LỜI CẢM o n v Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành, biết ơn sâu sắc nhất tới cô KS.DS. Nguyễn Thị Việt Hương, là người trực tiếp hướng dẫn tận tình chỉ bảo và giúp đỡ tôi hoàn thành khóa luận tốt nghiệp. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới các thầy cô trong bộ môn Công nghiệp Dược, các anh chị kỳ thuật viên đã giúp đỡ, tạo điều kiện cho tôi trong thời gian làm thực nghiệm. Nhân dịp này tôi cũng gửi lời cảm ơn tới toàn thể giảng viên, các bộ và các bạn sinh viên Trường ĐH Dược HN lời cảm ơn chân thành vì sự dạy bảo, giúp đỡ, dìu dắt tôi trong 5 năm học tại trường. Cùng nhân dịp này, cho tôi được gửi lời cảm ơn chân thành tới 2 chính phủ Việt Nam - Campuchia đã tạo điều kiện cho tôi được sang học tại Việt Nam và xin kính chúc tình hữu nghị lâu bền Việt Nam - Campuchia mãi mãi xanh tươi, đời đời bền vững. Cuối cùng, cho phép tôi được gửi lời cảm ơn sâu sắc tới bố mẹ, anh chị em, người thân, bạn bè của tôi luôn quan tâm, chia sẻ và giúp đỡ tôi tận tình. Hà Nội, ngày tháng 05 năm 2011 Sinh viên Sun Than Chú giải chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình vẽ, đồ thị Đặt vấn đề 1 Chương 1:TÓNG QUAN 2 1.1. Cây Mã tiền 2 1.1.1. Đặc điểm thực vật 2 1.1.2. Phân bố và sinh thái 4 1.2. Bộ phân dùng - Hạt mã tiền 5 1.2.1. Thành phần hóa học 5 1.2.2. Định lượng Strychnin trong hạt mã tiền 6 1.2.3. ứng dụng 6 1.3. Hoạt chất - Strychnin 7 1.3.1. Công thức hóa học và tính chất 7 1.3.2. Định lượng strychnin trong sản phấm 8 1.3.3. Tác dụng dược lý và ứng dụng 8 1.4. Các phương pháp chiết xuất alcaloid 9 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ử u 2.1. Nguyên vật liệu, thiết b ị 2.1.1. Nguyên liệu 2.1.2. Hóa chất và dung môi 2.1.3. Thiết bị và dụng cụ 2.2. Nội dung nghiên cứu 2.2.1. Lựa chọn dung môi chiết MỤC LỤC Trang 2.2.2 Lựa chọn số lần chiết 12 2.2.3 Lựa chọn thời gian chiết 12 2.3. Phương pháp nghiên cứu 12 2.3.1. Phương pháp để lựa chọn dung môi chiết 12 2.3.1.1. Phương phâp chiết nóng băng dung môi dầu hỏa 12 2 3.1.2. Phương pháp chiết bằng dung môi cồn 96 14 2.3.2. Lựa chọn số lần chiết xuất 15 2.3.3. Lựa chọn thời gian chiết 15 CHƯƠNG 3 : THỤC NGHIỆM, KÊT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 16 3.1 .Định lượng Strychnin trong dược liệu 16 3.2. Lựa chọn dung môi chiết 16 3.2.1 Phương pháp chiết nóng bằng dung môi dầu hỏa 16 3.2.2 Phương pháp chiết nóng bằng dung môi cồn 96"' 19 3.3. Lựa chọn số lần chiết 24 3.4. Lựa chọn thời gian chiết 26 KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 28 Tài liệu tham khảo dd : dung dịch DĐVN : Dược điển Việt Nam pp : phương pháp STT : số thứ tự TB : trung bình DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC VIẾT TẮT Bảng 3.1. Hàm lượng Strychnin trong dược liệu 16 Bảng 3.2. Khối lượng sản phẩm ở pp chiết bằng dầu hỏa 19 Bảng.3.3. Hàm lượng Strychnin trong sản phấm của pp chiết bằng dầu hỏa 19 Bảng 3.4. Khối lượng sản phẩm ở pp chiết bằng ethanol 96" 20 Bảng.3.5. Hàm lượng Strychnin trong SP của pp chiết bằng ethanol 96" 20 Bẩng.3.6. Khối lượng SP tương úng với dung môi của các pp chiết xuất 21 Bảng.3.7. Hiệu suất sản phẩm tương ứng với các pp chiết xuất 21 Bảng.3.8. Hàm lượng Strychnin trong sản phẩm thu được ở các pp chiết xuất 22 Bảng 3.9. Khối lượng Strychnin Sulfat ở 5 lần chiết của mẻ nguyên liệu 24 Bảng 3.10. Tỷ lệ Strychnin Sulfat ở mỗi lần chiết so với tổng khối lượng 25 Bảng.3.11. Khối lượng sản phẩm ở mỗi thời gian 26 DANH MỤC CÁC BẢNG Trang DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, Đ ồ THỊ Hình. 1.1. Cây mã tiền ở Campuchia tại tỉnh kompot 2 Hình. 1.2. Lá cây mã tiền 3 Hình. 1.3. Quả mã tiền xanh 3 Hlnh. 1.4. Quả mã tiền chín 3 Hình. 1.5. Cơm quả mã tiền 4 Hình. 1.6 . Hạt quả mã tiền 4 Hình.3.1. Hiệu suất tương ứng với các pp chiết xuất 22 Hình.3.2.Tỷ lệ % Strychnin Sulfat của mỗi lần chiết so với tổng khối lượng strychnin Sulfat thu được 25 Hình.3.3. K.hối lượng Strychnin sulfat ở mồi thơi gia khác nhau 27 Trang ĐẶT VẤN ĐÈ Nước Campuchia là một nước nằm trong khu vực nhiệt đới gió mùa Đông Nam Á với điều kiện môi trường tự nhiên thuận lợi tạo nên một thảm thực vật làm thuốc rất đa dạng và phong phú. Người dân đã sử dụng tri thức bản địa đế tự phòng và chữa bênh cho minh và cộng đồng. Cây Sleng ( Sleng tên gọi theo tiếng campuchia) là loại cây thuộc chi Strychnos nux vomica L., thường mọc nhiều ở các vùng rừng núi của Campuchia. Trong Đông y hạt cây này được dùng làm thuốc. Dân Campuchia thưòng dùng hạt mã tiền để chữa bênh như nhức mỏi tay chân, tiêu hóa kém, phong thấp, đau dây thần kinh theo phương pháp Y học cổ truyền. Hiện nay ở Việt Nam, vấn đề chiết xuất Strychnin Sulfat từ hạt Mã tiền đã được nghiên cứu và sản xuất. Tuy nhiên ở Campuchia cho đến nay qua tìm hiểu chúng tôi thấy vẫn chưa có tài liệu nào nghiên cứu về vấn đề này. Với mong muốn có thể sử dụng qui trình chiết xuất Strychnin Sulfat từ hạt Mã tiền đem áp dụng vào thực tế sản xuất tại đất nước Campuchia, để góp phần vào việc chữa bệnh cho nhân dân trong cộng đồng các dân tộc Campuchia. Hơn nữa tại Campuchia cây Mã tiền mọc hoang rất nhiều, hạt mã tiền Campuchia cho hàm lượng rất cao, do đó việc khai thác nguồn dược liệu này rất thuận lợi. Vì vậy, chúng tôi thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu kỹ thuật chiết xuất Strychnin Sulfat từ hạt mã tiền có nguồn gốc từ Camphuchia ” với mục tiêu: > Lựa chọn dung môi chiết > Lira chon số lần chiết • • > Lựa chọn thời gian chiết - 2 - CHƯƠNG 1 :TỔNG QUAN 1.1. Cây Mã Tiền: Strychnos nux vomica L. Tên khác: Củ chi, Phiên mộc miết, Mác sèn sứ (Tày). Co bên kho, Co sét ma (Thái), Sleng (Cămpuchia). Tên nước ngoài; Nux vomica tree, strychnine tree, poison nut tree, vomiting nut, crow fig (Anh). Vomiquier, noix vomique, arbre à noix vomique (Pháp). Họ : Mã tiền {Loganiaceae). 1.1.1. Đặc điểm thực vật của cây Mã tiền [5]. Cây to, thân đứng cao 5 - 12 m. Cành nhẵn, không có móc, đôi khi có gai ở kẽ lá, vỏ màu xám có lỗ bì. Hình. 1.1. Cây mã tiền ở Campuchia tại tỉnh kompot -3 - Lá mọc đối, hình trứng, đầu nhọn, dài 6 - 12cm, rộng 3,5 - 8,5cm, nhẵn và dai, mặt trên màu lục sẫm bóng, gân lá 3, nổi rõ ở mặt dưới, cuống lá dài 5 - lOcm. Cụm hoa mọc ở đầu cành thành chùy dài 3 - 5cm có 1-2 đôi lá có lông mịn, hoa màu trắng hoặc vàng nhạt, lá đài 5, hàn liền có lông, cánh hoa 5, hàn liền thành một ống dài 1 - l,2cm, nhị 5, đính ở phía trên ống tràng, bầu hình trứng, nhẵn. Quả hình cầu, đường kính 3 - 6 cm, vỏ cứng nhẵn bóng, khi chín màu vàng cam hay vàng đỏ, chứa cơm quả màu trắng và 1 - 5 hạt hình tròn dẹt như chiếc khuy áo to, đưòng kính 2 - 2,5cm, dày 4 - 5mm, một mặt lồi, một mặt lõm, có lông mượt óng ánh tỏa đều từ giữa ra, màu xám. Mùa hoa quả: tháng 2 -8 . Hình, 1.2. Lá mã tiền Hình. 1.3. Quả mã tiền xanh Hình. 1.4. Quả mã tiền chín - 4 - Hình. 1.5. Com quả mã tiền Hình. 1.6. Hạt quả mã tiên 1.1.2. Phân bố và sinh thái. Chi strychnos L. có khoảng 150 loài trên thế giới, ở Malaysia, có 25 loài ( PROSEA, No 12(1) - Medicinal and Poisonos Plant, 1999, 467), Việt Nam có gần 20 loài, hầu hết là những cây dạng bụi trườn, dây leo gỗ và chỉ có ít loài là cây gỗ, trong đó có cây mã tiền. Cây mã tiền phân bố tập trung ở vùng nhiệt đới Đông - Nam Á và Nam Á, bao gồm Ấn Độ, Bangladesh, Srilanca, Mianma, Thái Lan, Campuchia, Lào, Bắc Malaysia, Việt Nam. Cây có mọc hoang nhiều ở các vùng rừng núi Campuchia. ở Việt Nam, mã tiền chỉ thấy ở các tỉnh phía nam, nhiều nhất ở Khánh Hòa, Bình Thuận, Ninh Thuận, Đồng Nai, Bà R4a - Vũng Tàu, Long an, Tây Ninh, Kiên Giang ( đảo Phú Quốc), Gia Lai và Đắc Lắc. Sinh thái ; Mã tiền thuộc loại cây nhiệt đới điển hình. Cây thích nghi ở vùng có nhiệt độ trung bình là 24 - 26 °c trở lên. Cây ưa sáng, chịu được khí hậu khô nóng, thưòng mọc ở rừng thưa, rừng nửa rụng lá hoặc rừng kín thường xanh ở đai thấp, dưới 500m. Cây ra hoa quả nhiều hàng năm. Cây có khả năng tái sinh cây chồi sau khi bị chặt, ở các vùng đồi ven biển thuộc tỉnh [...]... lượng Strychnin sulfat ở lần chiết thứ i, tính theo gam i là thứ tự lần chiết (i = 1^ 5) ^ A/ là tổng khối lượng Strychnin sulfat ở 5 lần chiết Tỷ lệ % Strychnin sulfat ở mỗi lần chiết so với tổng khối lượng được tính theo công thức sau : Xí = ^ 1 0 0 -25 - Với Xi là tỷ lệ Strychnin sulfat ở lần chiết thứ i Ket quả được thể hiện ở bảng sau : Bảng 3.10 Tỷ lệ Strychnin sulfat ở mỗi lần chiết so với tống... Như vậy, dung môi dầu hỏa có nhiều ưu điểm hơn so với dung môi ethanol 96'^ : dịch chiết sạch, dễ tinh chế, hiệu suất cao, chất lượng sản phẩm tốt, qui trình sản xuất dễ thực hiện, có thể áp dụng trong thực tếsản xuất Do đó, chúng tôi lựa chọn dung môi dầu hỏa để chiết xuấtstrychnin từ hạt mã tiền - 24 - 3.3 Lựa chọn số lần chiết xuất Trong quá trình chiết xuất ,nếu số lần chiết ít sễ không rút hết... phương pháp trên hiệu quả chiết xuất, chất lượng sản phẩm, khả năng ứng dụng trong thực tế Từ đó lựa chọn phương pháp ứng với dung môi chiết xuất tổi ưu 2.2.2 Lựa chọn số lần chiết Chiết Strychnin Sulfat nhiều lần bằng dung môi đã chọn, dựa vào tỷ lệ khối lượng sản phấm thu được ở mỗi lần chiết để lựa chọn số lần chiết thích hợp 2.2.3 Lựa chọn thời gian chiết xuất Chiết Strychnin Sulfat theo các khoảng... phẩm thu ở lần chiết thứ 5 quá ít nên không thu đươc Lượng sản phẩm ở lần chiết thứ 4 là không đáng kể, nên bỏ quả Vì vậy, chúng tôi lựa chọn số lần chiết là 3 lần, trong đó dịch chiết 2 lần đầu đem xử lý thu sản phẩm và dịch chiết của lần thứ 3 làm dung môi chiết mẻ sau 3.4 Lựa chọn thòi gian chiết xuất Trong quá trình chiết xuất, thời gian chiết có ảnh hưởng đến hiệu suất chiết, nếu thời gian chiết. .. nghiệm để nguyên cứu hơn nữa Tuy nhiên, chúng tôi cũng đã sơ bộ lựa chọn được một số thống số kỹ thuật cho quá trình chiết xuất Strychnin sulfat từ hạt mã tiền của Campuchia, có thể áp được dụng trong quy mô sản xuất công nghiệp như sau: 1 Lựa chọn dung môi chiết: dầu hỏa 2 Lựa chọn số lần chiết: 3 lần; trong đó 2 dịch chiết đầu được gộp lại rồi đem tinh chế lấy sản phẩm, còn dịch chiết lần 3 được... được ở mỗi thời gian chiết để lựa chọn thời gian chiết thích hợp 2.3 Phu’ong pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp để lựa chọn dung môi chiết Theo nguyên tắc chung, chúng tôi đã thử chiết Strychnin từ hạt mã tiền theo cả 2 phương pháp với 2 loại dung môi khác nhau - Phương pháp 1 Chiết bằng dung môi phân cực : cồn ethanol 96" - Phương pháp 2 Chiết bằng dung môi không phân cực : Dầu hỏa Tiến hành chiết. .. Kết quả ở bảng trên được thể hiện bằng đồ thị 60 ị 50 49.41 40 39.06 2 . ở Việt Nam, vấn đề chiết xuất Strychnin Sulfat từ hạt Mã tiền đã được nghiên cứu và sản xuất. Tuy nhiên ở Campuchia cho đến nay qua tìm hiểu chúng tôi thấy vẫn chưa có tài liệu nào nghiên cứu. thuật chiết xuất Strychnin Sulfat từ hạt mã tiền có nguồn gốc từ Camphuchia ” với mục tiêu: > Lựa chọn dung môi chiết > Lira chon số lần chiết • • > Lựa chọn thời gian chiết - 2 - CHƯƠNG. Lá cây mã tiền 3 Hình. 1.3. Quả mã tiền xanh 3 Hlnh. 1.4. Quả mã tiền chín 3 Hình. 1.5. Cơm quả mã tiền 4 Hình. 1.6 . Hạt quả mã tiền 4 Hình.3.1. Hiệu suất tương ứng với các pp chiết xuất 22 Hình.3.2.Tỷ