LỜI CAM ĐOAN Tôi là Nguyễn Thị Kiều, nghiên cứu sinh khoá 30 Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành vi sinh y học, xin cam đoan: 1. Đây là luận án do bản thân tôi trực tiếp thực hiện dưới sự hướng dẫn của PGS.TS. Nguyễn Đăng Hiền và GS.TS. Lê Thị Luân. 2. Công trình này không trùng lặp với bất kỳ nghiên cứu nào khác đã được công bố tại Việt Nam. 3. Các số liệu và thông tin trong nghiên cứu là hoàn toàn chính xác, trung thực và khách quan, đã được xác nhận và chấp thuận của cơ sở nơi nghiên cứu. Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước pháp luật về những cam kết này. Hà Nội, ngày 18 tháng 8 năm 2015 Người viết Nguyễn Thị Kiều i Lời cảm ơn • Để hoàn thành luận án này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS. Nguyễn Đăng Hiền, GS.TS. Lê Thị Luân, những người thầy đã trực tiếp hướng dẫn, tạo mọi điều kiện, giúp đỡ tôi trong quá trình nghiên cứu, học tập. • Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS. Lê Văn Phủng, người có ảnh hưởng lớn nhất đối với tôi trong định hướng học tập, nghiên cứu; về sự cẩn thận, ý thức trách nhiệm trong công việc. • Tôi xin chân thành cảm ơn: Ban Giám hiệu, phòng Đào tạo Sau đại học trường Đại học Y Hà Nội; Các thầy cô, cán bộ, công nhân viên Bộ môn Vi sinh đã truyền đạt kiến thức và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình học tập. • Tôi xin gửi lời cảm ơn đặc biệt tới: Ban Lãnh đạo, tập thể Phòng Kiểm định chất lượng, tập thể Phòng Đảm bảo chất lượng - Trung tâm Nghiên cứu, Sản xuất Vắc xin và Sinh phẩm Y tế đã sát cánh cùng tôi trong thời gian tôi học tập, nghiên cứu tại đây. • Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo, Khoa Quản lý chất lượng Viện Kiểm Định Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm Y tế đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình học tập. • Cuối cùng, tôi xin bày tỏ tình cảm thân thương và lòng biết ơn đặc biệt đối với gia đình và người thân, bạn bè, đồng nghiệp vẫn luôn ở bên cạnh tôi, nâng đỡ tôi, chia sẻ, động viên, tạo điều kiện cho tôi học tập, nghiên cứu. Hà Nội, ngày 18 tháng 8 năm 2015 Nguyễn Thị Kiều ii CÁC CHỮ VIẾT TẮT AIK-C: A = America, I= Iran, K=The Kitasato institute, C=Chick embryo cell (Tên chủng vi rút dùng sản xuất vắc xin sởi tại Việt Nam) ATCC American type culture collection (Bộ sưu tập chủng mẫu của Mỹ) CFU Colony forming unit (Khuẩn lạc) FTM: Fluid Thioglycollate Medium (Môi trường lỏng thioglycolat) GMP: Good Manufacturing Practice (Thực hành sản xuất tốt) MVVAC Measles virus vaccine (Tên thương mại của vắc xin sởi sống giảm độc lực, đông khô sản xuất tại Việt Nam) PFU: Plaque Forming Unit (Đám hủy hoại tế bào) POLYVAC: Trung tâm Nghiên cứu, Sản xuất Vắc xin và Sinh phẩm Y tế PPLO Pleuropneumonia-like organisms (Tên môi trường phát hiện Mycoplasma) SCDB: Soybean Casein Digest Broth (Canh thang đậu tương) SD: Standard Deviation (Độ lệch chuẩn) TB: Trung bình TCMR: Tiêm chủng mở rộng Vero: Verda Reno (Tế bào thận khỉ xanh Châu Phi) Viện Kiểm định Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm Y tế iii Quốc gia: VVM: Vaccine Vial Monitor (Chỉ thị nhiệt lọ vắc xin) WHO: World Health Organization (Tổ chức Y tế Thế giới) iv MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Vi rút sởi 3 1.1.1. Đặc điểm vi rút học 3 1.1.2. Khả năng gây bệnh, biến chứng, điều trị bệnh sởi 6 1.1.3. Dịch tễ học bệnh sởi 6 1.1.4. Tình hình bệnh sởi trên thế giới và Việt Nam - Thành quả của việc sử dụng vắc xin 7 1.2. Vắc xin sởi 11 1.2.1. Sản xuất vắc xin sởi 11 1.2.2. Liều dùng, đường dùng, lịch tiêm, chống chỉ định với vắc xin sởi 16 1.2.3. Đáp ứng miễn dịch và phản ứng phụ sau tiêm chủng vắc xin sởi. .17 1.2.4. Thành phần vắc xin sởi chủng AIK-C của Viện Kitasato (Nhật Bản) và của Việt Nam 20 1.3. Kiểm định vắc xin, tính ổn định chất lượng của các loạt vắc xin. .21 1.3.1. Kiểm định vắc xin 21 1.3.2. Tính ổn định chất lượng của các loạt vắc xin 25 1.3.3. Tình hình nghiên cứu tính ổn định chất lượng vắc xin, tính ổn định chất lượng MVVAC 27 1.4. Tính ổn định nhiệt của vắc xin 28 1.4.1. Mục đích của nghiên cứu tính ổn định nhiệt 29 1.4.2. Phân loại nghiên cứu về tính ổn định nhiệt 30 1.4.3. Các chỉ số đánh giá tính ổn định nhiệt và hạn sử dụng của vắc xin31 1.4.4. Công cụ giám sát sự phơi nhiễm của vắc xin với nhiệt độ 31 1.4.5. Phân loại và cách xác định chỉ thị nhiệt lọ vắc xin 33 1.4.6. Tính ổn định nhiệt của vắc xin nói chung 34 v 1.4.7. Tính ổn định nhiệt của các vắc xin sởi/chứa sởi trên thế giới 38 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 41 2.1. Đối tượng nghiên cứu 41 2.2. Địa điểm và thời gian nghiên cứu 42 2.3. Vật liệu nghiên cứu 42 2.3.1. Trang thiết bị, dụng cụ 42 2.3.2. Mẫu chuẩn, tế bào, hoá chất, môi trường 43 2.4. Phương pháp nghiên cứu 45 2.4.1. Đánh giá tính ổn định về chất lượng của các loạt MVVAC sản xuất từ năm 2009 đến năm 2013 46 2.4.2. Đánh giá tính ổn định của MVVAC ở các điều kiện, nhiệt độ bảo quản khác nhau 48 2.4.2.1. Đánh giá tính ổn định của MVVAC ở nhiệt độ 2-80C 48 2.4.2.2. Đánh giá tính ổn định của MVVAC ở nhiệt độ 250C 49 2.4.2.3. Đánh giá tính ổn định của MVVAC ở nhiệt độ 370C 49 2.4.2.4. Đánh giá tính ổn định của MVVAC sau hồi chỉnh 50 2.5. Thực hiện các thử nghiệm để thu thập số liệu 51 2.5.1. Nhận dạng vi rút sởi bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang, ,,, 51 2.5.2. Xác định công hiệu của vắc xin bằng phương pháp tạo đám huỷ hoại tế bào ,,, 52 2.5.3. Xác định độ ổn định nhiệt của vắc xin , 53 2.5.4. Kiểm tra vô trùng bằng phương pháp màng lọc ,,, 54 2.5.4.1. Kiểm tra vi khuẩn và nấm 54 2.5.4.2. Phát hiện Mycoplasma , 57 2.5.5. Xác định tính an toàn 58 2.5.5.1. Xác định tính an toàn trên chuột lang 58 vi 2.5.5.2. Xác định tính an toàn trên chuột nhắt trắng 59 2.5.6. Xác định độ ẩm tồn dư , 60 2.5.7. Quan sát trạng thái 61 2.5.8. Xác định độ lệch trọng lượng 62 2.5.9. Đếm hạt trong vắc xin 63 2.5.10. Xác định pH 63 2.6. Xử lý số liệu 63 2.7. Đạo đức trong nghiên cứu 63 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 64 3.1. Kết quả đánh giá tính ổn định về chất lượng của các loạt MVVAC sản xuất từ năm 2009 đến năm 2013 64 3.1.1. Kết quả nhận dạng 64 3.1.2. Kết quả kiểm tra công hiệu 65 3.1.3. Kết quả kiểm tra độ ổn định nhiệt 69 3.1.4. Kết quả kiểm tra vô trùng 71 3.1.5. Kết quả kiểm tra tính an toàn trên động vật thực nghiệm 76 3.1.6. Kết quả kiểm tra độ ẩm tồn dư 80 3.1.7. Kết quả quan sát trạng thái 81 3.1.8. Kết quả kiểm tra độ lệch trọng lượng giữa các lọ vắc xin 82 3.1.9. Kết quả kiểm tra hạt không tan 83 3.1.10. Phân tích tính ổn định pH các loạt MVVAC 89 3.2. Kết quả đánh giá tính ổn định của MVVAC ở các điều kiện, nhiệt độ bảo quản khác nhau 90 3.2.1. Kết quả đánh giá tính ổn định của MVVAC ở nhiệt độ 2-80C 90 3.2.2. Kết quả đánh giá tính ổn định của MVVAC ở nhiệt độ 20-250C. .93 vii 3 loạt chọn ngẫu nhiên M-0211, M-0311, M-0411 sản xuất tháng 3 năm 2011 đã được sử dụng để đánh giá tính ổn định ở 20-250C, 370C và sau hồi chỉnh ở 2-80C 93 3.2.3. Kết quả đánh giá tính ổn định của MVVAC ở nhiệt độ 370C 94 3.2.4. Kết quả đánh giá tính ổn định của MVVAC sau hồi chỉnh 95 3.2.5. Kết quả xác định VVM của MVVAC 96 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 97 4.1. Bàn luận về kết quả xác định tính ổn định chất lượng của các loạt vắc xin sởi sản xuất tại Việt Nam từ năm 2009 đến năm 2013 97 4.1.1. Tác dụng của việc nghiên cứu tính ổn định chất lượng vắc xin, phương pháp sử dụng để nghiên cứu tính ổn định chất lượng vắc xin 97 4.1.2. Cỡ mẫu sử dụng trong nghiên cứu 99 4.1.3. Các chỉ số đánh giá, các mốc đánh giá tính ổn định 100 4.1.4. Sự tin cậy của các phương pháp xác định các chỉ số, kết quả phân tích các chỉ số 103 4.1.5. Các yếu tố góp phần duy trì tính ổn định chất lượng MVVAC 113 4.2. Bàn luận về tính ổn định của vắc xin sởi sản xuất tại Việt Nam ở các điều kiện nhiệt độ bảo quản khác nhau 117 4.2.1. Bàn luận về kết quả xác định tính ổn định của MVVAC ở các nhiệt độ khác nhau 117 4.2.2. Các chỉ số xác định tính ổn định nhiệt và hạn sử dụng của vắc xin 121 4.2.3. Các yếu tố tạo nên tính ổn định nhiệt của MVVAC 122 4.2.4. Ý nghĩa của việc nghiên cứu tính ổn định và xác định loại chỉ thị nhiệt lọ vắc xin của MVVAC 127 4.3. Hạn chế của đề tài 129 KẾT LUẬN 131 KIẾN NGHỊ 132 viii DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH KHOA HỌC CÔNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ix DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang x [...]... tính ổn định của MVVAC do POLYVAC sản xuất từ công đoạn đầu tiên Với mong muốn đánh giá được tính ổn định của vắc xin sởi MVVAC trong suốt quá trình từ ngay sau khi sản xuất, trong thời gian bảo quản đến khi sử dụng chúng tôi tiến hành đề tài Đánh giá tính ổn định của vắc xin sởi sản xuất tại Việt Nam từ năm 2009 đến năm 2013 với hai mục tiêu: 1 Đánh giá tính ổn định về chất lượng của các loạt vắc xin. .. cho từng vắc xin do họ sản xuất 2 Cùng một loại vắc xin nhưng mức độ ổn định của vắc xin của mỗi nhà sản xuất có thể khác nhau do khác biệt về chủng sản xuất, môi trường nuôi cấy, qui trình sản xuất, chất ổn định, Khi nhà sản xuất vắc xin muốn thay đổi một công đoạn của qui trình sản xuất hoặc thay đổi một yếu tố quan trọng nào đó trong quy trình sản xuất đều phải thực hiện các nghiên cứu tính ổn định. .. phần vắc xin sởi chủng AIK-C của Viện Kitasato (Nhật Bản) và của Việt Nam Bảng 1.2: Thành phần vắc xin sởi chủng AIK-C của POLYVAC và Viện Kitasato Loại vắc xin Thành phần Vi rút sởi sống, giảm độc lực chủng AIK-C Lactose Vắc xin sởi Việt Nam Vắc xin sởi Viện (MVVAC) Kitasato Ít nhất 5000 Ít nhất 1000 PFU/liều PFU/liều 2% D-Sorbitol Loại vắc xin Thành phần 2% 0,72% 1,8% Vắc xin sởi Việt Nam Vắc xin sởi. .. 2013 với hai mục tiêu: 1 Đánh giá tính ổn định về chất lượng của các loạt vắc xin sởi thành phẩm sản xuất tại Việt Nam từ năm 2009 đến năm 2013 2 Đánh giá tính ổn định của vắc xin sởi sản xuất tại Việt Nam ở các nhiệt độ bảo quản khác nhau 3 Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vi rút sởi 1.1.1 Đặc điểm vi rút học Vi rút sởi thuộc chi Morbilivirus, họ paramyxoviridae ,; chỉ có một typ huyết thanh, không... sởi xảy ra Như vậy, vắc xin sởi sản xuất từ chủng AIK-C thích hợp cho Việt Nam để tránh được hiện tượng nhiều trẻ em mắc sởi thậm chí tử vong do sởi ngay từ lúc chưa đến tuổi tiêm vắc xin giống như dịch sởi đã xảy ra ở Việt Nam trong năm 2014 Các nghiên cứu đặc điểm dịch tễ học bệnh sởi tại Việt Nam năm 2014 đều cho thấy tỷ lệ mắc sởi ở trẻ dưới 9 tháng khá cao: Cả nước 13,2% , Hà Nội 24,6% , Hà Nam. .. lượng) Hình 1.6: Kiểm định chất lượng và các yếu tố trong quản lý chất lượng vắc xin 1.3.2 Tính ổn định chất lượng của các loạt vắc xin Tính ổn định chất lượng của các loạt vắc xin là khái niệm nhằm đảm bảo cho sự xuất xưởng một cách liên tục các loạt vắc xin an toàn và hiệu quả Tính ổn định chất lượng của các loạt vắc xin được xác định bằng cách kiểm định chất lượng từng loạt vắc xin và tiến hành phân... thay đổi đó không ảnh hưởng đến tính ổn định của sản phẩm MVVAC được tiếp nhận chuyển giao công nghệ trực tiếp từ Viện Kitasato, Nhật Bản Do vậy, giai đoạn đầu MVVAC được sản xuất từ bán thành phẩm của Viện Kitasato Từ năm 2009, POLYVAC tự sản xuất MVVAC từ nguyên liệu đầu để tạo ra bán thành phẩm rồi vắc xin thành phẩm Tính ổn định nhiệt của MVVAC sản xuất từ bán thành phẩm của Viện Kitasato đã được... 21 Loại vắc xin Vắc xin sởi Việt Nam Vắc xin sởi Viện (MVVAC) Kitasato 0,4% 0,4% 0,36% ≤ 10 mg/liều/loại ≤ 10 mg/liều/loại kanamycin) kháng sinh kháng sinh Dạng trình bày 10 liều/lọ Liều đơn Thành phần L-Sodium glutamate Hydrolized gelatin Kháng sinh (erythromycin và Thành phần của vắc xin sởi của Viện Kitasato và của Việt Nam tương tự nhau Sự khác biệt lớn nhất nằm ở chỗ: Vắc xin sởi của Việt Nam có... gelatin, vắc xin sởi của Viện Kitasato không chứa gelatin 1.3 Kiểm định vắc xin, tính ổn định chất lượng của các loạt vắc xin 1.3.1 Kiểm định vắc xin Kiểm định vắc xin là một phần của GMP liên quan đến việc lấy mẫu, thực hiện thử nghiệm, hồ sơ hoá tài liệu kiểm định để đảm bảo: Các thử nghiệm cần thiết đã được thực hiện chính xác; các nguyên vật liệu, vắc xin chưa được phép sử dụng đến khi chất lượng của. .. sản xuất được vắc xin sởi sống giảm độc lực, dạng đông khô với tên MVVAC tại Trung tâm Nghiên cứu, Sản xuất Vắc xin và Sinh phẩm Y tế (POLYVAC) theo công nghệ và tiêu chuẩn Nhật Bản Tính ổn định của vắc xin có ảnh hưởng quan trọng đến sự thành công của chương trình tiêm chủng trên toàn cầu Tính ổn định này bao gồm hai loại: Tính ổn định về chất lượng của các loạt vắc xin (lot-to-lot consistency: Ổn định . của vắc xin sởi sản xuất tại Việt Nam từ năm 2009 đến năm 2013 với hai mục tiêu: 1. Đánh giá tính ổn định về chất lượng của các loạt vắc xin sởi thành phẩm sản xuất tại Việt Nam từ năm 2009 đến. Kết quả xác định VVM của MVVAC 96 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 97 4.1. Bàn luận về kết quả xác định tính ổn định chất lượng của các loạt vắc xin sởi sản xuất tại Việt Nam từ năm 2009 đến năm 2013 97 4.1.1 45 2.4.1. Đánh giá tính ổn định về chất lượng của các loạt MVVAC sản xuất từ năm 2009 đến năm 2013 46 2.4.2. Đánh giá tính ổn định của MVVAC ở các điều kiện, nhiệt độ bảo quản khác nhau 48 2.4.2.1. Đánh