Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm đông khô liposome amphotericin b bằng phương pháp tiêm ethanol

61 1.2K 2
Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm đông khô liposome amphotericin b bằng phương pháp tiêm ethanol

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

ĐẶT VẤN ĐỀ Tình trạng nhiễm nấm xâm lấn là nguyên nhân hàng đầu gây tử vong và đau ốm lâu dài ở những bệnh nhân ung thư và suy giảm miễn dịch. Amphotericin B là kháng sinh chống nấm phổ rộng, hoạt tính mạnh, được sử dụng phổ biến trong điều trị hơn 40 năm nay. Tuy nhiên, hạn chế của dược chất này là hầu như không tan trong nước nên sinh khả dụng thấp, đồng thời thuốc có nhiều tác dụng không mong muốn nhất là trên thận gây khó khăn cho việc sử dụng trong lâm sàng. Vì vậy, bào chế hệ mang thuốc chứa Amphotericin B giúp giảm độc tính và tăng sinh khả dụng của thuốc là yêu cầu có ý nghĩa khoa học và tính cấp thiết. Nhiều hệ mang thuốc chứa Amphotericin B đã được nghiên cứu phát triển và ứng dụng trong lâm sàng như: phức hợp với cholesteryl sulfate (Amphotec), phức hợp lipid (Abelcel)… Trong đó, sử dụng liposome làm hệ vận chuyển thuốc cho thấy có nhiều ưu điểm nổi bật: tăng thời gian lưu thông thuốc trong tuần hoàn, khu trú tác dụng của thuốc tại cơ quan đích… Đây là một hướng nghiên cứu đầy triển vọng được các nhà khoa học trong nước và trên thế giới quan tâm. Hiện nay, Bộ môn Bào chế trường Đại học Dược Hà Nội đã nghiên cứu bào chế liposome Amphotericin B bằng phương pháp hydrat hóa film, bốc hơi pha đảo và bước đầu bào chế bằng phương pháp tiêm ethanol. Để tiếp tục góp phần nghiên cứu về liposome nói chung và liposome Amphotericin B nói riêng, đề tài “Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm đông khô liposome Amphoterin B bằng phƣơng pháp tiêm ethanol” được tiến hành nhằm mục tiêu: 1. Bào chế liposome Amphotericin B bằng phương pháp tiêm ethanol. 2. Bước đầu bào chế thuốc tiêm đông khô liposome Amphotericin B.

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI VŨ THỊ QUỲNH NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ THUỐC TIÊM ĐÔNG KHÔ LIPOSOME AMPHOTERICIN B BẰNG PHƢƠNG PHÁP TIÊM ETHANOL KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2015 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI VŨ THỊ QUỲNH NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ THUỐC TIÊM ĐÔNG KHÔ LIPOSOME AMPHOTERICIN B BẰNG PHƢƠNG PHÁP TIÊM ETHANOL KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Ngƣời hƣớng dẫn: 1. ThS. Nguyễn Văn Lâm 2. ThS. Nguyễn Tuấn Quang Nơi thực hiện: 1. Bộ môn Bào chế - ĐH Dược HN 2. Học viện Quân y HÀ NỘI – 2015 LỜI CẢM ƠN Trong những dòng đầu tiên, tôi xin phép gửi lời cảm ơn sâu sắc tới: ThS. Nguyễn Văn Lâm ThS. Nguyễn Tuấn Quang Là những người thầy đã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo và hết lòng giúp đỡ tôi trong suốt quá trình nghiên cứu, thực hiện khóa luận này. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn đến PGS. TS. Phạm Thị Minh Huệ cùng toàn thể các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Bào chế - Trường Đại học Dược Hà Nội, Trung tâm Đào tạo - Nghiên cứu Dược - Học viện Quân Y đã giúp đỡ và tạo điều kiện để tôi hoàn thành khóa luận. Nhân đây, tôi xin gửi lời cảm ơn các thầy cô trong Ban giám hiệu, các phòng ban, các thầy cô giáo và cán bộ nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội - những người đã dạy bảo tôi trong suốt 5 năm học tập tại trường. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè - những người đã giúp đỡ, động viên tôi trong quá trình học tập và làm khóa luận. Hà Nội, ngày 7 tháng 5 năm 2015 Sinh viên Vũ Thị Quỳnh MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 1.1. Amphotericin B 2 1.1.1. Công thức hóa học 2 1.1.2. Đặc tính lý - hóa 2 1.1.3. Tác dụng, dược lý, chỉ định, liều dùng 2 1.1.4. Tác dụng không mong muốn (thường gặp) 3 1.2. Liposome 3 1.2.1. Khái niệm 3 1.2.2. Ưu, nhược điểm của liposome 4 1.2.3. Phương pháp bào chế liposome 5 1.2.3.1. Các phương pháp bào chế liposome 5 1.2.3.2. Bào chế liposome bằng phương pháp tiêm ethanol 5 1.3. Liposome Amphoterin B 9 1.3.1. Cấu trúc liposome Amphotericin B 9 1.3.2. Một số nghiên cứu về liposome Amphotericin B 12 1.3.2.1. Một số nghiên cứu bào chế liposome Amphotericin B trên thế giới 12 1.3.2.2. Một số nghiên cứu bào chế liposome Amphotericin B tại Việt Nam 12 1.4. Đông khô liposome 13 1.4.1. Độ ổn định của liposome 13 1.4.2. Quá trình đông khô 14 2.1. Đối tƣợng nghiên cứu, nguyên vật liệu, thiết bị nghiên cứu. 16 2.2. Nội dung nghiên cứu 17 2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu 17 2.3.1. Phương pháp bào chế liposome Amphotericin B 17 2.3.2. Phương pháp đánh giá liposome Amphotericin B tạo ra 18 2.3.2.1. Phương pháp định lượng Amphotericin B trong hỗn dịch liposome Amphotericin B 18 2.3.2.2. Hiệu suất quy trình (H%) 19 2.3.2.3. Phương pháp đánh giá một số đặc tính của liposome Amphotericin B 19 2.3.3. Đông khô liposome 20 2.3.3.1. Quy trình đông khô liposome Amphotericin B 20 2.3.3.2. Đánh giá liposome Amphotericin B sau đông khô 20 2.3.4. Phương pháp xử lý số liệu 20 2.3.5. Điều kiện thí nghiệm 20 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN 21 3.1. Xây dựng và thẩm định phƣơng pháp định lƣợng Amphotericin B trong hỗn dịch liposome bằng phƣơng pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC).21 3.1.1. Độ đặc hiệu 21 3.1.2. Khảo sát tính thích hợp của hệ thống sắc ký 21 3.1.3. Tính tuyến tính 22 3.1.4. Độ chính xác 23 3.1.5. Độ đúng 23 3.2. Nghiên cứu ảnh hƣởng của một số yếu tố thuộc về công thức và quy trình bào chế đến đặc tính của liposome Amphotericin B 24 3.2.1. Ảnh hưởng của yếu tố công thức đến đặc tính của liposome Amphotericin B 25 3.2.1.1. Vai trò của DSPG trong liposome Amphotericin B 25 3.2.1.2. Ảnh hưởng của tỷ lệ Chol/lipid đến đặc tính của liposome Amphotericin B. 26 3.2.1.3. Ảnh hưởng của tỷ lệ DSPG/AmB đến đặc tính của liposome Amphotericin B 29 3.2.2. Ảnh hưởng của một số yếu tố thuộc về quy trình bào chế đến đặc tính của liposome Amphotericin B. 31 3.2.2.1. Ảnh hưởng của đường kính kim đến đặc tính của liposome Amphotericin B 31 3.2.2.2. Ảnh hưởng của thời gian khuấy trộn pha nước. 33 3.3. Bào chế thuốc tiêm đông khô liposome Amphotericin B. 34 3.3.1. Ảnh hưởng của tá dược tạo khung đến các đặc tính của liposome Amphotericin B trước đông khô. 34 3.3.2. Ảnh hưởng của tá dược tạo khung đến các đặc tính của liposome Amphotericin B sau đông khô. 34 3.3.3. Đề xuất quy trình bào chế thuốc tiêm đông khô liposome Amphotericin B 37 3.4. Bàn luận 39 3.4.1. Về phương pháp định lượng Amphotericin B 39 3.4.2. Về phương pháp tiêm ethanol bào chế liposome Amphotericin B 39 3.4.3. Về công thức bào chế liposome Amphotericin B 40 3.4.4. Về đông khô liposome Amphotericin B 41 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT STT Viết tắt Từ/cụm từ viết tắt 1 AmB Amphotericin B 2 BP Dược điển Anh (British Pharmacopoeia) 3 Chol Cholesterol 4 DC Dược chất 5 DĐVN Dược điển Việt Nam 6 DMA N,N-dimethylacetamid 7 DMPC α-Dimyristoylphosphatidylcholin 8 DMPG l-α-Dimyristoylphosphatidylglycerol 9 DSPG Distearoylphosphatidylglycerol 10 ĐK Đông khô 11 HPLC Sắc kí lỏng hiệu năng cao (high performance liquid chromatography) 12 HSPC Phosphatidylcholin đậu nành hydrogen hóa (Hydrogennated soy phosphatidylcholine) 13 IC50 Nồng độ thuốc ức chế 50% đối tượng thử 14 KTTP Kích thước tiểu phân 15 kl/kl Khối lượng/khối lượng 16 L-AmB Liposome amphotericin B 17 LTT Lọc tiếp tuyến 18 NSX Nhà xản xuất 19 PDI Chỉ số đa phân tán (Polydispersity index) 20 PL Phospholipid 21 TB Trung bình 22 TKHH Tinh khiết hóa học 23 USP Dược điển Mỹ (United State Pharmacopoeia) 24 SPC Phosphatidylcholin đậu nành 25 SUV Liposome đơn lớp nhỏ (small unilamellar vesicle) 26 Z average Kích thước tiểu phân trung bình DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Số hiệu Tên hình vẽ, đồ thị Trang Hình 1.1 Cấu trúc liposome 4 Hình 1.2 Cơ chế hình thành liposome bằng phương pháp tiêm ethanol 6 Hình 1.3 Sơ đồ phương pháp tiêm ethanol bào chế liposome 7 Hình 1.4 Sơ đồ hệ thống kim phun 9 Hình 1.5 Cấu trúc liposome Amphotericin B 10 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn tương quan giữa nồng độ AmB và diện tích pic 22 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn sự thay đổi KTTP (A) và PDI (B) trước và sau khi LTT 27 Hình 3.3 Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng của tỷ lệ Chol/lipid đến hiệu suất quy trình 28 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng của tỷ lệ DSPG/AmB đến hiệu suất quy trình. 30 Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng của đường kính kim đến đặc tính của L-AmB 32 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn sự thay đổi của KTTP trước và sau đông khô 36 Hình 3.7 Sơ đồ quy trình bào chế thuốc tiêm đông khô liposome Amphotericin B 38 DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Số hiệu Tên bảng biểu Trang Bảng 2.1 Nguyên liệu 16 Bảng 2.2 Chương trình gradient dung môi pha động 18 Bảng 3.1 Kết quả khảo sát tính thích hợp của hệ thống sắc kí 21 Bảng 3.2 Tương quan giữa nồng độ AmB và diện tích pic 22 Bảng 3.3 Kết quả khảo sát độ chính xác của hệ thống sắc kí 23 Bảng 3.4 Kết quả khảo sát độ đúng của hệ thống sắc kí 24 Bảng 3.5 Thành phần công thức bào chế và các đặc tính của L- AmB thu được 25 Bảng 3.6 Thành phần công thức bào chế L-AmB khi thay đổi tỷ lệ Chol/lipid 26 Bảng 3.7 Ảnh hưởng của tỷ lệ Chol/lipid đến đặc tính của L- AmB 27 Bảng 3.8 Thành phần công thức bào chế L-AmB khi thay đổi tỷ lệ DSPG/AmB 29 Bảng 3.9 Ảnh hưởng của tỷ lệ DSPG/AmB lên các đặc tính của L-AmB 30 Bảng 3.10 Công thức bào chế hỗn dịch L-AmB 31 Bảng 3.11 Ảnh hưởng của đường kính kim đến các đặc tính của L-AmB 32 Bảng 3.12 Ảnh hưởng của thời gian khuấy trộn đến đặc tính của L-AmB 33 Bảng 3.13 Thành phần tá dược tạo khung và đặc tính của L-AmB trước đông khô 34 Bảng 3.14 Ảnh hưởng của tá dược tạo khung đến các đặc tính của L-AmB sau đông khô 36 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Tình trạng nhiễm nấm xâm lấn là nguyên nhân hàng đầu gây tử vong và đau ốm lâu dài ở những bệnh nhân ung thư và suy giảm miễn dịch. Amphotericin B là kháng sinh chống nấm phổ rộng, hoạt tính mạnh, được sử dụng phổ biến trong điều trị hơn 40 năm nay. Tuy nhiên, hạn chế của dược chất này là hầu như không tan trong nước nên sinh khả dụng thấp, đồng thời thuốc có nhiều tác dụng không mong muốn nhất là trên thận gây khó khăn cho việc sử dụng trong lâm sàng. Vì vậy, bào chế hệ mang thuốc chứa Amphotericin B giúp giảm độc tính và tăng sinh khả dụng của thuốc là yêu cầu có ý nghĩa khoa học và tính cấp thiết. Nhiều hệ mang thuốc chứa Amphotericin B đã được nghiên cứu phát triển và ứng dụng trong lâm sàng như: phức hợp với cholesteryl sulfate (Amphotec), phức hợp lipid (Abelcel)… Trong đó, sử dụng liposome làm hệ vận chuyển thuốc cho thấy có nhiều ưu điểm nổi bật: tăng thời gian lưu thông thuốc trong tuần hoàn, khu trú tác dụng của thuốc tại cơ quan đích… Đây là một hướng nghiên cứu đầy triển vọng được các nhà khoa học trong nước và trên thế giới quan tâm. Hiện nay, Bộ môn Bào chế trường Đại học Dược Hà Nội đã nghiên cứu bào chế liposome Amphotericin B bằng phương pháp hydrat hóa film, bốc hơi pha đảo và bước đầu bào chế bằng phương pháp tiêm ethanol. Để tiếp tục góp phần nghiên cứu về liposome nói chung và liposome Amphotericin B nói riêng, đề tài “Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm đông khô liposome Amphoterin B bằng phƣơng pháp tiêm ethanol” được tiến hành nhằm mục tiêu: 1. Bào chế liposome Amphotericin B bằng phương pháp tiêm ethanol. 2. Bước đầu bào chế thuốc tiêm đông khô liposome Amphotericin B. [...]... thuộc về công thức và quy trình b o < /b> chế < /b> đến đặc tính của L-AmB được b o < /b> chế < /b> theo phương pháp tiêm < /b> ethanol - Đánh giá ảnh hưởng của tá dược tạo khung đến đặc tính của L-AmB trước và sau đông < /b> khô,< /b> đề xuất quy trình b o < /b> chế < /b> thuốc < /b> tiêm < /b> đông < /b> khô < /b> L-AmB 2.3 Phƣơng pháp nghiên < /b> cứu < /b> 2.3.1 Phương pháp b o < /b> chế < /b> liposome < /b> Amphotericin < /b> B Quy trình b o < /b> chế < /b> L-AmB theo phương pháp tiêm < /b> ethanol: Dựa vào tài liệu tham khảo... các phương pháp b o < /b> chế < /b> liposome < /b> đều sử dụng dung môi hữu cơ để hòa tan lipid gây tác động b t lợi đến sức khỏe người sử dụng cũng như môi trường [30] 1.2.3 Phương pháp b o < /b> chế < /b> liposome < /b> 1.2.3.1 Các phương pháp b o < /b> chế < /b> liposome < /b> Có nhiều phương pháp b o < /b> chế < /b> liposome < /b> được sử dụng: - Phương pháp hydrat hóa film (phương pháp Bangham) - Phương pháp b c hơi pha đảo - Phương pháp pha loãng ether - Phương pháp. .. uống [37] 1.3.2.2 Một số nghiên < /b> cứu < /b> b o < /b> chế < /b> liposome < /b> Amphotericin < /b> B tại Việt Nam Tại b môn B o < /b> chế < /b> Đại học Dược Hà Nội, đã thực hiện các nghiên < /b> cứu < /b> b o < /b> chế < /b> L-AmB b ng nhiều phương pháp khác nhau Ths Đào Thị Thùy Dung (2013) đã nghiên < /b> cứu < /b> b o < /b> chế < /b> L-AmB b ng 2 phương pháp b c hơi pha đảo và hydrat hóa film đồng thời đánh giá được các yếu tố thuộc về công thức, quy trình b o < /b> chế,< /b> môi trường phân tán... chọn dạng b o < /b> chế < /b> liposome < /b> để nghiên < /b> 12 cứu < /b> hệ vận chuyển thuốc < /b> AmB 1.3.2 Một số nghiên < /b> cứu < /b> về liposome < /b> Amphotericin < /b> B 1.3.2.1 Một số nghiên < /b> cứu < /b> b o < /b> chế < /b> liposome < /b> Amphotericin < /b> B trên thế giới Deepak Singodia và cộng sự (2012) nghiên < /b> cứu < /b> b o < /b> chế < /b> L-AmB sử dụng Phosphatidylglycerol, Chol và DMPC (F - 1a) hoặc SPC (F - 2a) b ng phương pháp tiêm < /b> ethanol như sau: AmB hòa tan trong DMA được acid hóa b ng dung... lỏng - Phương pháp đông < /b> khô < /b> Trong đó phương pháp tiêm < /b> ethanol ngày càng được sử dụng rộng rãi trong b o < /b> chế < /b> liposome < /b> do có nhiều ưu điểm nổi b t 1.2.3.2 B o < /b> chế < /b> liposome < /b> b ng phương pháp tiêm < /b> ethanol a) Ưu, nhược điểm của phương pháp * Ưu điểm - Quy trình b o < /b> chế < /b> đơn giản, thực hiện dễ dàng và nhanh chóng hơn các phương pháp khác, tính lặp lại cao, dễ đồng nhất lô mẻ [9], [16], [17] - Thu được liposome.< /b> .. dụng phương pháp này để định lượng AmB trong chế < /b> phẩm liposome < /b> AmB 3.2 Nghiên < /b> cứu < /b> ảnh hƣởng của một số yếu tố thuộc về công thức và quy trình b o < /b> chế < /b> đến đặc tính của liposome < /b> Amphotericin < /b> B 25 3.2.1 Ảnh hưởng của yếu tố công thức đến đặc tính của liposome < /b> Amphotericin < /b> B 3.2.1.1 Vai trò của DSPG trong liposome < /b> Amphotericin < /b> B So sánh hai công thức b o < /b> chế < /b> L-AmB có và không sử dụng tá dược DSPG theo phương. .. TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên < /b> cứu,< /b> nguyên vật liệu, thiết b nghiên < /b> cứu < /b> - Đối tượng nghiên < /b> cứu:< /b> Liposome < /b> Amphotericin < /b> B Thuốc < /b> tiêm < /b> đông < /b> khô < /b> liposome < /b> Amphotericin < /b> B - Nguyên liệu: B ng 2.1 Nguyên liệu TT Tên nguyên liệu Nguồn gốc Tiêu chuẩn 1 Acid acetic b ng Merck - Đức NSX 2 Acid hydrochloric Trung Quốc NSX 3 Acetonitril dùng cho HPLC Merck - Đức NSX 4 Amphotericin < /b> B chuẩn Dr.Ehrenstorfer... hình cầu khép kín - liposome < /b> c) Quy trình b o < /b> chế < /b> liposome < /b> b ng phương pháp tiêm < /b> ethanol Quy trình b o < /b> chế < /b> liposome < /b> b ng phương pháp tiêm < /b> ethanol được b trí rất đơn giản: lipid và các thành phần tạo màng được hòa tan trong ethanol với nồng độ phù hợp, được tiêm < /b> nhanh vào pha nước thích hợp kết hợp khuấy trộn hoặc siêu âm ở tốc độ phù hợp DC được hòa tan dung dịch ethanol hoặc trong môi trường nước phụ... suất liposome < /b> hóa đạt 98,18%; liposome < /b> có KTTP 160,8 nm và PDI 0,288 [5] Phạm Thúy Ngọc (2014) đã b ớc đầu nghiên < /b> cứu < /b> b o < /b> chế < /b> liposome < /b> AmB b ng phương pháp tiêm < /b> ethanol và xác định được một số yếu tố thuộc về quy trình b o < /b> chế:< /b> tỷ lệ thể tích pha ethanol/ pha nước 8%, nhiệt độ pha nước khi phối hợp 600C, tốc độ khuấy trộn 3900 vòng/phút Tác giả đã lựa chọn công thức b o < /b> chế < /b> cho 10ml hỗn dịch: AmB 50... chế < /b> độ tan của PL trong ethanol (40 mM với phosphatidylcholin) [32] - Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất và chất lượng liposome < /b> tạo ra Liposome < /b> thu được có nồng độ thấp do b pha loãng, hiệu suất mang DC còn thấp nhất là với những DC tan trong nước [21], [22], [28] b) Cơ chế < /b> hình thành liposome < /b> b ng phương pháp tiêm < /b> ethanol Hình 1.2 Cơ chế < /b> hình thành liposome < /b> b ng phương pháp tiêm < /b> ethanol Cơ chế . tài Nghiên cứu b o chế thuốc tiêm đông khô liposome Amphoterin B bằng phƣơng pháp tiêm ethanol được tiến hành nhằm mục tiêu: 1. B o chế liposome Amphotericin B bằng phương pháp tiêm ethanol. . điểm của liposome 4 1.2.3. Phương pháp b o chế liposome 5 1.2.3.1. Các phương pháp b o chế liposome 5 1.2.3.2. B o chế liposome b ng phương pháp tiêm ethanol 5 1.3. Liposome Amphoterin B 9 1.3.1 cấu trúc hình cầu khép kín - liposome. c) Quy trình b o chế liposome b ng phương pháp tiêm ethanol Quy trình b o chế liposome b ng phương pháp tiêm ethanol được b trí rất đơn giản: lipid và

Ngày đăng: 25/07/2015, 00:46

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

Tài liệu liên quan