   SÀNG LC CÁC CÂY THUC VIT NAM CÓ TÁC DNG C CH XANTHIN OXIDASE IN VITRO KHÓA LUN TT NGHI - 2014    SÀNG LC CÁC CÂY THUC VIT NAM CÓ TÁC DNG C CH XANTHIN OXIDASE IN VITRO   2014 ng dn 1. TS. Nguy 2. TS. Nguyn Qunh Chi c hin B môn c lc B môn Dc liu LI C  hoàn thành khoá luc s  vô cùng quý báu ca các thy cô giáo, bi thân. c tiên tôi xin bày t li clòng bic ti TS. Nguyn Thu , TS. Nguyn Qunh Chi, TS. Nguyn Hoàng Anh, DS. Phc Vnh - nhng i th, tng dng viên tôi trong sut quá trình  tài này. Tôi xin chân thành cng y, Ban giám hiu cùng toàn th các thy cô ào to, các b môn, phòng ban khác ca Ti hc Hà Nu kin cho tôi hc tng kin thc b ích trong suc va qua. Tip theo tôi xin chân thành cy, cô và các anh ch t viên B môn c lc nhit tình ng viên và tu kin cho tôi trong sut quá trình nghiên cu và thc hi tài. Tôi xin gi li cn TS. Phùng Thi Vin Dc liu; TS. Trn Th Bách, Vin Sinh thái và Tài nguyên sinh vt Vit Nam; PGS.TS. Nguyn Th Hoài, khoa Dc, Tng i hc Hu p mu nghiên c tôi thc hi tài. Trong quá trình tìm kim tài liu và tra cu thông tin, tôi còn nhc s  rt nhit tình ca các anh ch c tp ti  và Group Tôi xin chân thành c  ht s Li cui cùng, tôi xin gi li cn nh  n bè, nhbên cnh và ng h ht lòng, tu kin tt nhng viên và  tôi hoàn thành khoá lun này. Hà Ni, tháng 5  Sinh viên Nguyn Th Thu Hoài MC LC LI C MC LC DANH MC CÁC CH VIT TT VÀ KÍ HIU DANH MC CÁC BNG DANH MC CÁC HÌNH T V 1  3 NG CA THUC 3 1.1.1. Sinh tng hp và chuyn hóa acid uric 3  4 ng ca các thuc h acid uric máu 6 1.2. ENZYM XANTHIN OXIDASE 8 1.2.1. Vai trò ca xanthin oxidase trong tng hp acid uric 8 1.2.2. V m cu trúc 8 1.2.3. Các yu t n hong ca enzym xanthin oxidase . 9 1.2.4. Mt s  nh ho ca enzym xanthin oxidase 10 1.3. CÁC NGHIÊN CU SÀNG LC LIU CÓ TÁC DNG H ACID URIC THÔNG QUA C CH XANTHIN OXIDASE IN VITRO 11 ng nghiên cu trên th gii 11 1.3.2. Các nghiên cu  Vit Nam 14          PHÁP NGHIÊN CU 17 2.1. NGUYÊN VT LIU 17 2.1.1. M 17 2.1.2. Chun b mu nghiên cu 18  19  19 2.2. NI DUNG NGHIÊN CU 19 U 20  20  20 2.3.3. Tin hành 21  23 T QU VÀ BÀN LUN 24 3.1. KT QU 24 3.1.1. Kt qu sàng lc tác dng c ch xanthin oxidase in vitro ca các mc liu, thc vt 24 nh IC 50 ca các mu c liu, thc vt ti 39 3.2. BÀN LUN 41 3.2.1. V kt qu sàng lc 41 3.2.2. V kt qu c ch xanthin oxidase ca các cây thuc ti . 46 KT LUN 50  XUT 51 TÀI LIU THAM KHO PH LC DANH MC CÁC CH VIT TT VÀ KÍ HIU BP dùng : B phn dùng CCTT :  Chng NK : Chng nhim khun  : ng HA : Huyt áp HGPRT : Hypoxanthine-guanin phosphoribosyltransferase DMSO : Dimethyl sulfoxid Oxh : Oxy hóa PRPP : Phosphoribosyl pyrophosphatase TDKMM : Tác dng không mong mun VQG : n quc gia XO : Xanthin oxidase DANH MC CÁC BNG Bng 2.1. B trí hn hp phn ng trong tng ging 21 Bng 3.1. ng ca các mc liu lên ho XO in vitro ti các n 100 µg/ml, 50 µg/ml, 10 µg/ml 25 Bng 3.2. ng ca các mu thc vt lên ho XO in vitro ti các n 100µg/ml, 50µg/ml, 10 µg/ml 34 Bng 3.3. N c ch 50% hot tính enzym xanthin oxidase (IC 50 ) ca các mu c liu, thc vt ti 39 DANH MC CÁC HÌNH   3 Hình 1.2. Cu trúc không gian ca xanthin oxidase 9 Hình 2.1. Quy trình thí nghing c ch xanthin oxidase ca các mu th 22 1 T V c bit n tính là nguyên nhân và là yu t  dn các bt áp, bnh tim mch, bnh thn, bng typ II [51], [82], [100]. t là bnh lý ri lon chuyn hóa, viêm khp mn tính ph bin nhng ngày càng  Các thuu tr  theo y hc hi rõ ràng, tác dng nhanh và hiu qu u tr i tt. Mt trong nh dc lý quan trng ca các thuc h acid uric máu là xanthin oxidase, enzym then chng sinh tng hp acid uric. Tuy nhiên, t bnh lý ri lon chuyn hóa nên bng phi dùng thuc lâu dài. Trong ng có giá th li cho bnh nhân nhiu tác dng không mong mun. Vì vy, vic tìm kim ngun thuc thay th vi hiu qu u tr  hot trng thc ng nghiên cc quan tâm phát trin. Vic tìm kim các hp cht làm thuc t ngun nguyên liu thiên nhiên luôn c phát tric  nhic. Khai thác ngun tài nguyên sinh hc t nguc lic s dng theo kinh nghim trong nhân dân và sàng lc tác dc lý ca dch chit t c liu này là ng tip cn phát hin và phát trin các thuc mi phc v u tr [83]. Vn là mm trong vùng nhii gió mùa, Vit Nam có thm thc vng và phong phú vi nhi c nghiên cu v tác dng sinh hc, nn y hc c truyn phát trin t ri. Dân gian s dng rt nhiu các bài thuc, v thu u tr các bnh v  khng phong (bnh gút theo y hc c truyn), phong thp n nay c ta có 3948 loài cây thuc, thuc 307 h ca 9 ngành thc vt bc thp (k c Nm) [15]. n tác dng c ch xanthin oxidase in vitro, trên th gi nhiu nghiên cu sàng lc t nguc liu và các cht/nhóm cht phân lp t c lic thc hin bi các nhóm nghiên cu khác nhau [21], [46], [56], 2 [71], [76], [91], [110], [116]. Tuy nhiên, ti Vit Nam, nghiên cng này còn hn ch. Nguyn Th Thanh Mai và cng s sàng lc c tác dng c ch xanthin oxidase in vitro ca c liu thu hái t 4 tnh min Trung b và min Nam ng và An Giang) [85]. Nhóm nghiên cu ti b môn c lc, Ti hc Hà Ni tri giá tác dng c ch xanthin oxidase in vitro ng Costar 3635 và áp dng c c tác dng c ch xanthin oxidase in vitro ca 91 mu thc vt, c liu thu hái  các tnh min Bc và min Trung Vit Nam [11].  c trin khai vi nhim ni bt tu kin thun li cho các nghiên cu sàng lc tip theo. m rc liu, thc vt  vào sàng l  .                 xanthin oxidase in vitro 1. in vitro  2. nh IC 50 các   [...]... 2-amino-4-hydroxypteridin (AHP) thành isox nthopterin (IXP ƣới sự xú t ủ x nthin oxi se Lƣợng IXP tạo r tỷ lệ với hoạt độ x nthin oxi se đƣợ phân t h qu ột sắ ký và đƣợ ph t hiện, định lƣợng ằng ete tor huỳnh qu ng với ƣớ sóng kí h thí h và ƣớ sóng ph t hiện tƣơng ứng là 343nm và 410nm [103] 1.3 CÁC NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC DƢỢC LIỆU CÓ TÁC DỤNG HẠ ACID URIC THÔNG QUA ỨC CHẾ XANTHIN OXIDASE IN VITRO Xanthin oxidase là... liệu (13,04%) có tác dụng ức chế trên 50% ở nồng độ 200 µg/ml [59]  Tiếp cận sàng lọc theo họ hoặc chi thực vật Một số tác giả lựa chọn hƣớng tiếp cận sàng lọc theo họ hoặc chi thực vật để đ nh gi tác dụng ức chế XO Hƣớng nghiên cứu này tập trung nghiên cứu sâu theo một họ, một số họ hoặc chi nhất định để tìm kiếm và phát hiện các cây thuốc có tiềm n ng nhất C ƣợc liệu thuộc các họ đƣợc các nhà nghiên... uricase [49] 1.2 ENZYM XANTHIN OXIDASE 1.2.1 V i trò ủ x thi oxi se tro g tổ g hợp i uri Xanthin oxidase là một enzym có vai trò then chốt trong on đƣờng tạo ra i uri C protein nhân purin đƣợc chuyển hóa thành hypoxanthin và xanthin, ƣới tác dụng xúc tác của enzym XO chúng đƣợc oxy hóa thành acid uric Enzym XO có vai trò quan trọng trong qu tr nh điều hòa nồng độ acid uric máu, bất kì tác động nào ảnh hƣởng... adenin và guanin bị thủy phân giải phóng nhóm amin tạo thành hypoxanthin và x nthin, ƣới tác dụng của enzym xanthin oxidase hypoxanthin bị oxy hóa thành xanthin rồi thành acid uric [3] nh Qu tr nh h nh thành i uri trong ơ thể [41] 4 Ở h u hết loài động vật ó vú (trừ loài ngƣời và loài linh trƣởng , uối on đƣờng huyển hó purin ó th m uri se, một loại enzym ở g n ó v i trò huyển hó i uri thành ll ntoin,... µg/ml [110] N m 2007, nghiên cứu sàng lọc tác dụng ức chế XO đƣợc tiến hành với 18 dịch chiết nƣớc, methanol và hỗn hợp nƣớc - methanol từ 6 ƣợc liệu đƣợc ngƣời dân bản địa Ấn Độ s dụng theo kinh nghiệm để điều trị bệnh gút và các triệu chứng liên quan Kết quả cho thấy 14 dịch chiết thể hiện tác dụng ức chế XO ở nồng độ 100 µg/ml, trong đó 10 ịch chiết có tác dụng ức chế lớn hơn 50% hoạt tính XO và... methanol thể hiện tác dụng ức chế XO in vitro mạnh nhất: Coccinia grandis (IC50 = 29,79 µg/ml), Datura metel (IC50 = 76,75 µg/ml), Strychnos nux-vomica (IC50 = 6,8 µg/ml) và Vitex negundo (IC50 = 78,75 g/ml đƣợ đƣ vào đ nh gi tác dụng hạ acid uric in vivo trên mô hình gây t ng i uri m u ấp bằng kali oxonat [116] N m 2010, H vlik và ộng sự đã tiến hành nghiên cứu sàng lọc tác dụng ức chế XO in vitro của 84... hế của các thuốc điều trị t ng u i uri m u hiện nay là ức chế xanthin oxidase hoặc gây thải trừ acid uric qu nƣớc tiểu Ngoài ra, nhóm thuốc tiêu i uri ũng đ ng trong gi i đoạn th nghiệm lâm sàng, tuy nhiên nhóm thuốc này gặp phải những hạn chế nhất định n n hƣ đƣợc ứng dụng trong điều trị t ng i uric máu mạn tính 1.1.3.1 Giảm tổng hợp acid uric thông qua ức chế enzym xanthin oxidase Allopurinol và... k khi p < 0,05 Tính IC50 và khoảng tin ậy 95% ủ IC50 ằng phƣơng ph p phân tí h hồi quy pro it tr n ph n mềm SPSS 18.0 24 Chƣơ g 3 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 KẾT QUẢ 3.1.1 K t quả s g ọ t ụ gứ h x thi oxi se in vitro ủ ẫu ƣợ iệu, thự vật Áp dụng phƣơng ph p đ nh gi t ụng ức chế xanthin oxidase in vitro trên đĩ UV 96 giếng Costar 3635 để đ nh gi tác dụng ức chế XO in vitro tại 3 nồng độ 100 µg/ml – 50 µg/ml... Hypericum perforatum với IC50 < 50 µg/ml [56] N m 2011, các tác giả Phillipines đã đ nh gi khả n ng ức chế XO của dịch chiết từ 15 ƣợc liệu s dụng với tác dụng chống viêm trong y học cổ truyền, kết quả cho thấy 5 ƣợc liệu (33,33%) có tác dụng ức chế trên 50% hoạt tính XO ở nồng độ 100 g/ml nhƣng t ụng yếu hơn rất nhiều so với thuố đối chứng allopurinol [21] Cùng n m đó, Hudaib và cộng sự đã tiến hành... VÀ ĐÍCH TÁC DỤNG CỦA THUỐC 1.1.1 Si h tổ g hợp v hu ể h i uri Acid uric là sản phẩm chuyển hóa cuối cùng của nu leo-protein ó hứ nhân purin (adenin, guanin) trong ơ thể ngƣời với sự th m gi ủ enzym: phosphoribosyl pyrophosphatase (PRPP), nucleoside phosphorylase, xanthin oxidase (XO) [36], [41] (H nh1.1 Trong đó, ác base purin (adenin và guanin) là sản phẩm trung gian của quá trình thoái hóa các acid .   SÀNG LC CÁC CÂY THUC VIT NAM CÓ TÁC DNG C CH XANTHIN OXIDASE IN VITRO KHÓA LUN TT NGHI - 2014.   SÀNG LC CÁC CÂY THUC VIT NAM CÓ TÁC DNG C CH XANTHIN OXIDASE IN VITRO  . 1.2.3. Các yu t n hong ca enzym xanthin oxidase . 9 1.2.4. Mt s  nh ho ca enzym xanthin oxidase 10 1.3. CÁC NGHIÊN CU SÀNG LC LIU CÓ TÁC DNG