BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP, KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ TUYỂN CHỌN MÔI TRƢỜNG NUÔI CẤY GIÚP TĂNG SINH KHỐI VI TẢO THRAUSTOCHYTRID CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ThS. TRẦN THỊ XUÂN MAI SINH VIÊN THỰC HIỆN NGUYỄN DUY PHƢƠNG MSSV: 3102771 LỚP: CNSHTT K36 Cần Thơ, Tháng 12/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP, KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ TUYỂN CHỌN MÔI TRƢỜNG NUÔI CẤY GIÚP TĂNG SINH KHỐI VI TẢO THRAUSTOCHYTRID CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ThS. TRẦN THỊ XUÂN MAI SINH VIÊN THỰC HIỆN NGUYỄN DUY PHƢƠNG MSSV: 3102771 LỚP: CNSHTT K36 Cần Thơ, Tháng 12/2014 Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƢỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN (Ký tên) (Ký tên) Trần Thị Xuân Mai Nguyễn Duy Phương DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký tên) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT LỜI CẢM TẠ Qua trình học tập nghiên cứu, đến hoàn thành Luận văn Tốt nghiệp Đại học, chuyên ngành Công nghệ Sinh học. Trong suốt trình nghiên cứu, có động viên giúp đỡ gia đình, quý thầy cô, bạn bè giúp vượt qua khó khăn hoàn thành tốt luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn: Cán hướng dẫn – Cô Trần Thị Xuân Mai tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm động viên, khuyến khích trình học tập nghiên cứu. Quý thầy cô Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Cần Thơ truyền đạt kiến thức, giúp đỡ tạo điều kiện để học tập thực đề tài. Các bạn lớp Công nghệ Sinh học tiên tiến K36 em sinh viên giúp đỡ hoàn thành tốt luận văn này. Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 Nguyễn Duy Phƣơng Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT TÓM TẮT Đề tài “Phân lập, khảo sát số đặc điểm sinh học tuyển chọn môi trường nuôi cấy giúp tăng sinh khối vi tảo Thraustochytrid” thực với mục tiêu phân lập số dòng vi tảo biển dị dưỡng có khả sản xuất carotenoid chọn môi trường giúp tăng sinh khối vi tảo số tỉnh Đồng sông Cửu Long (Trà Vinh Bến Tre), từ tuyển chọn dòng có hàm lượng carotenoid cao. Trong nghiên cứu mười lăm dòng vi tảo Thraustochytrid phân lập từ mẫu đước (Rhizophora apiculata Blume), bần (Sonneratia caseolaris) mắm (Avicennia officinalis) vùng biển hai tỉnh Trà Vinh Bến Tre dựa vào đặc điểm khuẩn lạc tế bào. Bốn dòng vi tảo B3, M6, M10 Đ14 chọn để khảo sát loại môi trường GYPS cải tiến (3g/L glucose, 1,25g/L yeast extract, 1,25g/L peptone 500ml/L), NM-5(50g/L glucose, 10g/L yeast extract, 10g/L peptone, 1g/L NaCl, 10g/L MgSO4), NM-8(80g/L glucose, 10g/L yeast extract, 10g/L peptone, 1g/L NaCl, 10g/L MgSO4), F-5(50g/L glucose, 10g/L yeast extract, 10g/L peptone, 500ml NSW/L) F-8(80g/L glucose, 10g/L yeast extract, 10g/L peptone, 500ml NSW/L), kết NM-5 môi trường tiềm cho nuôi tăng sinh khối vi tảo, đồng thời phân tích hàm lượng carotenoid tổng số dòng M10 có hàm lượng carotenoid cao với 3849 µg/kg trọng lượng khô, dòng M6 với 3000 µg/kg. Hai dòng Đ14 B3 có hàm lượng carotenoid thấp với 1811 1797 µg/kg. Với điều kiện nuôi cấy đơn giản, phát triển nhanh, có hàm lượng carotenoid tổng số cao, dòng M10 xem nguồn vi tảo tiềm để sản xuất carotenoid với số lượng lớn. Từ khóa: carotenoid, môi trường, sinh khối, vi tảo biển dị dưỡng Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến i Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT . LỜI CẢM TẠ TÓM TẮT i MỤC LỤC . ii DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH vi TỪ VIẾT TẮT vii CHƢƠNG 1. GIỚI THIỆU . 1.1. Đặt vấn đề . 1.2. Mục tiêu nghiên cứu CHƢƠNG 2. LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU . 2.1. Tổng quan vi tảo . 2.1.1. Đặc điểm hình thái 2.1.2. Cấu tạo tế bào . 2.1.3 Hình thức sinh sản . 2.1.4 Phân loại 2.1.5. Giá trị dinh dưỡng vi tảo 2.1.6. Sơ lược vi tảo nhóm Thraustochytrid tình hình nghiên cứu . 2.2. Một số yếu tố ảnh hƣởng đến nuôi sinh khối vi tảo 12 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến ii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT 2.2.1. Nhiệt độ độ mặn . 12 2.2.2. pH . 13 2.3. Một số phƣơng pháp xác định trình sinh trƣởng vi tảo 14 2.3.1. Đo mật độ thông qua giá trị OD . 14 2.3.2. Đếm mật số tế bào 14 2.4. Sắc tố carotenoid 14 2.4.1. Khái niệm phân bố . 14 2.4.2. Phân loại cấu tạo 14 2.4.3. Tính chất vật lý . 15 2.4.4. Tính chất hóa học . 16 2.4.5. Chức . 16 CHƢƠNG 3. PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1. Phƣơng tiện nghiên cứu…………………………………………………………… .18 3.1.1. Thời gian địa điểm 18 3.1.2. Nguyên vật liệu 18 3.1.4. Dụng cụ thiết bị 18 3.1.5. Hóa chất . 18 3.1.6. Môi trường nuôi cấy vi tảo biển 19 3.2. Phƣơng pháp nghiên cứu 20 3.2.1. Quy trình phân lập vi tảo 20 3.2.2. Mô tả hình thái khuẩn lạc tế bào vi tảo 21 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến iii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT 3.2.3. Nhân sinh khối dòng vi tảo phân lập . 22 3.2.4. Xác định trọng lượng khô tế bào vi tảo 22 3.2.5. Dựng đường chuẩn trọng lượng khô tế bào số OD 22 3.2.6. Xác định hàm lượng carotenoid . 23 3.2.7. Tuyển chọn môi trường nuôi cấy để tăng sinh khối tế bào. . 24 3.2.8. Phương pháp phân tích xử lý số liệu . 24 CHƢƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 25 4.1. Kết phân lập vi tảo . 25 4.2. Mô tả hình thái vi tảo 26 4.3. Kết dựng đƣờng chuẩn trọng lƣợng khô số OD 29 4.4. Kết đánh giá hiệu chọn lọc môi trƣờng để tăng sinh khối vi tảo. . 31 4.5. Hàm lƣợng carotenoid dòng vi tảo phân lập đƣợc . 34 CHƢƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 37 5.1 Kết luận . 37 5.2 Đề xuất . 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 PHỤ LỤC Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến iv Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT DANH SÁCH BẢNG Bảng3.1. Thành phần môi trƣờng GYPS bản………… .19 Bảng 3.2. Thành phần môi trƣờng GYPS cải tiến………… .19 Bảng 3.3. Thành phần kháng sinh…… 19 Bảng 3.4. Thành phần loại môi trƣờng chọn lọc…………………………20 Bảng 4.1. Các dòng vi tảo nguồn gốc dòng vi tảo phân lập 26 Bảng 4.2. Đặc điểm, hình thái khuẩn lạc tế bào dòng vi tảo phân lập đƣợc 27 Bảng 4.3. Hàm lƣợng carotenoid tổng số dòng vi tảo phân lập đƣợc…………………………………………………………… .38 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến v Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT DANH SÁCH HÌNH Hình2.1.Tế bào vi tảo Thraustochytrid E100……………………… .… .9 Hình2.2.Cấu trúc số loại sắc tố carotenoid…………………… .16 Hình4.1.Hình thái khuẩn lạc số dòng vi tảo phân lập đƣợc (A) B3; (B) M6; (C) M10; (D) Đ14………………………………….28 Hình4.2.Hình thái tế bào số dòng vi tảo dƣới kính hiển vi (E100)(A)M7;(B)B8;(C)M6;(D)M10;(E)B3;(F)Đ14……… .29 Hình 4.3.Biểu đồ sinh trƣởng dòng vi tảo theo thời gian (A: B3; B: M6; C: M10; D: Đ14)………………………………………… 31 Hình4.4. Đƣờng chuẩn OD 600 nm – trọng lƣợng khô dòng Đ14……… 31 Hình4.5. Đƣờng chuẩn OD 600 nm – trọng lƣợng khô dòng B3……… 32 Hình4.6. Đƣờng chuẩn OD 600 nm – trọng lƣợng khô dòng M6…… .32 Hình4.7. Đƣờng chuẩn OD 600 nm – trọng lƣợng khô dòng M10…… .35 Hình4.8.Sự khác hàm lƣợng carotenoid dòng vi tảo phân lập đƣợc……………………………………………………… .38 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến vi Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 7.624 1.906 .477 10 .048 8.101 14 F 39.939 Sig. .000 Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Subset for alpha = 0.05 Moitruong N Std. Deviation GYPSct F-8 1.916667 .2907960 F-5 2.096333 .1474121 NM-5 2.241333 .1601822 NM-8 2.256667 .0487750 .372000 Sig. .3229092 1.000 .106 Std. Deviation(total) .7606751 CV(%) 12,33% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. M6-Ngày 12 ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares df Mean Square Between Groups .235 .078 Within Groups .227 .028 Total .462 11 Duncan 2.757 Sig. .112 Sinhkhoikho Subset for alpha = 0.05 Moitruong F N Std. Deviation F-8 2.592333 .0526530 F-5 2.723000 .0462853 NM-8 2.914667 .2376531 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 NM-5 Trường ĐHCT 2.928333 Sig. .2282594 .051 Std. Deviation (total) .2048740 CV(%) 5,99% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. M10-Ngày ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares df Mean Square F Between Groups .057 .014 Within Groups .005 10 .001 Total .062 14 Sig. 28.057 .000 Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Subset for alpha = 0.05 Moitruong N Std. Deviation GYPSct F-8 F-5 .233333 .0104083 NM-5 .272000 .272000 .0127671 NM-8 Sig. .132000 .0425793 .179000 .0169214 .301667 .0125300 1.000 1.000 .061 .137 Std. Deviation (total) .0664345 CV(%) 44% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. M10-Ngày4 ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares df Mean Square Between Groups .174 .043 Within Groups .033 10 .003 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến F 13.255 Sig. .001 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares df Mean Square F Between Groups .174 .043 Within Groups .033 10 .003 Total .206 14 13.255 Sig. .001 Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Subset for alpha = 0.05 Moitruong N Std. Deviation GYPSct F-8 .463000 .0216333 F-5 .551333 .551333 .0123423 NM-8 .593000 .0155885 NM-5 .619000 .1062889 Sig. .322333 .0649692 1.000 .088 .197 Std. Deviation .1214440 CV(%) 10,7% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. M10-Ngày ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares df Mean Square Between Groups .782 .195 Within Groups .042 10 .004 Total .824 14 F 46.557 Sig. .000 Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Subset for alpha = 0.05 Moitruong N GYPSct F-8 .338667 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến Std. Deviation .0146401 .780000 .0640807 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT F-5 NM-8 .918333 .0166433 NM-5 .962333 .1226594 Sig. Std. (total) .896000 1.000 .896000 .0367151 .053 .259 Deviation .2425765 CV(%) 8,1% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. M10-Ngày ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 2.179 .545 .053 10 .005 2.232 14 F 102.728 Sig. .000 Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Subset for alpha = 0.05 Moitruong N Std. Deviation GYPSct F-8 1.135000E0 .0997112 F-5 1.152333E0 .0565803 NM-5 1.289000E0 .0438634 NM-8 1.303667E0 .1044095 Sig. Std. (total) .282667 1.000 .0234307 .777 Deviation CV(%) .810 .3993169 6,84% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT M10-Ngày 10 ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 6.283 1.571 .181 10 .018 6.465 14 Duncan F Sig. 86.763 Sinhkhoikho Subset for alpha = 0.05 Moitruong N Std. Deviation GYPSct F-8 1.718000E0 .1559177 NM-8 1.863667E0 1.863667E0 .1229200 F-5 1.891333E0 1.891333E0 .1662167 NM-5 1.992667E0 .1110060 .263333 Sig. Std. (total) .000 .1056235 1.000 .163 .289 Deviation .6795240 CV(%) 8,68% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. M10-Ngày 12 ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares df Mean Square Between Groups .063 .021 Within Groups .053 .007 Total .116 11 F 3.139 Sig. .087 Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Subset for alpha = 0.05 Moitruong N Std. Deviation F-8 2.167667 NM-8 2.255667 2.255667 .1207905 F-5 2.312000 2.312000 .0440341 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến .0700595 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 NM-5 Trường ĐHCT 2.362667 Sig. .072 .0725006 .162 Std. Deviation (total) .1027933 CV(%) 3,68% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Đ14-Ngày ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares df Mean Square Between Groups .062 .016 Within Groups .005 10 .000 Total .067 14 F Sig. 31.144 .000 Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Subset for alpha = 0.05 Moitruong N Std. Deviation GYPSct F-5 F-8 .588333 .0320000 NM-5 .597000 .0200083 NM-8 .610667 .0199249 Sig. Std. (total) .442000 .0157162 .509000 1.000 .0205994 1.000 .269 Deviation .0692261 CV(%) 0% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Đ14-Ngày ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares df Mean Square Between Groups .399 .100 Within Groups .040 10 .004 Total .440 14 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến F 24.809 Sig. .000 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Subset for alpha = 0.05 Moitruong N Std. Deviation GYPSct NM-8 .897000 .0494267 F-5 .961667 .0245832 F-8 .968667 .0115036 NM-5 .973000 .0945357 Sig. Std. (total) .548000 .0895042 1.000 .201 Deviation .1772273 CV(%) 7,27% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Đ14-Ngày ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 1.624 .406 .045 10 .004 1.668 14 F 90.920 Sig. .000 Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Subset for alpha = 0.05 Std. Deviation Moitruong N GYPSct F-8 1.297667 .0537153 F-5 1.328333 .0125033 NM-5 1.349333 .0090185 NM-8 1.351667 .0795634 Sig. .510667 1.000 Std. Deviation Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến .1134431 .377 .3452028 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT CV(%) 5,41% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Đ14-Ngày ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 3.255 .814 .024 10 .002 3.279 14 F Sig. 344.807 .000 Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Subset for alpha = 0.05 Moitruong N Std. Deviation GYPSct F-8 NM-8 1.635667E0 .0342199 NM-5 1.687000E0 .0075498 F-5 1.692000E0 .0943204 Sig. .481667 .0141067 1.537000E0 1.000 .0384361 1.000 .205 Std. Deviation .4839396 CV(%) 3,18% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Đ14-Ngày 10 ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares df Mean Square Between Groups 3.092 .773 Within Groups 2.436 10 .244 Total 5.528 14 F 3.174 Sig. .063 Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Moitruong N Subset for alpha = 0.05 Std. Deviation Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT GYPSct .928333 F-8 1.299667 NM-5 .0455448 1.299667 .0328684 2.005333 .0567568 F-5 2.010667 .7883846 NM-8 2.011667 .7680757 Sig. .378 .130 Std. Deviation .6283628 CV(%) 29% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Đ14-Ngày 12 ANOVA Sinhkhoikho Sum of Squares df Mean Square Between Groups .082 .027 Within Groups .026 .003 Total .107 11 F 8.514 Sig. .007 Homogeneous Subsets Sinhkhoikho Duncan Subset for alpha = 0.05 Std. Deviation Moitruong N F-8 F-5 2.019000 .0926409 NM-8 2.043667 .0272213 NM-5 2.053333 .0172434 Sig. 1.850333 1.000 .0563235 .496 Std. Deviation CV(%) .0987526 2,75% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT B.2. Sinh trƣởng bốn dòng vi tảo B3, M6, M10 Đ14 môi trƣờng NM-5 theo thời gian B3/NM-5 ANOVA OD Sum of Squares Between Groups Mean Square 15.278 11 1.389 .145 24 .006 15.423 35 Within Groups Total Homogeneous Subsets df F Sig. 229.464 .000 OD Duncan Thoigia n N Subset for alpha = 0.05 .259 Std. Deviatio n .025000 1.380 .085773 1.460 1.460 .085008 1.574 .047089 10 2.172 .127492 12 2.218 .079425 11 2.251 .063106 .427 .038423 .685 Sig. .076429 .975 .092089 1.190 .095016 1.723 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 .218 .084 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Std. Deviation (total) CV (%) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến .061944 .252 .663824 5,69% Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT M6/NM-5 ANOVA OD Sum of Squares Between Groups 31.225 Within Groups .254 Total 31.479 Homogeneous Subsets df Mean Square 11 2.839 24 .011 35 F 268.155 Sig. .000 OD Duncan Thoigi an N 1 .0763 Subset for alpha = 0.05 10 Std. Deviation .004619 .1883 10 12 2.842 .047353 11 2.867 .051733 .009292 .372 .036290 .577 Sig. .051449 .802 .096033 1.037 .068603 1.314 .029023 1.508 .195 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Std. Deviation(total) CV (%) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến .007506 1.884 .053201 2.168 1.00 1.00 .316829 .769 .948363 8,04% Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT M10/NM-5 Sum of Squares Between Groups 30.824 Within Groups .116 Total 30.940 Homogeneous Subsets ANOVA df Mean Square 11 2.802 24 .005 35 F 578.220 Sig. .000 OD Duncan Thoi gian N Subset for alpha = 0.05 10 11 .149 Std. Deviation .033561 10 12 2.865 .088895 11 2.867 .086581 .275 .052716 .503 .084198 .705 .080532 .920 .061744 1.130 .018148 1.345 .021794 1.535 .028937 2.121 .052564 2.407 .130610 Sig. 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 .977 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. .940217 Std. Deviation (total) CV (%) 5,04% Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT Đ14/NM-5 ANOVA OD Sum of Squares Between Groups 14.914 Within Groups .119 Total 15.033 Homogeneous Subsets df 11 24 35 Mean Square 1.356 .005 F 272.671 Sig. .000 OD Duncan Thoi gian N Subset for alpha = 0.05 .307 Std. Deviation .001528 10 2.076 .059138 2.115 .050478 12 2.129 .075507 11 2.132 .062405 Sig. .513 .017559 .649 .042438 .931 .099002 1.174 .112607 1.348 .125731 1.527 .058026 1.723 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 .016093 .381 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Std. Deviation (total) .655382 CV (%) 5,1% Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT B.3. Carotenoid ANOVA Carotenoid Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 8951470.000 2983823.333 668374.667 83546.833 9619844.667 11 F 35.714 Sig. .000 Homogeneous Subsets Carotenoid Duncan Subset for alpha = 0.05 Dong N Std. Deviation B3 1797.67 252.375 Đ14 1812.00 147.990 M6 M10 Sig. 3000.00 169.281 3849.00 .953 1.000 468.975 1.000 Std. Deviation(total) CV(%) 935.164 11% Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Trường ĐHCT Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học [...]... Phân lập, khảo sát một số đặc điểm sinh học và tuyển chọn môi trƣờng nuôi cấy giúp tăng sinh khối vi tảo Thraustochytrid được thực hiện mang tính cấp thiết trong giải quyết các yêu cầu thực tiễn đặt ra hiện nay 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Phân lập được một số dòng vi tảo biển dị dưỡng Thraustochytrid ở hai tỉnh Trà Vinh và Bến Tre) Tuyển chọn được môi trường nuôi cấy giúp tăng sinh khối vi tảo biển dị... nghệ Sinh học tiên tiến 23 Vi n NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT 3.2.7 Tuyển chọn môi trƣờng nuôi cấy để tăng sinh khối tế bào - Khảo sát sự sinh trưởng của các dòng vi tảo được chọn trên cả năm loại môi trường: GYPSct, NM-5, NM-8, F-5 và F-8 - Cách tiến hành như sau:  Nhân sinh khối cấp 1 như phần 3.4.2  Dùng bình tam giác 100ml để khảo sát, mỗi môi trường. .. cứu vi tảo trong sản xuất nhiên liệu sinh học (Chisti, 2007), nguyên liệu cho công nghiệp như chất dẽo sinh học bioplastic, và sử dụng sinh khối vi tảo sau khi tách chiết các chất có hoạt tính sinh học để sản xuất agar, alginate, giấy,…(Lembi và Waaland, 1988) 2.2 Một số yếu tố ảnh hƣởng đến nuôi sinh khối vi tảo 2.2.1 Nhiệt độ và độ mặn Nhiệt độ và độ mặn là những chỉ tiêu sinh lý cần thiết để lựa chọn. .. nghệ Sinh học tiên tiến 2 Vi n NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT CHƢƠNG 2 LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan về vi tảo Vi tảo (Microalgae) là tất cả các tảo có kích thước hiển vi, chúng có nhiều đặc điểm giống với sinh vật chân hạch hơn là sơ hạch Phần lớn các loài tảo trong tế bào có chất diệp lục nên chủ yếu là quang tự dưỡng, một số ít sống dị dưỡng, một số. .. DNA (OhHama và Miyachi, 1992) 2.1.3 Hình thức sinh sản Theo Tredici (2004), tảo cũng như vi tảo rất đa dạng trong sinh sản Các hình thức sinh sản của vi tảo gồm sinh sản sinh dưỡng, sinh sản vô tính và sinh sản hữu tính - Sinh sản sinh dưỡng: Được thực hiện bằng những phần riêng rẽ của cơ thể, không chuyên hóa về bộ phận sinh sản Ở các vi tảo đơn bào, sinh sản sinh dưỡng thực hiện bằng cách phân đôi tế... khác nhau 2.2.3 Dinh dƣỡng môi trƣờng Mỗi loài tảo cần một môi trường sống và sinh trưởng thích hợp, hiện nay có rất nhiều loại môi trường nuôi cấy tảo được sử dụng Đa số các môi trường có thành phần gồm các nguyên tố đa lượng (nitrat, phosphate,…), nguyên tố vi lượng (Fe, Mn, Cu, Si Bo,…) Tùy vào mục đích nghiên cứu mà chọn môi trường với thành phần dinh dưỡng thích hợp Một nghiên cứu của Leaño et... hiển vi quang học ở độ phóng đại 100-1000 lần, chụp lại hình ảnh quan sát được 3.2.3 Nhân sinh khối các dòng vi tảo phân lập đƣợc Nhân sinh khối cấp 1: Chuyển cẩn thận một khuẩn lạc đang nuôi cấy trên môi trường GYPS đặc vào ống ống nghiệm 50ml chứa 10ml môi trường lỏng GYPSct+Strep+Amp Nuôi dung dịch trên máy lắc 200 vòng/phút ở nhiệt độ ủ là 28oC±1 với điều kiện tối trong 3-4 ngày Nhân sinh khối. .. là chlorophyll a, b và carotenoid Hình thức sinh sản thường là phân đôi Tảo phân bố chủ yếu ở các thủy vực nước ngọt, môi trường có dinh dưỡng cao Một số ít sống ở môi trường nước lợ có nồng độ muối dưới 0,5% Phần lớn có đời sống dị dưỡng Một Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến 6 Vi n NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 36-2014 số chi thường gặp Euglena Trường ĐHCT gracilis,... Mỗi loài sinh vật sinh trưởng tốt ở vùng pH nhất định và riêng biệt pH môi trường nuôi cấy thường ảnh hưởng đến khả năng phân ly muối, phức chất và tính hòa tan các muối của kim loại (Đặng Đình Kim và Đặng Hoàng Phước Hiền, 1999) nên pH sẻ ảnh hưởng nhiều đến sinh trưởng vi tảo nói riêng và vi sinh vật nói chung Theo Barsanti và Gualtieri (2006), ngưỡng pH của hầu hết các loài vi tảo được nuôi cấy từ... tủ mát 4-6oC và cấy chuyển trên môi trường mới GYPSct đặc với mỗi tháng/lần 3.2.2 Mô tả hình thái khuẩn lạc và tế bào vi tảo - Quan sát, mô tả hình thái khuẩn lạc của các dòng vi tảo phân lập được - Quan sát, mô tả hình thái tế bào của các dòng vi tảo phân lập được dưới kính hiển vi - Các bước tiến hành quan sát hình thái tế bào vi tảo:  Chuẩn bị lame sạch, hơ dưới ngọn lửa đèn cồn  Nhỏ một giọt nước . Đại học Khóa 36-2014 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học tiên tiến i Vi n NC&PT Công nghệ Sinh học TÓM TẮT Đề tài Phân lập, khảo sát một số đặc điểm sinh học và tuyển chọn môi trường. trường nuôi cấy giúp tăng sinh khối vi tảo Thraustochytrid đã được thực hiện với mục tiêu phân lập được một số dòng vi tảo biển dị dưỡng có khả năng sản xuất carotenoid và chọn ra môi trường giúp. cứu và ứng dụng vi tảo ngày càng được quan tâm hơn. Xuất phát từ xu hướng chung và những thuận lợi của nước ta, đề tài nghiên cứu Phân lập, khảo sát một số đặc điểm sinh học và tuyển chọn môi