CÔNG TY CỔ PHẦN DỊCH VỤ KHCN SẮC KÝ – HẢI ĐĂNG KĐT: KỸ THUẬT PHÂN TÍCH NHANH VI SINH BẰNG PETRIFILM VÀ MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG ĐỊNH DANH TRONG THỰC PHẨM, THỦY SẢN 23-24/ 08/2012 Phương pháp phát quang sinh học ATP trong giám sát vệ sinh • Phân tử Adenosine triphosphate (ATP) được tìm thấy trong tất cả các tế bào sống nên sự phát hiện ATP là dấu hiệu để nhận biết vật chất sống đang tồn tại. • ATP có thể phát hiện một cách nhanh chóng bởi lượng ánh sáng phát ra thông qua sự kết hợp với enzyme luciferase nhờ một máy đo ánh sáng. Phương pháp phát quang sinh học ATP trong giám sát vệ sinh Nguyên tắc chung: - Mẫu thu bằng tăm bông vô trùng. - Cho vào dung dịch ly trích ATP, xử lý với ATPase và cho phản ứng phát sáng. I. KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG KHÔNG KHÍ • Nên được theo dõi ít nhất 2 tuần/lần, tùy vào kết quả kiểm tra • Tiến hành: KIỂM SOÁT MÔI TRƯỜNG PTN VI SINH • < 15 KL/đĩa thì chất lượng vi sinh của không khí là phù hợp • > 15 KL/đĩa tiến hành xử lý lại PTN  Đặt mt PCA tại các vị trí khác nhau trong PTN  Đặt 2 đĩa tại vị trí hay qua lại  Thời gian đặt đĩa 15 phút  Ủ ở 35 0 C/ (48 ± 2)h  Đếm các KL trên các đĩa và ghi nhận kết quả KIỂM SOÁT MÔI TRƯỜNG PTN VI SINH 2. KIỂM SOÁT CÁC BỀ MẶT PHÒNG THÍ NGHIỆM Kiểm soát VSV trên các bề mặt PTN: Qui định cách lấy mẫu bề mặt bằng kỹ thuật áp đĩa/que tăm bông quẹt trên bề mặt - Que tăm bông: Que vô trùng đựng trong tuýp - Thạch đĩa petri: ĐK: 65mm, môi trường phù hợp với VSV đích (bề mặt thạch lồi) - Lấy mẫu bề mặt thạch Áp mặt bề mặt thạch lên bề mặt cần thử/ thời gian tiếp xúc 10giây. - Que tăm bông Thấm ướt tăm bông lấy mẫu trên diện tích 20-100cm 2 . Cho tăm bông vào tuýp dd pha loãng. CẤY MẪU - Đ/v mẫu tăm bông Lắc đều ống 30giây Pha loãng nếu cần. Cấy bằng kỹ thuật hộp đổ (1ml) hay trải trang (0,1ml) - Đ/v chỉ tiêu Listeria monocytogenes, Salmonella spp. Lấy mẫu Swab, tăng sinh trên mt chọn lọc - Đ/v mẫu bề mặt thạch Ủ nhiệt độ thích hợp - Đối với bề mặt thạch Đếm CFU KL đặc trưng - Đối với Swab Đếm CFU trên mỗi đĩa và xác nhận - Đối với tăng sinh Theo qui trình của từng loại VSV ĐỌC KẾT QUẢ Số CFU/cm 2 : A FN Ns × = F: V ml của dd pha loãng trong tuýp hay trong túi nhựa A: S bề mặt quét (cm 2 ) TÍNH KẾT QUẢ dnnV C N )1,0( 21 + = ∑ ∑C: tổng KL trên các đĩa đếm được V: thể tích cấy n 1 , n 2 : số đĩa ở nồng độ thứ nhất và thứ hai đếm được d: độ pha loãng ban đầu chọn đếm Công thức (CFU/ml) [...]... khlạc mọc Một số phương pháp phân tích vi sinh vật • Phương pháp đếm khuẩn lạc: Phương pháp đếm khuẩn lạc cho phép xác định số lượng tế bào vi sinh vật còn sống hiện diện trong mẫu Tế bào sống là tế bào có khả năng phân chia tạo thành khuẩn lạc trên môi trường chọn lọc và không chọn lọc Do vậy phương pháp này có tên là phương pháp đếm khuẩn lạc hay đếm đĩa Một số phương pháp phân tích vi sinh vật Phương... chủng đối chiếu chỉ được sử dụng như chủng làm vi c Phần II: Một số phương pháp phân tích vi sinh vật • Phương pháp màng lọc - Thường dùng định lượng vsv chỉ thị trong mâũ nước khi tiến hành các thử nghiệm môi trường nơi có mật độ vsv tương đối thấp - Phương pháp này gồm bước lọc để tập trung vsv trong một mẫu nước trên màng lọc và xác định số tế bào dựa vào số khlạc đếm được sau khi đặt màng lọc lên... với sản phẩm dể bị hỏng như nhuyễn thể thì kiểm tra trong vòng 24h sau khi lấy mẫu Cá, sữa nguyên liệu trong vòng 36h KỸ THUẬT LẤY MẪU VÀ BẢO QUẢN MẪU 4 Bảo quản: Nhiệt độ bảo quản: - Sản phẩm không dễ phân hủy: nhiệt độ mt từ 180C đến 270C - Sản phẩm đông lạnh và đông lạnh sâu: < -150C, tốt nhất < - 180C - Các sản phẩm khác dễ phân hủy ở nhiệt độ mt, kể cả thực phẩm bị hư hỏng: từ 30C ± 20C KỸ THUẬT... trong suốt quá trình thao tác, trừ trường hợp có tiêu chuẩn quy định - Trường hợp định lượng các bào tử, vi c xử lý nhiệt huyền phù ban đầu cần thực hiện ngay sau khi chuẩn bị và làm nguội nhanh KỸ THUẬT CHUẨN BỊ DUNG DỊCH PHA LOÃNG VÀ CHUẨN BỊ MẪU d2/ Các dung dịch pha loãng thập phân tiếp theo: - Dùng pipet vô trùng lấy 1ml huyền phù ban đầu với sai số ± 5% cho vào ống nghiệm chứa 9 ml dịch pha loãng... làm tan băng 6.2/ Sản phẩm cứng và sản phẩm khô: - Không được dập mẫu quá 2,5p/lần - Nếu không dập mẫu được thì phải xay hoặc nghiền nhưng không được quá 1 phút 6.3/ Sản phẩm lỏng và không sánh đặc: Mẫu thử trước khi phân tích phải lắc đều KỸ THUẬT CHUẨN BỊ DUNG DỊCH PHA LOÃNG VÀ CHUẨN BỊ MẪU 6.4/ Sản phẩm không đồng nhất: - Lấy mẫu bằng cách ước lượng từng phần, đại diện cho các phần trong mẫu ban đầu... các sản phẩm ở dạng nguyên liệu KỸ THUẬT CHUẨN BỊ DUNG DỊCH PHA LOÃNG VÀ CHUẨN BỊ MẪU 6.10/ Các món ăn sơ chế: - Có bao gói: dùng kéo hoặc dao vô trùng để tháo bỏ đối với bào bì mềm Đối với bao bì cứng phải khử trùng thật kỹ ở ngoài bằng cồn Tất cả thao tác đều trong điều kiện vô trùng 6.11/ Cá tươi nguyên con: Lấy một miếng mẫu hình khối từ cơ lưng, cắt và nghiền nhỏ trong dịch pha loãng KỸ THUẬT... thì chỉ thực hiện trong khoảng thời gian ngắn đủ để chuyển mẫu KỸ THUẬT LẤY MẪU VÀ BẢO QUẢN MẪU 2 Vận chuyển: - Vận chuyển bằng pp nhanh nhất tới ptn - Mẫu được bao gói sao cho tránh bị rò rỉ hoặc vỡ - Trên nhãn sản phẩm phải ghi rõ có cần bảo quản lạnh hay không - Không sử dụng đá vụn để bảo quản mẫu Nhiệt độ trong quá trình vận chuyển: - Sản phẩm không dễ phân hủy: nhiệt độ phòng ( . PHẦN DỊCH VỤ KHCN SẮC KÝ – HẢI ĐĂNG KĐT: KỸ THUẬT PHÂN TÍCH NHANH VI SINH BẰNG PETRIFILM VÀ MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG ĐỊNH DANH TRONG THỰC PHẨM, THỦY SẢN 23-24/ 08/ 2012 Phương pháp phát quang sinh. là < C, tốt nhất là < - 18 - 18 0 0 C) C) - Sản phẩm dễ phân hủy ở nhiệt độ môi trường: 1 - Sản phẩm dễ phân hủy ở nhiệt độ môi trường: 1 0 0 C – 8 C – 8 0 0 C. C. KỸ THUẬT LẤY MẪU VÀ. bảo quản: Nhiệt độ bảo quản: - Sản phẩm không dễ phân hủy: nhiệt độ mt từ - Sản phẩm không dễ phân hủy: nhiệt độ mt từ 18 18 0 0 C đến 27 C đến 27 0 0 C. C. - Sản phẩm đông lạnh và đông lạnh