 TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐẶNG THỊ HẰNG NGHIÊN CỨU NÂNG CAO KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP KHÁNG SINH TỪ STREPTOMYCES 166.28 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2014  TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐẶNG THỊ HẰNG NGHIÊN CỨU NÂNG CAO KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP KHÁNG SINH TỪ STREPTOMYCES 166.28 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CH    PGS. TS Cao Văn Thu HÀ NỘI 2014 LỜI CẢM ƠN , tôi xin bàPGS. TS Cao Văn Thu,    - Sinh h    Nam. ,    trong   thâ   Hà Nội, ngày 5 tháng 8 năm 2014 Học viên Đặng Thị Hằng Mục lục  1  2  2 1.1.1.  2  2 1.1.3 2 Streptomyces 3  3 1.2.2.  3  4 Streptomyces  4  5 1. 5  5 1.4. Chit tách và tinh ch kháng sinh t dch lên men 6 1.4.1. M 6  6 nh cu trúc hóa hc ca cht kháng sinh 6 1.5.1. Ph t ngoi  kh kin 6 1.5.2. Ph hng ngoi (IR) 6 1.5.3. Ph khi (MS) 7 1.5.4. Ph cng t ht nhân (NMR) 8 1.6Streptomyces 166.28 9  9 1.6 9 1.7. Streptomyces 166.28 9 1.7.1.  9 1.7.2.  9 1.7.3.  9 1.8. Streptomyces 10 Streptomyces viridifaciens VlmI 10 1.8.2.  Streptomyces sp. IMV-70 11 1.8.3.   Streptomyces fradiae PTZ0025 12 1.8.4. Các pyramidacin A  D, 3-Hydroxyquinoline-2-carboxamide và các Streptomyces sp. DGC1 13            Streptomyces orientalis 16  18  18  18  20 2.2.  20  20  21  22  22  23  24  24  25  26 2.2.10.   26  28  28 3.1.1. Sàng  28  29  31  33  34  37  37  38  40  41  44  46  46  46 3.5.3.  46  47  47  51  51  52 4.3.  53  56  56  56 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ADN Acid DeoxyrubiNucleic B. cereus Bacillus cereus CW Cell wall ESI MS Electrospray ionization mass S. flexneri Shighella flexneri HTKS  MT g MTdt  MIC Minimum inhibitory concentration NMR Nuclear Magnetic Resonance VSV  SLNN    G(+)  G(-) Gram âm DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU STT  Trang 1 Streptomyces  5 2 - A 8 3  C (2  4) 10 4 - hy- droxyquinoline-2-carboxamide 11 5  13 6  13 7 1 14 8  14 9 LNN 22 10  23 11  23 12  26 13   34 14   34 15   36 16  36 17  37 18  S. flexneri) 37 19  3.11          38 20  39  21              sinh L1 40 22  (: B.cereus) 41 23   42 24   43 25  (: B.cereus) 44 26 8: D kin ph NMR v khung phenoxazone ca acti- nomycin D (1) và kháng sinh 2 (2) 48 27  52 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ STT Tên hình Trang 1 Hình 1  3 2  7 9 3  47 [...]... tài nghiên cứu về chủng x khuẩn Streptomyces 166. 28 và thu đƣ c m t số kết quả nhƣ sau: phổ t c dụng r ng, nhƣng hiệu suất sinh tổng h p kh ng sinh còn thấp, hiệu suất tinh chế chƣa cao, chƣa x c định đƣ c cấu tr c của chất kh ng sinh chính Do đó, ch ng tôi lựa chọn đề tài Nghiên cứu nâng cao khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ Streptomyces 166. 28 với ba mục tiêu sau: 1 Nâng cao ho t tính kháng sinh. .. con đƣờng sinh tổng h p, con đƣờng n tổng h p và con đƣờng tổng h p ho học Trong đó, con đƣờng sinh tổng h p kh ng sinh vẫn đƣ c s dụng chủ yếu Trong các kháng sinh có nguồn gốc vi sinh vật thì có khoảng 75% thu c chi x khuẩn Streptomyces[ 13, 16] Do đó, b môn Vi sinh – Sinh học trƣờng Đ i học Dƣ c Hà N i đã tập trung vào nghiên cứu chi x khuẩn này trong đó có chủng x khuẩn Streptomyces 166. 28 Trƣớc... nhất thu c chi Streptomyces có khả năng t o ra nhiều kh ng sinh có cấu tr c phức t p Trong tổng số c c kh ng sinh đã đƣ c tìm thấy do x khuẩn tổng h p thì có tới 55% là từ Streptomyces [22, 27] Bảng 1.1 dƣới đây giới thiệu m t số kh ng sinh do Streptomyces tổng h p [3] Bảng 1.1: M t số kh ng sinh do Streptomyces tổng h p Chất kháng sinh Chủng sinh tổng h p Phổ t c dụng Actinomycin S antibioticus Ung thƣ... nhân sinh học gen nhảy Các tác nhân vật lý và hóa học với liều lƣ ng và thời gian thích h p sẽ giết chết hầu hết các vi sinh vật Các cá th sống sót sẽ có sự biến đổi ở nhiễm sắc th , làm thay đổi các tính tr ng dẫn đến hoặc là mất (hay giảm) khả năng tổng h p kháng sinh (gọi là đ t biến âm tính), hoặc là tăng khả năng tổng h p kháng sinh (gọi là đ t biến dƣơng tính) Nhằm t o ra các chủng có khả năng sinh. .. cấu tr c hóa học của thành phần kh ng sinh chính thu đƣ c, cần đo nhiệt đ nóng chảy; iện giải phổ UV, IR, phổ khối ESI MS, phổ c ng hƣởng từ h t nhân (1H-NMR, 13C NMR, DEPT, COSY, HSQC, HMBC) 9 1.8 M t số nghiên cứu mới trong sinh tổng h p kh ng sinh từ Streptomyces 1.8.1 Quy tắc sinh tổng h p valanimycin từ Streptomyces viridifaciens: đặc tính của VlmI Nghiên cứu đƣ c thực hiện ởi c c t c giả khoa... tính kháng sinh ằng chọn lọc, cải t o giống 2 Nâng cao hiệu suất chiết t ch kháng sinh 3 Nghiên cứu cấu tr c hóa học của thành phần kh ng sinh chính 1 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Đ i cƣơng về kh ng sinh 1.1.1 Định nghĩa Kháng sinh là tất cả c c h p chất có nguồn gốc tự nhiên hay tổng h p, có t c dụng ức chế hay tiêu diệt chọn lọc đối với c c vi sinh vật (VSV) nhiễm sinh (c ng nhƣ cả với tế ào ung thƣ) ở nồng... gen 16S rRNA, nghiên cứu đã cho thấy Streptomyces sp DGC1có 99% tr ng khớp với trình tự gen 16S rRNA của Streptomyces atrovirens chủng NRRL B-16357 [21] 1.8.5 Nghiên cứu sản xuất kh ng sinh vancomycin từ x khuẩn Streptomyces orientalis Đây là công trình nghiên cứu đƣ c thực hiện ởi c c nhà khoa học thu c Viện Công nghệ sinh học (Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam) C c t c giả nghiên cứu điều kiện... ƣớc nghiên cứu tiếp theo [11] 1.6.2 Môi trƣờng lên men chìm C c nghiên cứu sơ trƣớc đó đã x c định đƣ c MT2dt là MT lên men chìm tốt nhất Tuy nhiên, ta cần x c định tiếp c c iện ph p cải thiện hiệu suất của qu trình lên men chìm nhằm đƣa chủng vào sản xuất quy mô công nghiệp [11] 1.7 Những vấn đề cần nghiên cứu tiếp về Streptomyces 166. 28 1.7.1 Cải t o giống Đ t o ra chủng có khả năng siêu sinh tổng. .. đƣ c đƣa vào chữa bệnh từ hơn 40 năm qua, nhƣng ngày nay vẫn đƣ c coi là kháng sinh quan trọng do hiệu quả chữa bệnh cao khi dùng m t mình hoặc phối h p với các kháng sinh khác, chống l i các vi khuẩn đã nhờn với nhiều lo i kháng sinh thông dụng Đầu tiên, các nhà khoa học Viện Công nghệ sinh học áp dụng phƣơng ph p gây chủng đ t biến bằng tia UV nhằm nâng cao ho t tính kháng sinh của biến chủng S orientalis... UV nhằm nâng cao ho t tính kháng sinh của biến chủng S orientalis 4912 Kết quả nghiên cứu khả năng sống sót của tế bào trần và bào t chủng S orientalis 4912 sau khi x lý UV ở đ sống sót từ 1 - 10%, ki m tra ho t tính kh ng sinh theo phƣơng ph p cục th ch cho thấy, khả năng sinh tổng h p kháng sinh của chủng này tăng lên từ 8 - 30,3% đối với x lý bào t và 66,33% đối với x lý tế bào trần Dựa trên môi .     Nghiên cứu nâng cao khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ Streptomyces 166. 28 ba  sau: 1.  kháng sinh  TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐẶNG THỊ HẰNG NGHIÊN CỨU NÂNG CAO KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP KHÁNG SINH TỪ STREPTOMYCES 166. 28 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CH. TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐẶNG THỊ HẰNG NGHIÊN CỨU NÂNG CAO KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP KHÁNG SINH TỪ STREPTOMYCES 166. 28 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC