BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THÚY NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ NHŨ TƯƠNG NANO NHỎ MẮT CHỨA DICLOFENAC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THÚY NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ NHŨ TƯƠNG NANO NHỎ MẮT CHỨA DICLOFENAC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. TS. Nguyễn Trần Linh 2. DS. Đặng Thị Hiền Nơi thực hiện Bộ môn Bào chế HÀ NỘI – 2013 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới: PGS. TS. Nguyễn Văn Long TS. Nguyễn Trần Linh ThS. Nguyễn Văn Lâm DS. Đặng Thị Hiền là những người thầy đã dìu dắt tôi từ những ngày đầu làm nghiên cứu khoa học và cũng là những người trực tiếp hướng dẫn, tận tình chỉ bảo, giúp đỡ tôi hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Bào chế và bộ môn Công nghiệp Dược đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện khóa luận này. Tôi cũng xin cảm ơn Ban giám hiệu, các phòng ban, các thầy cô giáo và cán bộ nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội – những người đã dạy bảo và giúp đỡ tôi trong suốt 5 năm học tập tại trường. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, anh chị em đã dành cho tôi sự giúp đỡ và động viên quý báu trong suốt thời gian qua. Hà Nội, ngày 21 tháng 5 năm 2013 Sinh viên Nguyễn Thị Thúy MỤC LỤC Danh mục các kí hiệu, các chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình vẽ, đồ thị ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN 2 1.1. Thông tin về dược chất acid diclofenac 2 1.1.1. Công thức hóa học 2 1.1.2. Điều chế 2 1.1.3. Đặc tính lý hóa 2 1.2. Thuốc nhỏ mắt 3 1.2.1. Định nghĩa 3 1.2.2. Sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt 3 1.2.3. Thuốc nhỏ mắt chứa diclofenac 4 1.3. Nhũ tương nano (Nano-emulsion) 4 1.3.1. Định nghĩa 4 1.3.2. Thành phần 4 1.3.3. Phương pháp bào chế 5 1.3.4. Độ ổn định 7 1.3.5. Một số phương pháp đánh giá hệ nhũ tương nano 7 1.3.6. Ưu điểm chung của nhũ tương nano 10 1.3.7. Ứng dụng 11 1.4. Ưu điểm của nhũ tương nano nhỏ mắt 11 1.5. Một số nghiên cứu về nhũ tương nano dành cho nhãn khoa 12 1.6. Một số chế phẩm nhũ tương nano trên thị trường 14 1.7. Nghiên cứu về nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac 15 CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1. Nguyên liệu, thiết bị 18 2.1.1. Nguyên liệu 18 2.1.2. Thiết bị 18 2.2. Nội dung nghiên cứu 19 2.3. Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1. Phương pháp bào chế nhũ tương nano 19 2.3.2. Phương pháp đánh giá một số đặc tính của hệ 20 2.3.3. Phương pháp định lượng 21 2.3.4. Phương pháp xác định tỷ lệ dược chất được nhũ tương hóa 22 2.3.5. Phương pháp đánh giá giải phóng dược chất in vitro 23 2.4. Phương pháp xử lý số liệu 24 CHƯƠNG 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25 3.1. Thẩm định phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao để định lượng dược chất diclofenac 25 3.1.1. Tính đặc hiệu của phương pháp 25 3.1.2. Xác định tính tuyến tính 25 3.1.3. Xác định độ đúng 26 3.1.4. Xác định độ chụm 28 3.1.5. Kết luận 28 3.2. Bào chế nhũ tương nano và xác định thời gian đồng nhất hóa thích hợp 29 3.2.1. Bào chế nhũ tương nano bằng phương pháp siêu âm kết hợp đồng nhất hóa ở áp suất cao 29 3.2.2. Bào chế nhũ tương nano bằng phương pháp siêu âm kết hợp đồng nhất hóa phân cắt tốc độ cao 30 3.2.3. Bào chế nhũ tương nano bằng phương pháp siêu âm 32 3.3. Xác định tỷ lệ dược chất được nhũ tương hóa 33 3.4. Đánh giá khả năng giải phóng dược chất in vitro 33 3.5. Bào chế nhũ tương nano ở quy mô 1 lít bằng phương pháp siêu âm 35 3.5.1. Khảo sát sự thay đổi kích thước tiểu phân của nhũ tương nano theo thời gian siêu âm 36 3.5.2. Khảo sát sự thay đổi tỷ lệ dược chất được nhũ tương hóa theo thời gian siêu âm 38 3.5.3. Khảo sát sự thay đổi mức độ giải phóng dược chất in vitro theo thời gian siêu âm 39 3.6. Đánh giá sự thay đổi một số thông số của nhũ tương nano trong điều kiện lão hóa cấp tốc 1 tháng 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 Tài liệu tham khảo Phụ lục DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT AUC Area under curve (Diện tích dưới đường cong) CDH Chất diện hoạt CT Công thức ĐNH Đồng nhất hóa DC Dược chất D/N Dầu/nước GTTB Giá trị trung bình HPLC High performace liquid chromatography (Sắc kí lỏng hiệu năng cao) KLPT Khối lượng phân tử KTTP Kích thước tiểu phân N/D Nước/dầu NTN Nhũ tương nano PdI Polydispersity index (Chỉ số đa phân tán) PL Phụ lục PP BC Phương pháp bào chế SA Siêu âm SD Standard deviation Độ lệch chuẩn DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Một số nghiên cứu về nhũ tương nano dành cho nhãn khoa 12 Bảng 1.2: Một số chế phẩm nhũ tương nano trên thị trường 15 Bảng 1.3: Các nghiên cứu về nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac 15 Bảng 1.4: Công thức NTN được lựa chọn để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo 17 Bảng 2.1: Nguyên liệu sử dụng trong quá trình thực nghiệm 18 Bảng 3.1: Sự phụ thuộc giữa diện tích pic và nồng độ acid diclofenac 26 Bảng 3.2: Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp HPLC 27 Bảng 3.3: Kết quả khảo sát độ chụm của phương pháp HPLC 28 Bảng 3.4: Kết quả sự thay đổi KTTP theo thời gian ĐNH của các NTN bào chế bằng phương pháp siêu âm kết hợp ĐNH ở áp suất cao 29 Bảng 3.5: Kết quả khảo sát thời gian ĐNH thích hợp và KTTP của các NTN bào chế bằng phương pháp siêu âm, siêu ấm kết hợp ĐNH ở áp suất cao 30 Bảng 3.6: Kết quả khảo sát sự thay đổi KTTP theo thời gian ĐNH của NTN CT 4 bào chế bằng phương pháp ĐNH phân cắt tốc độ cao 31 Bảng 3.7: Kết quả hàm lượng DC trong mẫu NTN bào chế bằng phương pháp siêu âm. 32 Bảng 3.8: Kết quả tỷ lệ DC được nhũ tương hóa của các mẫu NTN 33 Bảng 3.9: Kết quả tỷ lệ DC giải phóng từ NTN trong 4 giờ sử dụng màng thẩm tích 12000 Dalton 34 Bảng 3.10: Kết quả sự thay đổi KTTP theo thời gian siêu âm của các mẫu NTN bào chế ở quy mô 1 lít 36 Bảng 3.11: So sánh KTTP của các NTN bào chế bằng phương pháp siêu âm ở quy mô 100 mL và 1 L 38 Bảng 3.12: Kết quả tỷ lệ DC được nhũ tương hóa của các mẫu NTN có thời gian siêu âm khác nhau, bào chế ở quy mô 1 lít 39 Bảng 3.13: Kết quả tỷ lệ DC giải phóng trong 4 giờ qua màng thẩm tích 12000 Dalton của các mẫu NTN bào chế ở quy mô 1 lít có thời gian siêu âm khác nhau 39 Bảng 3.14: Kết quả xác định một số thông số của các NTN sau thời gian bảo quản 1 tháng ở 40±2ºC, độ ẩm 75±5% và so sánh với NTN mới bào chế 41 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1: Công thức cấu tạo acid diclofenac 2 Hình 1.2: Phương pháp ĐNH ở áp suất cao 6 Hình 1.3: Sơ đồ bình Franz 9 Hình 1.4: Mô hình thử nghiệm kĩ thuật thẩm tách micro 10 Hình 3.1: Đồ thị biểu diễn sự phự thuộc tuyến tính giữa nồng độ acid diclofenac và diện tích pic 26 Hình 3.2: Đồ thị biểu diễn sự thay đổi KTTP theo thời gian ĐNH của các NTN bào chế bằng phương pháp siêu âm kết hợp ĐNH ở áp suất cao 30 Hình 3.3: Đồ thị biểu diễn sự thay đổi KTTP theo thời gian ĐNH sử dụng máy phân cắt tốc độ cao với tốc độ 6000 vòng/phút 31 Hình 3.4: Đồ thị biểu diễn sự thay đổi KTTP theo thời gian ĐNH sử dụng máy phân cắt tốc độ cao với tốc độ 9000 vòng/phút 32 Hình 3.5: Đồ thị so sánh tỷ lệ DC giải phóng từ NTN sử dụng màng thẩm tích 12000 Dalton 35 Hình 3.6: Đồ thị biểu diễn sự thay đổi KTTP theo thời gian siêu âm của mẫu NTN bào chế ở quy mô 1 lít 37 Hình 3.7: Đồ thị thể hiện tỷ lệ DC giải phóng qua màng thẩm tích 12000 Dalton của các mẫu NTN bào chế ở quy mô 1 lít có thời gian siêu âm khác nhau 40 Hình 3.8: Đồ thị so sánh tỷ lệ DC giải phóng in vitro của NTN sau thời gian bảo quản 1 tháng ở 40±2ºC, độ ẩm 75±5% và NTN mới bào chế. 42 Hình P1: Kết quả phân bố kích thước tiểu phân mẫu NTN CT 1……………… PL1 Hình P2: Kết quả phân bố kích thước tiểu phân mẫu NTN CT 2……………… PL1 Hình P3: Kết quả phân bố kích thước tiểu phân mẫu NTN CT 3……………… PL1 Hình P4: Kết quả phân bố kích thước tiểu phân mẫu NTN CT 4……………… PL1 Hình P5: Kết quả thế zeta mẫu NTN CT 4……………………………………….PL2 Hình P6: Sắc đồ của dung dịch acid diclofenac chuẩn………………………… PL3 Hình P7: Sắc đồ mẫu NTN CT 1…………………………………………………PL3 Hình P8: Sắc đồ mẫu xác định hàm lượng DC được nhũ tương hóa CT 1………PL3 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Thuốc nhỏ mắt là dạng bào chế chiếm 90% các dạng thuốc điều trị các bệnh về mắt và được người tiêu dùng chấp nhận vì sự tiện dụng của nó [38]. Tuy nhiên, sinh khả dụng của thuốc nhỏ mắt thường rất thấp (chỉ khoảng 1% - 3%) do tác động của cơ chế bảo vệ sinh lý của hệ thống nước mắt và bản chất cấu tạo các lớp mô giác mạc [2]. Hơn nữa, sự hấp thu toàn thân của lượng thuốc thoát qua đường mũi – lệ có thể gây ra một số tác dụng không mong muốn. Diclofenac là dẫn chất của acid phenylacetic, thuộc nhóm thuốc chống viêm không steroid, có tác dụng chống viêm, hạ sốt, giảm đau mạnh. Tuy nhiên, trên thị trường diclofenac dùng cho nhãn khoa mới chỉ có dạng dung dịch nhỏ mắt 0,1%, thời gian tác dụng ngắn nên người bệnh phải dùng thuốc ít nhất 3 – 5 lần một ngày. Những nghiên cứu gần đây cho thấy thuốc nhỏ mắt nhũ tương nano khắc phục được những nhược điểm nêu trên của thuốc nhỏ mắt dạng dung dịch. Trên thị trường thế giới đã có chế phẩm Cationorm ® (Novagali Pharma, Pháp) là nhũ tương nano cation không chứa DC, chỉ định cho các trường hợp khô mắt. Thị trường Việt Nam chưa có chế phẩm thuốc nhỏ mắt nhũ tương nano nào. Vì vậy, bộ môn Bào chế đã tiến hành nghiên cứu bào chế nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac. NTN nhỏ mắt chứa diclofenac đã được nghiên cứu bào chế bằng phương pháp siêu âm [5], phương pháp siêu âm kết hợp ĐNH ở áp suất cao [6], phương pháp ĐNH phân cắt tốc độ cao [8] và đánh giá một số đặc tính của NTN [5], [6], [8]. Tiếp theo những nghiên cứu trên, chúng tôi tiến hành đề tài “Nghiên cứu bào chế nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac” với các mục tiêu sau: 1. Bào chế được nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac bằng phương pháp siêu âm, siêu âm kết hợp đồng nhất hóa ở áp suất cao hoặc phân cắt tốc độ cao. 2. Đánh giá ảnh hưởng của một số thông số kĩ thuật đến đặc tính nhũ tương nano. 3. Bào chế nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac bằng phương pháp siêu âm ở quy mô thể tích 1 L và bước đầu đánh giá độ ổn định của nhũ tương nano. [...]... 1.7 Nghiên cứu về nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac  Trên thế giới chưa có nghiên cứu nào về nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac được công bố  Ở Việt Nam, Bộ môn Bào chế - trường Đại học Dược Hà Nội đã tiến hành các đề tài nghiên cứu bào chế và đánh giá một số đặc tính của NTN nhỏ mắt chứa diclofenac Phương pháp và kết quả các nghiên cứu được thể hiện ở bảng 1.3 Bảng 1.3: Các nghiên cứu về nhũ. .. lực điều trị, giảm số lần sử dụng thuốc cho người bệnh [42], [12] 1.2.3 Thuốc nhỏ mắt chứa diclofenac Hiện nay trên thị trường, thuốc nhỏ mắt chứa diclofenac chỉ có dạng dung dịch natri diclofenac 0,1% Ví dụ: biệt dược Voltaren Ophtha (Novartis – Thụy Sĩ) [9] 1.3 Nhũ tương nano (Nano- emulsion) 1.3.1 Định nghĩa Nhũ tương nano là một hệ phân tán cơ học vi dị thể, trong suốt, trong mờ hoặc đục như sữa,... phẩm RestasisTM (Allergan, Mỹ) là nhũ tương nhỏ mắt chứa cyclosporin A 0,05%; chế phẩm Refresh Dry Eye Therapy® (Allergan, Mỹ) là nhũ tương nhỏ mắt không có DC [19] 1.2.2 Sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt 1.2.2.1 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt Sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt thường rất thấp Chỉ có khoảng 1% - 3% lượng DC có trong liều thuốc đã đưa vào mắt là thấm được qua giác mạc và phân... DC giải phóng in vitro, tỷ lệ DC được nhũ tương hóa - Bào chế NTN với DC acid diclofenac ở quy mô 1 L bằng phương pháp siêu âm - Đánh giá sự thay đổi KTTP, tỷ lệ DC được nhũ tương hóa, tỷ lệ DC giải phòng in vitro của một số mẫu NTN sau 1 tháng bảo quản ở điều kiện lão hóa cấp tốc 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp bào chế nhũ tương nano NTN được bào chế theo 3 phương pháp sau:  Phương pháp... Thuốc nhỏ mắt 1.2.1 Định nghĩa Thuốc nhỏ mắt là dung dịch nước, dung dịch dầu hoặc hỗn dịch vô khuẩn của một hay nhiều hoạt chất, dùng để nhỏ vào mắt Chế phẩm cũng có thể được bào chế dưới dạng khô (bột, bột đông khô, viên nén) vô khuẩn, được hòa tan hoặc phân tán vào một chất lỏng vô khuẩn thích hợp khi dùng [4] Thực tế thuốc nhỏ mắt cũng có dạng nhũ tương Ví dụ: chế phẩm RestasisTM (Allergan, Mỹ) là nhũ. .. nhũ hóa, các chất ổn định là cholesterol và acid phosphatidic NTN được đông khô hoặc giữ ở 4ºC Đó là một chế phẩm thuốc mắt NTN chứa flurbiprofen có thể thâm nhập vào khoang trước của mắt, độ ổn định cao và không kích ứng mắt Sinh khả dụng của dạng thuốc mắt này được tăng lên 4 lần [40] 1.4 Ưu điểm của nhũ tương nano nhỏ mắt - Sử dụng đơn giản và tiện lợi như dung dịch nhỏ mắt, tránh cảm giác cộm mắt. .. bề mặt nhỏ của cả hệ và sức căng mặt phân cách thấp của giọt D/N [52] - NTN cation có các giọt dầu tích điện dương, tương tác tĩnh điện với các mucin tích điện âm của giác mạc làm kéo dài thời gian lưu của thuốc trên giác mạc, tăng cường hấp thu DC qua giác mạc, tăng sinh khả dụng của thuốc [29] 1.5 Một số nghiên cứu về nhũ tương nano dành cho nhãn khoa Bảng 1.1: Một số nghiên cứu về nhũ tương nano dành... 1,87 mPa s; ổn tương tác tĩnh điện với các mucin tích điện âm của giác suất cao định ở mạc nên 25ºC và tăng độ 40ºC sau 6 hấp thu DC tháng; qua giác dung nạp mạc tốt với mắt thỏ EDTA 0,1%; Chitosan; PVA, PEG 1.6 Một số chế phẩm nhũ tương nano trên thị trường Các chế phẩm nhũ tương nano trên thị trường hiện nay chủ yếu là dạng thuốc tiêm Một số chế phẩm được trình bày ở bảng 1.2 Trong đó, chế phẩm Diprivan... tránh mờ mắt khi dùng dạng thuốc mỡ - So với dung dịch thuốc nhỏ mắt, NTN nhỏ mắt có thời gian tác dụng lâu hơn do DC được nhũ tương hóa trong các giọt dầu nên giải phóng thuốc từ từ [48], [32] vì vậy có thể giảm số lần sử dụng thuốc trong ngày cho bệnh nhân 12 - Do DC được hòa tan trong pha nội, hạn chế kích ứng mắt đối với DC gây kích ứng mắt khi tồn tại dưới dạng dung dịch [48] - KTTP nhỏ nên cho... trong quá trình đăng ký, Cyclokat (0,1% cyclosporin A, điều trị khô mắt nặng) đã hoàn tất thử nghiệm lâm sàng phase III, Catioprost (0,005% latanoprost, điều trị bệnh tăng nhãn áp) đã hoàn tất thử nghiệm lâm sàng pha IIb [29], [19] Thị trường Việt Nam chưa có chế phẩm thuốc nhỏ mắt nhũ tương nano nào 15 Bảng 1.2: Một số chế phẩm nhũ tương nano trên thị trường [46] Tên biệt dược Hoạt chất Đường dùng Hàm . có chế phẩm thuốc nhỏ mắt nhũ tương nano nào. Vì vậy, bộ môn Bào chế đã tiến hành nghiên cứu bào chế nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac. NTN nhỏ mắt chứa diclofenac đã được nghiên cứu bào. Tiếp theo những nghiên cứu trên, chúng tôi tiến hành đề tài Nghiên cứu bào chế nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac với các mục tiêu sau: 1. Bào chế được nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac bằng. 1.1: Một số nghiên cứu về nhũ tương nano dành cho nhãn khoa 12 Bảng 1.2: Một số chế phẩm nhũ tương nano trên thị trường 15 Bảng 1.3: Các nghiên cứu về nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac