Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẶT VẤN ĐÈ•Hiện nay, nhu cầu về các loại thuốc an thần, gây ngủ, chống co giật ở nước ta ngày càng lớn. Phần lớn các thuốc có tác dụng này đều có nguồn gốc hóa dược và phải nhập ngoại. Trong đó Seduxen và các dẫn chất của nó chiếm tỷ trọng cao: Seduxen, Valium, Mekoluxen 5 mg,... Tuy nhiên, Seduxen lại có nhược điểm lớn là gây nghiện nên việc phân phối và sử dụng được Bộ Y tể quản lý rất chặt chẽ. Do đó, nhu cầu về một loại thuốc an thần, gây ngủ, chống co giật nhưng không gây nghiện để sử dụng cho bệnh nhân ngày càng trở nên cấp thiết.Rotundin là một alcaloid được chiết từ củ của một số loài cây có tên gọi chung là bình vôi. Rotundin có tác dụng an thần, giảm đau, gây ngủ rất tốt, ít có tác dụng phụ so với các thuốc nguồn gốc hóa dược và không gây nghiện. Hiện nay, đã có nhiều cơ sở trong nước sản xuất các sản phẩm thuốc từ rotundin như: Rotunda (Dopharma), Rotundin 30 mg (Pharbaco),...Các sản phẩm này đang được tiêu thụ khá nhiều trên thị trường. Tuy nhiên, khả năng đáp ứng về rotundin dược dụng trong nước còn ít, phần lớn phải nhập từ Trung Quốc, trong khi nguồn dược liệu củ bình vôi ở nước ta khá phong phú. Do đó, vấn đề đặt ra là phải nghiên cứu, xây dựng được một quy trình chiết xuất rotundin đạt hiệu quả cao, có khả năng ứng dụng trong công nghiệp để tận dụng nguồn dược liệu sẵn có. Vì vậy, chúng tôi thực hiện đề tài Nghiên cứu lựa chọn phương pháp chiết xuất rotundin từ củ bình vôi vớimong muốn góp phần vào việc tìm ra một phương pháp chiết xuất rotundin có thể áp dụng vào thực tế sản xuất. Đề tài gồm các mục tiêu sau:1. Lựa chọn dung mồi để chiết rotundin cho hiệu suất cao, quá trìnhchiết dễ thưc hiên.• •2. Lựa chọn nhiệt độ chiết thích hợp với dung môi đã chọn.3. Lựa chọn số lần chiết thích hợp.
Bộ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI • • • • LÊ HOÀNG QUÂN NGHIÊN CỨU LựA CHỌN PHƯƠNG PHÁP CHIÉT XUẤT ROTUNDIN TỪ củ BÌNH VÔI KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP DƯỢC sĩ KHÓA 2005 - 2010 Người hướng dẫn: KS.DS. Nguyễn Thị Việt Hưong Nơi thực hiện: BM Công nghiệp dược ĐH Dược HN Thời gian thực hiện: Từ 02/2010 đến 05/2010 KLim:xụ HÀ NỘI - 2010 Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cô giáo KS.DS. Nguyễn Thị Việt Hương, người đã trực tiếp hướng dẫn, tận tình chỉ bảo và giúp đỡ em hoàn thành khóa luận này. Em xin chân thành cảm ơn toàn thể thầy cô giáo, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Công nghiệp dược đã tạo điều kiện thuận lợi và giúp đỡ em hoàn thành khóa luận đúng thời hạn. Em cũng xin gửi lời cảm ơn tới các thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội đã dạy dỗ và chỉ bảo em trong những năm tháng học tập ở trường. Cuối cùng, em xin cảm on gia đình, người thân, bạn bè đã động viên và giúp đỡ em trong suốt thời gian qua. Do thời gian có hạn và trình độ bản thân còn nhiều hạn chế nên khóa luận không thể tránh khỏi những thiếu sót. Vì vậy, em rất mong nhận được sự chỉ bảo của các thầy cô và sự góp ý của bạn bè. LỜI CẢM ƠN! Em xỉn chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 5 năm 2010. Sinh viên Lê Hoàng Quân Trang Chú giải chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình vẽ, đồ thị Đặt vấn đề 1 Chương 1. TỔNG QUAN . 2 1.1. Cây bình vôi 2 1.1.1. Đặc điểm thực vật 2 1.1.2. Phân bố và sinh thái 4 1.1.3. Bộ phận dùng và chế biến 6 1.1.4. Thành phần hóa học 6 1.1.5. ứng dụng của củ bình vôi 7 1.2. Sản phẩm - rotundin 8 1.2.1. Công thức hóa học và tính chất 8 1.2.2. Định tính và định lượng 9 1.2.3. Tác dụng dược lý và ứng dụng 9 1.2.4. Một số chế phẩm có rotundin 10 1.3. Chiết xuất rotundin từ củ bình vôi 11 Chương 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚXJ 12 2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị 12 2.1.1. Nguyên liệu 12 2.1.2. Hóa chất, dung môi 12 2.1.3. Thiết bị, dụng cụ 12 2.2. Nội dung nghiên cứu 12 2.2.1. Nghiên cứu lựa chọn dung môi chiết xuất 12 2.2.2. Nghiên cứu lựa chọn nhiệt độ chiết 13 2.2.3. Nghiên cứu lựa chọn số lần chiết 13 MỤC LỤC 2.3. Phương pháp thực nghiệm 13 2.3.1. Phương pháp định lượng 13 2.3.2. Phương pháp chiết xuất 15 Chương 3. THựC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1. Định lượng rotundin trong dược liệu củ bình vôi 21 3.2. Lựa chọn dung môi chiết xuất 21 3.2.1. Tiến hành phưoTig pháp chiết với dung môi là nước acid 21 3.2.2. Tiến hành phương pháp chiết với dung môi là ethanol 96® 23 3.2.3. Tiến hành phương pháp chiết với dung môi là dầu hỏa 25 3.2.4. Bàn luận 29 3.3. Lựa chọn nhiệt độ chiết 30 3.4. Lựa chọn số lần chiết 33 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XƯẨT 37 Kết luận 37 Đề xuất 37 Tài liệu tham khảo CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT dd dung dịch. DĐVN IV Dược điển Việt Nam IV. pp phương pháp. TB trung bình. Trang Bảng 3.1. Hàm lượng rotundin trong dược liệu 21 Bảng 3.2. Khối lượng sản phẩm ở pp chiết bằng nước acid 23 Bảng 3.3. Hàm lượng rotundin trong sản phẩm của pp chiết bằng nước acid 24 Bảng 3.4. Khối lượng sản phẩm ở pp chiết bằng ethanol 96^ 24 Bảng 3.5. Hàm lượng rotundin trong sản phẩm của pp chiết bằng ethanol 96® 25 Bảng 3.6. Khối lượng sản phẩm ở pp chiết bằng dầu hỏa 26 Bảng 3.7. Hàm lượng rotundin trong sản phẩm của pp chiết bằng dầu hỏa 26 Bảng 3.8. Khối lượng sản phẩm tương ứng với các pp chiết xuất 27 Bảng 3.9. Hiệu suất tương ứng với các pp chiết xuất 27 Bảng 3.10. Hàm lượng rotundin trong sản phẩm ở các pp chiết xuất 28 Bảng 3.1 ỉ. Khối lượng sản phẩm ở các nhiệt độ chiết tương ứng 31 Bảng 3.12. Hàm lượng rotundin trong sản phẩm ở các nhiệt độ chiết tương ứng 31 Bảng 3.13. Hiệu suất tương ửng ở các nhiệt độ chiết 32 Bảng 3.14. Khối lượng rotundin thô ở 5 lần chiết của mỗi mẻ dược liệu 34 Bảng 3.15. Tỷ lệ % khối lượng rotundin thô của mỗi lần chiết so với tổng khối lưọng 35 DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐÒ THỊ Trang Hình 3.1. Hiệu suất tương ứng với các pp chiết xuất 28 Hình 3.2. Hiệu suất tương ứng ở các nhiệt độ chiết 32 Hĩnh 3.3. Tỷ lệ % khối lượng rotundin thô của mỗi lần chiết so với tổng khối lượng 35 ĐẶT VẤN ĐÈ • Hiện nay, nhu cầu về các loại thuốc an thần, gây ngủ, chống co giật ở nước ta ngày càng lớn. Phần lớn các thuốc có tác dụng này đều có nguồn gốc hóa dược và phải nhập ngoại. Trong đó Seduxen và các dẫn chất của nó chiếm tỷ trọng cao: Seduxen, Valium, Mekoluxen 5 mg, Tuy nhiên, Seduxen lại có nhược điểm lớn là gây nghiện nên việc phân phối và sử dụng được Bộ Y tể quản lý rất chặt chẽ. Do đó, nhu cầu về một loại thuốc an thần, gây ngủ, chống co giật nhưng không gây nghiện để sử dụng cho bệnh nhân ngày càng trở nên cấp thiết. Rotundin là một alcaloid được chiết từ củ của một số loài cây có tên gọi chung là bình vôi. Rotundin có tác dụng an thần, giảm đau, gây ngủ rất tốt, ít có tác dụng phụ so với các thuốc nguồn gốc hóa dược và không gây nghiện. Hiện nay, đã có nhiều cơ sở trong nước sản xuất các sản phẩm thuốc từ rotundin như: Rotunda (Dopharma), Rotundin 30 mg (Pharbaco), Các sản phẩm này đang được tiêu thụ khá nhiều trên thị trường. Tuy nhiên, khả năng đáp ứng về rotundin dược dụng trong nước còn ít, phần lớn phải nhập từ Trung Quốc, trong khi nguồn dược liệu củ bình vôi ở nước ta khá phong phú. Do đó, vấn đề đặt ra là phải nghiên cứu, xây dựng được một quy trình chiết xuất rotundin đạt hiệu quả cao, có khả năng ứng dụng trong công nghiệp để tận dụng nguồn dược liệu sẵn có. Vì vậy, chúng tôi thực hiện đề tài Nghiên cứu lựa chọn phương pháp chiết xuất rotundin từ củ bình vôi với mong muốn góp phần vào việc tìm ra một phương pháp chiết xuất rotundin có thể áp dụng vào thực tế sản xuất. Đề tài gồm các mục tiêu sau: 1. Lựa chọn dung mồi để chiết rotundin cho hiệu suất cao, quá trình chiết dễ thưc hiên. • • 2. Lựa chọn nhiệt độ chiết thích hợp với dung môi đã chọn. 3. Lựa chọn số lần chiết thích hợp. Chương 1. TỎNG QUAN 1.1. Cây bình vôi. Nguồn dược liệu để chiết xuất rotundin ở Việt Nam là củ của cây bình vôi. - Tên khoa học: Bình vôi là tên gọi của nhiều loài cây là dây leo có rễ củ thuộc chi Stephanỉa Lour., họ Tiết dê {Menỉsperamaceae) [4]. - Tên khác: Cây củ một, củ mối tròn, dây mối trơn, củ gà ấp, - Hàm lượng rotundin trong củ bình vôi dao động trong khoảng từ 0,21% đến 3,55% tính theo dược liệu khô [4'. 1.1.1. Đặc điểm thực vật của cây bình vôi [4], + Loài Stephanỉa glabra (Roxb.) Miers: Thân leo, phát triển từ củ hình tròn, củ thưÒTig nằm ở khe đá, vỏ củ có các nốt sần, đôi khi có những rãnh nhỏ ngang dọc. Nhựa từ thân lá và lá không mang màu. Lá đơn, mọc so le, mép lá nguyên, đôi khi hơi chia thùy phần ngọn lá. Toàn thân và lá không có lông. Cuống lá dài từ 6 - 25 cm, gốc hơi phình lên và cong. Phiến lá hình tim, ngọn lá thuôn nhọn, mặt dưới xanh lợt. Lá có từ 9 — 11 gân xếp tỏa tròn do cuống lá dính vào 1/3 phiến lá tính từ gốc lá. Cụm hoa đực dạng tán kép, cuống cụm hoa dài 3 - 12 cm, mỗi cuống cụm hoa gồm nhiều tán, mỗi tán lại có nhiều tán cấp II, mỗi cuống tán cấp 2 mang 4 tán cấp III, kết thúc gồm 3 hoa với cuống của hoa rất ngắn. Hoa đực gồm 6 đài rời xếp thành 3 vòng (3 + 3), kích thước gần như bằng nhau. Đài hình trứng hẹp, chiều dài 1,5 mm. Ba cánh hoa hình trứng màu xanh khi còn trong nụ và chuyển màu vàng khi hoa nở, gốc cánh hoa đôi khi có thể tuyến. Bộ nhị hàn liền thành 1 trụ với 6 bao phấn màu vàng nhạt xếp thành vòng tròn, trên 1 trụ do chỉ nhị hàn liền tạo thành cột ngắn 0,5 - 1 mm. Khi hoa nở các bao phấn mở nắp ngang ra xung quanh. Hạt phấn nhỏ màu vàng. Cụm hoa cái dạng xim tán, cuống các bông hoa rất ngắn nên các bông hoa xếp sít vào nhau thành dạng đầu. Mỗi đầu gồm 2 0 -7 0 bông hoa (sau cho 20-70 quả). Cuống cụm hoa dài 2 - 5 cm. Hoa cái bất đối xứng. Mỗi hoa có 1 lá đài hình cánh hoa xếp lệch về 1 phía của hoa. Bầu hình trứng, núm nhụy chia 4 - 5 thùy dạng gai nhỏ và hầu như không có vòi nhụy. Quả hạch hình trứng ngược dài 5 - 6 mm, rộng 4 - 5 mm. vỏ quả ngoài nhẵn, lúc non màu xanh, chuyển sang màu vàng rồi đỏ sẫm khi chín. Hạt hình trứng ngược, cụt một đầu, vỏ hạch cứng chia nhiều vạch (17-20 vạch). Giá noãn có lỗ thủng ở giữa. Mùa hoa: Tháng 2-4, mùa quả tháng 5-6. + Loài Stephanỉa kuinanensis H. s. Lo et M. Yang: Thân leo dài 2 - 3 m, củ tròn, bề mặt vỏ củ có nhiều nốt sần. Toàn cây không có lông, lá có cuống, phiến lá dạng tam giác, chóp lá nhọn, gốc lá thay đổi từ từ đến gần bằng ít khi hơi lõm nông và rộng. Gân chính 9-10 chiếc, xếp dạng chân vịt, hệ gân phụ dạng mạng rõ. Cụm hoa đực xim tán kép mọc ở nách lá, cuống cụm hoa dạng sợi nhỏ dài 1-3,5 cm. Đỉnh cuống cum hoa có 6 - 1 cuống tán giả (xim tán) dài 0,6 - 0.8 cm. Gốc mỗi cuống tán giả có 1 lá bắc hình mác nhỏ dạng vạch. Mỗi tán giả có 5 - 6 xim nhỏ. Mỗi xim nhỏ có 5 - 6 hoa. Hoa đực nhỏ có cuống ngắn 0,5 mm, có 6 lá đài xếp 2 vòng, 3 lá đài vòng ngoài hình mác đảo hẹp, dài khoảng 1 mm, rộng 0,3 mm, 3 lá đài vòng trong hình thìa dài khoảng 1,5 mm, rộng 0,5 mm, 3 cánh hoa hình quạt gần tròn, cong lõm đều, cao khoảng 0,8 - 1 mm, rộng 1 - 1,5 mm, phía trong gốc cánh hoa có 2 tuyến. Nhị đính thành cột ngắn, bao phấn dính liền thành đĩa, nứt ngang. Cụm hoa cái gần dạng đầu có cuống sợi nhỏ dài 1-1,5 cm. Đỉnh cuống cụm hoa có 6 - 7 xim nhỏ. ở gốc mỗi xim nhỏ có 1 lá bắc dạng gai nhỏ, mềm. Mỗi xim nhỏ có 6 hoa. Hoa cái nhỏ, gần như không cuống, có 1 lá [...]... được lựa chọn, chúng tôi tiến hành khảo sát chiết ở các nhiệt độ khác nhau Dựa trên hiệu quả chiết xuất ở các nhiệt độ đó để lựa chọn nhiệt độ chiết xuất thích hợp 2.2.3 Nghiên cứu lựa chọn số ỉần chiết Trên cơ sở dung môi và nhiệt độ chiết xuất thích hợp đã lựa chọn, tiếp tục khảo sát lựa chọn số lần chiết thích họp 2.3 Phương pháp thực nghiệm 2.3.1 Phương pháp định lượng 2.3.1.1 Định lượng rotundin. .. phưong pháp chung sau: - Phương pháp chiết bằng dung môi phân cực: nước, nước acid, cồn, - Phương pháp chiết bằng dung môi ít phân cực: chloroform, dầu hỏa, Với mục đích của đề tài là lựa chọn được một phưoTig pháp chiết xuất rotundin từ củ bình vôi đạt hiệu suất cao và có thể áp dụng trong thực tế sản xuất nên chúng tôi tiến hành khảo sát cả 2 phương pháp chiết trên 12 Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP... lá vông, 15 mg rotundin Chỉ định: Điều trị các chứng mất ngủ, đau nội tạng, đau đầu, đau kinh, đau dạ con sau khi đẻ + Secluren (Công ty CPDP & TBYT Cà Mau): Viên nén bao phim có thành phần gồm bột thô rotundin, cao đặc lạc tiên, cao đặc tâm sen 1.3 Chiết xuất rotundin từ củ bình vôi Chiết xuất rotundin từ củ bình vôi có thể sử dụng nhiều phương pháp khác nhau Dựa vào dung môi chiết xuất có thể phân... tiếnhành khảo sát 3 phương pháp chiết tương ứng với 3 dung môi khác nhau: - pp 1: dung môi là nước acid - pp 2: dung môi là ethanol 96^ L 3 - pp 3: dung môi là dầu hỏa Đánh giá ưu nhược điểm của từng phương pháp dựa trên hiệu quả chiết xuất, chất lượng sản phẩm, khả năng ứng dụng trong thực tế Từ đó lựa chọn phương pháp ứng với dung môi chiết xuất tối ưu 2.2.2 Nghiên cứu lưa chon nhiềt đô chiết ~ • • •... các phương pháp chiết, ta có bảng tổng họp hàm lượng sau: Bảng 3.10 Hàm lượng rotundin trong sản phẩm thu được ở các pp chiết xuất Dung môi Nước acid Ethanol 96° Dầu hỏa Hàm lượng (%) 98,24 98,53 98,82 Nhận xét: Sản phẩm của các phương pháp chiết đều đạt tiêu chuẩn của DĐVN IV (hàm lượng rotundin > 98,0 %) Trong đó, sản phẩm của phương pháp chiết bằng dầu hỏa có hàm lượng rotundin cao hơn so với 2 phương. .. - Bình cầu thủy tinh 1500ml - Bộ đun sôi hồi lưu - Bình định mức lOOml - Máy cất quay - Bình chiết nguội - Nồi cách thủy - Cân kỹ thuật và cân phân tích - Bình Soxhlet lOOml - MáyHPLC - Máy hút chân không và phễu Buchner - Các dụng cụ khác: cốc có mỏ các loại lOOml, 250ml, 500ml,lOOOml; ống đong, pipet 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu lựa chọn dung môi chiết xuất Đẻ lựa chọn dung môi chiết xuất. .. bột [7] - Một số bài thuốc sử dụng củ bình vôi [15]: + Chữa phong thấp tê đau, phù thận, ho hoặc nôn ra máu: Củ bình vôi (Stephania cepharantha) 6 - 9 g, sắc nước uống + Chữa đau bụng đầy hơi, sốt r é t : Củ bình vôi (Stephania kwangsỉensis) 1,5 g, sắc nước uống hoặc dạng bột ■ Trong chiết xuất hoạt chất: Củ bình vôi chủ yếu được dùng làm nguyên liệu để chiết xuất rotundin hoặc cepharanthin tùy theo... là 155 Yêu cầu: Chế phẩm phải chứa từ 98,0 - 101,0 % C21H25NO4, tính theo chế phẩm khô 2.3.2 Phương pháp chiết xuất 2.3.2.1 Phương pháp chiết vói dung môi là nước acid * Sơ đồ quy trĩnh sản xuất: 16 cồn 96° than hoạt * Các giai đoạn sản xuất: Qui trình sản xuất được chia thành 3 giai đoạn: - Giai đoạn 1: Chuẩn bị nguyên liệu - Giai đoạn 2 : Chiết xuất theo phương pháp ngâm nguội, dung môi là dung dịch... Tiến hành phương pháp chiết vói dung môi là ethanol 96®: * Cách tiến hành: Giai đoạn 1: Chuẩn bị nguyên liệu Tiến hành như mục 3.2.1 Giai đoan 2: Chiết xuất • • Các thông số kỹ thuật của giai đoạn chiết xuất: 24 - Dung môi: + Ethanol 96^ + Thể tích dung môi: V = 500 ml/ lần chiết - Các thông số khác (khối lượng dược liệu, số lần chiết, thời gian chiết, nhiệt độ chiết) giống như ở phương pháp chiết bằng... pp chiết xuất Dung môi Nước acid Ethanol 96^ Dầu hỏa T (%) l 41,30 47,22 58,26 Kết quả ở bảng 3.9 được biểu diễn bằng đồ thị (hình 3.1): 28 Hĩnh 3.1 Hiệu suất tương ứng với các pp chiết xuất 58.26 60 47.22 50 41.30 40 I 30 < (D - ^ 20 10 nước acid ethanol 96° dầu hỏa Phương pháp chiết xuất - Nhận xét: Phương pháp chiết bằng dầu hỏa có hiệu suất cao nhất, các phương pháp chiết bằng ethanol 96° và chiết . Nội dung nghiên cứu 12 2.2.1. Nghiên cứu lựa chọn dung môi chiết xuất 12 2.2.2. Nghiên cứu lựa chọn nhiệt độ chiết 13 2.2.3. Nghiên cứu lựa chọn số lần chiết 13 MỤC LỤC 2.3. Phương pháp thực. đề tài Nghiên cứu lựa chọn phương pháp chiết xuất rotundin từ củ bình vôi với mong muốn góp phần vào việc tìm ra một phương pháp chiết xuất rotundin có thể áp dụng vào thực tế sản xuất. Đề. thô rotundin, cao đặc lạc tiên, cao đặc tâm sen. 1.3. Chiết xuất rotundin từ củ bình vôi Chiết xuất rotundin từ củ bình vôi có thể sử dụng nhiều phương pháp khác nhau. Dựa vào dung môi chiết xuất