BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  DƯƠNG THỊ THANH MAI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA DƯỢC LIỆU “NẾN ĐẤT” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2015 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI DƯƠNG THỊ THANH MAI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA DƯỢC LIỆU “NẾN ĐẤT” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. TS. Nguyễn Quỳnh Chi 2. DS. Hồ Thị Dung Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2015 LỜI CẢM ƠN Trong quá trình làm thực nghiệm và hoàn thành khóa luận, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến các thầy cô, gia đình và bạn bè – những người đã và đang giúp đỡ tôi rất nhiều. Trước hết, tôi xin bày tỏ sự ngưỡng mộ, lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến TS. Nguyễn Quỳnh Chi, người thầy tận tụy và mẫu mực đã truyền cho tôi niềm đam mê với dược liệu và tinh dầu, giúp tôi học được phong cách làm việc khoa học trong suốt thời gian nghiên cứu ở bộ môn. Tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến ThS. Lê Thanh Bình, người đã giúp đỡ tôi rất nhiều trong quá trình làm thực nghiệm, sự nhiệt tình quan tâm đến nghiên cứu và những hỗ trợ quý báu của cô đã giúp tôi hoàn thành khóa luận này. Tôi muốn gửi lời cảm ơn đến Ds. Hồ Thị Dung, người chị vô cùng thân thiết đã cùng tôi hoàn thành khóa luận và chia sẻ những khó khăn và niềm vui trong quá trình làm thực nghiệm. Xin cảm ơn các thầy cô giáo, các anh chị kỹ thuật viên và các bạn cùng làm khóa luận ở bộ môn Dược Liệu đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi khi làm thực nghiệm . Cuối cùng nhưng không kém phần quan trọng, tôi muốn gửi lời cảm ơn đến gia đình và những người bạn luôn bên tôi, giúp tôi có thêm nhiều quyết tâm và động lực để phấn đấu, là chỗ dựa tinh thần vững chắc để tôi hoàn thành tốt khóa luận này. Hà Nội, ngày 13 tháng 5 năm 2015 Sinh viên Dương Thị Thanh Mai MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ……………………………………………………………. 1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN…………………………………………… 2 1.1. Tổng quan về dược liệu “Nến đất” ……………………………… 2 1.3.1. Tên gọi khác………………………………………………… 2 1.3.2. Sử dụng “Nến đất” ở Việt Nam…… ………………………. 2 1.2. Tổng quan về nhựa dầu ……………………………… 3 1.1.1. Các khái niệm cơ bản………… ………………………… 3 1.1.2. Quá trình hình thành nhựa dầu trong cây….……… ………. 4 1.1.3. Thành phần hóa học của nhựa dầu ……………….………… 7 1.3. Tổng quan về các loại dammar … ……………….………………. 10 1.2.1. Định nghĩa …… …………………………………………. 10 1.2.2. Thành phần hóa học của dammar …………………………. 11 1.2.3. Sử dụng dammar trên thế giới …………… …………….… 13 CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU… 15 2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị…… ……………………………………… 15 2.1.1. Nguyên liệu nghiên cứu……………… …………………… 15 2.1.2. Phương tiện nghiên cứu….………………… …………… 16 2.1.2.1. Máy móc và thiết bị nghiên cứu………… ………… 16 2.1.2.2. Hóa chất, dung môi ………………………………… 17 2.2. Nội dung nghiên cứu……………………………………………… 17 2.2.1. Nghiên cứu thành phần tinh dầu trong các mẫu “Nến đất”… 17 2.2.2. Nghiên cứu thành phần hóa học của “Nến đất” sau khi cất tinh dầu ……………………………………………………………. 17 2.3. Phương pháp nghiên cứu…………………………………………… 17 2.3.1. Nghiên cứu thành phần tinh dầu trong các mẫu “Nến đất” … 17 2.3.1.1. Xác định hàm lượng tinh dầu trong các mẫu “Nến đất”. 17 2.3.1.2. Phân tích thành phần tinh dầu thu được ……………… 18 2.3.2. Nghiên cứu thành phần hóa học của “Nến đất” sau khi cất tinh dầu ……………………………………………………………. 19 CHƯƠNG 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN………… 21 3.1. Nghiên cứu thành phần tinh dầu trong các mẫu “Nến đất” ….… 21 3.1.1. Xác định hàm lượng tinh dầu trong các mẫu “Nến đất”.…… 21 3.1.2. Phân tích thành phần tinh dầu thu được ……………………. 22 3.1.2.1. Phương pháp sắc ký lớp mỏng ……………………… 22 3.1.2.2. Phương pháp sắc ký khí kết hợp khối phổ …………… 25 3.2. Nghiên cứu thành phần hóa học của “Nến đất” sau khi cất tinh dầu ……………………………………………………………………… 29 3.2.1. Xác định độ tan của “Nến đất” ………………………… 29 3.2.2. Định tính dịch chiết toàn phần ………… 29 3.2.2.1. Định tính dịch chiết toàn phần bằng phản ứng hóa học 29 3.2.2.2. Định tính dịch chiết toàn phần bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng ………………………………………………… 29 3.2.3. Phân tích thành phần “Nến đất” sau khi cất tinh dầu… …. 32 3.2.3.1. Phân đoạn dịch chiết toàn phần ………… ………… 32 3.2.3.2. Phân tích thành phần các phân đoạn thu được bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng … …………………………… 32 3.2.3.3. Phân tích thành phần các phân đoạn thu được bằng phương pháp sắc ký khí kết hợp khối phổ …………………… 35 3.3. Bàn luận …………………………………………………………… 39 3.3.1. Nghiên cứu thành phần tinh dầu trong các mẫu “Nến đất” 39 3.3.2. Nghiên cứu thành phần các mẫu “Nến đất” sau khi cất tinh 41 dầu ………………………………………………………………… KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ………………………………………… 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DCM Phân đoạn dicloromethan GC-MS Sắc ký khí kết hợp khối phổ H Mẫu “Nến đất” thu tại Huế HT1 Mẫu “Nến đất” loại 1 thu tại Hà Tĩnh HT2 Mẫu “Nến đất” loại 2 thu tại Hà Tĩnh HT3 Mẫu “Nến đất” loại 3 thu tại Hà Tĩnh nH Phân đoạn n-hexan QP Mẫu “Nến đất” thu tại Quế Phong (Nghệ An) SKLM Sắc ký lớp mỏng T r Thời gian lưu V Mẫu “Nến đất” thu tại Vinh (Nghệ An) DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 1 Bảng 3.1. Hàm lượng tinh dầu trong các mẫu “Nến đất” 21 2 Bảng 3.2. Kết quả phân tích các mẫu tinh dầu “Nến đất” bằng GC-MS 26 3 Bảng 3.3. Kết quả phân tích phân đoạn nH bằng GC-MS 36 4 Bảng 3.4. Kết quả phân tích phân đoạn nH-DCM bằng GC-MS 37 5 Bảng 3.5. Công thức hóa học các hợp chất triterpenoid trong phân đoạn nH-DCM 38 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình Trang 1 Hình 1.1. Sinh tổng hợp thành phần terpenoid và phenolic trong nhựa cây 5 2 Hình 1.2. Sinh tổng hợp các hợp chất terpenoid trong nhựa cây 6 3 Hình 1.3. Một số khung triterpenoid phổ biến trong nhựa các cây họ Dầu (Dipterocarpaceae), họ Trám (Burseraceae) và họ Đào lộn hột (Anacardiaceae) 9 4 Hình 1.4. Phân nhóm các họ theo thành phần hóa học của nhựa cây 10 5 Hình 2.1. Mẫu “Nến đất” tại các địa phương 16 6 Hình 2.2. Bộ dụng cụ định lượng tinh dầu theo Dược điển Mỹ 18 7 Hình 3.1. Sắc ký đồ tinh dầu “Nến đất” quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254nm (A), 366nm (B) và sau khi phun thuốc thử hiện màu (C) 24 8 Hình 3.2. Sắc ký đồ dịch chiết toàn phần “Nến đất” sau khi cất tinh dầu quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254nm (A), 366nm (B) và sau khi phun thuốc thử hiện màu (C) 31 9 Hình 3.3. Sắc ký đồ phân đoạn nH-DCM và DCM quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254nm (A), 366nm (B) và sau khi phun thuốc thử hiện màu (C) 34 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Bảo vệ và chăm sóc sức khỏe phụ nữ sau khi sinh là một đề tài luôn thu hút được nhiều sự quan tâm trong cả y học hiện đại cũng như y học cổ truyền. Cùng với sự phát triển không ngừng của y học tiên tiến, các phương pháp phục hồi sức khỏe cho bà mẹ sau sinh không ngừng được cải tiến và đang ngày một trở nên tiện lợi, hiệu quả hơn. Bên cạnh đó, không thể không kể đến các kinh nghiệm dân gian vô cùng hay và độc đáo được nhân dân áp dụng, lưu truyền từ nhiều đời nay. Nhiệm vụ của người làm nghiên cứu khoa học không chỉ là tìm ra những cái mới mà còn là tìm hiểu nhằm giải thích các bài thuốc dân gian này theo quan điểm khoa học và phát triển chúng theo hướng hiện đại. “Nến đất” từ lâu đã được biết đến rộng rãi với vai trò đặc biệt quan trọng trong các ngành nghề thủ công và công nghiệp. Tuy nhiên, ít ai biết rằng từ bao đời nay, “Nến đất” đã được người dân các tỉnh khu vực Bắc Trung Bộ (Nghệ An, Hà Tĩnh) sử dụng như một bài thuốc xông hơ, sát trùng âm đạo cho phụ nữ sau khi sinh; dân gian cũng sử dụng “Nến đất” để xông phòng trong các trường hợp trẻ sơ sinh có biểu hiện đầy hơi, chướng bụng, quấy khóc, hoặc dùng xông hơ tránh gió cho mẹ và bé những khi thời tiết thay đổi. Kinh nghiệm này đã được minh chứng là hoàn toàn có hiệu quả trong nhiều trường hợp cụ thể. Tuy nhiên cho đến nay, chưa có nghiên cứu cụ thể nào về thành phần hóa học, nguồn gốc và tác dụng của “Nến đất” để làm minh chứng cho việc sử dụng chúng trong dân gian. Do đó, đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học của dược liệu “Nến đất”” được thực hiện với hai mục tiêu sau: 1. Xác định hàm lượng và thành phần tinh dầu trong “Nến đất”. 2. Xác định thành phần hóa học của dược liệu “Nến đất” sau khi cất tinh dầu. [...]... hàm lượng tinh dầu trong các mẫu Nến đất - Phân tích thành phần tinh dầu thu được 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học của Nến đất sau khi cất tinh dầu 2.3 Phương pháp nghiên cứu: 2.3.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu trong các mẫu Nến đất 2.3.1.1 Xác định hàm lượng tinh dầu trong các mẫu Nến đất - Định lượng tinh dầu trong Nến đất : Tinh dầu trong các mẫu nghiên cứu được định lượng bằng phương... [8] Thành phần sesquiterpen của các dammar cũng khác nhau giữa các loài, nhưng phải thừa nhận rằng phần lớn kết quả phân tích khối phổ cho thấy sự tương đồng về thành phần hóa học giữa các mẫu Điều này dẫn đến sự phức tạp trong việc xác định nguồn gốc mẫu nghiên cứu [8] Bằng phương pháp sắc ký khí kết hợp khối phổ (GC-MS), Pauline Burger và cộng sự [1] đã tiến hành nghiên cứu thành phần hóa học của. .. (Burseraceae) và họ Đào lộn hột (Anacardiaceae) [16] Tùy theo loài, thành phần hóa học của nhựa ngoài phụ thuộc vào nguồn gốc thực vật còn thay đổi theo vị trí địa lý, điều kiện khí hậu, môi trường [1] Pauline Burger đã phân nhóm các họ theo thành phần hóa học chính của nhựa cây như Hình 1.4 [1] 10 Hình 1.4: Phân nhóm các họ theo thành phần hóa học của nhựa cây [1] 1.3 Tổng quan về các loại dammar 1.3.1 Định... Wiley 0,25μm), đối chiếu kết quả với 19 20 2.3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học của Nến đất sau khi cất tinh dầu - Xác định độ tan của Nến đất sau khi cất tinh dầu trong các dung môi khác nhau: hòa tan một lượng chính xác giống nhau các mẫu Nến đất sau khi cất tinh dầu vào cùng một thể tích các dung môi khác nhau Đánh giá bằng cảm quan kết luận độ tan của mẫu trong các dung môi: cloroform, n-hexan,... gốc thực vật của chúng ở một số vùng cũng như trong các văn bản khoa học [4], [1] Mặc dù nhựa của tất cả các loài trong họ Dầu (Dipterocarpaceae) đều được nghiên cứu từ quan điểm hóa học, việc xác định rõ ràng một loại nhựa chưa biết, tức là định danh nguồn gốc loài cây cho nhựa đó cũng là một vấn đề phức tạp [11] 1.3.2 Thành phần hóa học của dammar Các dammar nói chung đều là hỗn hợp của các hợp chất... 3.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu trong các mẫu Nến đất 3.1.1 Xác định hàm lượng tinh dầu trong các mẫu Nến đất Tinh dầu được tách ra khỏi dược liệu bằng phương pháp cất kéo hơi nước Quá trình định lượng tinh dầu được thực hiện bằng bộ dụng cụ định lượng tinh dầu theo dược điển Mỹ Mỗi mẫu được tiến hành định lượng 3 lần, lấy kết quả trung bình Kết quả hàm lượng tinh dầu trong các mẫu nghiên cứu. .. sesquiterpen hình thành sau khi gây tổn thương cây như α-bisabolen, δ-cadinen, được tổng hợp nhờ sự xúc tác của các enzym đặc hiệu chỉ xúc tác cho một phản ứng [8] 1.2.3 Thành phần hóa học của nhựa dầu Các loại nhựa dầu thường thu được từ một số họ như: họ Thông (Pinaceae), họ Dầu (Dipterocarpaceae), họ Trám (Burseraceae) Về mặt hóa học, nhựa dầu gồm hai phần: phần bay hơi được (tinh dầu) và phần không bay... xem mẫu nghiên cứu có phải là nhựa hay không trong nhiều trường hợp bởi cấu trúc hóa học của các chất đôi khi rất khó xác định cụ thể Bên cạnh đó, vai trò sinh thái học của các loại nhựa này còn ít được biết đến Vì vậy, mẫu có phải là nhựa hay không là kết luận 5 khó chắc chắn [8] Nắm rõ quá trình sinh tổng hợp các nhựa phenolic và terpenoid trong cây cũng như biết được một số thành phần hóa học của chúng... đong…) 2.1.2.2 Hóa chất, dung môi  n-hexan, dicloromethan đạt tiêu chuẩn phân tích của hãng Scharlab (Tây Ban Nha)  Cloroform dùng phân tích GC-MS đạt tiêu chuẩn phân tích của hãng Merck (Đức)  Các dung môi và hóa chất khác: n-hexan, toluen, ethyl acetat, cloroform, cồn 96o… đạt tiêu chuẩn phân tích (Trung Quốc) 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu trong các mẫu Nến đất - Xác... dầu hỏa để hoàn thiện sản phẩm Mặc dù được sử dụng tương đối phổ biến nhưng về mặt nguồn gốc cũng như thành phần hóa học, Nến đất hiện chưa được nghiên cứu một cách cụ thể 1.2 Tổng quan về nhựa dầu 1.2.1 Các khái niệm cơ bản - Nhựa thực vật là hỗn hợp tan trong dầu của terpenic và/hoặc các thành phần phenolic thứ cấp có thể bay hơi được hoặc không, thường được tiết ra từ các cấu trúc đặc biệt bên . ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  DƯƠNG THỊ THANH MAI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA DƯỢC LIỆU “NẾN ĐẤT” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2015 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC. 17 2.2. Nội dung nghiên cứu …………………………………………… 17 2.2.1. Nghiên cứu thành phần tinh dầu trong các mẫu Nến đất … 17 2.2.2. Nghiên cứu thành phần hóa học của Nến đất sau khi cất tinh. có nghiên cứu cụ thể nào về thành phần hóa học, nguồn gốc và tác dụng của Nến đất để làm minh chứng cho việc sử dụng chúng trong dân gian. Do đó, đề tài Nghiên cứu thành phần hóa học của dược