B Ộ Y T Ế TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI BQl s v . NGTTYỄN PHỨ C Á H H NGHIÊN cúu CHẾ BIẾN VỊ THUỐC DƠN LÁ Dỏ VÀ TÁC DỤNG CHỐNG KHÔI u CỦA ĐƠN LÁ Dỏ [ExcoecarìacoclììnchỉnensỉsVm, Euphorbiaceaeỉ (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ ĐẠI HỌC KHÓA 1997-2002) QUc^ 4 ^ THS . NGUYỄN THÁI AN TS . TRẦN LƯU VÃN HIẾN Al«c Uực ụ *s: BỘ MÔN DƯỢC HỌC cổ TRUYẼN PHÔNG ĐÔNG Y THựC NGHIỆM • VIỆN Y HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM 3/ 2002-5/2002 B à N ội, tíầáttg S/2 0 0 2 LỜI CẢM ƠN Với lòng kúứi ừọng và biết ơn sâu sắc nhất, em xin bày tỏ lòng biết Cín chân ứiành tói : ThS. Nguyễn Thái An TS . Trần Lưu Vân Hiền Là những người đã trực tiếp hướng dẫn, tận tình chỉ bảo và dành rất nhiều thời gian, công sức giúp đỡ em ttong suốt thòi gian thực hiện và hoàn thành khóa luận tốt nghiệp. Cũng nhân dịp này, em xin được bày tỏ lòng biết ơn tới sự giúp đỡ của PGS. TS. Phạm Xuân Sinh, GS. TS. Trần Mạnh Bình, PGS. TS. Bế Thị Thuấn, TS. Đỗ Ngọc Thanh. Cùng toàn thể các thầy cô và cán bộ Bộ môn Dược học cổ truyền, Bộ môn Dược liệu, Phòng Đông y thực nghiệm - Viện Y học cổ truyền Việt Nam, Phòng thí nghiệm Trung tâm trường Đại học Dược, Thư viện Đại học Dược đã giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp. Một lần nữa em xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, Ngày 20 tháng 5 năm 2002 Sinh viên Nguyễn Phúc Ánh MỤC LỤC Trang PHẦNI. ĐẶT VÂN ĐỂ 1 PHẦN II. TỔNG QUAN 2 2.1. Đặc điểm thực vật 2 2.1.1 Tên khoa học 2 2.1.2. Bộ phận dùng 2 2.1.3. Mô tả thực vật 2 2.1.4. Đặc điểm vi học 3 2.1.5. Phân bố 5 2.1.6. Trổng trọt thu hái và chế biến 5 2.2. Thành phần hoá học 6 2.3. Tác dụng sinh học 7 2.4. Công dụng 8 PHẦN III. THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 10 3.1. Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 10 3.1.1. Nguyên liệu 10 3.1.2. Phương pháp nghiên cứu 10 3.2. Kết quả và nhận xét 11 3.2.1. Xác định một số nhóm chất bằng phản ứng hoá học 11 3.2.2. Định lượng flavonoid toàn phần 19 3.2.3. Định tính flavonoid bằngSKLM 20 3.2.4. Định lượng tanin toàn phần 22 3.2.5. Phân lập các polyphenol 24 3.3. Tác dụng chống khối u của đơn lá đỏ 24 3.3.1. Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 24 3.3.2. Kết quả nghiên cứu 26 3.3.3. Nhận xét 28 PHẦN IV. KẾT QUẢ VÀ ĐỂ XUÂT 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 Chữ viết tắt MDA: Malonyl dialdehyd. SKLM: Sắc ký lớp mỏng. TT: Thuốc thử. YHCT: Y học cổ truyền. PHẦN I - ĐẶT VẤN ĐỂ Từ xa xưa, cây cỏ đã được loài người sử dụng làm thuốc chữa bệnh. Ngày nay, thời đại của khoa học kỹ thuật hiện đại, con ngưòd đã có thể tổng hợp được các hoạt chất có cấu trúc và tác dụng tương tự các thành phần có nguồn gốc thiên nhiên. Tuy nhiên các loài thảo dược hiện nay vẫn được tiếp tục sử dụng. ở Việt Nam, việc sử dụng cây cỏ làm thuốc là một tập quán có từ lâu đời. Với điều kiện khí hậu của vùng nhiệt đới, cây cỏ nước ta rất phong phú và đa dạng, trong đó có nhiều loài được sử dụng làm thuốc chữa bệnh. Cây Đơn lá đỏ (Excoecarỉa cochinchinensis Lour.) đã được dùng làm thuốc từ lâu theo kinh nghiệm dân gian để chữa mụn nhọt, mẩn ngứa, dị ứng, ỉa chảy Những nghiên cứu gần đây về vị thuốc này cho thấy trong Đơn lá đỏ có các thành phần tanin, flavonoid Đây là những hợp chất hiện đang được các nhà khoa học trên thế giới quan tâm về tác dụng chống oxy hoá (antioxydant), ức chế sự phát triển của HIV, khối u Bên cạnh đó, tuỳ thuộc vào mục đích điều trị mà vị thuốc được sử dụng ở các dạng chế biến khác nhau. Nhằm mục tiêu tìm hiểu sự thay đổi tác dụng và thành phần hoá học của dược liệu Đơn lá đỏ ở dạng chế biến và không chế biến, đồng thời bước đầu đánh giá khả năng chống khối u thực nghiệm của vị thuốc Đơn lá đỏ và hỗn hợp các polyphenol chiết xuất từ dược liệu Đơn lá đỏ, khoá luận tiến hành nghiên cứu với hai nội dung sau: 1. Nghiên cứu về thành phần hoá học của các mẫu dược liệu chế biến và không chế biến , 2. Nghiên cứu khả năng chống khối u thực nghiệm của Đơn lá đỏ . PHẦN II-TỔNG QUAN 2.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT: 2.1.1. Tên khoa học: Excoecaria òíco/ơr Hassk. [4], [7], [10], [14], [20]. Excoecaria cochinchinensis Lour. [5], [14], [24]. Họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) - Tên Việt Nam : Đơn lá đỏ hay còn gọi là Đơn tướng quân, Đơn tía, Đơn mặt quỉ, Đơn mặt trời, Liễu đỏ [5^ . - Tên Trung Quốc : Hồng bối quế hoa [14], Bách thiên liễu [10]. 2.1.2. Bộ phận dùng : Cành non, lá, rễ . 2.1.3. Mô tả thực vật : Cây nhỏ, cao 0,4-Im, toàn thân có nhựa mủ trắng, cây phân cành rất nhiều [18]. Cành nhỏ, gầy, dài, màu tía [14]. Lá mọc đối, hình trái xoan thuôn dài, phía cuống nhọn, phía đầu có mũi nhọn ngắn, dài 6-12cm, rộng 1,2 - 4cm [14], mặt trên lá có màu lục thẫm, mặt dưới lá có màu đỏ tía, mép lá có răng cưa [5], [15], [24], cuống ngắn 5-lOmm [12]. Gân lá hình lông chim [18]. Hoa mọc thành bông ở kẽ lá hay đầu cành, bông hoa đực dài 2cm, bông hoa cái ngắn hơn, cùng gốc hay khác gốc [15]. Cây ra hoa vào các tháng 4, 5, 6[12],[18]. (X em hìnhl) Hình l:Ả nh cây Đơn lá đỏ. Hoa đực có 3 nhị, chỉ nhị mảnh, bao phấn đính lưng, bao phấn hình bầu dục. Hoa cái có bầu trên hình trứng, 3 lá noãn hàn liền tạo thành bầu có 3 ô, đính noãn trung trục [18] . Công thức hoa [18]: * đ K3C0A3G0 * ? K3CoAe^ Quả nang 3 mảnh, đường kính chừng Icm. Hạt hình cầu màu nâu nhạt, đường kính 4mm [14], hạt có mồng. Nội nhũ dầu[18]. 2.1.4. Đặc điểm vi học : Theo tài liệu [18] đã xác định đặc điểm vi học của dược liệu Đơn lá đỏ bao gồm : vi phẫu lá, vi phẫu thân, soi bột lá . Mình 2 Sơ đồ tổng qiiáí vi phẫu lá. 1. Biểu bì 2 . Mỏ clày 3. Mổ mềm 4. Mô clạii , 5. Bó li be - gỗ 6. ồng nhựa mu- Sơ đồ vi pliẫu lliân : 1. Biểu bì 2. Mổ dày 3. Mô Iiiềiii vỏ 4. Sợi 5. Mô mềm riiộl 6. Ông nhựa niỉi 7. Bó li be - gỗ Hình 3-Sơ dồ tổng quát vi phẫu thân. oo oo 6 7- Hiiili 4: Đỵc (liểin bộ( lá 2.1.5. riiAn bố: 1. Tế bno lỗ kiư 2. Sợi 3. Mạch xoắn 4. Mảnh inô mềm 5. Mảnh mô mềm chứa chất míiii 6. Ti nil bộ( 7. 'ỉ inh (hể caiixi oxalal ở Việ( Nam, Đ(tn lá (l(S niọc lioang liay đnực trổng ở nliiềii iKĩi nliư ; Long An, Tiền Giang, Đồng Thííp, Hậu Giang, An Giang ở phía bắc, cây được (rồng nhiều Ỉ1 làng hoa Ngọc ĩlà - Hà Nội, Tliái Bình, Nam Định Ngoài ra, cfty còn đirợc trồng ở Quảng 'ĨAy, Ví1ii Nam (Trung Quốc) 119],124] Cây dược (rồng làm cảíih, lấy lá và cành non làm Ihiiốc |4|, |51, 114] những cây mọc hoang llniờng to cao iKm, U1 íl có màu đỏ tín hơn, có khi míit clirới cổ màu xanh, phiến lá liìnli nicìc thiiôn (lài [ 141. 2. ỉ.6. 'rrồng (rọf, thu hái VÍ1 chế biến: -Trổng (rọl: Tliưcìiig gieo hạt VÌIO vụ (lông xuân |41, híiy (lAm cành vào mùa xnAn và đầu hè, có nơi Irồiig bằng rễ cAy 112|. [...]... khối u khá cao, đặc biệt là một chuột xuất hiện nhi u khối u Tổng số khối u trên chuột ở tuần thứ 13 đã là 21 khối u, số lượng khối u xuất hiện thêm nhi u và nhanh ở các tuần cuối Trong khi tỷ lệ chuột mang khối u ở 2 nhóm đi u trị thấp hơn một cách đáng kể và số lượng khối u trên một chuột cũng ít hơn nhi u Cho đến tuần thứ 14 trong cả lô đi u trị bằng tanin toàn phần mới thấy có 5 khối u trên 4 chuột... số nghiên c u: trọng lượng chuột hàng tuần, ngày khối u bắt đ u xuất hiện, số khối u và kích thước u trên các chuột hàng tuần và ở tuần cuối cùng(tuần thứ 15) - ở tuần thứ 15, giết chuột bằng cách kéo lệch cột sống, xác định hàm lượng Malonyl dialdehyd (MDA) trong gan và thận chuột theo phương pháp do Jadwiga Robax mô tả [21] 3.3.2 Kết quả 33.2.1 Thời gian bắt đ u xuất hiện khối u: ở tuần thứ 9 sau... viêm cơ: Lá đơn đỏ kết họfp vód Kim ngân hoa, Ké đ u ngựa, Sài đất, Thổ phục linh, Hà thủ ô, Hoàng đằng, Huyền sâm, Kê huyết đằng, Lá móng tay, Bồ công anh, Ng u bàng tử mỗi vị 12g sắc u ng [3], [14] PHẦN III - THựC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1 NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 3.1.1 Nguyên li u, súc vật, hoá chất: Nguyên li u: các m u nghiên c u được thu hái và chế biến ở Hà Nội, có ký hi u lần lượt... Qua nghiên c u tác dụng chống khối u thực nghiệm của dịch sắc Đơn lá đỏ và tanin toàn phần chiết xuất từ lá của Đofn lá đỏ thấy các m u thử đ u có tác dụng ức chế sự hình thành và phát triển khối u trong mô hình gây u thực nghiệm trên chuột nhắt trắng Đê xuất: - Tiếp tục nghiên c u về các hợp chất polyphenol - Nghiên c u thêm một số tác dụng sinh học của các hợp chất polyphenol ... khối u ở 3 nhóm chuột nghiên c u Quan sát ti u bản dưới kính hiển vi NIKON thấy rất rõ hình ảnh của khối u bi u mô Tuy nhiên, với đi u kiện thực nghiệm dùng các li u lượng benzo \pc] pyren và d u Ba đ u (Croton oil) như đã ghi ở phần phương pháp, chưa thấy hình ảnh các tế bào lạ ở vùng có khối u 3.3.3 Nhận xét : Cao lỏng dược li u toàn phần từ lá khô của Đơn lá đỏ và tanin toàn phần chiết xuất từ lá. .. đối xứng của CH 3 1375 cm'^ ứng với dao động biến dạng đối xứng của CH 3 3.3 Nghiên c u tác dụng chống khối u thực nghiệm trên chuột nhắt trắng 3.3.1 Nguyên li u và phương pháp nghiên c u 33.1.1 Nguyên li u: - Dịch sắc lá khô được cô đến cao lỏng 1:1 - Tanin toàn phần 33.1.2 Phương pháp nghiên c u: Mô hình tạo khối u thực nghiệm được tiến hành theo phương pháp đã được Ramanathan R.[23] mi u tả Tác nhân... Gram(+) như Bacillus subtilỉs; B cereus; B pulmilus; Sarcina lutea - Dịch chiết saponin có tác dụng ức chế đối với vi khuẩn Gram(+) kém nhưng lại có tác dụng tốt trên nấm Candida albicans [12] Thử tác dụng của một thành phần tách từ hỗn hợp flavonoid toàn phần bằng sắc ký chế hoá, nhận thấy nó có tác dụng trên cả chủng Staphylococcus aureus [12] Dịch sắc lá Đơn đỏ, tanin toàn phần và chất FAD1 phân... đi u trị bằng cao lỏng dược li u cũng chỉ có 6 khối u trên 4 ch u ộ t 33.2.3 Kích thước các khối u ở tuần quan sát cuối cùng Tiến hành đo kích thước khối u ở tuần quan sát cuối cùng và chỉ tính những khối u có đường kính > Imm Kết quả thể hiện ở trong bảng 7 Bảng 7 Kích thước khôi u ở chuột ở tuần thứ 15 Kích thước khối u Nhóm đối Nhóm đi u trị bằng (đường kính mm) chứng tanin toàn phần Nhóm đi u trị... c u trúc ki u áaphnan và tigỉian [2 2 ] 2.3 TÁC DỤNG SINH HỌC: - Độc tính : lá Đơn lá đỏ không có độc tính cấp [18] - Đơn lá đỏ có tác dụng chống dị ứng, chống choáng phản vệ, đặc biệt là khi kết hợp với Kim ngân hoa, nâng cao tỷ lệ súc vật sống sót qua cơn choáng phản vệ [14], [15] - Đơn lá đỏ kết hợp với Thương nhĩ tử và Kinh giói dưới dạng chè nhúng có tác dụng chống dị ứng, chống viêm, kháng khuẩn,... lần 1 , khối u bắt đ u xuất hiện ở một số chuột (Bảng 5) Bảng 5: Sô lượng khối u trên chuột ở tuần thứ 9 Tuần 9 Số lượng Nhóm đi u trị bằng cao dược phần chứng Nhóm đi u trị bằng tanin toàn Nhóm đối li u 1/10 1/10 1 chuột 4/10 1 mang khối u 8 Tổng số khối u 3.32.2 Sự phát triển các khối u: Sự phát triển các khối u trên chuột ở các nhóm được trình bày trên bảng 6 Bảng 6 Sự phát triển của các khối u theo . polyphenol 24 3.3. Tác dụng chống khối u của đơn lá đỏ 24 3.3.1. Nguyên li u và phương pháp nghiên c u 24 3.3.2. Kết quả nghiên c u 26 3.3.3. Nhận xét 28 PHẦN IV. KẾT QUẢ VÀ ĐỂ XUÂT 29 TÀI LI U THAM KHẢO . ti u tìm hi u sự thay đổi tác dụng và thành phần hoá học của dược li u Đơn lá đỏ ở dạng chế biến và không chế biến, đồng thời bước đ u đánh giá khả năng chống khối u thực nghiệm của vị thuốc. thuốc Đơn lá đỏ và hỗn hợp các polyphenol chiết xuất từ dược li u Đơn lá đỏ, khoá luận tiến hành nghiên c u với hai nội dung sau: 1. Nghiên c u về thành phần hoá học của các m u dược li u chế biến