Đang tải... (xem toàn văn)
1 Đ T VẤN ĐỀ Tiêu chu ẩn hóa và kiểm tra chặt ch ẽ nguồn nguyên liệu ban đầu là yếu tố sống còn đ ể đảm bảo hiệu lực và tác dụng của thuốc th ảo mộ c. Vì vậy công tác kiểm nghiệm dược liệu để xác định rõ nguồn g ốc, tránh nhầm lẫn, giả mạo là hết sức quan trọng. Đây cũng là một hư ớng phát triển của ngành Dư ợc và là một trong những giải pháp nh ằm hiện đ ại hóa n ền ydư ợc học cổ truyền Việt Nam. Ba kích là một cây thuốc quý có giá trị sử dụng trong và ngoài nước. Trên thế giới đã nghiên cứu v ề một số hợp chất trong rễ Ba kích có ứng dụng trong điều trị như Monotropein có tác dụng chống viêm 26, Oligosaccharid có tác dụng chống trầm cảm, chống tổn thương tế bào thần kinh do corticosteron 19, hay nhóm Anthraquinon và Polysaccharid có tác dụng trong ngăn ngừa và điều trị bệnh liên quan đến sự tiêu xương 31 . Hiện nay, chuyên luận Ba kích trong Dược điển Việt Nam IV và Dược điển Trung Quốc chưa c chỉ tiêu thành ph ần hóa học. Vì những lý do trên, đề tài “Nghiên cứu nâng cấp tiêu chuẩn vị thuốc Ba kích và khảo sát thành phần hóa học của dịch chiết ethanol a kích” được tiến hành v ới m ục tiêu: 1. Khảo sát thành phần monotropein trong dịch chiết ethanol Ba ch bằng phương pháp s c lỏng hiệu năng cao HPLC. 2. Nâng cao tiêu chuẩn h a chuyên luận Ba ch trong Dược điển Việt Nam IV.
B Y T I HC HÀ NI TRNH TH NGA NGHIÊN CU NÂNG CP TIÊU CHUN V THUC BA KÍCH VÀ KHO SÁT THÀNH PHN HÓA HC CA DCH CHIT ETHANOL BA KÍCH KHÓA LUN TT NGHI HÀ NI - 2013 B Y T I HC HÀ NI TRNH TH NGA NGHIÊN CU NÂNG CP TIÊU CHUN V THUC BA KÍCH VÀ KHO SÁT THÀNH PHN HÓA HC CA DCH CHIT ETHANOL BA KÍCH KHÓA LUN TT NGHI ng dn: TS. Trn Vit Hùng DS. Ph c hin: Viện Kiểm nghiệm thuốc TW HÀ NI 2013 LI C Tôi xin bày t lòng bic ti: TS. Trần Việt Hùng Phó ving, Vin kim nghim thu ng d và to mu kin thun li trong sut quá trình hc tp và nghiên c hoàn thành khóa lun. DS. Phạm Thái Hà Văn, TS. Bùi Hồng Cường, Các thy cô giáo và cán b k thut viên B môn c hc c truyn - i hc Hà Ni; TS. Nguyễn Quốc Huy B môn thc v i h c Hà Ni và DS. Trịnh Thị Hồng Thảo cùng các anh ch khoa V ng - Vin kim nghim thu n tình ch b và tu kin tt nht trong quá trình thc hi tài khóa lun. i li c tôi trong sut quá trình hc tp ca mình. Hà N Sinh viên Trnh Th Nga Trang Danh m 1 NG QUAN 2 1.1. Ba kích 2 1.1.1. Tên khoa hc 2 1.1.2. Mô t cây 2 1.1.3. Cây d nhm ln. 3 1.1.4. Phân b, thu hái và ch bin 3 1.1.5. Thành phn hóa hc 3 1.1.6. Tác dc lý 4 1.1.7. Công dng và liu dùng 6 1.1.8. Bài thuc có Ba kích 7 1.1.9. Mt s n bit Ba kích 8 1.2. Sc kí lng hi 11 1.2.1. Khái nim 11 1.2.2. Detector dùng trong HPLC 12 1.2.3. Các thông s a HPLC 12 1.3. Monotropein 14 16 16 2.1.1. Nguyên liu 16 2.1.2. Thit b, dng c và hóa cht 16 17 t xut 17 nh hiu sut chit 17 nh tính mt s nhóm cht hng phn ng hóa hc 18 2.2.4. Sc kí lng hi 19 2.2.5. Thnh 20 lý s liu 21 22 3.1. Kt qu thc nghim và nhn xét 22 3.1.1. Bào ch nh hiu sut 22 nh tính mt s nhóm cht hng phn ng hóa hc 23 3.1.3. Xây dng Monotropein bng HPLC 24 3.1.3.1. Quy trình chy sc kí 24 3.1.3.2. Th 25 3.2. Bàn lu 3.2.1. V ng nghiên cu 30 3.2.2. V u 31 t xut 31 HPLC 31 3.2.2.3. Khu kin sc kí 32 3.2.2.4. Th.33 34 Kt lun 34 Kin ngh 35 DANH MC CÁC KÍ HIU, CÁC CH VIT TT HPLC DAD MeOH EtOAc SKLM BK TT VKNTTW KL HA dd RSD Sc ký lng hiu (High Performance Liquid Chromatography) Detector mng diot (Diod array detector) Methanol Ethylacetat Sc kí lp mng Phn ng Ba kích n Vit Nam IV n Trung Quc Thuc th Vin kim nghim thu Khng Hàm m Dung dch lch chui (relative standard deviation) DANH MC BNG Bng Tên bng Trang Bng 1.1 10 Bng 3.1 23 Bng 3.2 24 Bng 3.3 25 Bng 3.4 27 Bng 3.5 28 Bng 3.6 29 Bng 3.7 30 DANH MC HÌNH V TH Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Cây Ba kích (Morinda officinalis How) 2 Hình 1.2 9 Hình 1.3 9 Hình 1.4 9 Hình 1.5 11 Hình 1.6 14 Hình 2.1 Máy HPLC Agilient Technologies 1200 16 Hình 2.2 22 Hình 3.1 26 Hình 3.2 28 1 T V Tiêu chun hóa và kim tra cht ch ngun nguyên liu là yu t s m bo hiu lc và tác dng ca thuc tho mc. Vì vy công tác kim nghic li nh rõ ngun gc, tránh nhm ln, gi mo là ht sc quan trng. ng phát trin c c và là mt trong nhng gii pháp nhm hii hóa nn y-c hc c truyn Vit Nam. Ba kích là mt cây thuc quý có giá tr s dc. Trên th giiên cu v mt s hp cht trong r Ba kích có ng du tr Monotropein có tác dng chng viêm [26], Oligosaccharid có tác dng chng trm cm, chng t bào thn kinh do corticosteron [19], hay nhóm Anthraquinon và Polysaccharid có tác du tr bnh liên n s ]. Hin nay, chuyên lun Ba kích trong n Vit n Trung Quc tiêu thành phn hóa hc. Vì nh tài u nâng cp tiêu chun v thuc Ba kích và kho sát thành phn hóa hc ca dch chi c tin hành vi mc tiêu: 1. trong - HPLC. 2. [...]... chất hữu cơ bằng phản ứng hóa học Mẫu nghiên cứu: bột Ba ch, cao đặc Ba kích * Định tính Iridoid Lấy 5g bột Ba kích cao cho vào bình cầu 100ml Thêm 10ml EtOH đun hồi lưu 10 phút Lọc bỏ bã Dịch lọc, thêm 1 lượng tương đương với nước Thêm 5ml dung dịch chì axetat 2% Lọc Dịch lọc acid hóa bằng H2SO4 để kết tủa PbSO4 Lọc, dịch lọc cô đặc, hòa vào ít cồn làm dung dịch thử 1 ml dung dịch thử + 1-2 giọt TT Trim... hiệu - Chuẩn bị mẫu chuẩn: Sử dụng dung dịch chuẩn của phần thử độ lặp lại - Chuẩn bị mẫu thử: Sử dụng dung dịch thử của phần thử độ lặp lại - Chuẩn bị mẫu trắng: Dung môi pha mẫu (MeOH) Chạy s c ý đồ của mẫu tr ng, mẫu chuẩn và mẫu thử theo điều kiện như trên, ghi lại diện tích pic và thời gian lưu * Kết quả: được trình bày ở hình 3.1 26 (A) (B) (C) Hình 3.1 Sắc k ý đồ của Monotropein (A): Mẫu chuẩn; ... bằng cao đặc Ba kích 2.2.4 Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HP C) a Chuẩn bị mẫu + Mẫu chuẩn: pha dung dịch Monotropein trong methanol có nồng độ khoảng 250 µg/ml + Mẫu thử : Hòa tan cao Ba kích trong MeOH Dung dịch được lọc qua màng lọc 0,45µm b Khảo sát và tìm điều kiện sắc kí * Cột sắc kí Vì mẫu phân t ch là dược liệu có nhiều thành phần nên cần cần tách chất cần phân tích ra khỏi các thành phần khác trong... chống viêm của monotropein chủ yếu liên quan đến sự ức chế các biểu hiện của chất trung gian gây viêm thông qua hử hoạt t nh NF-κB và hỗ trợ vai trò chữa bệnh của n trong viêm ruột ết [15],[17].[26] 16 Chƣơng 2 ĐỐI TƢỢNG V PHƢƠNG PH P NGHI N CỨU 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHI N CỨU 2.1.1 Nguyên liệu Mẫu dược liệu và dịch chiết Ba kích do VKNTTW cung cấp, được kiểm tra và đạt tiêu chuẩn dược liệu đầu vào 2.1.2... của NK-ҡB (nuclear factor kappa B ) và JNK (c-Jun N-terminal inases) đồng thời điều chỉnh tỉ lệ OPG/RANKL (Osteopro-tegerin / receptor activator of NF-ҡB ligand ) của tế bào tạo xương [17], [31] g) Độc tính cấp LD50 xác định trên chuột nh t tr ng bằng đường uống của Ba kích là 193g/kg Chứng tỏ Ba ch c độ độc t nh rất thấp [10] 1.1.7 Công dụng và liều dùng Theo Đông y, Ba ch là vị thuốc c t nh ôn, vị. .. ether.Lấy 1ml dịch chiết ether cho vào ống nghiệm nhỏ, thêm 1ml dung dịch NaOH 10%, l c nhẹ Lớp nước sẽ có màu hồng [8] Định tính anthranoid toàn phần Lấy 0,5g bột Ba kích cho vào ống nghiệm 10ml Thêm 5ml dung dịch acid sulfuric 1N Đun trực tiếp trên nguồn nhiệt đến sôi Tiếp tục lọc và chiết như đối với dạng tự do Lấy 1ml dịch chiết ether, cho vào ống nghiệm nhỏ Thêm 1ml dung dịch NaOH 10% L c nhẹ Lớp nước... Vị đ ng, hơi ngọt - Từ 301,08g dược liệu thu được 62,83g cao đặc - Hiệu suất bào chế cao đặc đạt 25,56 ± 1,90 3.1.2 Định tính một số nhóm chất bằng phản ứng hóa học Tiến hành phản ứng theo phương pháp đã mô tả ở mục 2.2.2 Kết quả định tính hoá học được t m t t ở bảng 3.2: 24 Bảng 3.2 Định tính các nhóm chất trong vị thuốc và cao đặc Nh m chất STT Mẫu nghiên cứu Phản ứng định tính Bột Ba ch Cao Ba kích. .. (Thuốc thử Trim Hill: 10ml CH3COOH + 1ml dung dịch CuSO4 0,2% và 0,5ml HCl đặc) [9] * Định tính anthranoid (Phản ứng Borntraeger) Định tính dạng tự do Lấy 0,5g Ba kích cho vào ống nghiệm 10ml Thêm 5ml nước cất Đun trực tiếp với nguồn nhiệt cho đến sôi Lọc dịch chiết còn nóng qua giấy lọc vào trong bình gạn dung tích 50ml Làm nguội dịch lọc Thêm 5ml ether L c nhẹ, gạn lấy lớp ether.Lấy 1ml dịch chiết. .. thống - Chuẩn bị mẫu chuẩn: là mẫu chuẩn trong phần độ lặp lại - Tiêm vào hệ thống s c ký 6 lần dung dịch chuẩn và ghi lại s c ý đồ, xác định các giá trị về thời gian lưu, diện t ch pic Độ lặp lại của hệ thống được biểu thị bằng độ lệch chuẩn tương đối RSD * Kết quả: Độ thích hợp của hệ thống được trình bày trong bảng 3.4 STT 1 Bảng 3.4 Độ thích hợp của hệ thống Thời gian lƣu của Diện tích pic Monotropein... lấy dịch lọc - Định t nh đường khử: Lấy 2ml dịch lọc, thêm 1ml TT Fehling A và Fehling B Đun cách thủy trong vài phút xuất hiện tủa đỏ gạch [8] - Định t nh acid hữu cơ: Lấy 2ml dịch lọc, thêm 1 t bột Na 2CO3 thấy c bọt khí bay lên [8] * Định tính alcaloid Cho 5 g bột Ba kích vào các bình n n 50ml, iềm h a bằng dd NH4OH, đậy n để trong 30 phút Thêm 20ml dd CHCl3, l c đều, ngâm trong 1giờ Lọc lấy dịch chiết . HC HÀ NI TRNH TH NGA NGHIÊN CU NÂNG CP TIÊU CHUN V THUC BA KÍCH VÀ KHO SÁT THÀNH PHN HÓA HC CA DCH CHIT ETHANOL BA KÍCH KHÓA LUN TT NGHI . HC HÀ NI TRNH TH NGA NGHIÊN CU NÂNG CP TIÊU CHUN V THUC BA KÍCH VÀ KHO SÁT THÀNH PHN HÓA HC CA DCH CHIT ETHANOL BA KÍCH KHÓA LUN TT NGHI ng. n Trung Quc tiêu thành phn hóa hc. Vì nh tài u nâng cp tiêu chun v thuc Ba kích và kho sát thành phn hóa hc ca dch chi