Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẶT VẤN ĐỀ NSAIDs – nhóm chống viêm không steroid là một nhóm dược chất quan trọng dùng cho mục đích giảm đau, chống viêm trong các bệnh vềmắt với nhiều ưu điểm so với thuốc chống viêm steroid nhưkhông làm giảm đáp ứng miễn dịch, không gây ra đục thủy tinh thể, tăng nhãn áp và không ức chếsựtái tạo của lớp biểu mô giác mạc. Diclofenac là một dược chất điển hình thuộc nhóm này. Tuy nhiên trên thịtrường hiện chỉcó dạng dung dịch nhỏmắt natri diclofenac 0,1% với nhiều hạn chếcủa dạng bào chếquy ước nhưsinh khảdụng thấp, thời gian tác dụng ngắn, người bệnh phải dùng thuốc ít nhất 3 – 5 lần mỗi ngày. Gần đây, cùng với sựphát triển của công nghệnano, rất nhiều dạng bào chếmới đã ra đời với nỗlực khắc phục những nhược điểm của dạng bào chếcổ điển trong đó có dạng nhũtương nano với nhiều ưu điểm nổi trội. Chính vì vậy, bộmôn Bào chế đã tiến hành nghiên cứu bào chếnhũtương nano nhỏmắt diclofenac nhằm làm tăng tính thấm của dược chất, kiểm soát giải phóng thuốc, duy trì tác dụng kéo dài, hiệu quảvà thuận tiện cho người sửdụng. Hiện tại, công thức cơbản cho chếphẩm cũng nhưphương pháp bào chế đã bắt đầu được xác định 7, 8, 9, 10. Tiếp theo những nghiên cứu trên, chúng tôi tiến hành đềtài: “Xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng mắt thỏvà bước đầu đánh giá sinh khảdụng của nhũtương nano nhỏmắt diclofenac” với các mục tiêu: 1. Xây dựng và thẩm định được phương pháp định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng mắt thỏ. 2. Bước đầu đánh giá sinh khảdụng của chếphẩm trên mắt thỏbằng phương pháp trên.
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI QUẢN DUY QUANG XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG DICLOFENAC TRONG DỊCH TIỀN PHÒNG MẮT THỎ VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG CỦA NHŨ TƯƠNG NANO NHỎ MẮT DICLOFENAC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2014 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI QUẢN DUY QUANG XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG DICLOFENAC TRONG DỊCH TIỀN PHÒNG MẮT THỎ VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG CỦA NHŨ TƯƠNG NANO NHỎ MẮT DICLOFENAC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. TS. Nguyễn Trần Linh 2. DS. Đặng Thị Hiền Nơi thực hiện: Bộ môn Bào chế HÀ NỘI – 2014 LỜI CẢM ƠN Trong những dòng đầu tiên này, tôi xin phép được gửi lời cảm ơn sâu sắc tới: PGS.TS. Nguyễn Văn Long TS. Nguyễn Trần Linh DS. Đặng Thị Hiền là những người thầy đã nhiệt tình hướng dẫn và hết lòng giúp đỡ, tận tình chỉ bảo tôi trong suốt quá trình nghiên cứu, thực hiện khóa luận vừa qua. Tôi cũng xin được gửi lời cảm ơn chân thành đến tất cả thầy cô, các anh, chị kĩ thuật viên bộ môn Bào chế đã hết sức tạo điều kiện, giúp tôi hoàn thành đề tài. Nhân đây, tôi cũng xin cảm ơn Ban giám hiệu, các phòng ban, các thầy cô giáo và cán bộ công nhân viên trường Đại học Dược Hà nội – những người đã dạy bảo, giúp đỡ tôi trong suốt 5 năm học tập tại trường. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè – những người đã dành cho tôi sự giúp đỡ và động viên quý báu trong suốt thời gian qua. Hà nội, ngày 8 tháng 5 năm 2014 Sinh viên Quản Duy Quang MỤC LỤC Danh mục các kí hiệu, các chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình vẽ, đồ thị ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN 2 1.1. Thông tin về dược chất diclofenac 2 1.1.1. Công thức hóa học 2 1.1.2. Đặc tính lý hóa 2 1.1.3.Tác dụng dược lí 3 1.2. Thuốc nhỏ mắt 3 1.2.1. Định nghĩa 3 1.2.2. Sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt 3 1.2.3. Một số biện pháp cải thiện sinh khả dụng của thuốc nhãn khoa 4 1.3. Nhũ tương nano 4 1.3.1. Định nghĩa 4 1.3.2. Một số ưu điểm của nhũ tương nano 4 1.3.3. Các nghiên cứu nhũ tương nano diclofenac đã thực hiện 5 1.4. Xây dựng, thẩm định phương pháp định lượng dược chất trong dịch sinh học 6 1.4.1. Thẩm định phương pháp phân tích trong dịch sinh học 7 1.4.2. Một số phương pháp định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng 10 1.5. Đánh giá sinh khả dụng in vivo của thuốc nhỏ mắt 11 1.5.1. Các phương pháp đánh giá sinh khả dụng in vivo của thuốc nhỏ mắt 11 1.5.2.Một số nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng của thuốc nhỏ mắt 13 1.6. Một số mô hình dược động học 14 1.6.1. Mô hình ngăn (Compartmental Modelling) 14 1.6.2. Mô hình không ngăn (Noncompartmental Modelling) 16 1.6.3. Một số nghiên cứu về dược động học của thuốc nhỏ mắt 19 CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1. Nguyên liệu, thiết bị, động vật thí nghiệm 20 2.1.1. Nguyên liệu 20 2.1.2. Thiết bị 20 2.1.3. Động vật thí nghiệm 21 2.2. Nội dung nghiên cứu 21 2.3. Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1. Phương pháp bào chế nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac 21 2.3.2. Phương pháp bào chế dung dịch nhỏ mắt diclofenac so sánh 22 2.3.3. Phương pháp định lượng 23 2.3.4. Thẩm định phương pháp định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng 24 2.3.5. Đánh giá sinh khả dụng và các thông số dược động học 26 CHƯƠNG 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 31 3.1. Thẩm định phương pháp định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng 31 3.1.1. Tính chọn lọc 31 3.1.2. Tính tuyến tính 32 3.1.3. Giới hạn định lượng dưới 35 3.1.4. Độ đúng, độ chính xác 36 3.1.5. Độ ổn định 38 3.2. Đánh giá sinh khả dụng và các thông số dược động học 40 3.2.1. Xác định khối lượng riêng của các dạng bào chế 40 3.2.2. So sánh nồng độ diclofenac trong dịch tiền phòng của nhũ tương nano và dạng dung dịch 40 3.2.3. Xây dựng đường biểu diễn mức độ giải phóng in vivo của nhũ tương nano so với dung dịch 45 3.2.4. Khảo sát một vài thông số dược động học 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT AD Diclofenac AUC Diện tích dưới đường cong (Area under curve) CDH Chất diện hoạt DAD Detector mảng diod (Diode Array Detector) ĐDH Chất đồng diện hoạt ĐNH Đồng nhất hóa ECD Detector điện hóa (Electrochemical detector) FDA Cơ quan quản lý thực phẩm dược phẩm Mỹ (Food and Drug Administration) FLD Detector huỳnh quang (Flourescent detector) HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao (High performance liquid chromatography) HQC Mẫu kiểm tra nồng độ cao (High Quality Control) KTTP Kích thước tiểu phân LLOQ Giới hạn định lượng dưới (Lower Limit of Quantitation) LOD Giới hạn phát hiện (Limit of detection) LQC Mẫu kiểm tra nồng độ thấp (Low Quality Control) MQC Mẫu kiểm tra nồng độ trung bình (Medium Quality Control) MRT Thời gian lưu trung bình (Mean residence time) NSAIDs Nhóm thuốc chống viêm không steroid (Nonsteroidal anti-inflammatory drugs) NTN Nhũ tương nano PdI Chỉ số đa phân tán (Polydispersity index) SKD Sinh khả dụng USP Dược điển Mỹ (The United States Pharmacopeia) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1. Một số điều kiện chạy sắc ký định lượng AD trong dịch tiền phòng 10 Bảng 1.2. Một số đặc điểm giải phẫu, sinh lý của mắt người và mắt thỏ 12 Bảng 2.1. Nguyên liệu sử dụng 20 Bảng 3.1. Ảnh hưởng của mẫu trắng tại thời điểm trùng với thời gian lưu của AD 32 Bảng 3.2. Tương quan giữa nồng độ AD trong dịch tiền phòng và diện tích peak 33 Bảng 3.3. Nồng độ diclofenac trong các mẫu chuẩn tính theo phương trình hồi quy 34 Bảng 3.4. Xác định giới hạn định lượng dưới (LLOQ) 35 Bảng 3.5. Kết quả thẩm định độ đúng, độ lặp lại trong ngày 36 Bảng 3.6. Kết quả thẩm định độ đúng, độ lặp lại khác ngày 37 Bảng 3.7. Độ ổn định của mẫu sau xử lý bảo quản ở nhiệt độ phòng trong 24 giờ 39 Bảng 3.8. Khối lượng riêng của dạng NTN và dạng dung dịch 40 Bảng 3.9. Kết quả thí nghiệm và tính toán các lô 41 Bảng 3.10. Kết quả thí nghiệm và tính toán trung bình 3 lô 43 Bảng 3.11. Mức độ giải phóng in vivo của NTN so với dung dịch 45 Bảng 3.12. Các thông số dược động học tính toán nhờ phần mềm Phoenix 48 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1. Công thức cấu tạo acid diclofenac 2 Hình 1.2. Mô hình đánh giá khả năng thấm của dược chất qua giác mạc bằng phương pháp vi thẩm tích 13 Hình 1.3. Một số mô hình ngăn cho thuốc nhỏ mắt 14 Hình 1.4. Đường cong thực nghiệm C p – t trong mô hình không ngăn 17 Hình 3.1. Sắc ký đồ của dịch tiền phòng trắng 31 Hình 3.2. Sắc ký đồ của dịch tiền phòng có chứa diclofenac ở nồng độ 500 ng/mL 31 Hình 3.3. Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ diclofenac trong dịch tiền phòng và diện tích peak 33 Hình 3.4. Đồ thị biểu diễn đường cong nồng độ - thời gian trung bình 3 lô 43 Hình 3.5. Đồ thị biểu diễn mức độ giải phóng in vivo của NTN so với dung dịch 46 1 ĐẶT VẤN ĐỀ NSAIDs – nhóm chống viêm không steroid là một nhóm dược chất quan trọng dùng cho mục đích giảm đau, chống viêm trong các bệnh về mắt với nhiều ưu điểm so với thuốc chống viêm steroid như không làm giảm đáp ứng miễn dịch, không gây ra đục thủy tinh thể, tăng nhãn áp và không ức chế sự tái tạo của lớp biểu mô giác mạc. Diclofenac là một dược chất điển hình thuộc nhóm này. Tuy nhiên trên thị trường hiện chỉ có dạng dung dịch nhỏ mắt natri diclofenac 0,1% với nhiều hạn chế của dạng bào chế quy ước như sinh khả dụng thấp, thời gian tác dụng ngắn, người bệnh phải dùng thuốc ít nhất 3 – 5 lần mỗi ngày. Gần đây, cùng với sự phát triển của công nghệ nano, rất nhiều dạng bào chế mới đã ra đời với nỗ lực khắc phục những nhược điểm của dạng bào chế cổ điển trong đó có dạng nhũ tương nano với nhiều ưu điểm nổi trội. Chính vì vậy, bộ môn Bào chế đã tiến hành nghiên cứu bào chế nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac nhằm làm tăng tính thấm của dược chất, kiểm soát giải phóng thuốc, duy trì tác dụng kéo dài, hiệu quả và thuận tiện cho người sử dụng. Hiện tại, công thức cơ bản cho chế phẩm cũng như phương pháp bào chế đã bắt đầu được xác định [7], [8], [9], [10]. Tiếp theo những nghiên cứu trên, chúng tôi tiến hành đề tài: “Xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng mắt thỏ và bước đầu đánh giá sinh khả dụng của nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac” với các mục tiêu: 1. Xây dựng và thẩm định được phương pháp định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng mắt thỏ. 2. Bước đầu đánh giá sinh khả dụng của chế phẩm trên mắt thỏ bằng phương pháp trên. [...]... nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng in vivo, một trong những nội dung quan trọng là xây dựng được quy trình chiết tách, xử lý mẫu và định lượng thuốc trong dịch sinh học Với các thuốc nhỏ mắt, nội dung này chủ yếu đề cập đến việc xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng dược chất trong dịch tiền phòng ϳ 1.4.1 Thẩm định phương pháp phân tích trong dịch sinh học Để có khả năng áp dụng và đảm bảo chính... đích tác dụng là trong nhãn cầu thì định lượng dược chất trong dịch tiền phòng là phù hợp nhất bởi đây là khu vực trung gian vận chuyển các chất đến các mô và tổ chức trong mắt [28] Vì vậy phương pháp này đã được lựa chọn để đánh giá sinh khả dụng nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac ϭϯ 1.5.2.Một số nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng của thuốc nhỏ mắt Alia A.Badawi đã nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng giữa... tích Phương pháp này vẫn có thể cho kết quả đủ tin cậy và chính xác trong phạm vi của mục tiêu nghiên cứu 1.5 Đánh giá sinh khả dụng in vivo của thuốc nhỏ mắt 1.5.1 Các phương pháp đánh giá sinh khả dụng in vivo của thuốc nhỏ mắt Để đánh giá sinh khả dụng, dược động học hay tác dụng dược lý của một thuốc bất kì trước hết phải tiến hành các thử nghiệm đánh giá trên động vật Với thuốc nhỏ mắt, thỏ là... các dụng cụ thủy tinh khác… 2.1.3 Động vật thí nghiệm Động vật thí nghiệm được lựa chọn là thỏ đực, cân nặng khoảng 2,5 – 3,0 kg, được nuôi dưỡng trong điều kiện thí nghiệm với chế độ ăn uống đầy đủ và được kiểm soát 2.2 Nội dung nghiên cứu Xây dựng và thẩm định phương pháp HPLC để định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng của mắt thỏ Bước đầu đánh giá sinh khả dụng của nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac. .. cầu hơn mẫu lấy từ mắt được điều trị bằng dạng hỗn dịch nano Điều đó có nghĩa là NTN có khả năng chống viêm tốt hơn [13] So sánh NTN với dạng dung dịch: mỗi thỏ lần lượt được nhỏ vảo mắt trái dạng nhũ tương nano, mắt phải nhỏ dạng dung dịch Sau một khoảng thời gian nhất định, giết thỏ, hút lấy dịch tiền phòng và cắt lấy phần giác mạc Đem định lượng dược chất trong dịch tiền phòng và giác mạc thu được... [18] 1.4.2 Một số phương pháp định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng Nồng độ dược chất nói chung và diclofenac nói riêng trong dịch tiền phòng thường rất thấp Chính vì vậy, các nghiên cứu hiện nay chủ yếu sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao để định lượng bởi ưu điểm có độ nhạy cao Một số điều kiện chạy sắc ký cho định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng có thể tham khảo được trình bày... thông qua đánh giá các đặc tính vật lý (KTTP, PdI, thế zeta, độ nhớt) và khả năng giải phóng dược chất in vitro [9] Với những kết quả đã đạt được, nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng in vivo ở giai đoạn tiếp theo là cần thiết để có những đánh giá, lựa chọn giá trị hơn trong việc tìm ra công thức và phương pháp bào chế tối ưu 1.4 Xây dựng, thẩm định phương pháp định lượng dược chất trong dịch sinh học... ή ࡿࢉ Trong đó: Ct: Nồng độ dược chất trong mẫu thử (ng/mL) mc: Khối lượng acid diclofenac pha chuẩn (mg) St: Diện tích peak của mẫu thử (mAU.s) Sc: Diện tích peak của mẫu chuẩn (mAU.s) 2.3.4 Thẩm định phương pháp định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng Quy trình thẩm định phương pháp định lượng được tiến hành theo hướng dẫn của FDA [18] 2.3.4.1 Tính chọn lọc Chuẩn bị 6 mẫu dịch tiền phòng trắng... một phương pháp phân tích nào cũng cần thẩm định Theo hướng dẫn của FDA [18], quá trình thẩm định phương pháp phân tích trong dịch sinh học được tiến hành qua ba giai đoạn: Chuẩn bị chất chuẩn Xây dựng và thẩm định phương pháp phân tích Áp dụng phương pháp thẩm định cho các mẫu phân tích thường qui và các tiêu chuẩn chấp nhận cho lô mẻ phân tích 1.4.1.1 Chuẩn bị chất chuẩn Để kết quả phân tích có giá. .. từ mắt được điều trị bằng NTN cho nồng độ dược chất cao hơn hẳn so với các mẫu lấy từ mắt được điều trị bằng dạng dung dịch [13] Xiang Li và cộng sự cũng đánh giá sinh khả dụng dựa vào định lượng nồng độ dược chất trong dịch tiền phòng nhưng với kĩ thuật đặt màng vi thẩm tích vào mắt thỏ, loại bỏ được đáng kể dao động cá thể so với các phương pháp khác (hình 1.2) [23] Hình 1.2 Mô hình đánh giá khả . QUẢN DUY QUANG XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG DICLOFENAC TRONG DỊCH TIỀN PHÒNG MẮT THỎ VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG CỦA NHŨ TƯƠNG NANO NHỎ MẮT DICLOFENAC KHÓA. QUẢN DUY QUANG XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG DICLOFENAC TRONG DỊCH TIỀN PHÒNG MẮT THỎ VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG CỦA NHŨ TƯƠNG NANO NHỎ MẮT DICLOFENAC KHÓA. đánh giá sinh khả dụng của nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac với các mục tiêu: 1. Xây dựng và thẩm định được phương pháp định lượng diclofenac trong dịch tiền phòng mắt thỏ. 2. Bước đầu đánh