TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÖ Y LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Tên đề tài: THỬ NGHIỆM HIỆU QUẢ PHÕNG VÀ TRỊ BỆNH VIÊM GAN DO VIRUS CỦA KHÁNG THỂ IgY TRÊN VỊT CON Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGS.TS HỒ THỊ VIỆT THU NGUYỄN THANH XUÂN MSSV: 3103002 LỚP: THÚ Y – K36 Cần Thơ, 12/2014 i TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÖ Y ….  …. Đề tài: “Thử nghiệm hiệu phòng trị bệnh viêm gan virus kháng thể IgY vịt con”. Do sinh viên: Nguyễn Thanh Xuân thực phòng thí nghiệm virus học, môn Thú y trại Nghiên cứu Thực nghiệm Nông nghiệp, khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ từ tháng 6/2014 đến tháng 12/2014. Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2014 Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2014 Duyệt môn Duyệt giáo viên hƣớng dẫn PGS.TS Hồ Thị Việt Thu Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2014 Duyệt khoa Nông Nghiệp Và Sinh Học Ứng Dụng ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: Cha, mẹ gia đình tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành tốt trình học tập luận văn này. Cô Hồ Thị Việt Thu tận tình dạy bảo, hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình hoàn thành luận văn. Anh Lê Trần Hoài Khanh, anh Phạm Công Uẩn tận tình hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành tốt luận văn Thầy Lê Hoàng Sĩ, cố vấn học tập, tận tình dạy giúp đở suốt năm học vừa qua. Quý thầy cô trường Đại học Cần Thơ, đặc biệt thầy cô môn Thú y, khoa Nông Nghiệp Sinh học Ứng dụng tận tình giảng dạy truyền đạt cho nhiều kiến thức quý báu suốt năm học vừa qua. Các bạn sinh viên lớp Thú y khóa 36 gắn bó, vượt qua khó khăn để hoàn thành khóa học này. Xin gửi lời chúc đến quý thầy cô, người thân bạn bè dồi sức khỏe, thành công công tác hạnh phúc sống. Nguyễn Thanh Xuân iii MỤC LỤC Trang tựa . i Trang duyệt ii LỜI CẢM ƠN . iii MỤC LỤC . iv DANH MỤC BẢNG . vii DANH MỤC HÌNH .viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT . ix TÓM LƢỢC . x Chƣơng 1: ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 2: CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh viêm gan virus vịt giới nƣớc 2.1.1 Tình hình nghiên cứu giới 2.1.2 Tình hình nghiên cứu nước 2.2 Căn bệnh học 2.2.1 Phân loại 2.2.2 Đặc điểm hình thái cấu trúc virus viêm gan vịt 2.2.3 Đặc tính nuôi cấy virus . 2.2.4 Sức đề kháng virus viêm gan vịt . 2.2.5 Đặc tính kháng nguyên virus viêm gan vịt . 2.3 Truyền nhiễm học . 2.3.1 Loài mắc bệnh 2.3.2 Đường lây lan . 2.4 Cơ chế sinh bệnh . 2.5 Triệu chứng bệnh tích . 2.5.1 Triệu chứng 2.5.2 Bệnh tích 2.6 Chẩn đoán bệnh viêm gan vịt virus 11 iv 2.6.1 Chẩn đoán lâm sàng bệnh tích 11 2.6.2 Chẩn đoán virus học . 11 2.6.3 Chẩn đoán huyết học . 11 2.6.4 Chẩn đoán phân biệt . 12 2.7 Phòng bệnh . 12 2.7.1 Phòng bệnh vệ sinh thú y . 12 2.7.2 Phòng vaccine 12 2.8 Trị bệnh . 13 2.9 Miễn dịch chống virus viêm gan vịt . 14 2.9.1 Miễn dịch thụ động . 14 2.9.2 Miễn dịch chủ động 14 2.10 Vai trò kháng thể . 15 2.10.1 Liên kết với kháng nguyên . 15 2.10.2 Hoạt hóa tế bào miễn dịch 15 2.11 Kháng thể IgY . 17 2.11.1 Sơ lược IgY . 17 2.11.2 Ưu điểm IgY 18 2.11.3 Đặc tính IgY . 18 2.11.4 Tổng quan tình hình nghiên cứu IgY 20 Chƣơng 3: PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM . 21 3.1 Nội dung thí nghiệm . 21 3.2 Phƣơng tiện thí nghiệm 21 3.2.1 Thời gian địa điểm . 21 3.2.2 Đối tượng thí nghiệm . 21 3.2.3 Dụng cụ, hóa chất sinh phẩm . 21 3.3 Phƣơng pháp thí nghiệm 22 3.3.1 Chuẩn độ xác định liều gây chết 50% vịt thí nghiệm DHV type I 22 v 3.3.2 Thí nghiệm xác định liều bảo hộ 50% phôi vịt (PD50: protection dose 50%) kháng thể IgY phản ứng trung hòa phôi vịt 12 ngày tuổi 24 3.3.3 Thử nghiệm hiệu phòng bệnh viêm gan vịt virus type I kháng thể IgY 26 3.3.4 Thử nghiệm hiệu trị bệnh viêm gan vịt virus type I kháng thể IgY 27 3.3.5 Thống kê xử lý số liệu . 28 Chƣơng 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 Kết xác định liều gây chết 50% vịt thí nghiệm . 29 4.2 Kết xác định liều bảo hộ 50% phôi vịt 12 ngày tuổi kháng thể IgY . 30 4.3 Kết xác định hiệu phòng bệnh viêm gan vịt type I kháng thể IgY . 31 4.3.1 So sánh hiệu phòng bệnh viêm gan vịt type I kháng thể IgY theo đường cấp 31 4.3.2 So sánh hiệu phòng bệnh viêm gan vịt type I kháng thể IgY theo liều cấp 32 4.4 Kết xác định hiệu trị bệnh viêm gan vịt type I kháng thể IgY 33 4.4.1 So sánh hiệu trị bệnh viêm gan vịt type I kháng thể IgY theo thời điểm cấp . 33 4.4.2 So sánh hiệu trị bệnh viêm gan vịt type I kháng thể IgY theo liều cấp 34 Chƣơng 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36 5.1 Kết luận . 36 5.2 Đề nghị 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 Phụ chƣơng . 41 vi DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 3.1 Bố trí thí nghiệm tính số LD50 DHV type I vịt thí nghiệm 23 3.2 Bố trí thí nghiệm xác định liều bảo hộ 50% phôi vịt (PD50) kháng thể IgY 25 3.3 Bố trí thí nghiệm thử nghiệm hiệu phòng bệnh viêm gan vịt type I kháng thể IgY 27 3.4 Bố trí thí nghiệm thử nghiệm hiệu trị bệnh viêm gan vịt type I kháng thể IgY 28 4.1 Tỷ lệ vịt chết nồng độ 29 4.2 Số phôi vịt chết qua hiệu giá kháng thể trung hòa 30 4.3 Tỷ lệ bảo hộ vịt sử dụng kháng thể IgY để phòng bệnh viêm gan vịt theo đường cấp 31 4.4 Tỷ lệ bảo hộ vịt sử dụng kháng thể IgY để phòng bệnh viêm gan vịt theo liều cấp 32 4.5 Tỷ lệ bảo hộ vịt sử dụng kháng thể IgY để trị bệnh viêm gan vịt theo thời điểm cấp 33 4.6 Tỷ lệ bảo hộ vịt sử dụng kháng thể IgY để trị bệnh viêm gan vịt theo liều cấp 34 vii DANH MỤC HÌNH Hình Tên Hình Trang 2.1 Cấu trúc không gian Picornavirus 2.2 Vịt chết ngoẹo đầu 2.3 Gan vịt bị xuất huyết 10 2.4 Cấu trúc kháng thể 16 2.5 Cấu trúc kháng thể IgG IgY 19 viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ Nguyên văn Nghĩa tiếng Việt DHAV-3 Duck hepatitis virus type III Virus viêm gan vịt type III ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Phản ứng miễn dịch gắn men Fab Fragment antigen binding Phần nhận biết kháng nguyên Fc Fragment crystal Tiểu phần có khả kết tinh SPF Specific – pathogen – free Không có mầm bệnh đặc hiệu OIE Office international epizooties Tổ chức thú y giới ORF Open reading frame Khung đọc mở NK Natural killer Tế bào diệt tự nhiên LD50 Lethal dose 50% Liều gây chết 50% PD50 Protection dose 50% Liều bảo hộ 50% IgY Egg yolk immunoglobulin Globulin miễn dịch từ lòng đỏ trứng IgG Immunoglobulin G Globulin miễn dịch lớp G IgA Immunoglobulin A Globulin miễn dịch lớp A IgM Immunoglobulin M Globulin miễn dịch lớp M IgE Immunoglobulin E Globulin miễn dịch lớp E IgD Immunoglobulin D Globulin miễn dịch lớp D RNA Ribonucleic acid CPE Cytopathic effect Bệnh tích tế bào PBS Phosphat buffered saline Dung dịch đệm phosphate ix TÓM LƢỢC Đề tài “Thử nghiệm hiệu phòng trị bệnh viêm gan virus kháng thể IgY vịt con” tiến hành từ tháng 06/2014 đến tháng 12/2014, nhằm khảo sát khả phòng trị bệnh viêm gan vịt virus type I kháng thể lòng đỏ trứng IgY vịt con. Qua thời gian nghiên cứu ghi nhận kết sau: Kháng thể IgY có tác dụng việc phòng bệnh viêm gan vịt type I. Tỷ lệ bảo hộ vịt sử dụng kháng thể với liều 10 PD50 80%, 30 PD50 85% cao 95% ta sử dụng liều 50 PD50 để phòng bệnh viêm gan vịt type I. Tuy nhiên, sai khác ý nghĩa thống kê. Tỷ lệ bảo hộ vịt kháng thể K.T.V (Hanvet) 70%. Tỷ lệ bảo hộ vịt ta sử dụng liều 50 PD50 95%, cao so với sản phẩm K.T.V (Hanvet) sai khác có ý nghĩa thống kê. Kháng thể tiêm vào ức cho tỷ lệ bảo hộ cao (93,3%) ta cấp kháng thể đường uống (80%). Tuy nhiên, sai khác tỷ lệ bảo hộ vịt cấp kháng thể qua đường khác nhau. Kháng thể IgY có hiệu việc trị bệnh viêm gan vịt virus type I. Tỷ lệ bảo hộ vịt sử dụng liều 10 PD50 80%, tỷ lệ bảo hộ đạt 90% ta cấp kháng thể IgY với liều 50 PD50. Tỷ lệ bảo hộ thấp 60% ta sử dụng kháng thể K.T.V (Hanvet). Sự sai khác nghiệm thức sử dụng liều kháng thể 10 PD50, 30 PD50 50 PD50 ý nghĩa thống kê. Tỷ lệ bảo hộ vịt sử dụng kháng thể IgY với liều 50 PD 50 cao so với kháng thể K.T.V (Hanvet) sai khác có ý nghĩa thống kê. Tác dụng trị bệnh kháng thể theo thời điểm cấp (sau 6h, sau 12h) đạt 86,6%. Như vậy, kháng thể IgY có tác dụng cao việc phòng trị bệnh viêm gan vịt virus. Hiệu phòng bệnh viêm gan vịt type I kháng thể IgY đạt 95% ta sử dụng liều 50 PD50 93,3% ta cấp kháng thể qua đường tiêm bắp. Hiệu trị bệnh viêm gan vịt type I kháng thể IgY đạt 90% sử dụng với liều 50 PD50 86,6% ta cấp kháng thể sau 6h 12h công cường độc chủng virus viêm gan vịt type I subtype 3. Hiệu phòng trị bệnh kháng thể IgY cao sản phẩm K.T.V (Hanvet). Tỷ lệ bảo hộ kháng thể K.T.V phòng bệnh 70% việc trị bệnh 60%. x Chƣơng 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận - Kháng thể IgY có hiệu phòng trị bệnh viêm gan vịt type I. - Chưa thấy khác biệt cấp kháng thể qua đường uống tiêm ức. - Thời điểm cấp kháng thể sau 6h sau 12h công cường độc không ảnh hưởng đến hiệu phòng bệnh viêm gan vịt type I. - Sử dụng kháng thể với 50 PD50 cho hiệu cao phòng bệnh viêm gan vịt virus. Sử dụng kháng thể với liều 30 PD50 50 PD50 mang lại hiệu cao trị bệnh viêm gan vịt virus. - Hiệu phòng trị bệnh viêm gan vịt virus kháng thể IgY phòng thí nghiệm tạo cao kháng thể K.T.V công ty Hanvet. 5.2 Đề nghị - Cần khảo sát liều sử dụng kháng thể IgY phòng trị bệnh theo lứa tuổi khác nhau. 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt 1. Bùi Thanh Khiết (2007), Nghiên cứu quy trình sản xuất vaccine viêm gan vịt từ chủng virus vaccine nhược độc DH-EG-2000 ứng dụng phòng, can thiệp dịch vào thực tế sản xuất, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội. 2. Bùi Thị Cúc (2002), Nghiên cứu biến đổi bệnh lý đại thể, vi thể siêu vi thể bệnh viêm gan siêu vi trùng vịt, Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp, Viện Khoa học Kỹ thuật Việt Nam. 3. Đoàn Thị Thanh Hương, Nguyễn Bá Hiên, Trần Xuân Hạnh, Lê Thanh Hòa (2010), Phát genotype III (DHAV-3) virus gây bệnh viêm gan vịt Việt Nam phương pháp giám định phân tử, Tạp chí Công Nghệ Sinh Học, 8(2), tr. 145-153. 4. Hồ Thị Việt Thu Nguyễn Đức Hiền, (2012), Bệnh gia cầm. NXB Đại học Cần Thơ, tr. 283-288. 5. Hồ Thị Việt Thu, (2012), Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc, gia cầm. NXB Đại học Cần Thơ, tr. 87-90. 6. Lê Minh Chí, Hồ Đình Chúc, Bùi Quý Huy (1999), Kết điều tra dịch bệnh gia súc, gia cầm tỉnh phía Bắc (1995-1997), Khoa học Kỹ thuật Thú y, 6(3), Hội thú y Việt Nam, tr. 75-78. 7. Lê Thanh Hòa (2002), Sinh học phân tử: nguyên lý ứng dụng, Viện Công nghệ Sinh học – Viện Khoa học công nghệ Việt Nam, 104 trang. 8. Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (2004), Một số vấn đề miễn dich thụ động gia súc, gia cầm non, NXB Nông nghiệp Hà Nội. 9. Nguyễn Đức Lưu, Vũ Như Quán (2002), Bệnh viêm gan virus vịt, Khoa học Kỹ thuật Thú y, 9(1), tr. 87-90. 10. Nguyễn Đường, Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Khắc Tuấn, Nguyễn Thị Bích Lộc, Nguyễn Bá Hiên, (1990), Vi sinh vật đại cương. NXB Nông nghiệp, Hà Nội. 11. Nguyễn Phục Hưng (2004), Tình hình mắc bệnh viêm gan vịt virus số tỉnh đồng Bắc Bộ. Phân lập virus gây bệnh, nghiên cứu đặc tính sinh học chủng virus nhược độc viêm gan vịt DH-EG-2000 quy trình sản xuất vaccine. Luận văn thạc sỹ nông nghiệp. Trường Đại học Nông nghiệp I Hà Nội. 37 12. Nguyễn Văn Cảm, Nguyễn Thị Thu Hà, Nguyễn Khánh Ly (2001), Nghiên cứu biến đổi bệnh lý viêm gan vịt virus. Khoa học Kỹ thuật Thú y, 8(4), tr. 48-55. 13. Nguyễn Văn Cảm, Nguyễn Thị Thu Hà, Nguyễn Khánh Ly (2001), Nghiên cứu biến đổi bệnh lý viêm gan vịt virus. Khoa học Kỹ thuật Thú y, 8(4), tr. 48-51. 14. Nguyễn Vĩnh Phước, Hồ Đình Chúc, Nguyễn Văn Hanh, Đặng Thế Huynh (1978), Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc, NXB Nông nghiêp, Hà Nội. 15. Nguyễn Xuân Bình (1995), 109 bệnh gia cầm. NXB Long An, tr 179185. 16. Trần Minh Châu, Lê Thị Nồng, Nguyễn Đức Tạo (1985), Thăm dò chế tạo vaccine viêm gan vịt sử dụng, Kết nghiên cứu Khoa học Kỹ thuật Thú y (1985-1989), Viện Thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr. 41-45. 17. Trần Minh Châu, Lê Thu Hồng (1985), Thăm dò tạo chủng vaccine nhược độc viêm gan vịt chủng phân lập địa phương. Khoa học Kỹ thuật thú y, 6(4), tr. 3-8. 18. Trần Thị Lan Hương (2007), Phân lập virus gây bệnh viêm gan vịt đàn vịt nuôi số tỉnh phụ cận Hà Nội. Tạp chí Khoa học Kỹ thuật thú y 5, tr.13-16 Tài liệu tiếng Anh 1. Asplin, F.D., (1958), An attenuated strain of Vet Rec virus. Veterinary Record, 70: 1226-1230. 2. Asplin, F.D.,(1961), Notes on epidemiology and vaccination for hepatitis virus of ducks. Epizoot Bull, 56: 793-800. 3. Campbell, N.I. and J.N. Reece., (1995). Biologie. De Boeck,. W.H. Freeman and Company, New York: 18-23. 4. Chang, H.M., Y.T. Ou-Yang Chen and C.C. Chen., (1999), Productivity and some properties of immunoglobulin specific again Streptococcus mutant serotype C in chicken egg yolk (IgY). J. Agric. Food Chem, 47: 61-66. 38 5. Gough R.E and Spackman D (1981), Studies with inactivated duck virus hepatitis vaccines in breeder ducks, Avian Pathol 10, pp. 471-479. 6. Gough RE, Spackman D., (1981), Studies with inactivated duck virus hepatitis vaccines in breeder ducks. Avian Pathol 10: 471-479. 7. Haider SA, Calnek BW., (1979), In vitro isolation, propagation, and characterization of duck hepatitis virus type III. Avian Dis 23: 715-729. 8. Hatta, H., A. Crowley and B. Scoble., (1993), Production and some properties of egg yolk antibody (IgY) againt human rotavirus compared with rabbit IgG. Biosci. Biotechnol. Biochem, 57: 450-454. 9. Hwang J., (1996), Duck hepatitis virus in duck embryo liver cell culture. Avian dis: 500-512. 10. Kim M.C, Kim M.J, Kwon Y.K, Lindberg A.M, Joh S.J, Kwon H.M, Lee Y.J and Kwon J.H, 2009, Development of duck hepatitis A virus type III vaccine and its use to protect ducklings against infection. Vaccine, 27: 6688-6694. 11. Kim M.C, Kwon Y.K, Joh S.J, Kim S.J, Tolf C, Kim J.H, Sung H.W, Lindberg A.M and Kwon J.H., (2007), Recent Korean isolates of duck hepatitis virus reveal the presence of a new genome and serotype when compared to duck hepatitis virus type I type strains, Arch Virol, 152: 2059-72. 12. Kovacs-Nolan, J, Mine, Y., (2004), Passive immunization through avian egg antibodies. Food Biotechnol, 18: 39-62. 13. Levine, P.P. and J. Fabricant., (1950), Virus diseases of ducks in North America. Cornell Vet 40. 14. Patterson R., J.S. Youngner., W.O Weigle & F.J. Dixon., (1962), Antibody production and transfer to egg yolk in chicken. J. Immunol, 89: 272-278. 15. Reuss U (1959), Versuche zur aktiven and passiven Immunierung bei der Virus hepatitis der Entenkuken, Zentrabl Veterinaermed. 6: 808-815. 16. Rose, M.E and H. Hatta., (1974). Immunoglobulin classes in the hen’s egg: their segregation in yolk and white. Eur. J. Immunology 4: 512-523. 17. Shimizu, M., R. Fitzsimmons and S. Nakai., (1988). Anti-Ecoli immunoglobulin Y isolated from egg yolk of immunized chicken as a potential food ingredient. J. Food Sci, 53: 1360-1366. 39 18. Toth, T.E., (1969), Studies of an agent causing mortaliry among ducklings immune to duck virus hepatitis. Avian Dis, 13: 535-539. 19. Tseng C.H, Knowles N.J and Tsai H.J., (2007), Molecular analysis of duck hepatitis virus type I indicates that it should be assigned to a new genus, Virus Res. 123: 190-203. 20. Woolcock P.R., (2003), Duck hepatitis, Diseases of Poultry, 11th Ed, Iowa State Press, Ames, IA: 343-354. 21. Woolley, J.A. and J. Landon., (1995). Comparision of antibody production to human interleukin-6 (IL-6) by sheep and chicken. J. Immunol Methods, 178(2): 253-265. Tài liệu Internet 1. Chăn nuôi gia cầm. http://vi.wikipedia.org/wiki/Ch%C4%83n_nu%C3%B4i_gia_c%E1%BA %A7m 2. The production of Avian (Egg Yolk) http://altweb.jhsph.edu/pubs/ecvam/ecvam21.html Antibodies: IgY. 3. Overview of Duck Viral Hepatitis. http://www.merckmanuals.com/vet/poultry/duck_viral_hepatitis/overvie w_of_duck_viral_hepatitis.html 40 Phụ chƣơng 1: MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG QUÁ TRÌNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI Tiêm ức vịt Cho vịt uống kháng thể Phân lô vịt thí nghiệm 41 Phụ chƣơng 2: KẾT QUẢ PHÂN TÍCH THỐNG KÊ Bảng 4.3 Tỷ lệ bảo hộ vịt sử dụng kháng thể IgY để phòng bệnh viêm gan vịt theo đƣờng cấp Chi-Square Test: ĐC, Uống, Tiêm Expected counts are printed below observed counts So chet 2.29 So song 7.71 Total 10 6.86 24 23.14 30 6.86 28 23.14 30 Total 16 54 70 Chi-Sq = 14.286 0.107 3.440 DF = 2, P-Value + 4.233 + + 0.032 + + 1.019 = 23.117 = 0.000 Chi-Square Test: ĐC, Uống Expected counts are printed below observed counts So chet 3.50 So song 6.50 Total 10 10.50 24 19.50 30 Total 14 26 40 Chi-Sq = 5.786 + 3.115 + 1.929 + 1.038 = 11.868 DF = 1, P-Value = 0.001 Chi-Square Test: ĐC, Tiêm Expected counts are printed below observed counts So chet 2.50 So song 7.50 Total 10 7.50 28 22.50 30 Total 10 30 40 Chi-Sq = 12.100 + 4.033 + 42 4.033 + 1.344 = 21.511 DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: Uống, Tiêm Expected counts are printed below observed counts So chet 4.00 So song 24 26.00 Total 30 4.00 28 26.00 30 Total 52 60 Chi-Sq = 1.000 + 0.154 + 1.000 + 0.154 = 2.308 DF = 1, P-Value = 0.129 Bảng 4.4 Tỷ lệ bảo hộ vịt sử dụng kháng thể IgY để phòng bệnh viêm gan vịt theo liều cấp Chi-Square Test: ĐC, 10, 30, 50, K.T.V Expected counts are printed below observed counts So chet 2.44 So song 7.56 Total 10 4.89 16 15.11 20 4.89 17 15.11 20 4.89 19 15.11 20 4.89 14 15.11 20 Total 22 68 90 Chi-Sq = 12.626 0.162 0.730 3.093 0.253 DF = 4, P-Value + 4.085 + 0.052 + 0.236 + 1.001 + 0.082 = 0.000 + + + + = 22.320 43 Chi-Square Test: ĐC, 10 Expected counts are printed below observed counts So chet 4.00 So song 6.00 Total 10 8.00 16 12.00 20 Total 12 18 30 Chi-Sq = 4.000 + 2.667 + 2.000 + 1.333 = 10.000 DF = 1, P-Value = 0.002 Chi-Square Test: ĐC, 30 Expected counts are printed below observed counts So chet 3.67 So song 6.33 Total 10 7.33 17 12.67 20 Total 11 19 30 Chi-Sq = 5.121 + 2.965 + 2.561 + 1.482 = 12.129 DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: ĐC, 50 Expected counts are printed below observed counts So chet 3.00 So song 7.00 Total 10 6.00 19 14.00 20 Total 21 30 Chi-Sq = 8.333 + 3.571 + 4.167 + 1.786 = 17.857 DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: ĐC, K.T.V Expected counts are printed below observed counts So chet 4.67 So song 5.33 Total 10 44 9.33 14 10.67 20 Total 14 16 30 Chi-Sq = 2.381 + 2.083 + 1.190 + 1.042 = 6.696 DF = 1, P-Value = 0.010 Chi-Square Test: 10, 30 Expected counts are printed below observed counts So chet 3.50 So song 16 16.50 Total 20 3.50 17 16.50 20 Total 33 40 Chi-Sq = 0.071 + 0.015 + 0.071 + 0.015 = 0.173 DF = 1, P-Value = 0.677 Chi-Square Test: 10, 50 Expected counts are printed below observed counts So chet 2.50 So song 16 17.50 Total 20 2.50 19 17.50 20 Total 35 40 Chi-Sq = 0.900 + 0.129 + 0.900 + 0.129 = 2.057 DF = 1, P-Value = 0.151 Chi-Square Test: 10, K.T.V Expected counts are printed below observed counts So chet 5.00 So song 16 15.00 Total 20 5.00 14 15.00 20 Total 10 30 40 Chi-Sq = 0.200 + 0.200 + 0.067 + 0.067 = 0.533 45 DF = 1, P-Value = 0.465 Chi-Square Test: 30, 50 Expected counts are printed below observed counts So chet 2.00 So song 17 18.00 Total 20 2.00 19 18.00 20 Total 36 40 Chi-Sq = 0.500 + 0.056 + 0.500 + 0.056 = 1.111 DF = 1, P-Value = 0.292 Chi-Square Test: 30, KTV Expected counts are printed below observed counts So chet 4.50 So song 17 15.50 Total 20 4.50 14 15.50 20 Total 31 40 Chi-Sq = 0.500 + 0.145 + 0.500 + 0.145 = 1.290 DF = 1, P-Value = 0.256 Chi-Square Test: 50, K.T.V Expected counts are printed below observed counts So chet 3.50 So song 19 16.50 Total 20 3.50 14 16.50 20 Total 33 40 Chi-Sq = 1.786 + 0.379 + 1.786 + 0.379 = 4.329 DF = 1, P-Value = 0.037 Bảng 4.5 Tỷ lệ bảo hộ vịt sử dụng kháng thể IgY để trị bệnh viêm gan vịt theo thời điểm cấp 46 Chi-Square Test: ĐC, Sau 6h, Sau 12h Expected counts are printed below observed counts So chet 2.29 So song 7.71 Total 10 6.86 26 23.14 30 6.86 26 23.14 30 Total 16 54 70 Chi-Sq = 14.286 1.190 1.190 DF = 2, P-Value + 4.233 + + 0.353 + + 0.353 = 21.605 = 0.000 Chi-Square Test: ĐC, Sau 6h Expected counts are printed below observed counts So chet 3.00 So song 7.00 Total 10 9.00 26 21.00 30 Total 12 28 40 Chi-Sq = 8.333 + 3.571 + 2.778 + 1.190 = 15.873 DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: ĐC, Sau 12h Expected counts are printed below observed counts So chet 3.00 So song 7.00 Total 10 9.00 26 21.00 30 Total 12 28 40 Chi-Sq = 8.333 + 3.571 + 2.778 + 1.190 = 15.873 DF = 1, P-Value = 0.000 47 Chi-Square Test: Sau 6h, Sau 12h Expected counts are printed below observed counts So chet 4.00 So song 26 26.00 Total 30 4.00 26 26.00 30 Total 52 60 Chi-Sq = 0.000 + 0.000 + 0.000 + 0.000 = 0.000 DF = 1, P-Value = 1.000 Bảng 4.6 Tỷ lệ bảo hộ vịt sử dụng kháng thể IgY để trị bệnh viêm gan vịt theo thời điểm cấp Chi-Square Test: ĐC, 10, 30, 50, K.T.V Expected counts are printed below observed counts So chet 2.89 So song 7.11 Total 10 5.78 16 14.22 20 5.78 18 14.22 20 5.78 18 14.22 20 10 5.78 10 14.22 20 Total 26 64 90 Chi-Sq = 9.043 0.547 2.470 2.470 3.085 DF = 4, P-Value + 3.674 + 0.222 + 1.003 + 1.003 + 1.253 = 0.000 + + + + = 24.772 Chi-Square Test: ĐC, 10 Expected counts are printed below observed counts 48 So chet 4.00 So song 6.00 Total 10 8.00 16 12.00 20 Total 12 18 30 Chi-Sq = 4.000 + 2.667 + 2.000 + 1.333 = 10.000 DF = 1, P-Value = 0.002 Chi-Square Test: ĐC, 30 Expected counts are printed below observed counts So chet 3.33 So song 6.67 Total 10 6.67 18 13.33 20 Total 10 20 30 Chi-Sq = 6.533 + 3.267 + 3.267 + 1.633 = 14.700 DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: ĐC, 50 Expected counts are printed below observed counts So chet 3.33 So song 6.67 Total 10 6.67 18 13.33 20 Total 10 20 30 Chi-Sq = 6.533 + 3.267 + 3.267 + 1.633 = 14.700 DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: ĐC, K.T.V Expected counts are printed below observed counts So chet 5.33 So song 4.67 Total 10 10.67 12 9.33 20 Total 16 14 30 49 Chi-Sq = 1.333 + 1.524 + 0.667 + 0.762 = 4.286 DF = 1, P-Value = 0.038 Chi-Square Test: 10, 30 Expected counts are printed below observed counts So chet 3.00 So song 16 17.00 Total 20 3.00 18 17.00 20 Total 34 40 Chi-Sq = 0.333 + 0.059 + 0.333 + 0.059 = 0.784 DF = 1, P-Value = 0.376 Chi-Square Test: 10, 50 Expected counts are printed below observed counts So chet 3.00 So song 16 17.00 Total 20 3.00 18 17.00 20 Total 34 40 Chi-Sq = 0.333 + 0.059 + 0.333 + 0.059 = 0.784 DF = 1, P-Value = 0.376 Chi-Square Test: 10, K.T.V Expected counts are printed below observed counts So chet 6.00 So song 16 14.00 Total 20 6.00 12 14.00 20 Total 12 28 40 Chi-Sq = 0.667 + 0.286 + 0.667 + 0.286 = 1.905 DF = 1, P-Value = 0.168 50 Chi-Square Test: 30, 50 Expected counts are printed below observed counts So chet 2.00 So song 18 18.00 Total 20 2.00 18 18.00 20 Total 36 40 Chi-Sq = 0.000 + 0.000 + 0.000 + 0.000 = 0.000 DF = 1, P-Value = 1.000 Chi-Square Test: 30, K.T.V Expected counts are printed below observed counts So chet 5.00 So song 18 15.00 Total 20 5.00 12 15.00 20 Total 10 30 40 Chi-Sq = 1.800 + 0.600 + 1.800 + 0.600 = 4.800 DF = 1, P-Value = 0.028 Chi-Square Test: 50, K.T.V Expected counts are printed below observed counts So chet 5.00 So song 12 15.00 Total 20 5.00 18 15.00 20 Total 10 30 40 Chi-Sq = 1.800 + 0.600 + 1.800 + 0.600 = 4.800 DF = 1, P-Value = 0.028 51 [...]... chủng virus viêm gan vịt type I subtype 3 Để khảo sát khả năng phòng và trị bệnh của chế phẩm, chúng tôi tiến hành đề tài: Thử nghiệm hiệu quả phòng và trị bệnh viêm gan do virus của kháng thể IgY trên vịt con với các mục tiêu sau: - Xác định được khả năng phòng bệnh viêm gan vịt do virus của kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà - Xác định được khả năng trị bệnh viêm gan vịt do virus của kháng thể IgY. .. LD50 trên vịt, chúng tôi sử dụng liều 103,0 LD50 để gây nhiễm cho vịt trong thí nghiệm xác định hiệu quả phòng và trị bệnh viêm gan vịt do virus của kháng thể IgY trên vịt con 3 ngày tuổi 3.3.2 Thí nghiệm xác định liều bảo hộ 50% phôi vịt (PD50: protection dose 50%) của kháng thể IgY bằng phản ứng trung hòa trên phôi vịt 12 ngày tuổi Mục tiêu: xác định được liều bảo hộ 50% phôi vịt của dịch kháng thể. .. kháng thể bảo hộ 50% phôi vịt thí nghiệm (PD50) - Khảo sát hiệu quả phòng và trị bệnh của kháng thể IgY trên vịt con - Khảo sát khả năng trị bệnh của kháng thể IgY trên vịt con 3.2 Phƣơng tiện thí nghiệm 3.2.1 Thời gian và địa điểm Thời gian thực hiện đề tài: từ tháng 6 đến tháng 12 năm 2014 Địa điểm thí nghiệm: Thí nghiệm trên phôi vịt: xét nghiệm phản ứng trung hòa virus được thực hiện tại phòng. .. 79,66%-100%, bệnh tích vi thể điển hình ở gan có tế bào viêm dạng đơn nhân, xuất huyết, hoại tử, tăng sinh ống dẫn mật với tỷ lệ là 100% Nguyễn Đức Lưu và Vũ Như Quán (2002), đã nghiên cứu ứng dụng của kháng thể kháng virus viêm gan vịt để phòng trị bệnh Và Tháng 8 năm 2001 Công ty Han–Vet đã chế tạo được sản phẩm kháng thể viêm gan vịt Một nghiên cứu về bệnh viêm gan vịt do virus trên các đàn vịt nuôi... dịch tễ thế giới OIE (2010), bệnh viêm gan vịt do virus viêm gan type I xảy ra khắp nơi trên thế giới, còn bệnh viêm gan vịt gây ra bởi virus viêm gan vịt type II chỉ xảy ra ở nước Anh và type III chỉ mới được công bố ở Mỹ 2.2.2 Đặc điểm hình thái và cấu trúc của virus viêm gan vịt Virus viêm gan vịt có kích thước rất nhỏ, xuyên qua màng lọc Beckefeld và Seitz (Levine và Fabricant, 1950) Theo Reuss... nhiễm cận trên 50% B là tỷ lệ phần trăm (%) nhiễm cận dưới 50% a là nồng độ pha loãng tại A b là nồng độ pha loãng tại B Sau khi xác định được liều PD50 trên phôi vịt, chúng tôi sử dụng liều 10 PD50, 30 PD50, 50 PD50 để tiến hành thí nghiệm phòng và trị bệnh viêm gan vịt do virus cho vịt con 3 ngày tuổi 3.3.3 Thử nghiệm hiệu quả phòng bệnh viêm gan vịt do virus type I bằng kháng thể IgY Bố trí thí nghiệm: ... tiến hành thí nghiệm phòng và trị bệnh viêm gan vịt type I Chuẩn bị: chuẩn bị phôi vịt 12 ngày tuổi giống như thí nghiệm xác định LD50 Pha loãng mẫu kháng thể IgY theo log 2 với 8 nồng độ từ 1/2 đến 1/1024 Chuẩn bị virus viêm gan vịt type I với liều 100 LD50 Tiến hành: trộn virus viêm gan vịt type I và mẫu kháng thể đã chuẩn bị ở trên theo tỷ lệ 1:1 ở mỗi nồng độ Ủ hổn hợp virus và kháng thể này ở tủ... protein VP1, VP2 và VP3 nằm ngay trên bề mặt kháng nguyên; còn protein VP4 lặn sâu vào bên trong 2.2.3 Đặc tính nuôi cấy của virus Virus viêm gan vịt là loại ký sinh nội bào tuyệt đối Để gây bệnh, cần sử dụng huyễn dịch các cơ quan của vịt con chết do viêm gan vịt (gan, phổi, thận…) đã được xử lý bằng kháng sinh Có thể cấy chuyển virus viêm gan vịt trên động vật cảm thụ, trên phôi trứng và trên môi trường... phenol virus bị vô hoạt hoàn toàn Trong phân virus có khả năng sống được 37 ngày (Haider, 1979) 6 2.2.5 Đặc tính kháng nguyên của virus viêm gan vịt Theo Asplin (1965), tính kháng nguyên của virus luôn thay đổi, virus viêm gan vịt không làm ngưng kết hồng cầu gà, vịt, thỏ, cừu Huyết thanh của vịt nhiễm virus khỏi bệnh có khả năng trung hòa virus viêm gan vịt Không có trung hòa chéo giữa virus viêm gan vịt. .. Thu (2012), bệnh viêm gan do virus ở vịt là bệnh truyền nhiễm cấp tính, lây lan nhanh do nhiều type virus khác nhau là virus viêm gan vịt type I, type II, type III Bệnh xảy ra chủ yếu ở vịt con từ mới nở đến 6 tuần tuổi với các bệnh tích đặc trưng như gan sưng, nhạt màu và xuất huyết Do tính chất nguy hiểm của bệnh, nhiều sản phẩm kháng thể và vaccine đã được nghiên cứu sản xuất và đưa vào ứng dụng . viêm gan vịt đã được ghi nhận tại Việt Nam vào năm 197 8 nhưng vẫn chưa phân lập được mầm bệnh (Trần Minh Châu và Lê Thu Hồng, 1 98 5). Năm 1 98 3, Trần Minh Châu và cộng sự đã phân lập được virus. phôi từ 48 -96 giờ, phôi có bệnh tích xuất huyết. Qua nuôi cấy trên phôi gà, chủng virus này yếu đi, không gây bệnh cho vịt con (Trần Minh Châu và cộng sự, 1 98 5). Cũng trong năm 1 98 5, Trần Minh. với chủng virus cường độc thì bảo hộ được 70%–100% vịt con (Trần Minh Châu và cộng sự, 1 98 9). Năm 1 98 4, Lê Thanh Hòa và cộng sự đã nghiên cứu đặc tính sinh học của virus vaccine viêm gan vịt