TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y ---------- LÝ BẢO TRÂN ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI MỘT SỐ KIỂU HÌNH SÁN LÁ GAN LỚN KÝ SINH Ở BÕ TẠI MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Ngành: THÚ Y Cần Thơ, 5/2014 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÖ Y ---------- LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Ngành: THÚ Y ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI MỘT SỐ KIỂU HÌNH SÁN LÁ GAN LỚN KÝ SINH Ở BÕ TẠI MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG Giáo viên hƣớng dẫn: PGs.Ts. Nguyễn Hữu Hƣng Cần Thơ, 5/2014 Sinh viên thực hiện: Lý BảoTrân MSSV: 3103068 Lớp: Thú y K36 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÖ Y Luận văn kèm theo đây, với đề tựa “Đặc điểm hình thái số kiểu hình sán gan lớn ký sinh bò số tỉnh Đồng sông Cửu Long” Lý Bảo Trân thực hiện. Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 Cần Thơ, ngày Duyệt môn tháng năm 2014 Duyệt giáo viên hƣớng dẫn Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 Duyệt Khoa Nông nghiệp & SHƢD i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu thân. Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thật chƣa đƣợc công bố luận văn trƣớc đây. Tác giả luận văn Lý Bảo Trân ii LỜI CẢM ƠN Biết ơn công cha, nghĩa mẹ, ơn thầy tình cảm bạn bè! Kính dâng ba, mẹ nuôi dƣỡng, chăm sóc, tạo điều kiện tốt để có đƣợc ngày hôm nay. Xin chân thành cảm ơn: Thầy Nguyễn Hữu Hƣng dành nhiều thời gian quý báu để hƣớng dẫn, động viên ủng hộ đƣờng nghiên cứu khoa học. Thầy cố vấn Lê Hoàng Sĩ dìu dắt em năm đầu đại học bỡ ngỡ, thầy quan tâm đến khó khăn em để giúp em vững bƣớc đƣờng đời. Cảm ơn cô Nguyễn Hồ Bảo Trân tận tình hƣớng dẫn, bảo suốt trình tiến hành đề tài. Mãi khắc ghi công lao dạy bảo truyền đạt kiến thức khoa học quý thầy cô năm qua. Chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trƣờng Đại Học Cần Thơ, Ban Chủ Nhiệm Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, Bộ môn Thú Y tạo điều kiện thuận lợi cho trình học tập nhƣ thời gian tiến hành đề tài. Xin cảm ơn quý thầy cô Bộ môn Thú Y trƣờng Đại Học Cần Thơ tận tình đào tạo đƣợc kết tốt nhƣ ngày hôm nay. Chân thành cảm ơn anh Hà Huỳnh Hồng Vũ giúp đỡ việc thu thập mẫu tiến hành thí nghiệm. Cuối quên động viên tạo điều kiện bạn tập thể lớp Thú Y K36 giúp đỡ, động viên mang đến cho nguồn nghị lực học tập suốt thời gian qua. Tất tận tình, lo lắng giúp thêm động lực để vƣợt qua khó khăn thực đề tài nữa, hành trang quý báo cho đƣợc vững bƣớc bƣớc chân vào đƣờng đời. Xin chân thành cám ơn! iii TÓM LƢỢC Đề tài: “Đặc điểm hình thái số kiểu hình sán gan lớn ký sinh bò số tỉnh Đồng sông Cửu Long” thực tỉnh Đồng sông Cửu Long từ tháng 12 năm 2013 đến tháng năm 2014. Qua định danh phân loại 456 mẫu sán gan lớn đƣợc thu thập từ 88 bò nhiễm sán gan lớn tỉnh Đồng sông Cửu Long cho thấy: Bò nhiễm từ đến 12 sán gan cá thể bò, cụ thể bò tỉnh B A nhiễm cƣờng độ cao với tỉnh B nhiễm trung bình 6,161 ± 0,107 sán/cá thể bò tỉnh A nhiễm trung bình 6,050 ± 0,316 sán/cá thể bò; tỉnh D nhiễm cƣờng độ thấp 2,000 ± 0,312 sán/cá thể bò. Đã phân loại đƣợc dạng kiểu hình sán Đồng sông Cửu Long đƣợc đánh dấu lần lƣợt F1, F2, F3, F4 F5. Trong đó, kiểu hình F5 F4 có kích thƣớc lớn với), kích thƣớc F5 36,129 ± 1,161 (mm) x 6,438 ± 0,288 (mm), kích thƣớc F4 33,176 ± 0,339 (mm) x 9,902 ± 0,107 (mm) kiểu hình có kích thƣớc nhỏ F3 với kích thƣớc 27,367 ± 0,340 (mm) x 10,104 ± 0,096 (mm). Trong kiểu hình đƣợc tìm thấy Đồng sông Cửu Long ta thấy kiểu hình F4 F3 phổ biến với tần số xuất lần lƣợt 0,438 0,333. Ít kiểu hình F2 với tần số xuất 0,002 Đại diện hình thái số kiểu hình sán gan lớn ký sinh bò Đồng sông Cửu Long nghiêng loài F.gigantica. iv MỤC LỤC TRANG TRANG DUYỆT i LỜI CAM ĐOAN . ii LỜI CẢM ƠN . iii TÓM LƢỢC . iv MỤC LỤC . v DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT . vi DANH SÁCH HÌNH vii DANH SÁCH BẢNG . viii CHƢƠNG I ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG II CƠ SỞ LÝ LUẬN . 2.1 SƠ LƢỢC VỀ SÁN LÁ GAN . 2.1.1 Khái quát lớp sán gan . 2.1.2 Thành phần sán gan lớn Việt Nam 2.2 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA SÁN LÁ GAN LỚN . 2.2.1 Vị trí ký sinh ký chủ trung gian 2.2.2 Phân bố . 2.2.3 Vòng đời sán gan 2.2.4 Bệnh sán gan trâu bò 2.2.5 Đặc điểm hình thái 10 CHƢƠNG III NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU . 17 3.2 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU . 17 3.3 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 17 3.3.1 Đối tƣợng nghiên cứu . 17 3.3.2 Vật liệu hóa chất nghiên cứu 17 3.3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu . 18 3.3.3.1 Phƣơng pháp thu thập mẫu . 18 3.3.3.2 Phƣơng pháp đo sán gan . 18 3.3.3.3 Phƣơng pháp xử lý số liệu 22 CHƢƠNG IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 23 4.1 CƢỜNG ĐỘ NHIỄM SÁN LÁ GAN Ở BÕ TẠI MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG QUA PHƢƠNG PHÁP MỔ KHÁM . 23 4.2 THÀNH PHẦN CÁC KIỂU HÌNH SÁN LÁ GAN LỚN KÝ SINH Ở BÕ TẠI ĐBSCL . 23 4.2.1 Đặc điểm hình thái số kiểu hình . 23 4.2.2 Sán gan lớn tỉnh ĐBSCL . 31 CHƢƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 32 5.1 KẾT LUẬN 32 5.2 ĐỀ NGHỊ . 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 v DANH SÁNH CHỮ VIẾT TẮT F.hepatica Fasciola hepatica F.gigantica Fasciola gigantica ĐBSCL Đồng sông Cửu Long CIAS Computer image analysis system mm milimet g gram SL Số lƣợng TSXH Tần số xuất ĐĐHT Đặc điểm hình thái NXB Nhà xuất KH&KT Khoa học kỹ thuật vi DANH SÁCH HÌNH Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình 10 Hình 11 Hình 12 Hình 13 Hình 14 Hình 15 Hình 16 Hình 17 Hình 18 Hình 19 Hình 20 Hình 21 Hình 22 Tựa hình Vòng đời phát triển Fasciola hepatica Hình thái sán gan lớn trƣởng thành Hình ảnh giác miệng giác bụng sán gan Hình ảnh cấu tạo nội quan sán gan Fasciola gigantica Cobbold (1885) Sán gan Fasciola hepatica Sán gan Fasciola gigantica Fasciola hepatica Các tiêu đo lƣờng sán gan trƣởng thành Dụng cụ làm thí nghiệm Kính hiển vi Cố định tiến hành đo sán Mẫu sán đƣợc cố định để đo kích thƣớc Thƣớc đo trắc vi Thƣớc đo thị kính (trên) vật kính (dƣới) nhìn dƣới kính hiển vi quang học Dùng thƣớc trắc vi đo đƣờng kính giác bụng, giác miệng sán Hình ảnh giác miệng giác bụng quan sát dƣới kính hiển vi Kiểu hình sán gan dạng (F1) Kiểu hình sán gan dạng (F2) Kiểu hình sán gan dạng (F3) Kiểu hình sán gan dạng (F4) Kiểu hình sán gan dạng (F5) Hình ảnh sán gan lớn thu đƣợc tỉnh ĐBSCL vii Trang 10 11 11 12 13 14 15 17 18 19 19 20 21 21 22 26 26 27 27 28 29 DANH SÁCH BẢNG Bảng Bảng Tựa bảng Đƣờng kính giác miệng giác bụng Bảng So sánh kích thƣớc Fasciola gigantica Cobbold (1885) Phân biệt hai loài Fasciola hepatica Fasciola gigantica 12 Bảng Số lƣợng sán gan ký sinh cá thể bò số tỉnh ĐBSCL 23 Bảng Đặc điểm hình thái kiểu hình sán gan lớn số tỉnh ĐBSCL 24 Bảng Tóm tắt đặc điểm hình thái số kiểu hình sán số tỉnh ĐBSCL 29 Bảng Tần số xuất kiểu hình sán gan lớn ký sinh bò số tỉnh ĐBSCL 31 Bảng viii Trang 11 13 Dùng thƣớc Mititoyo Dial Caliper đo chiều dài chiều rộng mẫu sán. Sau đo kích thƣớc mẫu sán ta đặt mẫu sán cố định vào chậu cồn 70 o để mẫu sán không bị hỏng Cho cồn phủ mẫu để yên – ngày. Tháo dây cột phiến kính. Sau nhỏ lên mẫu dung dịch glycerin 50% (tỷ lệ glycerin : nƣớc cất 1:1) lên tiêu mẫu, đậy lên kính để yên – ngày. Đƣa tiêu có dung dịch glycerin lên kính lúp để xem tổng thể, để xem chi tiết cấu tạo bên ta đƣa lên kính hiển vi xem dƣới độ phóng đại 40 lần (X4) để định danh. Hình 11. Cố định tiến hành đo sán Hình 12. Mẫu sán đƣợc cố định để đo kích thƣớc 19 Phương pháp đo trắc vi Quan sát đo đƣờng kính giác bụng, giác miệng sán gan dƣới kính hiển vi vật kính 4X. Mô tả thước đo Thƣớc trắc vi thị kính miếng kính hình tròn có thƣớc nhỏ mm đƣợc chia thành 100 phần đƣợc đánh số từ  100. Thƣớc trắc vi vật kính thuỷ tinh, có thƣớc nhỏ 1mm đƣợc chia thành 100 khoảng nhau, khoảng chia 0,01mm hay 10 µm. (A) (B) Hình 13. Thƣớc đo trắc vi (A) thƣớc đo thị kính (B) thƣớc đo vật kính Xác định giá trị khoảng thước đo thị kính Để xác định giá trị khoảng thƣớc đo thị kính độ phóng đại ta làm nhƣ sau: Đặt thƣớc trắc vi vật kính vào bàn kính, điều khiển cho thấy ảnh rõ thƣớc. Xê dịch thƣớc trắc vi vật kính xoay thƣớc trắc vi thi kính cho thƣớc song song gần sát vào nhau, tiếp tục xê dich thƣớc trắc vi vật kính cho vạch thƣớc trắc vi vật kính trùng với vạch thƣớc trắc vi thị kính, vạch thứ thƣớc trắc vi vật kính trùng với thƣớc trắc vi thị kính (Hình 15). Đếm số khoảng cách thƣớc trắc vi thị kính trùng với thƣớc trắc vi vật kính. Ta có trị số khoảng cách thƣớc trắc vi thị kính (x) theo công thức: N x Trong đó: = * 10µm n  x trị số khoảng thƣớc trắc vi thị kính  N số khoảng thƣớc trắc vi vật kính, N=10 20  n số khoảng thƣớc trắc vi thị kính, n=4 Nhƣ vậy: 10 x = * 10µm = 25 µm = 0,025 mm Mô tả cách đo Tiến hành đo kích thƣớc theo trình tự sau: Thay thƣớc trắc vi vật kính mẫu sán, điều chỉnh cho thấy rõ ảnh mẫu. Di chuyển mẫu cho đầu mẫu đo trùng với vạch thƣớc trắc vi thị kính, từ tìm vạch thứ trùng với đầu mẫu đo. Đếm số khoảng trắc vi nằm vạch suy kích thƣớc mẫu cách lấy số khoảng trùng nhân với trị số khoảng cách thƣớc trắc vi thị. Thƣớc đo thị kính Thƣớc đo vật kính (1mm ÷ 100 khoảng; 0,01mm) Hình 14. Thƣớc đo thị kính (trên) vật kính (dƣới) nhìn dƣới kính hiển vi quang học Hình 15. Dùng thƣớc trắc vi đo đƣờng kính giác bụng, giác miệng sán 21 Hình 16. Hình ảnh giác miệng giác bụng quan sát dƣới kính hiển vi Phương pháp định danh phân loại Việc phân loại định danh đƣợc dựa vào tài liệu có hình ảnh Nguyễn Thị Lê (2000), Craig Faust’s (1970) vào khác biệt chiều dài, chiều rộng, giác miệng, giác bụng, tinh hoàn, tử cung, manh tràng, tuyến noãn hoàng, cấu tạo hình thái, vị trí phận thể. 3.3.3.3. Phương pháp xử lý số liệu Các số liệu đƣợc tính toán qua phƣơng pháp thống kê sinh học thực máy tính theo chƣơng trình Microsoft Excel. Cách tính  = số sán trung bình/1 cá thể bò min – max Tần số xuất kiểu hình sán = số sán loại kiểu hình/tổng số sán thu thập đƣợc tỉnh Trong  min số sán nhiễm thấp  max số sán nhiễm thấp 22 CHƢƠNG IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1. CƢỜNG ĐỘ NHIỄM SÁN LÁ GAN Ở BÕ TẠI MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG QUA PHƢƠNG PHÁP MỔ KHÁM Thí nghiệm đƣợc thực 88 bò nhiễm sán qua mổ khám đƣợc thể qua bảng nhƣ sau: Bảng 4. Số lƣợng sán gan ký sinh cá thể bò số tỉnh ĐBSCL Số bò nhiễm Tổng số sán gan Số sán/1 cá thể bò Số sán /cá thể (con) (con) (min - max) (TB ± SE) A 20 121 – 12 6,050 ± 0,316 B 31 191 – 10 6,161 ± 0,107 C 16 75 3–5 4,688 ± 0,070 D 18 1–5 2,000 ± 0,312 E 12 51 3–8 4,250 ± 0,216 Tổng 88 456 – 12 5,182 ± 0,253 Tỉnh Nhận xét: Qua bảng 4, thấy cá thể bò nhiễm từ – 12 sán/cá thể cụ thể nhƣ sau Cƣờng độ nhiễm bò bị nhiễm sán dao động từ 2,000 ± 0,312 con/cá thể đến 6,161 ± 0,107 con/cá thể. Trong đó, ta thấy tỉnh A tỉnh B có cƣờng độ nhiễm cao (tỉnh A có cƣờng độ nhiễm 6,050 ± 0,316 con/cá thể, tỉnh B có cƣờng độ nhiễm 6,161 ± 0,107 con/cá thể), mẫu D có cƣờng độ nhiễm thấp (2,000 ± 0,312 con/cá thể). Cƣờng độ nhiễm khác việc chăm sóc nuôi dƣỡng bò đƣợc nuôi dƣỡng nơi có ký chủ trung gian khác nhau. 4.2. THÀNH PHẦN CÁC KIỂU HÌNH SÁN LÁ GAN LỚN KÝ SINH Ở BÕ TẠI ĐBSCL 4.2.1. Đặc điểm hình thái số kiểu hình sán gan lớn tỉnh ĐBSCL Đề tài tiến hành định loại 456 mẫu sán gan bò thu thập tỉnh ĐBSCL. Sau tiến hành phân loại, định dạng đƣợc kiểu hình sán gan lớn bao gồm F1, F2, F3, F4 F5 với dạng kiểu hình kích thƣớc khác thể qua bảng 23 Bảng 5. Đặc điểm hình thái kiểu hình sán gan lớn số tỉnh ĐBSCL Chiều dài Chiều rộng Giác miệng Giác bụng Tỷ lệ (mm) (mm) (mm) (mm) dài/rộng 53 30,509 ± 0,482 9,926 ± 0,102 1,010 ± 0,114 1,333 ± 0,056 3,079 ± 0,045 F2 30,570 11,100 1,125 1,425 2,754 F3 152 27,367 ± 0,340 10,104 ± 0,096 1,011 ± 0,011 1,286 ± 0,008 2,720 ± 0,030 F4 222 33,176 ± 0,339 9,902 ± 0,107 1,062 ± 0,007 1.290 ± 0,007 3,380 ± 0,029 F5 28 36.129 ± 1.161 6,438 ± 0,288 0,960 ± 0,040 1,248 ± 0,022 4,215 ± 0,105 Tổng 456 31,101 ± 0,257 9,898 ± 0,067 1,040 ± 0,005 1,294 ± 0,005 3,174 ± 0,027 ĐĐHT SL F1 Chú thích: F1, F2, F3, F4, F5 ký hiệu kiểu hình sán gan lớn đánh dấu từ đến SL đơn vị: 24 Kích thƣớc chiều đo, kiểu hình sán biến động từ 27,367 ± 0,340 (mm) đến 36,129 ± 1,161 (mm) chiều dài từ 6,438 ± 0,288 (mm) đến 11,110 (mm) chiều rộng, tỷ lệ dài/rộng dao động từ 2,720 ± 0,030 (mm) đến 4,215 ± 0,105 (mm). Trong đó: Kiểu hình dạng (F5) có kích thƣớc lớn với kích thƣớc 36,129 ± 1,161 (mm) x 6,438 ± 0,288 (mm), tỷ lệ dài/rộng 4,215 ± 0,105. Kế tiếp kiểu hình dạng (F4) với kích thƣớc 33,176 ± 0,339 (mm) x 9,902 ± 0,107 (mm), tỷ lệ dài/rộng 3,380 ± 0,029, kiểu hình F4 có chiều rộng lớn so với kiểu hình F5 nhƣng chiều dài tỷ lệ dài/rộngđối với F5 có cao F4. Kiểu hình dạng F1 với kích thƣớc 30,509 ± 0,482 (mm) x 9,902 ± 0,102 (mm), tỷ lệ dài/rộng 3,079 ± 0,045; kiểu hình F1 có chiều rộng tƣơng dƣơng kiểu hình F4 (9,902 ± 0,102 (mm)) nhƣng chiều dài lại nhỏ hơn, tỷ lệ dài/rộng nhỏ hơn. Kiểu hình F2 có kích thƣớc 30,570 (mm) x 11,100(mm), tỷ lệ dài/rộng 2,754. Ta lại thấy kiểu hình có kích thƣớc nhỏ F3 với kích thƣớc 27.367 ± 0.340 (mm) x 10.104 ± 0.096 (mm), tỷ lệ dài/rộng 2,720 ± 0,030. Nhận xét cách tổng quát, giá trị trung bình giác bụng giác miệng tƣơng đối đồng đều. Giác miệng nhỏ giác bụng dao động khoảng 1,040 ± 0,005 (mm); giác bụng dao động khoảng 1,294 ± 0,005 (mm): Kiểu hình F1 có giác miệng 1,010 ± 0,114 (mm), giác bụng 1,333 ± 0,056 (mm). Kiểu hình F2 giác miệng 1,125 (mm), giác bụng 1,425 (mm). Kiểu hình F3 có giác miệng 1,011 ± 0,011 (mm), giác bụng 1,286 ± 0,008 (mm). F4 có giác miệng 1,062 ± 0,007 (mm), giác bụng 1.290 ± 0,007 (mm). F5 có giác miệng 0,960 ± 0,040 (mm), giác bụng 1,248 ± 0,022 (mm)). Từ kết trên, ta thấy số liệu kích thƣớc có hƣớng nghi ngờ sán gan F.gigantica. Đặc điểm hình thái dạng sán phân loại Sau đo kích thƣớc cần thƣớc, tiến hành đánh giá hình thái bên dựa vào đặc điểm tổng quan sán, đƣợc mô tả kiểu hình dạng sán nhƣ sau: 25 (a) Kiểu hình F1 Hình 17. Kiểu hình sán gan dạng (F1) Hình dáng giống nhƣ lá, dài 21,670 – 37,205 mm, rộng 8,310 – 12,200 mm. Đa số chiều dài gấp lần chiều rộng. Đầu sán có chóp, hình nón, thƣờng có màu xám, có vai (thấy rõ). Hai rìa bên thân song song nhau, phần cuối thân kín lại. Chúng có giác miệng giác bụng. Các giác bụng tròn lớn lồi ra, giác miệng nhỏ đỉnh đầu, đƣờng kính giác miệng giác bụng lần lƣợt 0,750 – 1,250 mm, 1,125 – 1,675 mm. Buồng trứng phân thành nhiều nhánh nằm gần trƣớc thân, tuyến noãn hoàn xếp dọc bên thân phủ khắp, tạo chóp nhọn gốc đuôi. Hai tinh hoàn phân nhánh nằm chồng lên nhau. (b) Kiểu hình dạng F2 Hình 18. Kiểu hình sán gan dạng (F2) Thân có dạng hình chữ nhật (suông từ phần đầu đến đuôi), dài 30,570 mm, rộng 11,100 mm. Đầu sán có chóp, hình nón, thƣờng có màu xám, không vai. Hai rìa bên thân song song nhau, phần cuối thân kín lại, tù (dẹt). Chúng có giác miệng 26 giác bụng. Các giác bụng tròn lớn lồi ra, giác miệng nhỏ đỉnh đầu, đƣờng kính giác miệng giác bụng lần lƣợt 1,125 mm, 1,425 mm. Buồng trứng phân thành nhiều nhánh nằm gần trƣớc thân, tuyến noãn hoàn xếp dọc bên thân, phủ khắp, chiếm gần ½ thân sán, tạo đƣờng kẻ (nhỏ) giữa, tạo chóp nhọn gần gốc đuôi. Hai tinh hoàn phân nhánh nằm chồng lên nhau. (c) Kiểu hình dạng F3 Hình 19. Kiểu hình sán gan dạng (F3) Hình dáng giống nhƣ lá, dài 11,000 – 44,955 mm, rộng 6,640 – 15,560 mm. Đầu sán có chóp, hình nón, thƣờng có màu xám, không vai. Hai rìa bên thân song song (2 rìa thân không song song hẳn), phần cuối thân kín lại. Chúng có giác miệng giác bụng. Các giác bụng tròn lớn lồi ra, giác miệng nhỏ đỉnh đầu, đƣờng kính giác miệng giác bụng lần lƣợt 0,700 – 1,375 mm, 1,000 – 1,650 mm. Buồng trứng phân thành nhiều nhánh nằm gần trƣớc thân, tuyến noãn hoàn xếp dọc bên thân, phủ khắp, chiếm gần ½ thân sán, tạo đƣờng kẻ (nhỏ) giữa. Hai tinh hoàn phân nhánh nằm chồng lên nhau. (d) Kiểu hình dạng F4 Hình 20. Kiểu hình sán gan dạng (F4) 27 Hình dáng giống nhƣ lá, dài 18,840 – 44,975 mm, rộng 6,115 – 14,430 mm. Đầu sán có chóp, hình nón, thƣờng có màu xám, có vai. Hai rìa bên thân song song (2 rìa thân không song song hẳn), phần cuối thân kín lại. Chúng có giác miệng giác bụng. Các giác bụng tròn lớn lồi ra, giác miệng nhỏ đỉnh đầu, đƣờng kính giác miệng giác bụng lần lƣợt 0,700 – 1,250 mm, 1,000 – 1,625 mm. Buồng trứng phân thành nhiều nhánh nằm gần trƣớc thân, tuyến noãn hoàng ít, xếp dọc bên thân, không phủ khắp phần thân sau sán, tạo đƣờng kẻ (nhỏ) giữa, tạo chóp nhọn (sâu) gần gốc đuôi. Hai tinh hoàn phân nhánh nằm chồng lên nhau. (e) Kiểu hình dạng F5 Hình 21. Kiểu hình sán gan dạng (F5) Thân sán thon dài, dài 23,430 – 47,230 mm, rộng 4,970 – 11,640 mm. Đầu sán có chóp, hình nón, thƣờng có màu xám, có vai. Hai rìa bên thân song song nhau, phần cuối thân kín lại. Chúng có giác miệng giác bụng. Các giác bụng tròn lớn lồi ra, giác miệng nhỏ đỉnh đầu. đƣờng kính giác miệng giác bụng lần lƣợt 0,725 – 1,200 mm, 1,000 – 1,600 mm. Buồng trứng phân thành nhiều nhánh nằm gần trƣớc thân, tuyến noãn hoàng dọc theo thể, phủ khắp, chiếm gần ½ thân sán, tạo đƣờng kẻ (nhỏ) giữa, tạo chóp nhọn gần gốc đuôi. Hai tinh hoàn phân nhánh nằm chồng lên nhau. 28 F1 F2 F3 F4 F5 Hình 22. Hình ảnh sán gan lớn thu đƣợc tỉnh ĐBSCL Bảng 6. Tóm tắt đặc điểm hình thái số kiểu hình sán số tỉnh ĐBSCL Kiểu hình F1 F2 F3 F4 Đặc điểm hình thái  Cơ thể dài, tỷ lệ dài chia rộng 3,08  Đƣờng kính giác miệng 1,050 mm; giác bụng 1,333 mm  Ruột phân nhánh  Phần đầu hình nón, tạo vai  Phần đuôi tù  mép thân song song  Tuyến noãn hoàng phủ khắp, tạo chóp nhọn gốc đuôi  Cơ thể dài, tỷ lệ dài/rộng 2,75  Đƣờng kính giác miệng 1,125 mm; giác bụng 1,425 mm  Ruột phân nhánh  Phần đầu hình nón, vai  Phần đuôi tù nhiều (dẹt)  mép thân song song  Tuyến noãn hoàng phủ khắp, chiếm gần ½ thân sán, tạo đƣờng kẻ (nhỏ) giữa, tạo chóp nhọn gần gốc đuôi.  Cơ thể dài, tỷ lệ dài/rộng 2,72  Đƣờng kính giác miệng 1,011 mm; giác bụng 1,286 mm  Ruột phân nhánh  Phần đầu hình nón, vai  Phần đuôi tù  mép thân song song  Tuyến noãn hoàng phủ khắp, chiếm gần ½ thân sán, tạo đƣờng kẻ (nhỏ) giữa.  Cơ thể dài, tỷ lệ dài/rộng 3,38  Đƣờng kính giác miệng 1,062 mm; giác bụng 1,296 mm  Ruột phân nhánh  Phần đầu hình nón, tạo vai hẳn  Phần đuôi nhọn  mép thân song song  Tuyến noãn hoàng ít, không phủ khắp phần thân sau sán, tạo đƣờng 29        F5 kẻ (nhỏ) giữa, tạo chóp nhọn (sâu) gần gốc đuôi. Cơ thể dài (dài kiểu hình), tỷ lệ dài/rộng 4,22 Đƣờng kính giác miệng 0,996 mm; giác bụng 1,248 mm Ruột phân nhánh Phần đầu hình nón, tạo vai Phần đuôi nhọn mép thân song song Tuyến noãn hoàng phủ khắp, chiếm gần ½ thân sán, tạo đƣờng kẻ (nhỏ) giữa, tạo chóp nhọn gần gốc đuôi Nhìn chung, dạng kiểu hình sán có hình dạng kích thƣớc nghiêng F.gigantica, nhiên có vài cá thể có kích thƣớc sai khác hơn. Dựa vào đặc điểm hình thái bên nhƣ chiều dài, chiều rộng, tỷ lệ dài rộng,…chúng có hƣớng nghi ngờ F.hepatica lai F.gigantica F.hepatica. Qua kết đo kích thƣớc bảng đánh giá kiểu hình từ bảng ta thấy:      Kích thƣớc chiều dài chiều rộng thuộc F.gigantica. Đƣờng kính giác miệng nhỏ giác bụng thuộc F.gigantica. Các mẫu sán không vai tạo vai, F.gigantica F.hepatica Hai mép thân song song, F.gigantica. Đa phần có phần đuôi tù, F.gigantica. Từ dẫn chứng có hƣớng nghi ngờ mẫu sán thu đƣợc từ tỉnh ĐBSCL nghiêng F.gigantica. Tuy nhiên, nghiên cứu dừng lại việc định danh dựa vào kiểu hình nên chƣa thể khẳng định loài nào. Để đánh giá xác, mẫu đƣợc tiến hành định danh kiểu gen qua định danh phƣơng pháp sinh học phân tử. 30 4.2.2. So sánh tần số xuất kiểu hình sán số tỉnh ĐBSCL Bảng 7. Tần số xuất kiểu hình sán gan lớn ký sinh bò số tỉnh ĐBSCL A KH SL B TS XH SL C TS XH SL D TS XH SL Tổng E TS XH SL TS XH SL TS XH F1 15 0,12 15 0,08 0,08 0,06 16 0,31 53 0,116 F2 _ _ _ _ _ _ _ _ 0,02 0,002 F3 69 0,57 31 0,16 40 0,54 0,11 10 0,20 152 0,333 F4 26 0,22 13 0,70 25 0,33 15 0,83 23 0,45 222 0,487 F5 11 0,09 12 0,06 0,05 _ _ 0,02 28 0,062 Chú thích: F1, F2, F3, F4, F5 ký hiệu kiểu hình sán gan lớn đánh dấu từ đến Từ bảng cho thấy sán ký sinh gan có kiểu hình (đƣợc ký hiệu lần lƣợt F1, F2, F3, F4 F5). Trong đó: Tỉnh E có đầy đủ kiểu hình, tỉnh A, B, C có kiểu hình tỉnh D có dạng kiểu hình. Trong kiểu hình sán lá, kiểu hình F4 phổ biến chiếm tần số xuất cao (0,487); kiểu hình F3 (0,333); kiểu hình F1 (0,116); kiểu hình F5 (0,062) thấp kiểu hình F2 (0,002), kiểu hình đƣợc tìm thấy tỉnh E mà tỉnh khác không thấy đƣợc. 31 CHƢƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Bằng phƣơng pháp định danh phân loại truyền thống dựa vào đặc điểm hình thái, kích thƣớc chiều đo sán gan lớn ký sinh tỉnh ĐBSCL nghiêng loài F.gigantica. Qua định danh phân loại 456 mẫu sán gan lớn thu thập từ 88 bò bị nhiễm tỉnh ĐBSCL cho thấy: Bò nhiễm sán gan lớn với cƣờng độ nhiễm từ – 12 (sán/cá thể bò), cụ thể bò tỉnh B nhiễm trung bình 6,161 ± 0,107 (sán/cá thể bò) bò tỉnh A nhiễm trung bình 6,050 ± 0,316 (sán/cá thể bò). Thấp bò tỉnh D nhiễm trung bình 2,000 ±0,312 (sán/cá thể bò). Đã phân loại đƣợc kiểu hình sán gan lớn F1, F2, F3, F4, F5. Trong đó, kiểu hình F4 F5 có kích thƣớc chiều đo lớn với kích thƣớc chiều dài chiều rộng F4 F5 lần lƣợt 33,176 ± 0,339 (mm) x 9,902 ± 0,107 (mm) 36,129 ± 1,161 (mm) x 6,438 ± 0,288 (mm); loài có kích thƣớc nhỏ F3 với kích thƣớc chiều dài chiều rộng lần lƣợt 27,367 ± 0,340 (mm) x 10,104 ± 0,096 (mm). Trong kiểu hình đƣợc tìm thấy, kiểu hình F4 F3 phổ biến với tần số xuất hai kiểu hình 0,487 0,333. Kiểu hình F2 thấp có cá thể tƣơng ứng với tần số xuất 0,002. ĐỀ NGHỊ Các kiểu hình sán gan lớn cần đƣợc phân loại theo kiểu hình gen để xác định loài xác hơn. 5.2 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước Đặng Thị Cẩm Thạch, Đỗ Trung Dũng, Lê Ngọc Loan (2008). Tình hình nhiễm sán gan lớn Việt Nam năm 2007 đề xuất biện pháp phòng chống. Tạp chí phòng chống bệnh sốt rét bệnh ký sinh trùng số 4, 2008, tr.31 – 37. 2. Đặng Thị Cẩm Thạch (2010). Đặc điểm dịch tễ học biện pháp phòng chống bệnh sán gan lớn Việt Nam. Chƣơng trình KH&CN trọng điểm cấp nhà nƣớc KC10/06-10. 3. Đỗ Dƣơng Thái, Trịnh Văn Thịnh (1976). Công trình nghiên cứu ký sinh trùng Việt Nam. NXB KH&KT, tr.201 – 203. 4. Học viện Quân y (2000). Giáo trình thực hành Ký sinh trùng côn trùng học. Sách giáo khoa. Nhà xuất Quân đội nhân dân Việt Nam. 5. Học viện Quân y (2008). Ký sinh trùng côn trùng học. Sách giáo khoa. Nhà xuất Quân đội nhân dân Việt nam. 6. Nguyễn Hữu Hƣng (2010). Giáo trình Bệnh ký sinh trùng gia súc gia cầm. NXB Đại học Cần Thơ. 7. Nguyễn Thị Lê (1995). Danh mục loài sán (trematoda) ký sinh chim thú Việt Nam. Nhà xuất khoa học kỹ thuật, 1995, tr.33 – 129. 8. Nguyễn Thị Lê (2000). Động vật chí Việt Nam. NXB KH&KT, Hà Nội, 8: 52 – 64. 9. Nguyễn Thị Lê cs (1977). Bệnh giun sán từ động vật lây sang người. NXB KH&KT. 10. Nguyễn Thị Lê, Phạm Văn Lực cs (1996). Giun sán kí sinh gia súc Việt Nam. NXB KH&KT, trang.66 – 67. 11. Nguyễn Văn Đề, Lê Khánh Thuận (2004). Sán gan (liver fluckes). Nhà xuất Y học (2004). 12. Phạm Văn Thân, Huỳnh Hồng Quang (2007). Đặc điểm sinh học vài nét dịch tễ học bệnh sán gan lớn (Fasciola hepatica Fasciola gigantica). Tạp chí y học thực hành thành phố Hồ Chí Minh, số đặc biệt chuyên đề ký sinh trùng, tập 11, phụ số 2/2007, tr.2-6. 13. Trƣờng Đại học nông lâm, Đại học Thái Nguyên (2008). Ký sinh trùng học thú y. NXB Nông Nghiệp, tr.123 – 144. Tài liệu nước 1. Alatoom A, Cavuoti D, Southern P, Gander R. Fasciola hepatica infection in the United States. Lab Med. July (2008);39(7):425-8. 2. Ashrafi, K., Valero, M.A., Panova, M., Periago, M.V., Massound, J., Mas-Coma, S. (2006). Phenotypic analysis of adults of Fasciola hepatica, Fasciola gigantica and intermediate forms from the endemic region of Gilan, Iran. Parasitol. Int. 55: 249260. 3. Asma Waheed Qureshi et al., (2005). Epidemiology of human fascioliasis in rural areas of Lahore, Pakistan. Pubjjab Univ.J.Zool., vol.20 (2), pp.159-169. 4. Boray J.C (1965) Studies on the relative susceptibility of some lymnaeids to infection with Fasciola gigantica and Fasciola hepatica and on the adaption of Fasciola spp. Annals of Tropical Medicine and Parasitology 60, p. 114 – 124. 5. Cobbold, T.S. (1855). Description of a new trematode worm (Fasciola gigantica). 1. 33 6. Craig and Faust’s (1970). Climical parasitology 8th lea and Febiger, Philadelphia, USA. 7. Dunn, A.M. (1978). Veterinary Helminthology. 2th Ed Butler and Tanner Ltd. London, UK. Soulsby, E.J.L., 1982. Helminth, Arthropod and Protozoa of Domestic Animals. 7th Ed. Baillere Tindall, London, UK: 809. Edinburgh N. Phil. J. N. S. 2: 262-266. 8. Haseeb AN, el-Shazly AM, Arafa MA, Morsy AT. A review on fascioliasis in Egypt. J Egypt Soc Parasitol. Apr 2002;32(1):317-54. 9. Hope-Cawdery M J, Strickland K L, Conway A, Crowe P J (1977), Production effects of liver fluke in cattle. The of effects of infection on liveweight gain, feed intake and food conversion efficiency in beef cattle. British Veterinary Journal. 10. Kenddell S.B. (1965). Relationship between the species Fasciola and their molluscan hosts. Adv. Parasitol. 3: 59-98. 11. Kuchai J.A., Chishti, M.Z. Manal M.M. Dar S.A. Rasool M. Ahmad J. and Tak H. (2011). Some epidemiological aspects of fascioliasis among cattle of Ladakh, Global Veterinaria. 7(4): 342-346. 12. Maria Adela Valero, M.S.Mas-Coma (2000). Comparative infectivity of Fasciola hepatica metacercariae from isolates of the main and secondary reservoir animal host species in the Bolivian Altiplano high human endemic region. Folia Parasitologica 47., pp17-22. 13. Mas-Coma, S., Bargues, M.D., Valero, M.A. (2005). Fascioliasis and other plantborne trematode zoonoses. Int. J. Parasitol. 35: 1255-1278. 14. Periago, M.V., Valero, M., A., Panova, M., Mas-Coma, S. (2006). Phenotypic compararison of allopatric population of Fasciola hepatica and Fasciola gigantica from European and African bovines using a computer image analysis system (CIAS). Parasitol. Res. 99: 368-378. 15. Tolan RW Jr. Fascioliasis due to Fasciola hepatica and Fasciola gigantica infection: an update on this 'neglected' neglected tropical disease. Lab Med. Feb 2011;42(2):107117. Các trang web tham khảo www.advite.com http://scialert.net http://www.impehcm.org.vn http://www.stanford.edu http://tmcr.usuhs.edu 34 [...]... dƣỡng tại những nơi có ký chủ trung gian khác nhau 4.2 THÀNH PHẦN CÁC KIỂU HÌNH SÁN LÁ GAN LỚN KÝ SINH Ở BÕ TẠI ĐBSCL 4.2.1 Đặc điểm hình thái của một số kiểu hình sán lá gan lớn tại 5 tỉnh ĐBSCL Đề tài tiến hành định loại 456 mẫu sán lá gan bò thu thập tại 5 tỉnh ĐBSCL Sau khi tiến hành phân loại, chúng tôi định dạng đƣợc 5 kiểu hình sán lá gan lớn bao gồm F1, F2, F3, F4 và F5 với các dạng kiểu hình. .. nhất  max là số sán nhiễm thấp nhất 22 CHƢƠNG IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 CƢỜNG ĐỘ NHIỄM SÁN LÁ GAN Ở BÕ TẠI MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG QUA PHƢƠNG PHÁP MỔ KHÁM Thí nghiệm đƣợc thực hiện trên 88 bò nhiễm sán qua mổ khám đƣợc thể hiện qua bảng 4 nhƣ sau: Bảng 4 Số lƣợng sán lá gan ký sinh trên một cá thể bò tại một số tỉnh ĐBSCL Số bò nhiễm Tổng số sán lá gan Số sán/ 1 cá thể bò Số sán /cá thể... nghi ngờ là sán lá gan F.gigantica Đặc điểm hình thái của 5 dạng sán lá được phân loại Sau khi đo các kích thƣớc cần thƣớc, chúng tôi tiến hành đánh giá hình thái bên ngoài dựa vào đặc điểm tổng quan của sán, đƣợc mô tả kiểu hình của 5 dạng sán nhƣ sau: 25 (a) Kiểu hình F1 Hình 17 Kiểu hình sán lá gan dạng 1 (F1) Hình dáng giống nhƣ chiếc lá, dài 21,670 – 37,205 mm, rộng 8,310 – 12,200 mm Đa số chiều... ký sinh ở bò tại một số tỉnh Đồng bằng sông Cửu Long thời gian thực hiện từ tháng 12 năm 2013 đến tháng 5 năm 2014 Với mục đích và yêu cầu sau: Xác định kiểu hình các loài sán lá gan ký sinh qua phƣơng pháp phân loại truyền thống Qua đó nắm đƣợc đặc điểm, thông số, chỉ số nhằm phân biệt giữa các loài Fasciola spp về mặt hình thái học làm cơ sở giúp việc phân loài đạt kết quả tốt 1 CHƢƠNG II CỞ SỞ LÝ... F.gigantica dựa vào phƣơng pháp hình thái học (kiểu hình) Các kỹ thuật và phƣơng pháp này đã đáp ứng đƣợc phần lớn yêu cầu về phân loại sinh vật và cho kết quả tốt Để tìm hiểu kỹ hơn về đặc điểm hình thái cũng nhƣ cách phân loại sán và cũng sự chấp nhận của Bộ môn Thú y – Khoa Nông nghiệp – Trƣờng Đại học Cần Thơ chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài Đặc điểm hình thái một số kiểu hình sán lá gan lớn ký. .. dài/chiều rộng của sán lá gan lớn tại Việt Nam chứng tỏ tất cả sán đã phân loại thuộc loài F.gigantica Hồ Thị Thuận và Nguyễn Ngọc Phƣơng (1987) công bố tìm thấy 2 loài sán lá gan F.gigantica và F.hepatica ở một số tỉnh miền Nam Tác giả cũng mô tả 2 loài, sán lá gan F.gigantica có kích thƣớc 3,5 – 5,5 x 0,5 – 1,2 cm; F.hepatica có kích thƣớc 2,0 – 3,0 x 0,8 cm So sánh số đo của sán trƣởng thành với Periago... gây bệnh của sán lá gan (kể cả gây nhiễm và nhiễm tự nhiên) Ở những vùng có mầm bệnh tồn tại, cứ trung bình 3 tháng, sán lá gan lớn lại hoàn thành vòng đời trong cơ thể trâu, bò, nghĩa là lại tạo ra một đời sán lá gan mới trong cơ thể Con vật khi đã có sán lá gan ký sinh có thể tiếp tục nhiễm mầm bệnh mới dẫn đến tình trạng số lƣợng sán lá gan trong cơ thể tăng dần theo tuổi trâu, bò 6 Hình 1 Vòng đời... cấu tạo về hình thái, vị trí của từng bộ phận cơ thể 3.3.3.3 Phương pháp xử lý số liệu Các số liệu đƣợc tính toán qua phƣơng pháp thống kê sinh học thực hiện trên máy tính theo chƣơng trình Microsoft Excel Cách tính  = số sán trung bình/1 cá thể bò min – max Tần số xuất hiện kiểu hình sán lá = số sán của 1 loại kiểu hình/ tổng số sán lá thu thập đƣợc trên một tỉnh Trong đó  min là số sán nhiễm thấp... loài sán lá gan từ các nguồn mà chỉ có một trong 2 loài sẽ cung cấp cơ sở để chọn đặc điểm hình thái nào cần đƣợc so sánh để phân biệt 2 loài và dạng trung gian Tác giả đã nghiên cứu tỷ mỉ về hình thái để đƣa ra các thông số có thể phân biệt 2 loài F.hepatica và F.gigantica trên cơ sở: (a) Chỉ sử dụng sán ở cùng một vật chủ để tránh sự sai lệch về vật chủ 3 (b) Sán đƣợc cố định, nhuộm và gắn tiêu bản bằng. .. điểm: mẫu đã đƣợc thu thập tại 5 tỉnh ĐBSCL (các tỉnh đƣợc ký hiệu lần lƣợt A, B, C, D và E) Địa điểm thí nghiệm: thực hiện tại phòng thí nghiệm Ký sinh trùng E213 thuộc Bộ môn Thú y, Khoa Nông nghiệp và Sinh học Ứng dụng, Trƣờng Đại học Cần Thơ 3.3 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.3.1 Đối tƣợng nghiên cứu Số sán lá gan lớn đƣợc thu thập trên 88 bò nhiễm sán lá gan lớn tại 5 tỉnh ĐBSCL qua phƣơng pháp . 36,1 29 ± 1,161 (mm) x 6,438 ± 0,288 (mm), kích thƣớc F4 là 33, 176 ± 0,3 39 (mm) x 9, 902 ± 0,1 07 (mm) và kiểu hình có kích thƣớc nhỏ nhất là F3 với kích thƣớc 27, 3 67 ± 0,340 (mm) x 10,104 ± 0, 096 . sán lá gan trên trâu bò 7 2.2.5 Đặc điểm hình thái 10 CHƢƠNG III NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 17 3.2 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 17 3.3 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG. Hình 17 Kiểu hình sán lá gan dạng 1 (F1) 26 Hình 18 Kiểu hình sán lá gan dạng 2 (F2) 26 Hình 19 Kiểu hình sán lá gan dạng 3 (F3) 27 Hình 20 Kiểu hình sán lá gan dạng 4 (F4) 27 Hình