TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA HỌC TỰ NHIÊN  NGUYỄN VĂN NHỚ KHẢO SÁT SỰ THAY ĐỔI HÀM LƯỢNG CỦA DOXYCYCLINE TRONG HUYẾT TƯƠNG GIA CẦM THEO THỜI GIAN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH HÓA DƯỢC Cần thơ, 2013 Luận văn tốt nghiệp đại học TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN HÓA HỌC NGUYỄN VĂN NHỚ KHẢO SÁT SỰ THAY ĐỔI HÀM LƯỢNG CỦA DOXYCYCLINE TRONG HUYẾT TƯƠNG GIA CẦM THEO THỜI GIAN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH HÓA DƯỢC CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TS. NGUYỄN TRỌNG TUÂN Cần thơ, 2013 SVTH: Nguyễn Văn Nhớ Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Năm học 2013-2014 Đề tài: “Khảo sát thay đổi hàm lượng doxycycline huyết tương gia cầm theo thời gian phương pháp HPLC” LỜI CAM ĐOAN Tôi tên Nguyễn Văn Nhớ, tác giả Luận văn xin xác nhận chỉnh sửa hoàn chỉnh theo ý kiến góp ý Thầy, Cô phản biện Hội đồng chấm bảo vệ luận văn. Cần thơ, ngày 25 tháng 12 năm 2013 Nguyễn Văn Nhớ Luận văn tốt nghiệp đại học Chuyên ngành: Hóa Dược Đã bảo vệ duyệt Hiệu trưởng:…………………………. Trưởng Khoa:…………………………. Trưởng Chuyên ngành Cán hướng dẫn TS. Nguyễn Trọng Tuân SVTH: Nguyễn Văn Nhớ Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Độc lập - Tự Do - Hạnh phúc -----  ------ BỘ MÔN HÓA HỌC NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN 1. Cán hướng dẫn: TS. Nguyễn Trọng Tuân 2. Đề tài: Khảo sát thay đổi hàm lượng doxycycline huyết tương gia cầm theo thời gian phương pháp HPLC. 3. Sinh viên thực hiện: Nguyễn Văn Nhớ MSSV: 2102468 Lớp: Hóa Dược – Khóa 36 4. Nội dung nhận xét: a. Nhận xét hình thức luận văn tốt nghiệp: b. Nhận xét nội dung luận văn tốt nghiệp: c. Nhận xét đối tượng sinh viên tham gia thực đề tài: d. Kết luận, đề nghị, điểm: Cần thơ, ngày… tháng… năm 2013 Cán chấm hướng dẫn SVTH: Nguyễn Văn Nhớ Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Độc lập - Tự Do - Hạnh phúc -----  ------ BỘ MÔN HÓA HỌC NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 1. Cán phản biện: 2. Đề tài: Khảo sát thay đổi hàm lượng doxycycline huyết tương gia cầm theo thời gian phương pháp HPLC. 3. Sinh viên thực hiện: Nguyễn Văn Nhớ MSSV: 2102468 Lớp: Hóa Dược – Khóa 36 4. Nội dung nhận xét: a. Nhận xét hình thức luận văn tốt nghiệp: b. Nhận xét nội dung luận văn tốt nghiệp: c. Nhận xét đối tượng sinh viên tham gia thực đề tài: d. Kết luận, đề nghị, điểm: Cần thơ, ngày… tháng… năm 2013 Cán chấm phản biện SVTH: Nguyễn Văn Nhớ Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học SVTH: Nguyễn Văn Nhớ Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn quý Thầy, Cô đặc biệt thầy cô môn hóa học, Khoa Khoa Học Tự Nhiên, trường Đại Học Cần Thơ, Thầy, Cô truyền đạt tận tình cho em kiến thức kinh nghiệm quý báu suốt thời gian em theo học trường. Em xin chân thành cảm ơn Cô, Chú, Anh, Chị công tác Trung Tâm R&D giúp đỡ em trình thực đề tài. Em xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo công ty Vemedim chấp nhận tạo điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thành luận văn này. Một lần em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc gia đình động viên giúp đỡ thực luận văn này. Cùng tất bạn sinh viên ngành Hóa dược, Khoa Khoa Học Tự Nhiên, trường Đại Học Cần Thơ hỗ trợ nhiệt tình giúp đỡ hoàn thành luận văn này. Em xin chân thành cảm ơn! Cần thơ, ngày tháng năm 2013 Sinh viên thực Nguyễn Văn Nhớ SVTH: Nguyễn Văn Nhớ i Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học TÓM TẮT Đối với loại dược phẩm việc xác định số dược động học cần thiết. Đề tài “Khảo sát thay đổi hàm lượng doxycycline huyết tương gia cầm theo thời gian phương pháp HPLC” thực nhằm xác định hàm lượng doxycycline huyết tương gia cầm sau sử dụng thuốc. Từ tạo sở khoa học sử dụng doxycycline đúng, hợp lý, an toàn hiệu quả. Đề tài thực phương pháp chiết pha rắn SPE sau định lượng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC. Qua trình thực đề tài thu kết quả: xác định hiệu suất thu hồi phương pháp chiết SPE, H% = 96,7%, giá trị LOD = 0,18, LOQ = 0,6, RSD = 6,18, R = 0,999 phương pháp HPLC. Nồng độ doxycycline huyết tương đạt mức cao thời điểm sau sử dụng thuốc sau 48 tồn máu nên cần ý đến thời gian ngưng sử dụng thuốc trước giết. Từ khóa: HPLC, SPE, doxycycline. SVTH: Nguyễn Văn Nhớ ii Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học ABSTRACT For each drug, the determination of pharmacokinetic indices are necessary. The project “Survey changes in content of plasma doxycycline birds over time by HPLC method” was implemented in order to determine the concentration of doxycycline in plasma of poultry after use drug. From that point, we create a true, reasonable, safe and effective scientific basis of using doxycycline. The topic is performed by using Solid Phase Extraction method and quantified by High Performance Liquid Chromatography. The results of the topic are: determining the efficiency of recovery of the SPE extraction method, H% = 96.7%, the values of LOD = 0,18, LOQ = 0,6, RSD = 6,18, R = 0,999 of the HPLC method. The concentration of Doxycycline in plasma is peak at hours after using drugs and still exists in the blood after 48 hours. Therefore, we need to pay attention to the time of discontinuation of using drugs before killing. Key words: HPLC, SPE, doxycycline. SVTH: Nguyễn Văn Nhớ iii Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan kết luận văn hoàn thành dựa kết nghiên cứu thực nghiệm kết nghiên cứu chưa dung cho luận văn cấp nào. Cần Thơ, ngày …tháng…năm 2013 Sinh viên cam đoan Nguyễn Văn Nhớ SVTH: Nguyễn Văn Nhớ iv Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học Hình 4.2 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ doxycycline huyết tương theo thời gian mẫu IM 10. Nhận xét – đánh giá Từ bảng 4.4 hình 4.2 cho thấy, doxycycline hấp thu nhanh qua đường tiêm, nồng độ doxycycline huyết tương tăng nhanh khoảng thời gian từ tiêm đến sau tiêm. Nồng độ thuốc đạt mức cao (0,47 ppm) thời gian đầu sau tiêm sau nồng độ doxycycline huyết tương giảm chậm theo thời gian. Từ khoảng thời gian 24h sau tiêm nồng độ giảm chậm, khoảng thời gian từ sau 48 sau tiêm nồng đồ doxycycline tồn máu mức tương đối thấp (0,223 ppm). SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 40 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học 4.3.2 Mẫu uống (PO 10, PO 20, PO 30) Mẫu uống (PO 10) Bảng 4.5 Kết phân tích hàm lượng doxycycline huyết tương gia cầm mẫu PO 10 Thời gian Diện tích peak Cdoxycycline HT (ppm) 0,5h sau uống 468891 1,273 1h sau uống 680839 1,844 2h sau uống 1178718 3,186 3h sau uống 1005868 2,720 6h sau uống 629745 1,707 9h sau uống 322729 0,880 12h sau uống 249219 0,681 24h sau uống 71286 0,202 36h sau uống 12597 0,044 48h sau uống 6080 0,026 Mẫu đối chứng: 0,0 ppm SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 41 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học Biếu diễn kết tính toán đồ thị hàm lượng lại doxycycline theo thời gian. Hình 4.3 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ doxycycline huyết tương theo thời gian mẫu PO 10. Nhận xét – đánh giá Từ bảng 4.5 hình 4.3 cho thấy, doxycycline hấp thu nhanh qua đường uống nồng độ tăng nhanh khoảng thời gian từ uống đến sau uống. Nồng độ thuốc huyết tương đạt mức cao (3,18 ppm) thời gian đầu sau uống, sau nồng độ doxycycline giảm nhanh theo thời gian từ khoảng đến sau uống. Từ khoảng thời gian sau uống nồng độ giảm chậm dần đến khoảng thời gian từ sau 36 sau uống nồng độ doxycycline (0,044 ppm) 0,026 ppm qua 48 giờ. SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 42 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học Mẫu uống (PO 20) Bảng 4.6 Kết phân tích hàm lượng doxycycline huyết tương gia cầm mẫu PO 20 Thời gian Diện tích peak Cdoxycycline HT (ppm) 0,5h sau uống 517143 1,403 1h sau uống 845943 2,289 2h sau uống 1262640 3,412 3h sau uống 1132763 3,062 6h sau uống 1064788 2,879 9h sau uống 565562 1,534 12h sau uống 357684 0,974 24h sau uống 91900 0,258 36h sau uống 22847 0,072 48h sau uống 20523 0,065 Mẫu đối chứng: 0,0 ppm SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 43 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học Biếu diễn kết tính toán đồ thị hàm lượng lại doxycycline theo thời gian. Hình 4.4 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ doxycycline huyết tương theo thời gian mẫu PO 20. Nhận xét – đánh giá Từ bảng 4.6 hình 4.4 cho thấy, liều uống 20 mg/kgTT doxycycline hấp thu nhanh qua đường uống, nồng độ doxycycline huyết tương tăng nhanh khoảng thời gian từ uống đến khoảng sau uống. Nồng độ doxycycline đạt mức cao (3,412 ppm) thời gian đầu sau uống sau nồng độ doxycycline máu giảm nhanh theo thời gian từ khoảng đến sau uống. Từ khoảng thời gian sau uống nồng độ giảm chậm dần đến 48 nồng độ lại máu 0,065 ppm. SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 44 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học Mẫu uống (PO 30) Bảng 4.7 Kết phân tích hàm lượng doxycycline huyết tương gia cầm mẫu PO 30 Thời gian Diện tích peak CDoxycycline HT (ppm) 0.5h sau uống 722185 1,956 1h sau uống 724824 1,963 2h sau uống 1416487 3,826 3h sau uống 1239427 3,349 6h sau uống 985568 2,665 9h sau uống 417250 1,134 12h sau uống 345626 0,941 24h sau tiêm 134624 0,373 36h sau uống 59296 0,170 48h sau uống 50493 0.146 Mẫu đối chứng: 0,0 ppm SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 45 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học Biếu diễn kết tính toán đồ thị hàm lượng lại doxycycline theo thời gian. Hình 4.5 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ doxycycline huyết tương theo thời gian mẫu PO 30. Nhận xét – đánh giá: Từ bảng 4.7 hình 4.5 cho thấy, liều uống 30 mg/kgTT doxycycline hấp thu nhanh qua đường uống, nồng độ doxycycline huyết tương tăng nhanh khoảng thời gian từ uống đến khoảng sau uống. Nồng độ thuốc đạt mức cao (3,826 ppm) thời gian đầu sau uống, sau nồng độ doxycycline máu giảm nhanh theo thời gian khoảng đến giảm tương đối chậm khoảng thời gian từ đến sau uống. Sau tiếp tục giảm với tốc độ tương đối chậm từ khoảng thời gian từ đến 36 (chỉ 0,17 ppm) 0,146 ppm khoảng thời gian 48 giờ. SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 46 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học 4.3.3 Đánh giá chung mẫu Hình 4.6 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ doxycycline huyết tương theo thời gian mẫu: IM 10 , PO 10, PO 20 PO 30. So sánh hàm lượng doxycycline theo thời gian mẫu: Qua hình 4.5 cho thấy: nhìn chung doxycycline mẫu đạt mức hàm lượng cao khoảng thời gian sau sử dụng thuốc giảm tương đối nhanh từ đến sau sử dụng thuốc, sau 12 tất mẫu giảm xuống mức ppm tiếp tục giảm tương đối khoảng thời gian lại. Ở mẫu uống thay đổi hàm lượng thuốc sử dụng cho gia cầm (gà) thay đổi không đáng kể hàm lượng thuốc cho sử dụng vượt mức hấp thu tối đa cá thể nên tăng liều sử dụng hàm lượng doxycycline máu thay đổi mạnh. Ở mẫu tiêm hàm lượng doxycycline máu cao thời điểm sau tiêm, hàm lượng đạt thấp, có 0,47 ppm. Và giảm tương đối chậm theo thời gian. Giữa mẫu tiêm (IM 10) mẫu uống (PO 10) có khác biệt nhiều hàm lượng sử dụng là: SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 47 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học - - Mức độ hấp thụ mẫu tiêm mẫu uống, nồng độ doxycycline cao huyết tương mẫu PO 10 3,18 ppm, mẫu tiêm IM 10 có 0,47 ppm. Ở mẫu tiêm IM 10 hàm lượng doxycycline đạt mức cao mức thời gian sau sử dụng, mẫu uống PO 10 hấp thu nhanh đạt mức cao thời gian sau uống. SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 48 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học CHƯƠNG KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ Kết luận Qua trình tiến hành “khảo sát thay đổi hàm lượng doxycycline huyết tương gia cầm theo thời gian phương pháp HPLC” đạt kết sau: Xây đựng phương trình đường chuẩn doxycycline từ khoảng 0,1 ppm đến 40 ppm, đồng thời xác định RSD, LOD, LOQ. Xác định hiệu suất thu hồi doxycycline phương pháp chiết pha rắn SPE. Với điều kiện làm việc phòng thí nghiệm, quy trình chiết tách SPE phân tích HPLC thu kết sau: Quy trình phân tích doxycycline Sử dụng cột SPE Chromabond Easy Máy HPLC Shimazdu LC – 20AD với đầu dò UV Pha động: ACN:MeOH:TFA 0,15% (23:25:52). Cột: RP – C18 Gemini Phenomenex 250 x 4,6 mm, µm. Detector UV 225 nm Tốc độ dòng: mL/ phút Thể tích tiêm: 20 μL. Xác định hàm lượng doxycycline huyết tương gia cầm theo thời gian mẫu: IM 10, PO 10, PO 20, PO 30 với nghiệm thức tiến hành khảo sát nồng độ thuốc doxycycline mẫu đạt mức hàm lượng cao khoảng thời gian sau sử dụng thuốc giảm tương đối nhanh từ đến sau sử dụng thuốc, sau 12 tất mẫu giảm xuống mức ppm tiếp tục giảm tương đối khoảng thời gian lại. Sau 48 tiêm thuốc, nồng độ thuốc tồn máu nên cần ý xem xét thời gian ngưng sử dụng thuốc trước tiến hành giết mổ. Kiến nghị Cần tiến hành khảo sát hàm lượng doxycycline tồn dư thịt gà. Khảo sát thêm số kháng sinh thông dụng khác. SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 49 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học Cần mở rộng khảo sát thêm nhiều đối tượng khác như: vịt, trâu, bò…nhằm phân tích phản ứng khác vật nuôi thuốc, đánh giá khả hấp thu, chuyển hóa thuốc vật nuôi khác mà có bước điều chỉnh lượng thuốc sử dụng cho phù hợp. Cần tiến hành khảo sát khoảng thời gian gần kéo dài thời gian khảo sát để có kết xác thời gian đạt nồng độ cực đại thuốc thời gian bán hủy thuốc thể vật nuôi, đánh giá xác tốc độ biến thiên nồng độ thuốc máu vật nuôi thử nghiệm. Đồng thời có thêm kết thời gian hết hẳn thuốc máu vật nuôi mà có khuyến cáo sử dụng thuốc hợp lý hơn. SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 50 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học TÀI LIỆU THAM KHẢO (1) Bài Giảng Hóa Dược (2013) - Phần Kháng Sinh, Bộ Môn Hóa Dược, Trường Đại Học Y Dược Cần Thơ. (2) Doxycycline Hyclate Product Data Sheet, Issue Date 09/11/2013. (3) (4) http://www.dieutri.vn/d/14-5-2011/S555/Doxycyclin.htm Dược Điển Việt Nam 4. (5) TS. Nguyễn Đình Lâm, Chuyên đề Sắc ký (Cơ sở lý thuyết ứng dụng), Bộ môn Công nghệ Hóa học vật liệu, Khoa Hóa, Trường Đại học Bách Khoa – Đại học Đà Nẵng. (6) Http://Luanvan.Net.Vn/Luan-Van/Lay-Mau-Xu-Ly-So-Bo-Va-Bao-QuanMau-Phan-Tich-8182/, Truy Cập Ngày 19/09/2013. (7) Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương Pháp Cô Lập Hợp Chất Hữu Cơ, Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh. (8) Phạm Thị Ánh, Phân tích kỹ thuật sắc ký, 2010, Trung tâm đào tạo phát triển sắc ký Thành phố Hồ Chí Minh. (9) Hoàng Minh Châu, Cơ Sở Hóa Học Phân Tích (9/2007), Nhà Xuất Bản Khoa Học Và Kỹ Thuật. (10) Macherey Nagel, Spe Applications. (11) Giáo trình kiểm nghiệm 2009, Bộ môn hóa phân tích – kiểm nghiệm – Độc chất, Trường Đại học Y Dược Cần Thơ, (12) Nguyễn Thị Diệp Chi (2008), Giáo Trình Các Phương Pháp Phân Tích Hiện Đại, Bộ Môn Hóa Học, Khoa Khoa Học Tự Nhiên. (13) Phạm Bình Minh, Luận Văn Tốt Nghiệp Đại Học (2013), Xác Định Dư Lượng Thuốc Bảo Về Thực Vật Trong Bảo Quản Củ Hành Tím Vĩnh Châu (Sóc Trăng). (14) Hồ Viết Quý, Cơ sở hóa học phân tích đại, tập Các phương pháp phân chia, làm giàu ứng dụng phân tích, NXB Đại học Sư phạm. (15) Nguyễn Đức Huê, Các phương pháp phân tích hữu cơ, NXB Đại học Quốc Gia Hà Nội. (16) Chu Phạm Ngọc Sơn, Kỹ thuật sắc ký lỏng, Tháng 10/2010, Trung tâm phát triển đào tạo sắc ký Thành phố Hồ Chí Minh. (17) PGS.TS. Trần Tử An (2005), Kiểm Nghiệm Dược Phẩm, Nhà Xuất Bản Y Học. (18) PGS.TS. Phạm Xuân Đà (8/2010), Thẩm Định Phương Pháp Trong Phân Tích Hóa Học & Vi Sinh Vật, Viện Kiểm Nghiệm An Toàn Vệ Sinh Thực Phẩm Quốc Gia. SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 51 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học (19) Trần Thị Bích Nhung, Luận Văn Đại Học (2010), Xác Định Hàm Lượng Glucosamine Sulfate Trong Dược Phẩm Bằng Phương Pháp Sắc Ký Lỏng Cao Áp, Đại Học Cần Thơ. (20) Trương Kim Thoa, Luận Văn Đại Học (2010), Đánh Giá Các Phương Pháp Định Lượng Sorbitol Trong Nguyên Liệu Dược Phẩm. (21) Http://Www.Case.Vn/Vi-Vn/87/88/117/Details.Case 27/09/2013 Truy Cập Ngày (22) Http://Vi.Wikipedia.Org/Wiki/Dung_M%C3%B4i Truy Cập Ngày 20/09/2013. (23) Becky Wittrig, Ph.D, Restek Corporation, HPLC Method Development. (24) British Pharmacopoeia 2007 (Bp-2007). (25) Copyright © 1998-2000 Applications With HPLC. Agilent Technologies, Pharmaceutical (26) Dragan A MutavdzˇIc´ Pavlovic´ , Sandra Babic´ , Alka J.M. Horvat, Marija Kasˇ Telan-Macan. Sample Preparation In Analysis Of Pharmaceuticals. Trends In Analytical Chemistry, Vol. 26, No. 11, 2007. (27) George Lunn, Copyright @ 2005 By John Wiley & Sons, Inc . HPLC Methods For Recently Approved Pharmaceuticals. (28) Gl Sciences’ Newest And Most Advanced Ods Phase - New For 2009, State-Of-The-Art C18 Hplc Columns (29) Macherey Nagel, Solid Phase Extraction Application Guide. (30) Idris Et Al. Journal Of Analytical Science And Technology 2013, Simultaneous Determination Of Methaqualone, Saccharin, Paracetamol, And Phenacetin In Illicit Drug Samples By HPLC. (31) Innovative Approaches For Today’s Food Analysis Challenges, Agilent Spe Food Safety Applications Notebook, Volume 1. (32) International Journal Of Life Science And Pharma Research- Vol 2/Issue 4/Oct-Dec 2012, Doxycycline Hyclate: A Review Of Properties, Applications And Analytical Methods. (33) Jason Olbrich* And Joel Corbett- Olbrich And Corbett. Mod Chem Appl 2013, Development And Utilization Of Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography Methods For A Series Of Therapeutic Agents. (34) Journal Of Rare Earths, Vol.23, Suppl., Dec. 2005, P.19, Determination Of Doxycycline By Europium Ion Fluorescence Probe Sensitized By Surfactant. (35) Journal Of The Sebian Chemical Society, A Rapid And Reliable Determination Of Doxycycline Hyclate By Hplc With Uv Detection In Pharmaceutical Samples, J. Serb. Chem. Soc. 73 (6) 665–671 (2008) Jscs–3749. SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 52 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học (36) Udo Huber Ronald E. Majors, Principles In Preparative HPLC, © 2007 Agilent Technologies Inc. April 2007, Publication Number 5989-6639en. (37) Pavagada J. Ramesh, Kanakapura Basavaiah, Kalsang Tharpa, Kanakapura Basavaiah Vinay, Hosakere Doddarevanna Revanasiddappa. Development And Validation Of RP-HPLC Method For The Determination Of Doxycycline Hyclate In Spiked Human Urine And Pharmaceuticals. Journal Of Pre-Clinical And Clinical Research, 2010, Vol 4, No 2, 101-107 (38) Pharmacokinetics Of Doxycycline In Adults With Cystic Fibrosis, Http://Www.Ncbi.Nlm.Nih.Gov/Pubmed/22024822, Truy Cập Ngày 17/09/2013. SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 53 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học PHỤ LỤC KẾT QUẢ XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN CỦA DOXYCYCLINE SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 54 Hóa Dược K36 SVTH: Nguyễn Văn Nhớ Hóa Dược K36 [...]... nồng độ doxycycline trong huyết tương theo thời gian mẫu PO 10 42 Hình 4.4 Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của nồng độ doxycycline trong huyết tương theo thời gian mẫu PO 20 44 Hình 4.5 Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của nồng độ doxycycline trong huyết tương theo thời gian mẫu PO 30 46 Hình 4.6 Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của nồng độ doxycycline trong huyết tương theo thời gian mẫu:... 38 Bảng 4.4 Kết quả phân tích hàm lượng doxycycline trong huyết tương gia cầm mẫu IM 10 39 Bảng 4.5 Kết quả phân tích hàm lượng doxycycline trong huyết tương gia cầm mẫu PO 10 41 Bảng 4.6 Kết quả phân tích hàm lượng doxycycline trong huyết tương gia cầm mẫu PO 20 43 Bảng 4.7 Kết quả phân tích hàm lượng doxycycline trong huyết tương gia cầm mẫu PO 30 45... tài Khảo sát sự thay đổi hàm lượng của doxycycline trong huyết tương gia cầm theo thời gian bằng phương pháp HPLC Xác định hàm lượng thuốc trong huyết tương gia cầm sau khi tiêm thuốc Từ đó tạo cơ sở khoa học sử dụng doxycycline đúng, hợp lý, an toàn và hiệu quả SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 1 Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học 1.3 Nội dung đề tài Phân tích định tính Dựa vào HPLC để phân tích định tích doxycycline. .. mẫu 29 3.2.3 Khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của doxycycline 31 SVTH: Nguyễn Văn Nhớ v Hóa Dược K36 Luận văn tốt nghiệp đại học 3.2.4 Xác định hiệu suất thu hồi 33 3.2.5 Khảo sát sự thay đổi hàm lượng doxycycline trong huyết tương gia cầm theo thời gian 35 Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 4.1 Kết quả khảo sát tính tuyến tính theo nồng độ của doxycycline 37 4.2... đặc biệt vi sinh vật gây bệnh Xuất phát từ nhu cầu trên của thực tiễn, tôi tiến hành nghiên cứu đề tài Khảo sát sự thay đổi hàm lượng của doxycycline trong huyết tương gia cầm theo thời gian bằng phương pháp HPLC với sự giúp đỡ của Công ty Cổ Phần sản xuất Kinh Doanh Vật Tư và Thuốc Thú Y (Vemedim) Doxycycline là một kháng sinh thuộc nhóm tetracyclin có sức mạnh tiêu diệt được cả vi khuẩn gram (-) và... thống HPLC 33 Hình 3.5 Quy trình chiết doxycycline bằng phương pháp SPE 34 Hình 3.6 Hệ thống máy cô quay chân không 35 Hình 3.7 Máy siêu âm 35 Hình 4.1 Đồ thị biểu diễn phương trình đường chuẩn của doxycycline 37 Hình 4.2 Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của nồng độ doxycycline trong huyết tương theo thời gian mẫu IM 10 40 Hình 4.3 Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của. .. 37 4.2 Kết quả tính hiệu suất thu hồi 38 4.3 Kết quả khảo sát sự thay đổi hàm lượng doxycycline trong huyết tương gia cầm theo thời gian 39 4.3.1 Mẫu tiêm (IM 10) 39 4.3.2 Mẫu uống (PO 10, PO 20, PO 30) 41 Chương 5 KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 49 Kết luận 49 Kiến nghị 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC 54 SVTH: Nguyễn Văn Nhớ... trị Rf của từng vết So sánh Rf của vết bên dung dịch chuẩn và vết bên dung dịch mẫu để xác định xem trong mẫu có chứa chất cần phân tích hay không Rf  a b a: Đoạn đường di chuyển của chất phân tích b: Đoạn đường di chuyển của pha động Sắc ký lỏng hiệu năng cao Nguyên tắc phân tích định tính của phương pháp là: so sánh thời gian lưu của các peak trong mẫu phân tích với thời gian lưu của các peak trong. .. dung dịch chuẩn và dung dịch thử Ghi lại sắc ký đồ của doxycyclin Tính hàm lượng doxycyclin, có trong mẫu dựa vào diện tích peak thu được trên sắc ký đồ của dung dịch chuẩn và dung dịch thử Ngoài ra còn có các phương pháp để xác định doxycycline như: Phương pháp đo huỳnh quang, phương pháp so màu, phương pháp định lượng trong môi trường khan… 2.2 Phương pháp chiết tách 2.2.1 Chuẩn bị mẫu phân tích [5],[6]... HPLC để phân tích định tích doxycycline dựa vào thời gian lưu của mẫu thử và mẫu chuẩn Phân tích định lượng Xây dựng đường chuẩn Tính toán hiệu suất thu hồi Xác định giới hạn phát hiện (LOD) Xác định giới hạn định lượng (LOQ) Tiến hành định lượng doxycycline trong huyết tương của các mẫu tiêm (IM 10) và mẫu uống (PO 10, PO 20, PO 30) ở những khoảng thời gian khác nhau SVTH: Nguyễn Văn Nhớ 2 Hóa Dược . 2 .3. 3 Phân tích định tính 22 2 .3. 4 Phân tích định lượng 22 2 .3. 5 Hiệu suất thu hồi 25 2 .3. 6 Xác định RSD, LOD, LOQ . 25 2 .3. 7 Các thông số đặc trưng trong sắc ký lỏng hiệu năng cao 27 2 .3. 8. vấn đề 1 1 .2 Mục tiêu đề tài 1 1 .3 Nội dung đề tài 2 Chương 2. TỔNG QUAN 3 2. 1 Sơ lược về doxycycline 3 2. 1.1 Cấu tạo 3 2. 1 .2 Tính chất 3 2. 1 .3 Phương pháp xác định 5 2. 2 Phương pháp. 27 2 .3. 8 Ứng dụng của sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) 28 Chương 3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 3. 1 Phương tiện nghiên cứu 29 3. 1.1 Thiết bị 29 3. 1 .2 Dụng cụ 29 3. 1 .3 Hóa chất 29 3. 2 Thực