BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHAN THỊ HỒNG TRANG BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG TĂNG CƯỜNG CHỨC NĂNG SINH SẢN NAM VÀ ĐỘC TÍNH CỦA CHẾ PHẨM TES KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2014 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHAN THỊ HỒNG TRANG BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG TĂNG CƯỜNG CHỨC NĂNG SINH SẢN NAM VÀ ĐỘC TÍNH CỦA CHẾ PHẨM TES KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 3. TS. Đỗ Thị Nguyệt Quế 4. DS. Mai Ngọc Tú Nơi thực hiện: 2. Bộ môn Dược Lực Trường đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2014 LỜI CẢM ƠN Từ tận đáy lòng tôi xin gửi đến cô giáo TS Đỗ Thị Nguyệt Quế là người trực tiếp hướng dẫn tôi lời cám ơn chân thành, lòng kính trọng sâu sắc nhất. Cô giáo đã chỉ bảo ân cần, nghiêm khắc dìu dắt, quan tâm, nhắc nhở tôi. Cô giáo đã mang tình yêu nghề thực sự đến cho tôi. Với tình cảm chân thành tôi xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến thầy giáo PGS, TS Vũ Văn Điền, cô giáo ThS Nguyễn Thu Hằng đã tận tình giúp đỡ, hướng dẫn giảng dạy, chỉ bảo ân cần, quan tâm, tạo mọi điều kiện để tôi hoàn thành khóa luận này. Tôi cũng xin bày tỏ lòng cám ơn tới chị Mai Ngọc Tú đã nhiệt tình chỉ bảo, giúp đỡ trong suốt thời gian tôi thực hiện đề tài. Tôi xin chân thành cám ơn PGS. Đào Thị Vui (trưởng bộ môn Dược Lực) cùng toàn thể các thầy cô, cán bộ, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Dược Lực, Dược Cổ Truyền Trường đại học Dược Hà Nội và Trường Đại học Y Hà Nội, bệnh viện phụ sản Trung ương, bệnh viện Việt Nam CuBa đã tạo điều kiện cho tôi trong suốt thời gian tôi tham gia nghiên cứu tại các bộ môn. Tôi xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến sự dạy dỗ, dìu dắt hết lòng của các thầy cô giáo cùng các cán bộ Trường Đại học Dược Hà Nội trong suốt 5 năm học vừa qua, đã mang đến cho tôi những kiến thức bổ ích và nhiều kinh nghiệm quý báu để làm hành trang cho tôi bước vào cuộc đời Dược Sỹ. Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình tôi, cám ơn bố mẹ tôi là người đã sinh thành, nuôi dưỡng, tần tảo hy sinh, gắn bó với tôi, là động lực cho tôi học tập và nghiên cứu. Cám ơn bạn bè tôi đã luôn chia sẻ, đốc thúc tôi tìm hiểu, viết bài, luôn cổ vũ, động viên, là chỗ dựa tinh thần cho tôi trong suốt quá trình tôi học tập và nghiên cứu. MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1. TỔNG QUAN 1.1. Một vài nét về sự suy giảm chức năng sinh sản, sinh dục nam 1.1.1. Khái niêm, nguồn gốc và sự điều hòa bài tiết hormon sinh dục nam 1.1.2. Vai trò của androgen đối với chức năng sinh lý nam và cơ thể 1.1.3. Ảnh hưởng của suy giảm androgen đối với sức khỏe nam giới 1.1.4. Triệu chứng của suy sinh dục nam 1.2. Bài thuốc và các vị thuốc trong bài thuốc dùng làm đối tượng nghiên cứu 1.2.1. Bài thuốc 1.2.2. Các vị thuốc trong bài thuốc Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Đối tượng nghiên cứu 2.2. Động vật nghiên cứu 2.3. Hóa chất, thiết bị 2.4. Phương pháp nghiên cứu 2.4.1. Đánh giá tác dụng androgen của chế phẩm TES 2.4.2. Đánh giá độc tính cấp tính của chế phẩm TES 2.4.3. Đánh giá độc tính bán trường diễn của chế phẩm TES 2.5. Phương pháp xử lý số liệu Chương 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1. Kết quả đánh giá tác dụng androgen của chế phẩm TES 3.1.1. Kết quả đánh giá tác dụng androgen của chế phẩm TES trên nhóm đối tượng chuột cống đực trưởng thành 3.1.2. Kết quả đánh giá hoạt tính androgen của chế phẩm TES trên chuột cống đực non thiến 3.2. Kết quả độc tính cấp của chế phẩm TES 3.3. Kết quả đánh giá độc tính bán trường diễn của chế phẩm TES 3.3.1. Ảnh hưởng của cao TES đến tình trạng chung và cân nặng chuột cống 1 2 2 2 5 8 11 11 12 20 20 21 21 21 21 24 25 27 28 28 28 30 32 33 33 3.3.2. Ảnh hưởng của cao TES đến các chỉ số huyết học của chuột cống trắng 3.3.3. Ảnh hưởng của cao TES đến các chỉ số sinh hóa của chuột cống trắng 3.3.4. Kết quả mô bệnh học 3.4. Bàn luận KẾT LUẬN ĐỀ XUẤT-Ý KIẾN TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 36 37 40 49 50 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DHT Dihydrotestosteron DHEA Dehydroepiandrosteron HCG Human chorionic gonadotropin ER Estrogen receptor SDHEA Sulphat dehydroepiandrosteron SHBG Sex hormone binding globulin TRH Thyreotropin DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 3.1 Ảnh hưởng của chế phẩm TES lên khối lượng của chuột cống đực trưởng thành 28 Bảng 3.2 Ảnh hưởng của chế phẩm TES lên sự phát triển các cơ quan sinh dục phụ của chuột cống đực trưởng thành 29 Bảng 3.3 Ảnh hưởng của chế phẩm TES lên khối lượng của chuột cống đực non thiến 31 Bảng 3.4 Ảnh hưởng của chế phẩm TES lên sự phát triển các cơ quan sinh dục phụ của chuột cống đực non thiến 31 Bảng 3.5 Mô tả tình trạng chuột ở các lô thử nghiệm trong vòng 7 ngày 32 Bảng 3.6 Số chuột chết ở các lô trong vòng 72 giờ 33 Bảng 3.7 Ảnh hưởng của chế phẩm TES đến khối lượng cơ thể động vật thí nghiệm 34 Bảng 3.8 Ảnh hưởng của cao TES đến các thông số huyết học 34 Bảng 3.9 Ảnh hưởng của chế phẩm TES đến các thông số sinh hóa 36 DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang Hình 2.1 Quy trình chế biến cao 20 Hình 2.2 Sơ đồ nghiên cứu hoạt tính androgen trên chuột cống đực trưởng thành 23 Hình 2.3 Sơ đồ nghiên cứu hoạt tính androgen trên chuột cống đực non thiến 24 Hình 3.1 Ảnh hưởng của chế phẩm TES lên nồng độ testosteron huyết tương của chuột cống đực trưởng thành 30 Hình 3.2 Cấu trúc vi thể thận lô chứng 38 Hình 3.3 Cấu trúc vi thể thận lô uống mâu thử liều 1 38 Hình 3.4 Cấu trúc vi thể thận lô uống mẫu thử liều 2 38 Hình 3.5 Cấu trúc vi thể gan lô chứng 39 Hình 3.6 Cấu trúc vi thể gan lô uống mẫu thử liều 1 39 Hình 3.7 Cấu trúc vi thể gan lô uống mẫu thử liều 2 40 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Suy giảm chức năng sinh dục, vô sinh, liệt dương… là những vấn đề của xã hội hiện đại. Cùng với sự phát triển của kinh tế - xã hội, các stress cũng như sự ô nhiễm môi trường tỷ lệ nam giới bị mắc bệnh vô sinh, liệt dương ngày càng tăng. Theo ước tính của WHO có khoảng 80 triệu cặp vợ chồng vô sinh, trong đó vô sinh do nam giới chiếm khoảng 40–50 %. Testosteron trong máu giảm thấp ảnh hưởng nhiều đến tâm lý, đến cơ quan vận mạch và tuần hoàn, đến hệ thống cơ, xương, khớp, thần kinh và não bộ. Suy giảm chức năng sinh dục nam giới không chỉ ảnh hưởng đến sức khỏe, tinh thần của người nam giới mà còn ảnh hưởng đến sức lao động, cũng như hạnh phúc gia đình, sự phát triển nòi giống và thường gây hậu quả tiêu cực đối với đời sống xã hội, giảm chất lượng cuộc sống. Điều trị suy giảm sinh dục nam phức tạp do bệnh có nhiều nguyên nhân, hiện nay việc điều trị này còn nhiều hạn chế vì vậy việc nghiên cứu thuốc điều trị suy giảm sinh dục nam, điều hòa suy giảm testosteron là có ý nghĩa khoa học và thực tiễn. Theo kinh nghiệm dân gian, một số bài thuốc như bát vị, ích tinh xung tễ,tán dục đan…, một số vị thuốc như đỗ trọng, ba kích, xà sàng, bá bệnh…đã được sử dụng trong điều trị hoặc hỗ trợ điều trị chức năng sinh sản nam và được cho rằng có tác dụng. Bài thuốc TES với sự kết hợp 4 vị thuốc bá bệnh, ba kích, xà sàng tử, bạch tật lê trong y học cổ truyền có tác dụng chính là là bổ dương, cùng với 4 vị thuốc có tác dụng bồi bổ cơ thể: câu kỳ tử, hoàng kỳ, đương quy, cốt khí củ đã được sử dụng theo kinh nghiệm trên một số bệnh nhân biểu hiện hiếm muộn, có suy giảm chức năng sinh dục và cho tác dụng khả quan. Để góp phần vào việc cung cấp các bằng chứng khoa học nhằm đưa bài thuốc này vào sử dụng trên lâm sàng chúng tôi tiến hành đề tài: “Bước đầu đánh giá tác dụng tăng cường chức năng sinh sản nam và độc tính của chế phẩm TES” với các mục tiêu sau: 1. Đánh giá hoạt tính androgen của chế phẩm TES trên chuột cống đực non đã thiến và trên chuột cống đực trưởng thành. 2. Đánh giá độc tính cấp tính của chế phẩm TES. 3. Đánh giá độc tính bán trường diễn của chế phẩm TES. 2 Chương 1. TỔNG QUAN 1.1. Một vài nét về sự suy giảm chức năng sinh sản, sinh dục nam 1.1.1. Khái niệm, nguồn gốc và sự điều hòa bài tiết hormon sinh dục nam Androgen hay còn gọi là hormon androgen hay testoid, thường là hormon steroid có vai trò kích thích hoặc kiểm soát sự phát triển và duy trì đặc tính nam thứ phát ở động vật có xương sống nhờ liên kết với androgen receptor. Androgen được phát hiện lần đầu tiên vào năm 1936. Những androgen quan trọng trong cơ thể là testosteron, dihydrotestosteron (DHT), dehydroepiandrosteron (DHEA), androstenedion và androstenediol. Chúng đều có vai trò quan trọng ngang nhau trong việc phát triển giới tính nam trong đó testosteron là androgen cơ bản và được biết đến nhiều nhất [3], [39], [44], [47], [50]. Nguồn gốc Androgen được sản xuất chủ yếu từ tế bào biểu mô trong tinh hoàn từ khoảng tuần thứ 8 của bào thai. Tế bào này được gọi là tế bào Leydig và ngay sau đó chúng tạo ra sự khác biệt về giới tính. Các tế bào Leydig tổng hợp androgen từ cholesterol và acetyl-CoA, trong đó con đường tổng hợp từ cholesterol là chính. Ngoài ra một số cơ quan khác cũng tham gia bài tiết androgen như vỏ thượng thận, buồng trứng, nhau thai. Ở nữ giới testosteron được tổng hợp và bài tiết từ hoàng thể và vỏ thượng thận [3], [47], [51]. Điều hòa bài tiết testosteron Ở khoảng tuần thứ 8 của thời kỳ bào thai, hormon HCG do nhau thai tiết ra thúc đẩy sự biệt hóa tế bào Leyding và sự sản xuất androgen ở giai đoạn này. Đến khoảng tuần thứ 11-12 của thời kỳ bào thai, hormon tuyến yên LH được hình thành và đóng vai trò điều hòa bài tiết androgen. Hoạt động của androgen ở mô đích liên quan đến sự chuyển đổi của testosteron thành DHT [47], [51]. 1.1.2. Vai trò của androgen đối với chức năng sinh lý nam và cơ thể 1.1.2.1. Vai trò của androgen đối với chức năng sinh lý nam  Vai trò trong hình thành và phát triển cơ quan sinh dục nam [...]... huyết học Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Đánh giá tác dụng androgen của chế phẩm TES Sử dụng test sàng lọc của Hershberger để đánh giá tác dụng androgen Thử nghiệm được tiến hành trên hai đối tượng: chuột cống trắng đực non thiến và chuột cống trắng đực trưởng thành 21 2.4.1.1 Đánh giá tác dụng androgen của chế phẩm TES trên chuôt cống trắng đực trưởng thành Sử dụng mô hình Hershberger trên chuột cống... độ testoseron và làm giảm sự sinh tinh, giảm xuất tinh ở người dẫn đến vô sinh [1] 1.1.2.2 Các tác dụng khác của androgen trong cơ thể - Tác dụng trên chuyển hóa protein và phát triển cơ: testosteron tác dụng lên chuyển hóa protein làm tăng khối lượng cơ sau dậy thì ở nam giới Dưới tác dụng của testosteron, khối lượng cơ có thể tăng lên 50% so với nữ giới [10], [11] - Tác dụng đến sự phát triển của. .. hoạt tính androgen trên chuột cống đực non thiến So sánh giá trị trung bình các thông số đánh giá ở trên giữa các lô chuột dùng mẫu thử và lô chứng để đánh giá tác dụng của mẫu thử 2.4.2 Đánh giá độc tính cấp tính của chế phẩm TES Tiến hành thử độc tính cấp theo phương pháp Litchfield- Wilcoxon Tiến hành trên chuột nhắt trắng, các bước tiến hành cụ thể như sau: Chuột được nhịn đói 4h trước khi uống chế. .. tăng lực Đối với người cao tuổi, ba kích có tác dụng tăng lực rõ rệt qua những cảm giác chủ quan như đỡ mệt mỏi, ngủ ngon, ăn ngon và những dấu hiệu khách quan như tăng cân, tăng cơ lực Ngoài ra, ba kích có tác dụng chống độc và tác dụng chống viêm rõ rệt [27] Tác dụng trên hệ nội tiết: ba kích có khả năng tăng cường hiệu lực của androgen trên chuột cống trắng đực Các nghiên cứu cho thấy: đối với nam. .. động sinh dục yếu, ba kích có tác dụng làm tăng khả năng giao hợp, đặc biệt đối với các trường hợp khả năng giao hợp yếu và tần suất giao hợp thưa Tuy không 14 làm tăng đòi hỏi tính dục nhưng ba kích có tác dụng tăng cường sức dẻo dai Ba kích không làm thay đổi tinh dịch đồ nhưng trên thực tế có tác dụng hỗ trợ và cải thiện hoạt động sinh dục cũng như điều trị vô sinh cho nam giới tương đối nhẹ và suy... bày dưới dạng trung vị và khoảng (giá trị cực tiểu – giá trị cực đại) Dùng thuật toán MannWhitney U test để so sánh kết quả giữa các lô - Phân tích thống kê bằng phần mềm SPSS, sự khác biệt giữa các lô được coi là có ý nghĩa khi p . đánh giá tác dụng tăng cường chức năng sinh sản nam và độc tính của chế phẩm TES với các mục tiêu sau: 1. Đánh giá hoạt tính androgen của chế phẩm TES trên chuột cống đực non đã thiến và trên. 2. Đánh giá độc tính cấp tính của chế phẩm TES. 3. Đánh giá độc tính bán trường diễn của chế phẩm TES. 2 Chương 1. TỔNG QUAN 1.1. Một vài nét về sự suy giảm chức năng sinh sản, sinh. 2.4.2. Đánh giá độc tính cấp tính của chế phẩm TES 2.4.3. Đánh giá độc tính bán trường diễn của chế phẩm TES 2.5. Phương pháp xử lý số liệu Chương 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1. Kết quả đánh giá tác