193 13,030 67,962 0,000 Bảng 43: Bảng ANOVA hàm lƣợng IAA tổng hợp dòng vi khuẩn ngày Nguồn Nghiệm thức (NT) Sai số Tổng cộng CF = 369,201; Độ tự (df) 25 52 77 Tổng bình phƣơng (SS) 320,720 1,745 322,465 CV (%) = 8,420; Trung bình bình phƣơng (MS) 12,829 0,034 F bảng F tính 382,292 LSD.01 = 0,398 5% 1% 1,74 2,18 Bảng 44: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc vi khuẩn tổng hợp ngày STT Dòng vi khuẩn 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 Hàm lƣợng IAA tổng hợp (µg/ml) SH1 SH2 SH3 Tổng cộng 92,543 39,979 32,308 Bình phƣơng 8564,290 1598,354 1043,797 Trung bình 7,712 3,332 2,692 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 64,834 76,463 73,234 52,651 111,949 138,575 101,069 60,615 21,419 12,024 2,302 62,106 56,203 26,189 52,880 5,483 6,969 11,122 0,000 4,732 12,321 25,325 0,000 4203,412 5846,556 5363,210 2772,172 12532,534 19203,091 10215,015 3674,172 458,780 144,575 5,299 3857,216 3158,833 685,887 2796,330 30,066 48,571 123,701 0,000 22,394 151,805 641,342 0,000 5,403 6,372 6,103 4,388 9,329 11,548 8,422 5,051 1,785 1,002 0,192 5,176 4,684 2,182 4,407 0,457 0,581 0,927 0,000 0,394 1,027 2,110 0,000 Bảng 45: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc tất dòng vi khuẩn tổng hợp thời điểm Thời điểm Ngày Ngày Ngày Ngày Hàm lƣợng IAA (µg/ml) Tổng cộng Trung bình Bình phƣơng 282,314 348,500 342,786 169,699 3,619 4,468 4,395 2,176 79701,009 121452,250 117502,046 28797,694 Bảng 46: Bảng ANOVA hàm lƣợng IAA tổng hợp dòng vi khuẩn Nghiệm thức (NT) Vi khuẩn (VK) Thời điểm (TĐ) Tương tác VK x TĐ Sai số Độ tự (df) 103 25 75 208 Tổng bình phƣơng (SS) 4109,785 3072,262 265,004 772,519 6,659 Tổng cộng 311 4116,444 Nguồn CF = 4189,522; CV (%) = 4,883 LSD.01 (VK) = 0,188; LSD.01 (TĐ) = 0,074; Trung bình bình phƣơng (MS) 39,901 122,890 88,335 10,300 0,032 F bảng F tính 1246,276 3838,405 2759,074 321,722 LSD.01 (VK x TĐ) = 0,376 5% 1% 1,32 1,57 2,65 1,35 1,48 1,88 3,88 1,63 2. Kết khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn môi trƣờng RMR có bổ sung tryptophan Bảng 47: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc vi khuẩn tổng hợp ngày STT Dòng vi khuẩn 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 SH1 SH2 SH3 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 Hàm lƣợng IAA (µg/ml) Tổng I II III cộng (TC) 8,447 8,447 7,921 24,816 8,711 8,711 8,447 25,868 5,289 5,026 5,289 15,605 7,132 7,132 7,395 21,658 6,868 6,605 6,868 20,342 5,553 5,816 5,816 17,184 5,026 5,026 5,289 15,342 10,816 10,816 10,553 32,184 12,395 13,184 12,921 38,500 12,921 12,921 13,447 39,289 9,500 9,500 8,974 27,974 2,395 2,395 2,658 7,447 2,395 2,132 2,395 6,921 2,658 2,395 2,395 7,447 9,763 10,026 9,763 29,553 7,921 8,184 8,184 24,289 2,132 2,395 2,395 6,921 5,816 5,553 5,553 16,921 1,079 1,079 1,342 3,500 1,079 1,342 1,079 3,500 2,921 2,921 2,921 8,763 0,553 0,553 0,816 1,921 0,289 0,553 0,553 1,395 0,816 0,553 0,816 2,184 1,605 1,605 1,868 5,079 0,553 0,553 0,816 1,921 Bình phƣơng (BP) Trung bình BP (I) BP (II) BP (III) BP (TC) 8,272 71,358 71,358 62,743 615,823 8,623 75,873 75,873 71,358 669,175 5,202 27,979 25,264 27,979 243,524 7,219 50,859 50,859 54,682 469,064 6,781 47,175 43,630 47,175 413,801 5,728 30,832 33,823 33,823 295,297 5,114 25,264 25,264 27,979 235,380 10,728 116,981 116,981 111,358 1035,823 12,833 153,630 173,823 166,954 1482,250 13,096 166,954 166,954 180,832 1543,663 9,325 90,250 90,250 80,527 782,527 2,482 5,735 5,735 7,064 55,463 2,307 5,735 4,544 5,735 47,901 2,482 7,064 5,735 5,735 55,463 9,851 95,319 100,527 95,319 873,358 8,096 62,743 66,981 66,981 589,979 2,307 4,544 5,735 5,735 47,901 5,640 33,823 30,832 30,832 286,322 1,167 1,164 1,164 1,801 12,250 1,167 1,164 1,801 1,164 12,250 2,921 8,533 8,533 8,533 76,793 0,640 0,305 0,305 0,666 3,690 0,465 0,084 0,305 0,305 1,945 0,728 0,666 0,305 0,666 4,771 1,693 2,577 2,577 3,491 25,796 0,640 0,305 0,305 0,666 3,690 Bảng 48: Bảng ANOVA hàm lƣợng IAA tổng hợp dòng vi khuẩn ngày Nghiệm thức (NT) Sai số Độ tự (df) 25 52 Tổng bình phƣơng (SS) 1175,869 1,847 Tổng cộng 77 1177,716 Nguồn CF = 2118,765; CV (%) = 3,616; Trung bình bình phƣơng (MS) 47,035 0,036 F bảng F tính 1324,405 LSD.01 = 0,409 5% 1% 1,74 2,18 Bảng 49: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc vi khuẩn tổng hợp ngày STT Dòng vi khuẩn I 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 SH1 SH2 SH3 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 17,500 5,500 5,750 11,000 13,250 6,500 5,500 10,750 12,250 13,750 8,250 4,000 3,000 3,000 3,750 19,250 7,500 5,750 1,500 2,500 3,500 1,500 0,750 1,500 3,000 0,750 Hàm lƣợngIAA (µg/ml) Tổng II III cộng (TC) 17,500 17,250 52,250 5,250 5,500 16,250 5,250 5,750 16,750 10,500 10,750 32,250 12,750 13,250 39,250 6,250 6,250 19,000 5,500 5,250 16,250 10,500 11,000 32,250 12,000 12,000 36,250 13,000 13,500 40,250 8,000 8,000 24,250 4,250 4,000 12,250 2,750 3,250 9,000 3,500 3,000 9,500 3,750 3,500 11,000 19,500 19,000 57,750 7,000 7,500 22,000 6,000 5,750 17,500 1,500 1,750 4,750 2,500 2,750 7,750 3,500 3,500 10,500 1,250 1,250 4,000 1,000 0,750 2,500 1,750 1,500 4,750 3,250 3,250 9,500 0,750 1,000 2,500 Bình phƣơng (BP) Trung bình BP (I) BP (II) BP (III) BP (TC) 17,417 5,417 5,583 10,750 13,083 6,333 5,417 10,750 12,083 13,417 8,083 4,083 3,000 3,167 3,667 19,250 7,333 5,833 1,583 2,583 3,500 1,333 0,833 1,583 3,167 0,833 306,250 30,250 33,063 121,000 175,563 42,250 30,250 115,563 150,063 189,063 68,063 16,000 9,000 9,000 14,063 370,563 56,250 33,063 2,250 6,250 12,250 2,250 0,563 2,250 9,000 0,563 306,250 27,563 27,563 110,250 162,563 39,063 30,250 110,250 144,000 169,000 64,000 18,063 7,563 12,250 14,063 380,250 49,000 36,000 2,250 6,250 12,250 1,563 1,000 3,063 10,563 0,563 297,563 30,250 33,063 115,563 175,563 39,063 27,563 121,000 144,000 182,250 64,000 16,000 10,563 9,000 12,250 361,000 56,250 33,063 3,063 7,563 12,250 1,563 0,563 2,250 10,563 1,000 2730,063 264,063 280,563 1040,063 1540,563 361,000 264,063 1040,063 1314,063 1620,063 588,063 150,063 81,000 90,250 121,000 3335,063 484,000 306,250 22,563 60,063 110,250 16,000 6,250 22,563 90,250 6,250 Bảng 50: Bảng ANOVA hàm lƣợng IAA tổng hợp dòng vi khuẩn ngày Nguồn Nghiệm thức (NT) Sai số Tổng cộng CF = 3337,885; Độ tự (df) 25 52 77 Tổng bình phƣơng (SS) 1976,927 2,125 1979,052 CV (%) = 3,090; Trung bình bình phƣơng (MS) 79,077 0,041 F bảng F tính 1935,063 LSD.01 = 0,439 5% 1% 1,74 2,18 Bảng 51: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc vi khuẩn tổng hợp ngày STT Dòng vi khuẩn I 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 SH1 SH2 SH3 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 12,167 5,262 5,500 10,262 11,214 11,690 11,452 10,976 12,405 15,024 7,881 1,452 1,690 2,167 1,452 5,262 3,357 1,929 0,738 0,738 1,214 0,738 0,976 0,738 5,976 1,214 Hàm lƣợngIAA (µg/ml) Tổng II III cộng (TC) 12,167 11,929 36,262 5,500 5,500 16,262 5,500 5,500 16,500 10,262 10,024 30,548 11,214 10,976 33,405 11,452 11,452 34,595 11,452 11,214 34,119 10,976 11,214 33,167 12,405 12,167 36,976 14,786 15,024 44,833 7,643 7,881 23,405 1,452 1,452 4,357 1,452 1,690 4,833 1,929 2,167 6,262 1,452 1,214 4,119 5,738 5,976 16,976 3,357 3,595 10,310 1,690 1,929 5,548 0,738 0,976 2,452 0,976 0,738 2,452 1,214 0,976 3,405 0,738 0,976 2,452 0,738 1,214 2,929 0,976 0,738 2,452 5,738 5,500 17,214 0,976 0,976 3,167 Bình phƣơng (BP) Trung bình BP (I) BP (II) BP (III) BP (TC) 12,087 5,421 5,500 10,183 11,135 11,532 11,373 11,056 12,325 14,944 7,802 1,452 1,611 2,087 1,373 5,659 3,437 1,849 0,817 0,817 1,135 0,817 0,976 0,817 5,738 1,056 148,028 27,688 30,250 105,307 125,760 136,667 131,157 120,477 153,878 225,715 62,109 2,109 2,858 4,694 2,109 27,688 11,270 3,719 0,545 0,545 1,474 0,545 0,953 0,545 35,715 1,474 148,028 30,250 30,250 105,307 125,760 131,157 131,157 120,477 153,878 218,617 58,413 2,109 2,109 3,719 2,109 32,926 11,270 2,858 0,545 0,953 1,474 0,545 0,545 0,953 32,926 0,953 142,291 30,250 30,250 100,477 120,477 131,157 125,760 125,760 148,028 225,715 62,109 2,109 2,858 4,694 1,474 35,715 12,926 3,719 0,953 0,545 0,953 0,953 1,474 0,545 30,250 0,953 1314,926 264,450 272,250 933,157 1115,878 1196,830 1164,109 1100,028 1367,239 2010,028 547,783 18,985 23,361 39,211 16,967 288,191 106,286 30,776 6,014 6,014 11,592 6,014 8,577 6,014 296,332 10,028 Bảng 52: Bảng ANOVA hàm lƣợng IAA tổng hợp dòng vi khuẩn ngày Nguồn Nghiệm thức (NT) Sai số Tổng cộng CF = 2359,500; Độ tự (df) 25 52 77 Tổng bình phƣơng (SS) 1694,180 1,285 1695,465 CV (%) = 2,858; Trung bình bình phƣơng (MS) 67,767 0,025 F bảng F tính 2742,419 LSD.01 = 0,341 5% 1% 1,74 2,18 Bảng 53: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc vi khuẩn tổng hợp ngày STT Dòng vi khuẩn 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 SH1 SH2 SH3 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 Hàm lƣợng lân hòa tan (µg/ml) Tổng Trung I II III cộng bình (TC) 4,780 4,780 4,537 14,098 4,699 4,780 4,537 4,537 13,854 4,618 3,561 3,805 3,561 10,927 3,642 4,293 3,805 4,293 12,390 4,130 4,293 4,293 4,049 12,634 4,211 3,805 3,805 3,561 11,171 3,724 3,805 3,561 3,317 10,683 3,561 4,780 4,537 4,537 13,854 4,618 8,927 8,683 8,927 26,537 8,846 10,390 10,634 10,390 31,415 10,472 6,976 7,463 7,463 21,902 7,301 0,878 0,634 1,122 2,634 0,878 0,878 0,878 0,634 2,390 0,797 1,366 1,366 1,122 3,854 1,285 0,146 0,146 0,146 0,439 0,146 5,512 5,268 5,024 15,805 5,268 1,610 1,610 1,854 5,073 1,691 1,610 1,610 1,854 5,073 1,691 0,878 0,878 0,634 2,390 0,797 0,146 0,146 0,146 0,439 0,146 0,878 0,878 1,122 2,878 0,959 0,634 0,634 0,390 1,659 0,553 0,390 0,390 0,146 0,927 0,309 0,634 0,634 0,634 1,902 0,634 1,122 0,878 1,122 3,122 1,041 1,122 1,122 0,878 3,122 1,041 Bình phƣơng (BP) BP (II) BP (III) BP (TC) 22,853 22,853 22,853 20,581 12,681 14,477 18,427 14,477 18,427 18,427 14,477 14,477 14,477 12,681 22,853 20,581 79,688 75,393 107,957 113,085 48,659 55,703 0,771 0,402 0,771 0,771 1,866 1,866 0,021 0,021 30,384 27,755 2,591 2,591 2,591 2,591 0,771 0,771 0,021 0,021 0,771 0,771 0,402 0,402 0,152 0,152 0,402 0,402 1,259 0,771 1,259 1,259 20,581 20,581 12,681 18,427 16,393 12,681 11,003 20,581 79,688 107,957 55,703 1,259 0,402 1,259 0,021 25,244 3,436 3,436 0,402 0,021 1,259 0,152 0,021 0,402 1,259 0,771 198,741 191,924 119,396 153,518 159,622 124,785 114,125 191,924 704,190 986,879 479,717 6,939 5,713 14,851 0,193 249,794 25,737 25,737 5,713 0,193 8,283 2,751 0,859 3,619 9,747 9,747 BP (I) Bảng 54: Bảng ANOVA hàm lƣợng IAA tổng hợp dòng vi khuẩn ngày Nghiệm thức (NT) Sai số Độ tự (df) 25 52 Tổng bình phƣơng (SS) 579,772 1,388 Tổng cộng 77 581,160 Nguồn CF = 685,127; CV (%) = 5,513; Trung bình bình phƣơng (MS) 23,191 0,027 F bảng F tính 868,783 LSD.01 = 0,355 5% 1% 1,74 2,18 Bảng 55: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc tất dòng vi khuẩn tổng hợp thời điểm STT Dòng vi khuẩn 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 SH1 SH2 SH3 SH4 SH5 SH6 SH7 SH8 SH9 SH10 SH11 SH12 SH13 SH14 SH15 SH16 SH17 SH18 SH19 SH20 SH21 SH22 SH23 SH24 SH25 SH26 Hàm lƣợng IAA (µg/ml) Tổng cộng 127,425 72,234 59,782 96,846 105,631 81,950 76,394 111,455 138,263 155,787 97,531 26,689 23,145 27,063 45,111 114,821 44,304 45,042 13,093 14,141 25,546 10,032 7,750 11,289 34,915 10,710 Bình phƣơng 16237,196 5217,748 3573,899 9379,101 11157,911 6715,832 5836,055 12422,114 19116,595 24269,727 9512,274 712,284 535,674 732,402 2034,976 13183,757 1962,822 2028,768 171,417 199,979 652,597 100,640 60,065 127,442 1219,070 114,697 Trung bình 10,619 6,019 4,982 8,070 8,803 6,829 6,366 9,288 11,522 12,982 8,128 2,224 1,929 2,255 3,759 9,568 3,692 3,753 1,091 1,178 2,129 0,836 0,646 0,941 2,910 0,892 Bảng 56: Hàm lƣợng IAA (µg/ml) đƣợc vi khuẩn tổng hợp ngày Thời điểm Hàm lƣợng IAA (µg/ml) Tổng cộng Trung bình Bình phƣơng Ngày 406,526 5,212 165263,645 Ngày Ngày Ngày 510,250 429,000 231,171 6,542 5,500 2,964 260355,063 184041 53439,9072 Bảng 57: Bảng ANOVA hàm lƣợng IAA tổng hợp dòng vi khuẩn Nguồn Nghiệm thức (NT) Vi khuẩn (VK) Thời điểm (TĐ) Tương tác VK x TĐ Sai số Tổng cộng Độ tự (df) 103 25 75 208 311 Tổng bình phƣơng (SS) 5957,634 4302,5291 530,88612 1124,2188 6,6447432 5964,2787 CF = 7970,391; CV (%) = 3,536 LSD.01 (VK) = 0,188; LSD.01 (TĐ) = 0,074; Trung bình bình phƣơng (MS) 57,841106 172,10116 176,96204 14,989583 0,0319459 F bảng F tính 1810,59671 5387,27248 5539,43223 469,21804 LSD.01 (VK x TĐ) = 0,376 5% 1% 1,32 1,57 2,65 1,35 1,48 1,88 3,88 1,63 [...]... hữu ích ở cây lúa trồng ở miền Trung, đặc biệt vùng miền núi của tỉnh Phú Yên - Phú Yên là một trong những vựa lúa lớn của miền Trung - vẫn còn nhiều hạn chế Vì các lý do trên, đề tài Phân lập và khảo sát đặc tính vi khuẩn nội sinh cây lúa trồng trên đất ở huyện Sơn Hòa, tỉnh Phú Yên được thực hiện 1.2 Mục tiêu đề tài Phân lập được một số dòng vi khuẩn nội sinh cây lúa và khảo sát đặc tính cố định... mẫu và phân lập các dòng vi khuẩn + Thu mẫu Địa điểm thu mẫu: Thu mẫu lúa ở vùng trồng lúa tại 3 địa điểm của huyện Sơn Hòa, tỉnh Phú Yên Cách thu mẫu: Thu 3 mẫu lúa ở mỗi địa điểm, mỗi mẫu chọn 4-5 cây lúa đang ở giai đoạn tăng trưởng mạnh Cách bảo quản mẫu trong quá trình vận chuyển: Rửa cây lúa dưới vòi nước chảy mạnh cho thật sạch đất bám ở thân và rễ, bảo quản ở 4ºC + Xử lý mẫu Cắt rời thân và. .. tỉnh Phú Yên, có diện tích lớn, nằm trên Quốc lộ 25 nối các tỉnh Tây Nguyên với duyên hải Nam Trung Bộ, trung tâm huyện là thị trấn Củng Sơn với một cao nguyên nổi tiếng khí hậu ôn hòa mát mẻ là cao nguyên Vân Hòa - là một vùng đất đỏ bazan, nằm ở độ cao 400m trên địa bàn các xã Sơn Xuân, Sơn Long và Sơn Định Sơn Hòa có vị trí giáp huyện Đồng Xuân ở phía bắc, giáp huyện Sông Hinh và huyện Tây Hoà ở. .. 2013 Trường ĐHCT Trên thế giới, nhiều vi khuẩn nội sinh được tìm thấy ở rễ, vùng rễ và thân cây lúa như Azospirillum sp., Burkholderia sp., Enterobacter sp., Herbaspirillium sp., Klebsiella sp.,… (Koomnok et al., 2007; Mano và Morisaki, 2008) Ở Vi t Nam, đặc biệt ở vùng đồng bằng sông Cửu Long đã có nhiều nghiên cứu và ứng dụng vi khuẩn nội sinh ở cây lúa như phân lập được Burkholderia vietnamiensis,... tra độ ròng của các dòng vi khuẩn phân lập dưới kính hiển vi quang học ở độ phóng đại 400 lần Cấy chuyển vi khuẩn đã ròng sang ống nghiệm chứa môi trường RMR đặc, trữ ở 4ºC và được xem như là một dòng vi khuẩn 3.3.2 Quan sát hình thái và đo kích thƣớc khuẩn lạc Trong khi cấy chuyển vi khuẩn trên môi trường phân lập đặc, tiến hành đo kích thước và quan sát hình thái các dạng khuẩn lạc bao gồm các chỉ... một vụ và nhu cầu nước qua các thời kỳ sinh trưởng không giống nhau Trong đất ngập nước, cây lúa phát triển thuận lợi, cho năng suất cao và ổn định nhất Cây lúa có thể trồng trên các loại đất khác nhau nhưng đất trồng lúa tốt cần có khả năng giữ nước tốt, có pH thích hợp trong khoảng 5,5 - 7,5 và giàu các chất dinh dưỡng (Nguyễn Ngọc Đệ, 2008) Ở Vi t Nam, lúa là cây trồng cổ truyền và là cây trồng quan... cây lúa trồng ở miền Nam Vi t Nam (Van et al., 1994; Cao Ngọc Điệp et al., 2007) Bên cạnh đó, hiệu quả của những dòng vi khuẩn nội sinh trên các giống lúa cao sản cũng được nghiên cứu như Pseudomonas stutzeri với cây lúa cao sản trồng trên đất phù sa nông trường Sông Hậu, Cần Thơ (Ngô Thanh Phong và Cao Ngọc Điệp, 2011) Tuy nhiên, vi c nghiên cứu và hiểu biết về các loài vi khuẩn nội sinh hữu ích ở. .. phát hiện và phân lập từ rễ và thân cây mía đường trồng ở Brazil bởi Cavalcante và Döbereiner Chúng hiện diện trong các khoảng trống gian bào của tế bào nhu mô và được xem là vi khuẩn nội sinh bắt buộc (Cavalcante và Döbereiner, 1988) A diazotrophicus cũng được phân lập từ những cây trồng khác như cỏ Cameroon (Pennisetum purpureum), coffee (Coffea arabica), trà, chuối, ragi, lúa và khóm và kể cả trên những... 3.2.2 Nguyên vật liệu Mẫu rễ và thân lúa được thu từ ruộng lúa ở 3 xã thuộc huyện Sơn Hòa, tỉnh Phú Yên 3.2.3 Hóa chất + Hóa chất dùng để khử trùng mẫu rễ, thân của cây lúa - Ethanol 96% - Hydrogen peroxide (H2O2) 3% - Nước cất vô trùng Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 20 Vi n NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 35 - 2013 Trường ĐHCT + Hóa chất dùng để phân lập vi khuẩn nội sinh Bảng... sát dưới kính hiển vi quang học ở độ phóng đại 400 lần và ghi nhận kết quả Nếu tế bào vi khuẩn có màu tím xanh, vi khuẩn Gram dương vì vách tế bào ăn màu Crystal violet nên có màu tím xanh Nếu tế bào vi khuẩn có màu hồng đỏ, vi khuẩn Gram âm vì không còn màu của Crystal violet nên có màu hồng của Fushin 3.3.4 Xác địnhđặc tính những dòng vi khuẩn nội sinh 3.3.4.1 Khảo sát khả năng cố định đạm + Nguyên . Khả năng tổng hợp IAA của các dòng vi khuẩn 44 CHƢƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 51 5. 1. Kết luận 51 5. 2. Đề nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Các hình ảnh Phụ lục 2: Kết quả. NH 4 + cao nhất được dòng SH22 tổng hợp (4,1 75 µg/ml) sau 4 ngày chủng, dòng SH4 hòa tan được lượng P 2 O 5 cao nhất (196, 188 µg/ml) ở ngày thứ 15 và dòng SH9 sinh tổng hợp được lượng IAA cao. lúa tốt cần có khả năng giữ nước tốt, có pH thích hợp trong khoảng 5, 5 - 7 ,5 và giàu các chất dinh dưỡng (Nguyễn Ngọc Đệ, 20 08) . Ở Việt Nam, lúa là cây trồng cổ truyền và là cây trồng quan trọng