Nghiên cứu một số yếu tố liên quan với lệch bội nhiễm sắc thể của phôi người trước làm tổ

ĐẶT VẤN ĐỀ Phương pháp thụ tinh trong ống nghiệm (In-Vitro Fertilizaion/ IVF) đóng một vai trò quan trọng trong lĩnh vực hỗ trợ sinh sản, và ngày càng được phát triển rộng khắp trên thế giới. Để điều trị thụ tinh trong ống nghiệm đạt kết quả cao đảm bảo cho ra đời một thế hệ khoẻ mạnh về thể lực, sáng suốt về tinh thần, góp phần nâng cao chất lượng dân số thì việc nghiên cứu một phương pháp ưu việt để lựa chọn phôi tốt có bộ nhiễm sắc thể (NST) bình thường là yêu cầu cấp thiết và thực tiễn. Hiện nay, việc lựa chọn phôi thường chỉ dựa trên những tiêu chuẩn về hình thái của phôi như: kích thước và số lượng các phôi bào, số lượng nhân của phôi bào và tỷ lệ các mảnh vụn tế bào trong phôi [1]. Chúng ta đều biết rằng đánh giá về hình thái không phản ánh đầy đủ chất lượng thực của phôi, đã hạn chế đến kết quả điều trị thụ tinh trong ống nghiệm. Nhiều khi phôi có chỉ số hình thái cao lại không làm tổ được hoặc không tạo ra trẻ khoẻ mạnh, ngược lại, một số lượng phôi có chỉ số hình thái thấp lại có thể tạo ra em bé bình thường. Trong nhiều trường hợp, phôi không phát triển và không làm tổ được hoặc bị sẩy sớm là do phôi bị rối loạn về số lượng nhiễm sắc thể như: vô nhiễm (thiếu cả hai nhiễm sắc thể tương đồng), đơn nhiễm (thiếu một nhiễm sắc thể), tam nhiễm (thừa một nhiễm sắc thể). Hiện tượng thiếu, thừa nhiễm sắc thể nói trên gọi là lệch bội nhiễm sắc thể (LBNST/aneuploidy). Lệch bội nhiễm sắc thể ở noãn và phôi người thu được trong quá trình điều trị thụ tinh trong ống nghiệm đã được nêu lên từ lâu và rất nhiều nghiên cứu cũng đã công nhận là hiện tượng lệch bội nhiễm sắc thể xẩy ra ở giai đoạn trước khi làm tổ. Rối loạn lệch bội nhiễm sắc thể tăng theo tuổi, hơn một nửa số noãn thu được của phụ nữ trên bốn mươi tuổi có rối loạn lệch bội nhiễm sắc thể. Tỷ lệ lệch bội nhiễm sắc thể càng tăng trên phôi của các cặp vợ chồng bị sẩy thai liên tiếp hoặc đã từng điều trị thụ tinh trong ống nghiệm hoặc bơm tinh trùng vào buồng tử cung (IUI/ Intra-Uterine Insemination) nhiều lần thất bại. Phần lớn các trường hợp, lệch bội nhiễm sắc thể gây ảnh hưởng đến sự sống và phát triển của phôi. Phôi bị lệch bội nhiễm sắc thể có thể biểu hiện qua hình thái của phôi. Nhiều nghiên cứu đã đề cập đến hình thái của phôi như phôi có nhiều mảnh vụn tế bào, phôi có kích thước các phôi bào không đồng đều, phôi bào đa nhân, phôi có số lượng phôi bào không điển hình đều có liên quan đến lệch bội nhiễm sắc thể [2]. Tuy nhiên, nhiều nghiên cứu cho rằng mối liên quan này không chặt chẽ do những giới hạn về mặt kỹ thuật, hoặc chưa có kỹ thuật kiểm tra toàn bộ nhiễm sắc thể của phôi. Hầu hết các nghiên cứu cũng như thử nghiệm lâm sàng trước đây chỉ áp dụng kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ (FISH/Fluorescence In Situ Hybridization) chỉ cho phép kiểm tra một số lượng giới hạn nhiễm sắc thể của phôi (một số lượng lớn nhiễm sắc thể không được kiểm tra) để suy luận đánh giá toàn bộ phôi nên tỷ lệ chẩn đoán âm tính giả cao (phôi bị lệch bội nhiễm sắc thể mà đánh giá là bình thường). Các sai lầm về đánh giá phôi nói trên sẽ làm cho tỷ lệ phôi chuyển bị lệch bội nhiễm sắc thể cao, làm giảm tỷ lệ có thai, và quan trọng hơn là cho ra đời những trẻ mang bộ nhiễm sắc thể bất thường, gây nỗi đau cho gia đình, giảm chất lượng dân số, thêm gánh nặng cho xã hội. Trong vài năm gần đây, một số phương pháp xét nghiệm di truyền mới đã được áp dụng để xét nghiệm toàn bộ 23 cặp nhiễm sắc thể của phôi như phương pháp lai so sánh bộ gen dùng chíp DNA (a-CGH/array-comparative genomic hybridization), phương pháp phân tích đa hình đơn dùng chíp DNA (a-SNP/Single-nucleotide polymorphism), phương pháp phản ứng chuỗi định lượng (qPCR/quantitative polymerase chain reaction). Nhờ kết hợp những phương pháp mới này cùng với tiến bộ trong sinh thiết phôi nói chung và sinh thiết phôi ở giai đoạn phôi nang mà các nhà lâm sàng có thể chọn lựa tương đối chính xác 1-2 phôi có số lượng nhiễm sắc thể bình thường, có khả năng làm tổ cao để chuyển phôi, góp phần làm tăng tỷ lệ làm tổ, giảm tỷ lệ sảy thai và đa thai. Do vậy kỳ vọng của nghiên cứu này là áp dụng một kỹ thuật di truyền phân tử mới, sử dụng bộ thử chíp DNA gọi là phương pháp lai so sánh bộ gen (array comparative genomic hybridization/ a-CGH) để phân tích toàn bộ 46 nhiễm sắc thể của phôi, làm cơ sở để khuyến cáo ứng dụng một phương pháp chọn lọc phôi hữu hiệu, chính xác hơn góp phần làm tăng hiệu quả của kỹ thuật điều trị thụ tinh trong ống nghiệm, đồng thời có đủ dữ liệu chính xác hơn để nghiên cứu một số yếu tố liên quan đến lệch bội nhiễm sắc thể, làm cơ sở để phòng bệnh, dự đoán và tư vấn. Để đáp ứng được yêu cầu trên, nghiên cứu cần có các mục tiêu sau: 1. Xác định tỷ lệ lệch bội nhiễm sắc thể trên 23 đôi nhiễm sắc thể của phôi ngày 3 sau thụ tinh trong ống nghiệm bằng kỹ thuật lai so sánh bộ gen (a-CGH) và khả năng tự sửa chữa của phôi ngày 3 bị lệch bội nhiễm sắc thể khi phát triển thành phôi nang. 2. Nghiên cứu một số yếu tố liên quan với lệch bội nhiễm sắc thể của phôi ngày 3 trước làm tổ.