Đang tải... (xem toàn văn)
TẠO ĐỘNG VẬT BIẾN ĐỔI GEN
T Ạ O Đ Ộ N G V Ậ T B I Ế N Đ Ổ I G E N Nhóm 6 [...]... nhiễm với vector mang gen muc tiêu - Chọn lọc tế bào mang gen mục tiêu - Tiêm tế bào mang gen chuyển vào túi phôi nhận Biến đổi tế bào gốc phôi (ES) Quá trình tạo động vật biến đổi gen Thiết kế gen chuyển Chuyển gen vào tế bào (động vật) Biểu hiện gen chuyển và bất hoạt gen trong cơ thể Biểu hiện gen chuyển và bất hoạt gen • Tái tổ hợp tương đồng Biểu hiện gen chuyển và bất hoạt gen • • • Hệ thống Cre-loxP... qua sự tái tổ hợp tương đồng • Thường được ứng dụng tạo các động vật mang bệnh Knock-down Là kĩ thuật làm giảm sự biểu hiện của gen • • Phương pháp knock down được dùng là sử dụng RNAi Dùng đểnghiên cứu về gen đã biết trình tự nhưng không biết hay chưa rõ về chức năng Các động vật biến đổi gen thành công Động vật nhận Gen và chức năng của chúng Gen sinh trưởng và yếu tố sinh trưởng (fGH, hGH, bGH)... • • • Các bước tạo động vật chuyển gen bằng vi tiêm : Thực hiện kĩ thuật thụ tinh ống nghiệm tạo hợp tử Thiết kế vector mang gen cần chuyển và thực hiện vi tiêm vector mang gen đích vào nhân nguyên đực • • • Nuôi cấy in vitro cho hợp tử phát triển đến giai đoạn túi phôi Cấy chuyển túi phôi đã chuyển gen vào tử cung của động vật cái nhận phôi Căn cứ vào gen chỉ thị và hoạt động của các gen tái tổ hợp,... có thể tóm tắt như sau: - Tạo vector tái tổ hợp bằng cách thay thế các gen mã hóa protein vỏ bằng đoạn gen cần chuyển - Tạo đoạn gen mã hóa protein vỏ - Chuyển các đoạn vừa tạo vào tế bào động vật mà sau này muốn chuyển gen - Đoạn vector tái tổ hợp do có trình tự ψ (psi) nhận diện đóng gói sẽ được đóng gói với các protein vỏ và tạo thành một vector virus hoàn chỉnh Biến đổi tế bào gốc phôi (ES) -Nuôi... “knock-down” sự biểu hiện của gen và chức năng của nó Chiến lược định hướng gen • • • Knock out Knock in Knock down Knock-out • Là kĩ thuật bất hoạt gen với cấu trúc DNA thích hợp thông qua sự tái tổ hợp tương đồng • • Thường dùng để nghiên cứu chức năng của gen Phương pháp knock out phổ biến là dùng vector thay thế Knock-in • Là kĩ thuật thay thế một gen, bằng phiên bản đột biến của cùng gen đó thông qua sự... con được chuyển gen Vi tiêm (microinjection) Chuyển gen nhờ virus (virus mediated) Chuyển gen nhờ virus LTR Sơ đồ genome của retrovirus gag mã hóa protein lõi, capsid và nucleprotein pol mã hóa enzyme phiên mã ngược và enzyme hợp nhất env mã hóa protein cấu trúc vỏ virus Trình tự ψ (psi) nhận diện đóng gói LTR vùng lặp lại nối dài LTR Chuyển gen nhờ virus Chuyển gen nhờ virus Quá trình tạo một vector... Cell-type-specific gene knockouts using the loxP-Cre recombination system Biểu hiện gen chuyển và bất hoạt gen • • RNA interference Sự can thiệp của RNA (RNAi) là hiện tượng RNA tác động như là cơ chế có thể làm “im lặng” gen sau phiên mã, đáp ứng lại khi có các RNA mạch đôi trong tế bào Biểu hiện gen chuyển và bất hoạt gen • • Cơ chế hoạt động của RNAi gồm các bước sau: Các dsRNA (double strand RNA) dài được... chứa loxP lai với một con chuột biến đổi gen mang một loại tế bào cụ thể promoter kiểm soát biểu hiện của Cre recombinase, gây ra sự tái tổ hợp giữa các vị trí loxP Sự tái tổ hợp Cre-loxP là kéo lại gần nhau hai vùng loxP ở xa nhau, cắt bằng Cre ricombinaza vùng đệm giữa các trình tự lặp, trao đổi và kết nối các sợi DNA để tạo phân tử DNA tái tổ hợp Cell-type-specific gene knockouts using the loxP-Cre... a-globin, neomicine, phosphats-transferase, liciferase Các loại gen hóc môn sinh trưởng và yếu tố sinh trưởng Lợn (mMT, hGH, mMT-bGH, PRL-bGH, mMT-hGRF, alb-hGRF, mMT-hGF và mMT-bGH hGH, rGH, hGRF, gen mã hoá luciferase Chuột (mMT, hGH, mMT-bGH, PRL-bGH, mMT-hGRF, alb-hGRF, mMT-hGF ), smt-sGH5, sMT-sGH9 Cừu a1-antitripsin (trong điều trị viêm phổi), tạo albumin, yếu tố trong quá trình đông máu b-GH Bò . sữa…) Quá trình tạo động vật biến đổi gen Thiết kế gen chuyển Thiết kế gen chuyển Chuyển gen vào tế bào (động vật) Chuyển gen vào tế bào (động vật) Biểu hiện gen chuyển và bất hoạt gen trong cơ. mã. Quá trình tạo động vật biến đổi gen Thiết kế gen chuyển Thiết kế gen chuyển Chuyển gen vào tế bào (động vật) Chuyển gen vào tế bào (động vật) Biểu hiện gen chuyển và bất hoạt gen trong cơ. Động vật biến đổi gen • Động vật biến đổi gen có thể được định nghĩa là những cá thể chứa các bản sao của một trình tự gen được thêm vào một cách nhân tạo, theo chủ ý. Vì sao phải tạo động vật