BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ------- ------- TRẦN THÙY MAI NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO LOÀI LAN HÀI CÓ NGUY CƠ TUYỆT CHỦNG PAPHIOPEDILUM PURPURATUM LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI, NĂM 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ------- ------- TRẦN THÙY MAI NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO LOÀI LAN HÀI CÓ NGUY CƠ TUYỆT CHỦNG PAPHIOPEDILUM PURPURATUM CHUYÊN NGÀNH MÃ SỐ : CÔNG NGHỆ SINH HỌC : 60420201 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. HOÀNG THỊ NGA PGS.TS. NGUYỄN THỊ LÝ ANH HÀ NỘI, NĂM 2014 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu tôi. Các số liệu kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình nghiên cứu khác. Tôi xin cam đoan thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2014 Tác giả luận văn Trần Thùy Mai Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp này, cố gắng thân, nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi từ thầy cô, gia đình, bạn bè đồng nghiệp suốt trình học tập nghiên cứu. Trước tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới chị TS. Hoàng Thị Nga – Trưởng phòng Công nghệ sinh học thực vật, Viện Sinh học nông nghiệp; PGS.TS. Nguyễn Thị Lý Anh – Viện trưởng Viện Sinh học nông Nghiệp - Học viện Nông nghiệp Việt Nam hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho suốt trình thực đề tài, đánh giá kết hoàn thành luận văn đồng thời bồi dưỡng cho kiến thức chuyên môn kinh nghiệm quý báu. Tôi xin cảm ơn nhiệt tình bảo, giúp đỡ Ban lãnh đạo anh chị Viện Sinh học Nông nghiệp – Học viện Nông nghiệp Việt Nam dành cho suốt thời gian thực đề tài. Để hoàn thành luận văn này, xin bày tỏ lòng biết ơn tới Thầy giáo, Cô giáo, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Công nghệ sinh học Thực vật, Khoa Công nghệ sinh học – Học viện Nông nghiệp Việt Nam, ủng hộ, tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành thủ tục cần thiết để bảo vệ thành công luận văn này. Tôi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến gia đình toàn thể bạn bè động viên giúp đỡ suốt trình học tập trình hoàn thành khóa luận. Hà Nội, ngày tháng năm 2014 Tác giả luận văn Trần Thùy Mai Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1. Đặt vấn đề 2. Mục đích yêu cầu 2.1. Mục đích 2.2. Yêu cầu 3. Ý nghĩa khoa học thực tiễn 3.1. Ý nghĩa khoa học 3.2. Ý nghĩa thực tiễn Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Giới thiệu chung lan Hài Paphiopedilum 1.1.1. Nguồn gốc quan hệ họ hàng lan Hài 1.1.2. Phân loại 1.1.3. Những nét chi Paphiopedium 1.1.4. Thực trạng Lan Hài 11 1.1.5. Giới thiệu loài Paphiopedilum purpuratum 15 1.2. Tổng quan kỹ thuật nhân giống in vitro lan Hài 17 1.2.1 Kỹ thuật nhân giống thực vật in vitro 18 1.2.2. Nghiên cứu nhân giống in vitro lan 20 1.2.3. Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hài 23 Chương VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1. Đối tượng vật liệu nghiên cứu 28 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu 28 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii 2.1.2. Vật liệu nghiên cứu 28 2.2. Thời gian địa điểm nghiên cứu 28 2.3. Nội dung nghiên cứu 28 2.4. Phương pháp nghiên cứu 29 2.4.1. Phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 29 2.4.2. Phương pháp bố trí thí nghiệm 29 2.4.3. Các tiêu theo dõi 33 2.4.4. Phương pháp xử lý số liệu. 33 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1. Nhóm thí nghiệm tạo vật liệu khởi đầu 3.1.1. Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng tuổi đến khả nảy mầm hạt 34 lan Hài P.purpuratum. 3.1.2. 34 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng môi trường thích hợp cho khả nảy mầm hạt Lan Hài P.purpuratum 36 3.2 Nhóm thí nghiệm nhân nhanh 38 3.2.1. Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng BA bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh loài lan Hài P.purpuratum 3.2.2. 39 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng Kinetin bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh loài lan Hài P.purpuratum 3.2.3. 40 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng BA α–NAA bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh loài lan Hài P.purpuratum. 3.2.4. 42 Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng dịch cà chua bổ sung vào môi trường nuôi cấý đến khả nhân nhanh loài lan Hài P.purpuratum 3.2.5. 44 Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng dịch chiết chuối bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh loài lan Hài 45 P.purpuratum 3.2.6. Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng dịch chuối khoai tây bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh loài lan Hài P.purpuratum Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 47 Page iv 3.2.7. Thí nghiệm 9: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng, phát triển chồi lan Hài P.purpuratum 3.2.8. 48 Thí nghiệm 10: Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng đường bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả sinh trưởng chồi lan Hài 50 P.purpuratum. 3.2.9. Thí nghiệm 11: Ảnh hưởng cường độ chiếu sáng đến sinh trưởng chồi lan Hài P.purpuratum. 52 3.3 Nhóm thí nghiệm tạo hoàn chỉnh 53 3.3.1 Thí nghiệm 12: Ảnh hưởng α-NAA đến rễ chồi loài lan Hài P.purpuratum 53 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 55 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 56 1. Kết luận 56 2. Đề nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC 61 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT BA 6-Benzylaminopurine CT Công thức CTTD Chỉ tiêu theo dõi CTTN Công thức thí nghiệm CV(%) Hệ số biến động (Correlation of Variants) ĐC Đối chứng IAA Indol acetic acid IBA Indol butyric acid α- NAA α Naphtyl acetic acid KC KnudsonC, 1965 Ki Kinetin LSD 0.05 Sai khác tối thiểu có ý nghĩa P = 0.05 (Least Significant Difference) MS Murashige-Skoog, 1962 PLB Protocorm like body: Thể sinh chồi RE Robert Ernst, 1979 THT Than hoạt tính VW Vacin and Went, 1949 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1.1. Các giống lan Hài Việt Nam mùa nở hoa 11 Bảng 1.2. Các nhóm lan Hài Việt Nam theo thứ tự hạng bảo tồn Tổ chức bảo tồn thiên nhiên quốc tế (IUCN) . 13 Bảng 3.1: Ảnh hưởng tuổi đến khả nảy mầm hạt lan Hài P.purpuratum (sau 12 tuần theo dõi) . 34 Bảng 3.2: Tỷ lệ nảy mầm lan Hài P.purpuratum môi trường khác (sau 12 tuần theo dõi) . 36 Bảng 3.3: Ảnh hưởng BA bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh loài lan Hài P.purpuratum (sau 12 tuần theo dõi) . 40 Bảng 3.4: Ảnh hưởng Kinetin bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh loài lan Hài P.purpuratum (sau 12 tuần theo dõi) . 41 Bảng 3.5: Ảnh hưởng BA α–NAA bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh loài lan Hài P.purpuratum (sau 12 tuần theo dõi) 43 Bảng 3.6. Ảnh hưởng dịch cà chua bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh loài lan Hài P.purpuratum (sau 12 tuần theo dõi) 44 Bảng 3.7: Ảnh hưởng dịch chuối bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh loài lan Hài P.purpuratum (sau 12 tuần theo dõi) . 46 Bảng 3.8: Ảnh hưởng dịch chuối khoai tây bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh lan Hài P.purpuratum (sau 12 tuần theo dõi) 47 Bảng 3.9:Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến khả sinh trưởng chồi loài lan Hài P.purpuratum (sau 10 tuần nuôi cấy) 49 Bảng 3.10: Ảnh hưởng hàm lượng đường bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả sinh trưởng chồi lan Hài P.purpuratum (sau 10 tuần theo dõi) . 50 Bảng 3.11. Ảnh hưởng cường độ chiếu sáng đến sinh trưởng chồi lan Hài P.purpuratum (sau 12 tuần theo dõi) . 52 Bảng 3.12: Ảnh hưởng α-NAA đến rễ chồi loài lan Hài P.purpuratum (sau 10 tuần nuôi cấy) 53 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang Hình 1.1. Hình thái hoa Paphiopedilum Hình 1.2. Một số hình ảnh Lan Hài P.purpuratum 17 Hình 2.1. Cây loài lan Hài P.purpuratum . 28 Hình 3.1: Hạt lan Hài P.purpuratum tuổi khác sau 12 tuần gieo 35 Hình 3.2. Hạt lan Hài P.purpuratum môi trường khác sau 12 tuần gieo 38 Hình 3.3. Ảnh hưởng BA α – NAA đến khả nhân nhanh loài lan Hài P.purpuratum 44 Hình 3.4. Ảnh hưởng hàm lượng đường bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả sinh trưởng chồi lan Hài P.purpuratum (sau 10 tuần theo dõi) . 51 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT 1. Averyanov, Phillip Cribb, Phan Kế Lộc, Nguyễn Tiến Hiệp (2008). Lan Hài Việt Nam, Nxb Giao thông Vận tải, TP Hồ Chí Minh. 2. Võ Hà Giang, Ngô Xuân Bình (2010). Nghiên cứu nhân giống phong lan đuôi chồn (Rhynchotylis rotunda (L.) Blume) phương pháp nuôi cấy mô tế bào, Tạp chí Nông nghiệp phát triển nông thôn , số 5/2010, tr. 25-30. 3. Hoàng Thị Giang, Nguyễn Quang Thạch, Mạch Hồng Thắm, Đỗ Thị Thu Hà (2010) Nghiên cứu in vitro nuôi trồng giống lan Hài quý P.hangianum perner Gurss (Hài Hằng) thu thập Việt Nam, Tạp chí Khoa học Phát triển 2010, tập 8, số 2, tr.194 – 201. 4. Hoàng Thị Lan Hương, Nguyễn Xuân Linh, Phạm Thị Liên (2004). Nghiên cứu quy trình nhân giống Lan Hồ Điệp Moscow phương pháp nuôi cấy in-vitro, Tạp chí Nông nghiệp phát triển nông thôn, số 3/2004, tr. 355-356. 5. Đặng Xuyến Như (2006). Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống nuôi trồng giống hai loài lan Hài Việt Nam. 6. Dương Tấn Nhựt (2007). Một số kỹ thuật nhân giống vô tính Lan Hài (Pahhiopedilum delenatii), Báo cáo khoa học Hội thảo ứng dụng kỹ thuật nhân giống nuôi trồng hoa Lan thành phố Hồ Chí Minh, tr: 13-19 7. Dương Tấn Nhựt cs (2007). Ảnh hưởng monosaccharide disaccharide lên trình phát sinh phôi vô tính lan Hồ Điệp Phalaenopsis amabili, Hội nghị khoa học Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa, NXB Nông Nghiệp, Thành phố Hồ Chí Minh, tr. 27-36. 8. Nguyễn Quang Thạch (2003). Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống nuôi trồng phong lan Phalaenopsis, Báo cáo Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc, NXB Khoa học kỹ thuật. 9. Khuất Hữu Trung cộng (2007). Nghiên cứu đa dạng di truyền loài lan Hài đốm (Paphiopedilum concloro Pfizer) địa Việt Nam, Tạp chí Khoa học công nghệ, số (12/2009), tr. 70-77. 10. Vũ Văn Vụ, Vũ Thành Tâm, Hoàng Minh Tấn (2001). Sinh lý học thực vật, NXB Giáo Dục. 11. Nguyễn Thiện Tịch (2001). The Orchid of Vietnam1, Nxb Nông nghiệp 424pp. TÀI LIỆU TIẾNG ANH 1. Abdoulaye T & Mark (2006). Effects of carbon source and explant type on somatic embryogenesis of four cacao genotype, HortScience 41(3): 753-758. 2. Arditti J, Ernst (1993). Micropropagation of orchids, John Wiley and Sons, New York. 3. Averyanov, L. V. 2000a. Rare species of Orchidaceae in the flora of Vietnam. 1. The genera Acanthephippium - Didymoplexiopsis. Bot. Journ. (St.-Petersburg) 85, Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 57 3:128-138 (in Russian). 4. Averyanov, L. V. 2000b. Rare species of Orchidaceae in the flora of Vietnam. 2. The genera Eria-Zeuxine. Bot. Journ. (St.-Petersburg) 85, 4:137-147 (in Russian). 5. Averyanov, L. V. and A. L. Averyanova, 2003. Update checklist of the orchids of Vietnam. Vietnam International University Publishing House, Ha Noi, 1020pp. (bilingua, in English and Vietnamese). 6. Banziger H (1996), The mesmerizing wart: the pollination strategy of epiphytic lady slipper orchid Paphiopedilum villosum (Lindl.) Stein (Orchidaceae). Bot J Linn Soc 121:59–90. 7. Bo Long, Alex X. Niemiera, Zhi-ying Cheng, Chun-lin Long (2010). In vitro propagation of four threatened Paphiopedilum species (Orchidaceae), Plant Cell Tiss Organ Cult ,101:151–162 8. Cao SD, Jia HT (2003). Effects of different carbon source on tissue culture of Strawberry. Shandong for Sci Technol 126(3):6-7. 9. Chen TY, Chen JT, Chang WC (2004a). Plant regeneration through direct shoot bud formation from leaf cultures of Paphiopediulum orchids. Plant Cell Tiss Organ Cult 76:11–15. 10. Chen ZL, Ye XL, Liang CY, Duan J (2004b). Seed germination in vitro of Paphiopedilum armeniacum and P.micranthum. ActaHortic Sinica 31(4):540–542 11. Cribb, P., Averyanov, L & Nguyễn Tiến Hiệp (2000). Paphiopedilum henryanum in North Vietnam. Orchid Review 108, 1232: 124-127. 12. Ding CC, Wu H, Liu FY (2004). Factors affecting the germination of Paphiopedilum armeniacum. Acta Bot Yunnanica 26(6):673–677. 13. Dutra D, Johnson TR, Kauth PJ, Stewart SL, Kane ME, Richardson L(2008). Asymbiotic seed germination, in vitro seedling development, and greenhouse acclimatization of the threatened terrestrial orchid Bletia purpurea. Plant Cell Tiss Organ Cult 94:11–21. 14. George, E.F., (1993). Shipment and distribution. In: Storing and distributing clonal material. In: Plant propagation by tissue culture. Part 1, The technology. Exegetics Ltd., Edington, Wetsbury, Wilts, England. 15. . Guillamin, A (1934). Paphiopedilum Kerch. (Paphiopedilum Pfitz). In Lecomte, H.&Humbert,H.eds., Flore generale de Indo-chine 6. Fasc.5: 636-646. 16. Hong PI, Chen JT, Chang WC (2008). Plant regeneration via protocorm like body formation and shoot multiplication from seed derived callus of a maudiae type slipper orchid. Acta Physiol Plant 30:755–759. 17. Huang LC, Lin CJ, Kuo CI, Huang BL, Murashige T (2001). Paphiopedilum cloning in vitro. Sci Hortic 91:111–121 18. Lee YI (1998). The study of embryo development and seed germination in vitro in slipper orchids. MSc thesis. National Taiwan University, Taiwan 19. . Lee YI (2007). The asymbiotic seed germination of six Paphiopedilum species in relation to the time of seed collection and seed pretreatment. Acta Hortic Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 58 755:381–385 20. . Lee YI, Yeung EC, Lee N, Chung MC (2006). Embryo development in the Lady’s slipper orchid, Paphiopedilum delenatii, with emphasis on the ultrastructure of the suspensor. Ann Bot 98:1311–1319 21. Lee Y.-I., M.C. Chen, C.Y. Huang (2010). Effect of medium composition on a asymbiotic seed germination of five phalaenopsis species, ISHS Acta Horticulturae 878, International Orchid Symposium November 25th. 22. Li JM (2002) . Textbook of plant tissue culture, 2nd edn, Agriculture University of China, Beijing, p 25. 23. Lin YH, Chang C, Chang WC (2000). Plant regeneration from callus culture of a Paphiopedilum hybrid. Plant Cell Tiss Organ Cult 62:21–25 24. Liu ZJ, Liu KW, Chen LJ (2006). Conservation ecology of endangered species Paphiopedilum armeniacum (Orchidaceae), Acta Ecol Sinica 26(9):2791–2800 25. Martin KP (2003). Clonal propagation, encapsulation and reitroduction of Ipsea malabarica (Reichb.f.) J. D. Hook., and andangered orchid. In vitro Cell Dev Biol Plant 39: 322-326. 26. Ochora J., W.D. Stock, H. P. Linder and L. E. Newton (2001). Symbiotic Seed Germination, in Twelve Kenyan Orchid Species. 27. Oldach KH, Morgnestern A, Rother S, Girgi M et al (2001). Efficient in vitro plant regeneration from immature zyotic embryos of pearl millet (pennisetum glaucum L. R. Br.) and Sorghum bicolor L. moench plant Cell. Rep 20: 416-421. 28. Perner, H.& Gruss, O (1999). Paphiopedilum hangianum, a new species of the genus from Vietnam. Die Orchidee Suppl. 6: 3-7. 29. Pierik R. L. M.(1997). In vitro culure of higher plants. Kluwwer Ackademic publishers, 1997. p. 149-154 30. Pinto J. R. S.1, R. M. O. Freitas1, S. C. Praxedes (2010), “Stimulation of In vitro development of cattleya granulosa by sucrose”, General and Applied Plant Physiology – 2010, Volume 36 (3–4), pp. 183– 188. 31. studies of Paphiopedilumg odefroyae stein. Acta Bot Sinica 29(1):14–21. 32. Roslina Jawan1, Jualang Azlan Gansau1* and Janna Ong Abdullah (2010), “In vitro Culture of Borneo’s Endemic Orchid, Vanda dearei, AsPac”, J. Mol. Biol. Biotechnol. 2010. Vol. 18 (1): 203-207. 33. Seidenfagen, G. (1992).The orchids of Indochina. Opera Botanica 114: 502pp. 34. Shi J, Luo YB, Bernhardt P, Ran JC, Liu ZJ, Zhou Q (2008), Pollination by deceit in Paphiopedilum barbigerum (Orchidaceae): a staminode exploits the innate colour preferences of hoverflies (Syrphidae). Plant Biol 11:17–28 . 35. Shu Fung Lo, Satish Manohar Nalawade, Chao Lin Kuo, Chung Li Cheng and Hsin Sheng Tsay (2004), “Asymbiotic germination of immature seeds, plantlet development and ex vitro establishment of plants of Dendrobium tosaense makino a medicinally important orchild”, In vitro Cellular and Developmental Biology – Plant 40(5):528-535. 2004. Systematics and Geography of Plants. Vol. 71, 152 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 59 No. 2, Plant Systematics and Phytogeography for the Understanding of African Biodiversity (2001), pp. 585-596 36. Stewart L.Scott and Kane E Michael. (2006), “Symbiotic seed germination and evidence for in vitro mycobiont specificity in Spiranthes brevilabris (Orchidaceae) and its implications for species-level conservation”, In vitro Cellular and Developmental Biology - Plant 43(3):178-186. 2007. 37. Stimart DP, Ascher PD (1981). In vitro germination of Paphiopedilum seed on a completely defined medium. Sci Hortic 14:165–170. 38. Tawaro Supavadee, Suraninpong Potjamarn and Chanprame Sontichai (2008), “Germination and Regeneration of Cymbidium findlaysonianum Lindl.on a Medium Supplemented with Some Organic Sources”, Walailak J Sci & Tech 2008; 5(2): 125-135. 39. Tay LJ, Takeno K, Hori Y (1988). Culture conditions suitable for in vitro seed germination and development of seedling in Paphiopedilum. J Jpn Soc Hortic Sci 57:243–249. 40. Thomas TD, Michael A (2004). High frequency plantlet regeneration and multiple shoot induction from culture immature seeds of rhynchostylist retusa Blume., an exquiside orchid. Plant Bio-technol Rep1: 243-249 41. Trigiano RN and Gray DJ., (2000), Plant tissue culture concepts and laboratory exercises. CRC Press, New York. 42. Van Staden J, stewart J (1975), “Cytokinins in banana fruit”, Zpflanzenphysiol, 76: 280-283. 43. Zeng SJ, Chen ZL, Duan J (2006). Asepsis sowing and in vitro propagation of Paphiopedilum hirsutissimum Pfitz. Plant Physiol Commun 42(2):247. 44. Zettler W. Lawrence, Jennifer A. Sunley and Tonya Wilson Delaney (2000). “Symbiotic Seed Germination of an Orchid in Decline (Platanthera integra) from the Green Swamp, North Carolina”. Castanea.Vol. 65, No. (Sep., 2000), pp. 207-212 TÀI LIỆU ĐIỆN TỬ 1. www.slipperorchids.info 2. www.vuonhoalan.net Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 60 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: CÁC MÔI TRƯỜNG SỬ DỤNG TRONG CÁC NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN DINH DƯỠNG MURASHIGE AND SKOOG – 1962 (MS) Thành phần 1. Đa lượng NH4NO3 Luợng pha 1l dung dịch mẹ 1l môi truờng sử dụng (g) 33, 00 KNO3 38,00 MgSO4.7H2O 10,00 KH2PO4 2. Vi luợng H3BO3 3,40 (mg) 620,00 MnSO4.4H2O 2230,00 ZnSO4.4H2O 860,00 KI 83,00 MoNa2.2H2O 25,00 CoCl2.6H2O 2,50 CuSO4.5H2O 2,50 3. Sắt FeSO4.7H2O 5,56 (mg) 400 100 Pyridoxin (B6) 100 Thyamin HCl (B1) ml/l 20 (g) 6,60 6. Inositol ml/l 7,46 Axit Nicotinic (B5) 5. CaCl2.H2O 10 ml/l (g) Na2EDTA 4. Vitamin Glycine 50 ml/l (mg ) 100 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 50ml/l ml/l Page 61 THÀNH PHẦN DINH DƯỠNG VACIN AND WENT- 1949 (VW) Thành phần 1. Đa lượng Lượng pha 1l dung dịch mẹ 1l môi truờng sử dụng (g) KNO3 10,50 KH2PO4 5,00 MgSO4 2,44 (NH4)2SO4 50 ml/l 10,00 Ca3(PO4)2(Pha riêng) 4,00 2. Vi lượng MnSO4.H2O (mg) 3. Sắt FeSO4.7H2O (g) 10 ml/l 568,00 ml/l 4,63 THÀNH PHẦN DINH DƯỠNG ROBERT ERNST – 1979 (RE) Luợng pha Thành phần 1. Đa lượng 1l dung dịch mẹ 1l môi truờng sử dụng (g) NH4NO3 8,00 (NH4)2SO4 3,00 KNO3 8,00 Mg(NO3)2.6H2O 2,00 KH2PO4 6,00 Ca(NO3).4H2O (Pha 3,00 50 ml/l riêng) 2. Sắt FeSO4.7H2O Na2EDTA (g) 5,00 ml/l 7,40 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 62 PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ XỬ LÝ THỐNG KÊ BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE 25/ 8/14 20:57 ------------------------------------------------------------------ :PAGE Anh huong cua BA toi kha nang nhan nhanh VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .467533 .779222E-01 12.27 0.000 * RESIDUAL 14 .889334E-01 .635239E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 20 .556467 .278233E-01 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE 25/ 8/14 20:57 ------------------------------------------------------------------ :PAGE Anh huong cua BA toi kha nang nhan nhanh VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .787619E-01 .131270E-01 2.03 0.129 * RESIDUAL 14 .906667E-01 .647619E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 20 .169429 .847143E-02 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 25/ 8/14 20:57 ------------------------------------------------------------------ :PAGE Anh huong cua BA toi kha nang nhan nhanh VARIATE V005 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.62690 .604483 67.38 0.000 * RESIDUAL 14 .125600 .897143E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 20 3.75250 .187625 ----------------------------------------------------------------------------TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 8/14 20:57 ------------------------------------------------------------------ :PAGE Anh huong cua BA toi kha nang nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT$ ------------------------------------------------------------------------------CT$ NOS 3 3 3 CC 2.12000 2.02000 2.07000 1.96000 1.87667 1.84000 1.64667 SL 2.16000 2.09000 2.05333 2.07667 2.01667 2.09333 1.95000 HSN 1.58333 1.83333 1.98333 2.24667 2.66667 2.81000 2.44333 SE(N= 3) 0.460159E-01 0.464622E-01 0.546853E-01 5%LSD 14DF 0.139576 0.140930 0.165872 ------------------------------------------------------------------------------ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 8/14 20:57 ------------------------------------------------------------------ :PAGE Anh huong cua BA toi kha nang nhan nhanh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 63 VARIATE CC SL HSN GRAND MEAN (N= 21) NO. OBS. 21 1.9333 21 2.0629 21 2.2238 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ -------------------- SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.16680 0.79702E-01 4.1 0.0001 0.92040E-010.80475E-01 3.9 0.1292 0.43316 0.94718E-01 4.3 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE 25/ 8/14 21: ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua Ki toi kha nang nhan nhanh VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .361245 .722489E-01 7.99 0.002 * RESIDUAL 12 .108467 .903889E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 17 .469711 .276301E-01 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE 25/ 8/14 21: ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua Ki toi kha nang nhan nhanh VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .735611E-01 .147122E-01 2.23 0.117 * RESIDUAL 12 .790000E-01 .658333E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 17 .152561 .897418E-02 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 25/ 8/14 21: ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua Ki toi kha nang nhan nhanh VARIATE V005 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.08963 .417926 62.48 0.000 * RESIDUAL 12 .802665E-01 .668888E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 17 2.16989 .127641 ----------------------------------------------------------------------------TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 8/14 21: ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua Ki toi kha nang nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT$ ------------------------------------------------------------------------------CT$ NOS 3 3 3 CC 2.11333 2.42000 2.54333 2.40000 2.39333 2.21667 SL 2.14333 2.24000 2.28000 2.20333 2.27000 2.10667 HSN 1.58667 1.76667 1.96000 2.41667 2.50000 2.30667 SE(N= 3) 0.548905E-01 0.468449E-01 0.472189E-01 5%LSD 12DF 0.169136 0.144345 0.145498 ------------------------------------------------------------------------------ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 8/14 21: ------------------------------------------------------------------ :PAGE Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 64 anh huong cua Ki toi kha nang nhan nhanh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - VARIATE CC SL HSN GRAND MEAN (N= 18) NO. OBS. 18 2.3478 18 2.2072 18 2.0894 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ -------------------- SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.16622 0.95073E-01 4.0 0.0017 0.94732E-010.81138E-01 3.7 0.1175 0.35727 0.81786E-01 3.9 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE 26 26/ 8/** 19:47 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua su ket hop BA-NAA toi kha nang nhan nhanh VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .929733E-01 .232433E-01 3.70 0.043 * RESIDUAL 10 .628667E-01 .628667E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 14 .155840 .111314E-01 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE 26 26/ 8/** 19:47 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua su ket hop BA-NAA toi kha nang nhan nhanh VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .691067E-01 .172767E-01 2.63 0.098 * RESIDUAL 10 .657333E-01 .657333E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 14 .134840 .963143E-02 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 26 26/ 8/** 19:47 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua su ket hop BA-NAA toi kha nang nhan nhanh VARIATE V005 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5.35493 1.33873 130.23 0.000 * RESIDUAL 10 .102800 .102800E-01 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 14 5.45773 .389838 ----------------------------------------------------------------------------TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 26 26/ 8/** 19:47 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua su ket hop BA-NAA toi kha nang nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT$ ------------------------------------------------------------------------------CT$ NOS 3 3 CC 2.11667 2.14000 2.27333 2.18667 2.32333 SL 2.14000 2.03000 2.07000 1.99333 2.17667 HSN 1.58667 2.78333 3.16000 3.26000 2.82667 SE(N= 3) 0.457772E-01 0.468093E-01 0.585378E-01 5%LSD 10DF 0.144246 0.147498 0.184455 ------------------------------------------------------------------------------- Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 65 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 26 26/ 8/** 19:47 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua su ket hop BA-NAA toi kha nang nhan nhanh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - VARIATE CC SL HSN GRAND MEAN (N= 15) NO. OBS. 15 2.2080 15 2.0820 15 2.7233 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ -------------------- SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.10551 0.79289E-01 3.6 0.0426 0.98140E-010.81076E-01 3.9 0.0978 0.62437 0.10139 3.7 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE 33 26/ 8/** 20:13 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua dich chiet ca chua toi kha nang nhan nhanh VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .730493 .182623 35.95 0.000 * RESIDUAL 10 .508000E-01 .508000E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 14 .781293 .558067E-01 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE 33 26/ 8/** 20:13 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua dich chiet ca chua VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .537560 .134390 21.98 0.000 * RESIDUAL 10 .611334E-01 .611334E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 14 .598693 .427638E-01 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 33 26/ 8/** 20:13 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua dich chiet ca chua toi kha nang nhan nhanh VARIATE V005 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .851893 .212973 63.01 0.000 * RESIDUAL 10 .338001E-01 .338001E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 14 .885693 .632638E-01 ----------------------------------------------------------------------------TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 33 26/ 8/** 20:13 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua dich chiet ca chua toi kha nang nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT$ ------------------------------------------------------------------------------CT$ NOS 3 3 CC 1.98667 1.79000 1.66333 1.52000 1.34333 SL 1.99667 1.84667 1.77333 1.62667 1.44333 HSN 1.43667 1.80333 1.52333 1.23000 1.12000 SE(N= 3) 0.411501E-01 0.451418E-01 0.335659E-01 5%LSD 10DF 0.129666 0.142243 0.105767 ------------------------------------------------------------------------------- Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 66 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 33 26/ 8/** 20:13 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua dich chiet ca chua toi kha nang nhan nhanh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - VARIATE CC SL HSN GRAND MEAN (N= 15) NO. OBS. 15 1.6607 15 1.7373 15 1.4227 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ -------------------- SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.23623 0.71274E-01 4.3 0.0000 0.20679 0.78188E-01 4.5 0.0001 0.25152 0.58138E-01 4.1 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE C.CAO FILE 25/ 8/14 21:12 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua dich chiet chuoi toi kha nang nhan nhanh VARIATE V003 C.CAO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .123627 .309067E-01 3.54 0.048 * RESIDUAL 10 .873333E-01 .873333E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 14 .210960 .150686E-01 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLA FILE 25/ 8/14 21:12 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua dich chiet chuoi toi kha nang nhan nhanh VARIATE V004 SLA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .255240 .638100E-01 6.84 0.007 * RESIDUAL 10 .933334E-01 .933334E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 14 .348573 .248981E-01 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE 25/ 8/14 21:12 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua dich chiet chuoi toi kha nang nhan nhanh VARIATE V005 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .871907 .217977 34.42 0.000 * RESIDUAL 10 .633333E-01 .633333E-02 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 14 .935240 .668029E-01 ----------------------------------------------------------------------------TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 8/14 21:12 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua dich chiet chuoi toi kha nang nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT$ ------------------------------------------------------------------------------CT$ NOS 3 3 C.CAO 1.98667 2.18667 2.23333 2.18667 2.22667 SLA 2.00667 2.32667 2.35667 2.30333 2.33333 HSN 1.42333 1.61667 2.05667 1.96667 1.94667 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 67 SE(N= 3) 0.539547E-01 0.557773E-01 0.459468E-01 5%LSD 10DF 0.170013 0.175756 0.144780 ------------------------------------------------------------------------------ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 8/14 21:12 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua dich chiet chuoi toi kha nang nhan nhanh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - VARIATE C.CAO SLA HSN GRAND MEAN (N= 15) NO. OBS. 15 2.1640 15 2.2653 15 1.8020 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ -------------------- SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.12275 0.93452E-01 4.3 0.0478 0.15779 0.96609E-01 4.3 0.0067 0.25846 0.79582E-01 4.4 0.0000 | | | | SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE 36 26/ 8/** 21:11 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua dich chiet chuoi va khoai tay toi kha nang nhan nhanh ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -------------------------------------------------------------VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB CC 0.11297 0.69400E-02 10 16.28 0.000 SL 0.18741 0.84134E-02 10 22.28 0.000 HSN 0.68358 0.61467E-02 10 111.21 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 36 26/ 8/** 21:11 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua dich chiet chuoi va khoai tay toi kha nang nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT$ ------------------------------------------------------------------------------CT$ NOS 3 3 CC 1.98000 2.34667 2.39333 2.41667 2.46000 SL 2.00000 2.45000 2.50333 2.59000 2.61333 HSN 1.44000 1.77667 1.81667 2.55333 2.45667 SE(N= 3) 0.480971E-01 0.529571E-01 0.452649E-01 5%LSD 10DF 0.151556 0.166870 0.142631 ------------------------------------------------------------------------------ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 36 26/ 8/** 21:11 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua dich chiet chuoi va khoai tay toi kha nang nhan nhanh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - VARIATE CC GRAND MEAN (N= 15) NO. OBS. 15 2.3193 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ -------------------- SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.19296 0.83307E-01 3.6 0.0003 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 68 SL HSN 15 15 2.4313 2.0087 0.24404 0.44688 0.91724E-01 0.78401E-01 3.8 0.0001 3.9 0.0000 SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE 35 26/ 8/** 20:30 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua nen moi truong toi sinh truong cua choi ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -------------------------------------------------------------VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB CC 0.50831 0.26589E-01 12 19.12 0.000 SL 0.44466 0.25422E-01 12 17.49 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 35 26/ 8/** 20:30 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua nen moi truong toi sinh truong cua choi MEANS FOR EFFECT CT$ ------------------------------------------------------------------------------CT$ NOS 3 3 3 CC 3.59000 4.23667 3.45000 4.16333 3.83667 4.52333 SL 3.47667 4.10333 3.38000 4.06000 3.52333 4.27333 SE(N= 3) 0.941436E-01 0.920547E-01 5%LSD 12DF 0.290088 0.283652 ------------------------------------------------------------------------------ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 35 26/ 8/** 20:30 ---------------------------------------------------------------- PAGE anh huong cua nen moi truong toi sinh truong cua choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - VARIATE CC SL GRAND MEAN (N= 18) NO. OBS. 18 3.9667 18 3.8028 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ -------------------- SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.41021 0.16306 4.1 0.0000 0.38565 0.15944 4.2 0.0001 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE 25/ 8/14 21:19 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua ham luong duong toi sinh truong cua choi VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.32990 .443300 15.31 0.001 * RESIDUAL .231667 .289583E-01 ----------------------------------------------------------------------------- Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 69 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.56157 .141961 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE 25/ 8/14 21:19 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua ham luong duong toi sinh truong cua choi VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.17777 .392589 15.23 0.001 * RESIDUAL .206200 .257750E-01 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 11 1.38397 .125815 ----------------------------------------------------------------------------TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 8/14 21:19 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua ham luong duong toi sinh truong cua choi MEANS FOR EFFECT CT$ ------------------------------------------------------------------------------CT$ NOS 3 3 CC 4.47333 4.08667 3.87667 3.55667 SL 4.12667 4.06667 3.58333 3.39000 SE(N= 3) 0.982486E-01 0.926912E-01 5%LSD 8DF 0.320379 0.302256 ------------------------------------------------------------------------------ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 8/14 21:19 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua ham luong duong toi sinh truong cua choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - VARIATE CC SL GRAND MEAN (N= 12) NO. OBS. 12 3.9983 12 3.7917 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ -------------------- SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.37678 0.17017 4.3 0.0013 0.35470 0.16055 4.2 0.0014 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE 25/ 8/14 21:22 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua cuong chieu sang toi sinh truong cua choi VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .978692 .326231 10.90 0.004 * RESIDUAL .239400 .299250E-01 ----------------------------------------------------------------------------- Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 70 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.21809 .110736 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE 25/ 8/14 21:22 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua cuong chieu sang toi sinh truong cua choi VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.13207 .377356 14.89 0.001 * RESIDUAL .202733 .253417E-01 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 11 1.33480 .121345 ----------------------------------------------------------------------------TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 8/14 21:22 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua cuong chieu sang toi sinh truong cua choi MEANS FOR EFFECT CT$ ------------------------------------------------------------------------------CT$ NOS 3 3 CC 3.67667 4.35333 4.29000 3.85667 SL 3.54667 4.23333 4.23000 3.71000 SE(N= 3) 0.998750E-01 0.919088E-01 5%LSD 8DF 0.325682 0.299705 ------------------------------------------------------------------------------ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 8/14 21:22 ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua cuong chieu sang toi sinh truong cua choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - VARIATE CC SL GRAND MEAN (N= 12) NO. OBS. 12 4.0442 12 3.9300 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ -------------------- SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.33277 0.17299 4.3 0.0037 0.34835 0.15919 4.1 0.0014 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE 25/ 8/14 21: ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua NAA den re VARIATE V003 CC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .250358 .834527E-01 2.62 0.122 * RESIDUAL .254933 .318667E-01 ----------------------------------------------------------------------------- Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 71 * TOTAL (CORRECTED) 11 .505292 .459356E-01 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE 25/ 8/14 21: ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua NAA den re VARIATE V004 SL LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ .381025 .127008 5.40 0.026 * RESIDUAL .188267 .235333E-01 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 11 .569292 .517538E-01 ----------------------------------------------------------------------------BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE 25/ 8/14 21: ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua NAA den re VARIATE V005 SR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.76249 1.25416 91.54 0.000 * RESIDUAL .109600 .137000E-01 ----------------------------------------------------------------------------* TOTAL (CORRECTED) 11 3.87209 .352008 ----------------------------------------------------------------------------TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 25/ 8/14 21: ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua NAA den re MEANS FOR EFFECT CT$ ------------------------------------------------------------------------------CT$ NOS 3 3 CC 4.04000 4.25333 4.37333 4.41000 SL 3.82667 4.11000 4.23000 4.29000 SR 2.27333 3.10000 3.62667 3.65667 SE(N= 3) 0.103064 0.885689E-01 0.675771E-01 5%LSD 8DF 0.336082 0.288814 0.220362 ------------------------------------------------------------------------------ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 25/ 8/14 21: ------------------------------------------------------------------ :PAGE anh huong cua NAA den re F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL. SECTION - VARIATE CC SL SR GRAND MEAN (N= 12) NO. OBS. 12 4.2692 12 4.1142 12 3.1642 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ -------------------- SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.21433 0.17851 4.2 0.1224 0.22749 0.15341 3.7 0.0255 0.59330 0.11705 3.7 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 72 [...]... kinh doanh lan Hài Từ những cơ sở khoa học và thực tế, chúng tôi đã tiến hành đề tài: Nghiên cứu nhân giống in vitro loài lan Hài có nguy cơ tuyệt chủng Paphiopedilum purpuratum 2 Mục đích và yêu cầu 2.1 Mục đích Xây dựng được quy trình nhân nhanh in vitro cây lan Hài có nguy cơ tuyệt chủng Paphiopedilum purpuratum được thu thập ở Việt Nam 2.2 Yêu cầu - Xác định được tuổi quả thích hợp đưa vào nhân. .. Á Lan Hài là chủng họ lan có giá trị thương mại cao nhất, được yêu chuộng, sưu tầm và săn lùng nhiều nhất trên thế giới Việt Nam là một trung tâm sản xuất lan Hài lớn của thế giới với trên 20 loài thuộc chi Paphiopedilum Lan Hài Việt Nam bao gồm nhiều loài giá trị như lan Hài đỏ, lan Hài vàng, lan Hài tía, lan Hài trắng, lan Hài vân, lan Hài vân duyên, lan Hài đốm, lan Hài lông hay lan Hài râu,… Paphiopedilum. .. báo tiếp theo sự tuyệt chủng của lan Hài Việt Nam Một loạt các loài lan Hài khác hiện đang bị đe dọa nghiêm trọng, trong đó sẽ có hài Vân (P.callosum), hài Hồng (P delenatii), hài Tía (P .purpuratum) và cả loài hài Hương lan (P.emersonii) Lan Hài còn tồn tại rất ít trong vùng phân bố tự nhiên, phần lớn ở những vách núi hiểm trở, khó tiếp cận Vì vậy việc bảo tồn và phát triển các loài lan Hài của Việt Nam... cầu cây giống Với tình trạng hiện nay các loài lan Hài đang bị tận thu một cách quá mức thì rất cần thiết phải có một phương pháp hiệu quả để nhân giống các loài lan Hài Phương pháp nhân giống bằng công nghệ nuôi cấy mô tế bào sẽ là công cụ hiệu quả Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 17 nhất trong việc khôi phục lại các loài lan Hài đang có nguy cơ tuyệt chủng. .. nhất cho nhân nhanh PLB và chồi lan Hồ điệp lai S8-11 Hiệu quả các hỗn hợp hợp chất hữu cơ tự nhiên cũng được khẳng định trong nuôi cấy in vitro cây Paphiopedilum hangianum Gurss (Hoàng Thị Giang và cs, 2010) 1.2.3 Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hài 1.2.3.1 Nghiên cứu trên thế giới Mặc dù sự hình thành hạt của lan Hài rất lớn nhưng tỷ lệ hạt nảy mầm trong tự nhiên lại rất thấp vì hạt lan Hài quá... hợp pháp Lan Hài đã được chỉ định là có nguy cơ tuyệt chủng bởi các Công ước quốc tế về buôn bán các loài động vật, thực vật hoang dã (CITES, CITES Appendices, 2008) Ở Việt Nam, với sự hiện hữu của hơn 20 loài thuộc chi Paphiopedilum, Việt Nam là một trong những quốc gia có nguồn lan Hài tự nhiên phong phú nhất Không những phong phú về chủng loại, Việt Nam còn có nhiều loài lan Hài đặc hữu có giá trị... hình ảnh về Lan Hài P .purpuratum (Nguồn: www.slipperorchids.info) A, Các bộ phận của cây; B, Hoa Lan Hài P.dianthum; C, Cây sinh trưởng ngoài tự nhiên; D, Phân bố địa lý 1.2 Tổng quan về kỹ thuật nhân giống in vitro lan Hài Trước kia, do Paphiopedilum là giống lan đa thân nên người ta thường dùng phương pháp tách bụi để nhân giống, đây là phương pháp đơn giản, dễ thực hiện và cây con tách ra có tỷ lệ... tiễn Cung cấp phương pháp mới để nhân giống lan Hài P .purpuratum được thu thập ở Việt Nam, góp phần bảo tồn và phát triển nguồn gen của loài lan Hài quý có nguy cơ tuyệt chủng Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 3 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung về lan Hài Paphiopedilum Lan Hài là một nhóm rất khác biệt Chúng có thể dễ dàng nhận ra bởi cấu trúc... dạng của lan Hài cao hơn bất cứ nơi nào trên thế giới Nhiều loài lan Hài của Việt Nam không chỉ rất hiếm mà còn có những loài đặc hữu hẹp, là báu vật quốc gia có tầm quan trọng quốc tế Các kết quả của quá trình nghiên cứu thực vật của Viện Sinh thái và Tài nguy n Sinh vật thuộc trung tâm khoa học Tự Nhiên và Công Nghệ Quốc Gia Việt Nam và nghiên cứu các mẫu thu mua để buôn bán thì có 18 loài lan Hài và... 1.2.1 Kỹ thuật nhân giống thực vật in vitro 1.2.1.1 Khái niệm nhân giống thực vật in vtro Phương pháp nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy mô – tế bào (nhân giống in vitro) dựa tên cơ sở về tính toàn năng và khả năng phân hóa, phản phân hóa của tế bào, mô thực vật Đây là lĩnh vực mà nuôi cấy mô và tế bào thực vật đã thực sự mang lại hiệu quả kinh tế to lớn (Vũ Văn Vụ và cs, 2001), (Hoàng Minh Tấn và cs, . thiệu loài Paphiopedilum purpuratum 15 1.2. Tổng quan về kỹ thuật nhân giống in vitro lan Hài 17 1.2.1 Kỹ thuật nhân giống thực vật in vitro 18 1.2.2. Nghiên cứu về nhân giống in vitro cây lan. người trồng, kinh doanh lan Hài. Từ những cơ sở khoa học và thực tế, chúng tôi đã tiến hành đề tài: Nghiên cứu nhân giống in vitro loài lan Hài có nguy cơ tuyệt chủng Paphiopedilum purpuratum  TRẦN THÙY MAI NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO LOÀI LAN HÀI CÓ NGUY CƠ TUYỆT CHỦNG PAPHIOPEDILUM PURPURATUM CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ : 60420201