BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ THANH MAI KIỂM NGHIỆM MỘT SỐ CHỈ TIÊU CỦA VACXIN NEWCASTLE CHỦNG LASOTA SẢN XUẤT TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ THANH MAI KIỂM NGHIỆM MỘT SỐ CHỈ TIÊU CỦA VACXIN NEWCASTLE CHỦNG LASOTA SẢN XUẤT TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà NGÀNH : 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS. VŨ NHƯ QUÁN TS. NGUYỄN BÁ HIÊN HÀ NỘI – 2013 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ii LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Tôi xin cam ñoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Mọi sự giúp ñỡ ñã ñược cảm ơn. Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thanh Mai Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp iii LỜI CÁM ƠN ðể hoàn thành luận văn này ngoài sự cố gắng của bản thân tôi luôn nhận ñược sự quan tâm giúp ñỡ của nhà trường, bạn bè ñồng nghiệp. Trước tiên tôi xin chân thành cám ơn sự giúp ñỡ quý báu của các thầy cô giáo bộ môn Ngoại sản, Vi sinh vật truyền nhiễm, các thầy cô giáo khoa Thú y - Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội ñã dành nhiều thời gian và công sức giúp ñỡ tôi trong quá trình học tập và thực hiện ñề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Vũ Như Quán, TS. Nguyễn Bá Hiên, người ñã tận tình giúp ñỡ, hướng dẫn tôi trong qua trình thực hiện và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh ñạo Xí nghiệp thuốc thú y Trung Ương cùng bạn bè ñồng nghiệp và gia ñình ñã giúp ñỡ ñộng viên tôi hoàn thành chương trình học tập cao học và hoàn thành Luận văn tốt nghiệp. Xin chân thành cảm ơn! Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp iv MỤC LỤC Lời cam ñoan ii Lời cám ơn iii Mục lục iv Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Danh mục các chữ viết tắt ix MỞ ðẦU 1 Chương I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1 Lịch sử nghiên cứu bệnh Newcastle 3 1.1.1 Giới thiệu chung về bệnh 3 1.1.2 Lịch sử bệnh 3 1.2 Một số ñặc ñiểm của virus Newcastle 5 1.2.1 Phân loại 5 1.2.2 Hình thái và cấu trúc của Virus Newcastle 6 1.2.2 ðặc tính sinh học của virus Newcastle 7 1.3 Miễn dịch chống virus Newcastle 12 1.3.1 Miễn dịch thụ ñộng 12 1.3.2 Miễn dịch chủ ñộng 13 1.3.3 Quy luật hình thành kháng thể ñặc hiệu 15 1.4 Truyền nhiễm học 16 1.4.1 Dịch tễ học 16 1.4.2 Cơ chế sinh bệnh 18 1.4.3 Các thể bệnh Newcastle 19 1.5 Triệu chứng và bệnh tích của bệnh Newcastle 19 1.5.1 Triệu chứng 19 1.5.2 Bệnh tích 20 1.6 Chẩn ñoán bệnh Newcastle 21 1.6.1 Chẩn ñoán lâm sàng 21 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp v 1.6.2 Chẩn ñoán virus học 21 1.6.3 Chẩn ñoán huyết thanh học 22 1.7 Phòng bệnh Newcastle 22 1.7.1 Biện pháp can thiệt 22 1.7.2 Vệ sinh phòng bệnh 23 1.7.3 Vacxin phòng bệnh 23 1.7.3 ðiều trị 24 Chương 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Nội dung nghiên cứu: 25 2.1.1 Kiểm tra các chỉ tiêu kỹ thuật của vacxin 25 2.1.2 ðánh giá ñộ dài miễn dịch của gà sau khi sử dụng vacxin 25 2.1.3 Kiểm tra ñộ dài bảo quản của vaccine sau thời gian lưu kho ở nhiệt ñộ 2 o -8 o C. 25 2.2 ðối tượng nghiên cứu 25 2.3 Phạm vi nghiên cứu 25 2.4 Nguyên liệu 25 2.4.1 Thiết bị, máy móc 25 2.4.2 Nguyên liệu 25 2.5 Phương pháp nghiên cứu 26 2.5.1 Phương pháp lấy mẫu theo TCVN 160 – 92 vacxin thú y – Quy trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệm 26 2.5.2 Phương pháp kiểm tra ñộ ẩm và chân không 26 2.5.3 Phương pháp xác ñịnh hiệu giá virus (liều gây nhiễm 50% phôi gà: EID 50 ) của lô vacxin 27 2.5.4 Phương pháp kiểm tra chỉ tiêu vô trùng 29 2.5.5 Phương pháp kiểm tra an toàn 30 2.5.6 Kiểm tra hiệu lực 30 2.5.7 ðánh giá tỷ lệ bảo hộ của gà khi ñược dùng vacxin Lasota 30 2.5.8 Phương pháp ñánh giá ñộ dài miễn dịch của gà sau khi dùng vacxin. 31 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp vi 2.5.9 Phương pháp kiểm tra ñộ dài bảo quản của vacxin Lasota sau thời gian lưu kho 31 2.5.10 Phương pháp xác ñịnh hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle trong huyết thanh của gà sau khi sử dụng vacxin bằng phản ứng HI 32 3.5.10 Phương pháp xử lý số liệu. 34 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Kiểm tra các chỉ tiêu kỹ thuật của vacxin 35 3.1.1 Kiểm tra các chỉ tiêu vật lý của vacxin 35 3.1.2 Kết quả kiểm tra hiệu giá virus ( liều gây nhiễm 50% phôi gà: EID 50 ) của 3 lô vacxin Lasota 37 3.1.3 Kết quả kiểm tra vô trùng 40 3.1.4 Kết quả kiểm tra an toàn 42 3.1.5 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu hiệu lực của vacxin 44 3.1.6 ðánh giá tỷ lệ bảo hộ của gà ñối với bệnh Newcastle sau khi ñược sử dụng vacxin Lasota 46 3.2 Kêt quả ñánh giá ñộ dài miễn dịch của gà sau khi dùng vacxin Lasota bằng phương pháp công cường ñộc ở các thời ñiểm nhất ñịnh. 49 3.3 Kết quả ñịnh kỳ kiểm tra ñộ dài bảo quản của vacxin nhược ñộc Lasota sau thời gian lưu kho 55 3.3.1 Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin nhược ñộc Lasota sau thời gian bảo quản 3 tháng, 6 tháng, 9 tháng và 12 tháng 55 3.3.2. Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin nhược ñộc Lasota sau thời gian bảo quản 13 tháng và 14 tháng 57 KẾT LUẬN 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp vii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 3.1 Kết quả kiểm tra ñộ chân không của vacxin Lasota 35 3.2 Kết quả kiểm tra ñộ ẩm của vacxin Lasota 36 3.3 Kết quả xác ñịnh hiệu giá virus của vacxin Lasota của lô I 39 3.4 Kết quả xác ñịnh hiệu giá virus của vacxin Lasota của lô vacxin 1, 2, 3 40 3.5 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin Lasota 41 3.6 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin Lasota 43 3.7 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu hiệu lực của vacxin Lasota 45 3.8 Tỷ lệ bảo hộ của gà sau khi sử dụng vacxin Lasota bằng phương pháp công cường ñộc 47 3.9 Kết quả ñánh giá ñộ dài miễn dịch của gà sau khi sử dụng vacxin 14, 21 và 28 ngày bằng phương pháp công cường ñộc 51 3.10 Kết quả ñánh giá ñộ dài miễn dịch của gà sau khi sử dụng vacxin 35 và 42 ngày bằng phương pháp công cường ñộc 52 3.11 Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin Lasota sau thời gian bảo quản 3 tháng, 6 tháng, 9 tháng và 12 tháng bằng phương pháp công cường ñộc 56 3.12 Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin Lasota sau thời gian bảo quản 13 tháng và 14 tháng bằng phương pháp công cường ñộc 59 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp viii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 3.1 Biểu ñồ biểu diễn kết quả kiểm tra ñộ ẩm và ñộ chân không của vacxin Lasota 37 3.2 Kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus Newcastle bằng phản ứng HI 46 3.3 Xuất huyết dạ dầy tuyến, dạ dầy cơ 48 3.4 Xuất huyết niêm mạc ruột 49 3.5 Biểu ñồ biểu diễn ñộ dài miễn dịch của gà sau khi sử dụng vacxin Lasota 54 3.6 Biểu ñồ biểu diễn ñộ dài bảo quản của vacxin sau thời gian lưu k ho. 58 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ix DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ARN Acid ribonucleic APMV Avian paramyxovirus CCð: Công cường ñộc ðC ðối chứng EID 50 50 percent Embryo infective dose ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay F Fusion protein FAO Food Agriculture Organization HA Haemagglutination HI Haemagglutination inhibition HN Haemagglutinin neuraminidase OIE Office International des Epizooties L Large protein LD 50 Lethalis dosis 50% MDT Mean Death Time M Matrix protein M Mukteswar ND Newcastle disease NP Nucleocapsid protein TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TN Thí nghiệm RT – PCR Reverse transcription – Polymerase ICPI Intracerebral pathogenicity index IVPI Intravenous pathogenicity index [...]... nghi p thu c thú y Trung Ương s n xu t 2.3 Ph m vi nghiên c u − Nghiên c u ñư c th c hi n t i phòng ki m nghi m vacxin virus, Xí nghi p thu c thú y Trung Ương − Th nghi m an toàn và hi u l c các lô gà thí nghi m t i Xí nghi p thu c thú y Trung Ương 2.4 Nguyên li u 2.4.1 Thi t b , m y móc - Thi t b , m y móc: các trang thi t b c n thi t ñ th c hi n ñ tài như: t l nh, t s y, m y p tr ng, m y l c, t - m... ng y, 21-28 ng y, 50-58 ng y và 133-140 ng y; Vacxin s d ng là Lasota và H 1, b ng phương pháp nh mũi ho c tiêm dư i da tuỳ t ng lo i vacxin T khi phát hi n ñ n nay, b nh Newcastle thư ng xuyên x y ra t i các ñ a phương trong c nư c, g y thi t h i ñáng k cho ngành chăn nuôi gà 1.2 M t s ñ c ñi m c a virus Newcastle 1.2.1 Phân lo i H paramyxovirus (family Paramyxoviridae) ñư c chia thành 2 subfamily... th trư ng Vi t Nam Vacxin phòng Newcastle do xí nghi p thu c Thú y Trung Ương s n xu t bao g m hai lo i vacxin Newcastle h I và vacxin Newcastle h II là Lasota Theo quy ñ nh, b t c m t lo i vacxin nào trư c khi xu t xư ng lưu hành trên th trư ng ñ u ph i ti n hành ki m tra các ch tiêu: an toàn, vô trùng, hi u l c Ngoài ra vi c ph i xác ñ nh ñư c th i gian b o qu n thích h p và x y d ng ñư c l ch tiêm... nghi m, nh ng s n ph m vacxin do xí nghi p s n xu t c n ph i ra soát l i quy trình ki m nghi m ñ x y d ng m t tiêu chu n ki m nghi m cơ s ch t ch , ñ m b o m t vacxin khi xu t xư ng, lưu thông trên th trư ng ph i có ch t lư ng t t Do v y, chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: “Ki m nghi m m t s ch tiêu c a vacxin Newcastle ch ng Lasota s n xu t t i Xí nghi p thu c thú y Trung Ương Trư ng ð i H c Nông... thư ng ph c v cho ñ tài 2.4.2 Nguyên li u + M u vacxin lasota do xí nghi p thu c thú y Trung Ương s n xu t có ít nh t 106 EID50 Trư ng ð i H c Nông Nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 25 + Gi ng virus cư ng ñ c Newcastle ch ng VN91 do xí nghi p thu c thú y Trung Ương s n xu t có ít nh t 105LD50 + Gà các l a tu i ñ t tiêu chu n thí nghi m + Phôi gà 10 ng y tu i, sinh ra t ñàn gà b m kh... nư c th t gan y m khí 2.5 Phương pháp nghiên c u 2.5.1 Phương pháp l y m u theo TCVN 160 – 92 vacxin thú y – Quy trình l y m u và s d ng m u trong ki m nghi m - M u ki m nghi m là các ñơn v s n ph m ñư c l y ra t các lô vacxin ñ ti n hành ki m nghi m trư c khi xu t ra s d ng và lưu gi trong th i gian b o qu n c a vacxin ñ gi i quy t các tranh ch p n u có - M u ñư c l y theo lô vacxin, lô vacxin là toàn... nông nghi p 1 M c ñích c a ñ tài - Ki m tra m t s ch tiêu c a vacxin Lasota s n xu t t i Xí nghi p thu c thú y Trung Ương g m: vô trùng, an toàn, hi u l c, ñ dài b o qu n, ñ dài mi n d ch c a vacxin Ý nghĩa c a ñ tài: - Là cơ s ñ ñưa ra ñư c chính xác ñ dài b o qu n vacxin Lasota - T ñó x y d ng ñư c quy trình s d ng và b o qu n vacxin phù h p giúp cho xí nghi p, các chi c c, các cơ s chăn nuôi, lưu tr... lư ng tr ng Vacxin n y g y mi n d ch m nh và b n v ng ch dùng cho gà dư i 2 tháng tu i + Cách dùng: L n 1: 7 ng y tu i L n 2: 21 ng y tu i L n 3: 35 ng y tu i Phương pháp ch ng b ng cách nh m t, nh mũi, ho c cho u ng - Vacxin Newcastle như c ñ c ñông khô ch ng M (H 1) + ð c ñi m: Là m t vacxin s ng làm b ng ch ng y u v a (Mukteswar Mesogen) Ch ng n y g y mi n d ch b n, nhưng nó có th g y b nh gà dư... 2 Chương I: T NG QUAN TÀI LI U 1.1 L ch s nghiên c u b nh Newcastle B nh Newcastle (Newcastle disease – ND) hay b nh gà rù là m t b nh truy n nhi m c p tính c a loài gà, có tri u ch ng và b nh tích g n gi ng v i b nh Cúm gà ð c trưng c a b nh là viêm, xu t huy t và loét niêm m c ñư ng tiêu hóa (Nguy n Bá Hiên và cs., 2012) 1.1.1 Gi i thi u chung v b nh B nh Newcastle g y ra b i virus paramyxo type... n hình thư ng t p trung ñư ng tiêu hoá: Niêm m c d d y tuy n xu t huy t thành nh ng ch m màu ñ tròn to b ng ñ u ñinh ghim, m i ñi m tương ng v i m t l ñ ra c a tuy n tiêu hoá Nhi u trư ng h p xu t huy t thành v t Loét ño n ñ u và cu i c a cu ng m niêm m c ru t non V t loét có th nhìn th y t m t ngoài có hình tròn, hình tr ng hay hình h t ñ u, có màu m n chín M ra th y v t loét d y c m lên trên b m . NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ THANH MAI KIỂM NGHIỆM MỘT SỐ CHỈ TIÊU CỦA VACXIN NEWCASTLE CHỦNG LASOTA SẢN XUẤT TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG CHUYÊN NGÀNH : THÚ. ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ THANH MAI KIỂM NGHIỆM MỘT SỐ CHỈ TIÊU CỦA VACXIN NEWCASTLE CHỦNG LASOTA SẢN XUẤT TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG LUẬN. xuất tại Xí nghiệp thuốc thú y Trung Ương . Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp 2 Mục ñích của ñề tài - Kiểm tra một số chỉ tiêu của vacxin Lasota sản