TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH – KTNN - -  - - TRẦN THỊ THẮM NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY ĐINH LĂNG (Polyscias fruticosa (L.) Harms) BẰNG KĨ THUẬT IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật HÀ NỘI, 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH – KTNN - -  - - TRẦN THỊ THẮM NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY ĐINH LĂNG (Polyscias fruticosa (L.) Harms) BẰNG KĨ THUẬT IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật Người hường dẫn khoa học Th.S LA VIỆT HỒNG HÀ NỘI, 2014 i LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Th.s La Việt Hồng – Khoa Sinh KTNN Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Tôi xin cảm ơn tới các Ban Giám hiệu trường ĐHSP Hà Nội 2, Ban Chủ nhiệm khoa Sinh – KTNN trường ĐHSP Hà Nội đã tạo mọi điều kiện để tôi hoàn thành khóa luận này. Trong thời gian thực hiện đề tài tôi cũng nhận được sự giúp đỡ tận tình của cô Mai Thị Hồng – Phòng thí nghiệm Sinh lý thực vật, thầy Ong Xuân Phong - Trung tâm Hỗ trợ Nghiên cứu Khoa học và Chuyển giao Công nghệ đã giúp đỡ, đóng góp ý kiến để tôi hoàn thành đề tài khóa luận, nhân đây tôi cũng xin gửi lời cảm ơn. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn tập thể cán bộ Trung tâm Hỗ trợ Nghiên cứu Khoa học và Chuyển giao Công nghệ, Phòng thí nghiệm Sinh lí thực vật, Phòng thí nghiệm Thực vật- trường ĐHSP Hà Nội 2 đã tạo điều kiện thuận lợi về thiết bị, phương tiện để tôi có thể hoàn thành khóa luận này. Cảm ơn gia đình và bạn bè đã luôn động viên, góp ý cho tôi trong qua trình học tập và hoàn thành đề tài. Hà Nội,10 tháng 04 năm 2014 Sinh viên TRẦN THỊ THẮM ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nghiên cứu trong khóa luận là trung thực và chưa được ai công bố. Hà Nội,10 tháng 04 năm 2014 Sinh viên TRẦN THỊ THẮM iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC Error! Bookmark not defined. DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii MỞ ĐẦU 1 1. Lý do chọn đề tài 1 2. Mục đích nghiên cứu Error! Bookmark not defined. 3. Nội dung nghiên cứu Error! Bookmark not defined. 4. Ý nghĩa của đề tài 2 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Giới thiệu về cây Đinh lăng - Polyscias fruticosa (L.) Harms 3 1.1.1. Phân loại 3 1.1.2. Mô tả 3 1.1.3. Nguồn gốc, phân bố 3 1.1.4. Hợp chất tự nhiên trong cây Đinh lăng Polyscias fruticosa (L). Harms 4 1.1.4.1.Trong lá 4 1.1.4.2. Trong rễ 4 1.1.5. Tác dụng dược lý của cây Đinh lăng 4 1.2. Sơ lược về nhân giống cây in vitro 5 1.2.1. Cơ sở khoa học của nuôi cấy mô tế bào thực vật 5 1.2.2. Ưu, nhược điểm của phương pháp nhân giống in vitro 6 1.2.2.1. Ưu điểm 6 1.2.2.2. Nhược điểm 7 1.2.3. Các giai đoạn nhân giống in vitro 8 iv 1.2.3.1. Giai đoạn 1: Khử trùng mô cấy 8 1.2.3.2. Giai đoạn 2: Tái sinh mô nuôi cấy 8 1.2.3.3. Giai đoạn 3: Nhân nhanh chồi 8 1.2.3.4. Giai đoạn 4: Tạo cây hoàn chỉnh 9 1.2.3.5. Giai đoạn 5: Đưa cây ra đất 9 1.2.4. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nuôi cấy mô 9 1.2.4.1. Mô nuôi cấy 9 1.2.4.2. Vô trùng trong nuôi cấy 10 1.2.4.3. Điều kiện nuôi cấy 11 1.2.4.4. Môi trường nuôi cấy 13 1.2.4.5. Vai trò của chất kích thích sinh trưởng trong nuôi cấy 13 1.2.4.6. Ảnh hưởng của pH và Agar 15 1.3. Các nghiên cứu in vitro về cây Đinh lăng 16 1.3.1. Tạo cây con 16 1.3.2. Tạo phôi soma 16 1.3.3. Tạo sẹo và phát sinh phôi soma 16 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 18 2.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu 18 2.2. Vật liệu và thiết bị nghiên cứu 18 2.2.1. Đối tượng nghiên cứu 18 2.2.2. Trang thiết bị và dụng cụ 18 2.2.3. Môi trường nuôi cấy 20 2.2.4. Điều kiện nuôi cấy in vitro 21 2.3. Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1. Phương pháp khử trùng mẫu 21 2.3.2. Bố trí thí nghiệm 22 2.3.2.1. Thí nghiệm 1: Tạo vật liệu in vitro chồi đỉnh Đinh lăng. 23 v 2.3.2.2. Thí nghiệm 2: Nhân nhanh cây Đinh lăng bằng phương pháp tạo đa chồi (Ảnh hưởng của BAP đến khả năng tạo đa chồi). 24 2.3.2.3. Thí nghiệm 3: Tạo rễ cây Đinh lăng in vitro (Ảnh hưởng của NAA đến khả năng tạo rễ ở chồi đỉnh Đinh lăng) 24 2.3.2.4. Thí nghiệm 4: Đánh giá một số đặc điểm hình thái, giải phẫu và sinh lý của cây Đinh lăng in vitro 25 a. Thí nghiệm 4a: Đánh giá một số đặc điểm hình thái, giải phẫu 25 b. Thí nghiệm 4b: Đánh giá một số đặc điểm sinh lý 26 2.3.3. Phương pháp xử lý số liệu 27 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1. Tạo vật liệu in vitro chồi đỉnh cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms) 28 3.2. Nhân nhanh cây Đinh lăng bằng phương pháp tạo đa chồi (Ảnh hưởng của BAP đến khả năng tạo đa chồi cây Đinh lăng in vitro) 33 3.3. Tạo rễ cây Đinh lăng in vitro 35 3.4. Thí nghiệm 4: Đánh giá một số đặc điểm hình thái, giải phẫu và sinh lý của cây Đinh lăng in vitro 37 3.4.1. Thí nghiệm 4a: Đánh giá đặc điểm hình thái, giải phẫu 37 3.4.2. Thí nghiệm 4b: Đánh giá một số đặc điểm sinh lý 39 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 4.1. Kết luận 41 4.2. Kiến nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 PHỤ LỤC 46 CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU ĐƯỢC CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN TÁC GIẢ 47 vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1. Các công thức thí nghiệm xác định hiệu quả của chất khử trùng. 23 Bảng 2.2. Công thức thí nghiệm xác định ảnh hưởng của BAP đến khả 24 Bảng 2.3: Ảnh hưởng của NAA đến tạo rễ cây Đinh lăng in vitro 25 Bảng 3.1 Hiệu quả chất khử trùng trên mẫu đỉnh sinh trưởng cây Đinh lăng 29 Bảng 3.2. Ảnh hưởng của nồng độ BAP đến hệ số nhân chồi cây Đinh lăng 33 Bảng 3.3 Ảnh hưởng của NAA đến sự hình thành rễ ở cây Đinh lăng 36 Bảng 3.4 Hàm lượng diệp lục a, diệp lục b và tổng số (a+b) 39 vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây Đinh lăng – Polyscias fruticosa (L.) Harms 3 Hình 3.1 Hiệu quả chất khử trùng trên mẫu đỉnh sinh trưởng cây Đinh lăng 30 Hình 3.2 Đỉnh sinh trưởng cây Đinh lăng. (Trái) mẫu in vitro vô trùng sau 5 ngày nuôi cấy, (Phải) mẫu in vitro bị nhiễm sau 5 ngày nuôi cấy. 31 Hình 3.3 Các bước đơn giản tạo vật liệu in vitro từ đỉnh sinh trưởng của cây Đinh lăng 33 Hình 3.4 Ảnh hưởng của nồng độ BAP đến hệ số nhân chồi cây Đinh lăng 34 Hình 3.5 Chồi Đinh lăng sau 8 tuần nuôi cấy trên môi trường có bổ sung BAP 35 Hình 3.6 Tạo rễ cây Đinh lăng in vitro 37 Hình 3.7. Hình thái chồi ngọn cây Đinh lăng 38 Hình 3.8 (A) Lát cắt ngang chồi đỉnh Đinh lăng tự nhiên, (B) Cắt ngang chồi đỉnh Đinh lăng in vitro. 38 Hình 3.9 (A) Lát cắt ngang cuống lá Đinh lăng tự nhiên; (B)Lát cắt ngang cuống lá Đinh lăng in vitro 39 Hình a: Thao tác trong box cấy vô trùng 45 Hình b: Kiểm tra mẫu nuôi cấy trong phòng cây tại Trung tâm Hỗ trợ Nghiên cứu Khoa học & Chuyển giao Công nghệ, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2.45 viii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT NAA: Napthlacetic acid BA: Benzyl adenin IBA: Indol butyric acid 2,4 – D: 2,4-Dichlorophenoxy acetic aicd BAP: 6-Benzyl amino purin MS: Murashige và Skoog Nxb: Nhà xuất bản Tp.HCM: Thành phố Hồ Chí Minh [...]... từ Đinh lăng Vì vậy, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu nhân giống cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L. ) Harms) bằng kĩ thuật in vitro. ” 2 Mục đích nghiên cứu Nhân giống cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L. ) Harm) bằng phương pháp tạo đa chồi trong điều kiện in vitro 3 Nội dung nghiên cứu - Quy trình tạo vật liệu in vitro chồi đỉnh cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L. ) Harms) -... ở Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L. ) Harms) trong nhân giống in vitro - Ảnh hưởng của α – NAA đến khả năng ra rễ của cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L. ) Harms) trong nhân giống in vitro - Nghiên cứu một số đặc điểm hình thái, giải phẫu và sinh lý chồi đỉnh cây Đinh lăng in vitro 4 Ý nghĩa của đề tài - Ý nghĩa lí luận: Nhằm góp phần bổ sung vào nguồn tài liệu nghiên cứu in vitro về cây Đinh lăng. .. loài Đinh lăng được sử dụng làm thuốc phổ biến nhất là Polyscias fruticosa (L. ) Harms Đây là loài có nhiều tác dụng dược lý giống Nhân sâm [2] 1.1.4 Hợp chất tự nhiên trong cây Đinh lăng Polyscias fruticosa (L) Harms Cây Đinh lăng chứa alkaloid, glycosid và các vitamin tan trong nước như: B1, B2, B6 và các phytosterin Vỏ và lá Đinh lăng chứa saponin [3] 1.1.4.1.Trong lá Lá Đinh lăng chứa sapoin triterpen... chế do chưa được chú ý trồng trọt, khai thác, bào chế Mặt khác, Đinh lăng có nhiều loại khác nhau như: Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fruticosa (L. ) Harms), Đinh lăng lá tròn (Polyscias balfouriana), Đinh lăng trổ (Polyscias guilfoylei) [1] Sự khác biệt về điều kiện dinh dưỡng và địa lí có thể làm thay đổi hình thái và chất lượng của Đinh lăng Để góp phần việc đẩy mạnh việc sử dụng có hiệu quả nguồn dược... đề tài Cây Đinh lăng - Polyscias fruticosa (L. ) Harms thuộc họ Nhân sâm hay Ngũ gia bì (Araliaceae) [1], là cây thuốc được sử dụng nhiều trong y học dân gian Việt Nam và Trung Quốc Theo nhiều nghiên cứu, cây Đinh lăng có nhiều tác dụng dược lí giống Nhân sâm, đặc biệt dược liệu từ cây Đinh lăng có tác dụng tăng cường thể lực, tăng sức đề kháng và tăng khả năng thích nghi [2] Các kết quả nghiên cứu trước... (Polyscias fruticosa (L. ) Harms) - Ý nghĩa thực tiễn: Kết quả của đề tài có thể được sử dụng nghiên cứu trong nuôi cấy mô tế bào cây dược liệu Góp phần sản xuất cây giống có hiệu quả cao, chất lượng tốt, ứng dụng vào sản xuất sẽ góp phần nâng cao hiệu quả nghiên cứu khai thác, bào chế các sản phẩm từ Đinh lăng 2 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu về cây Đinh lăng - Polyscias fruticosa (L. ). .. sau 4 tuần nuôi cấy 2.3.2.4 Thí nghiệm 4: Đánh giá một số đặc điểm hình thái, giải phẫu và sinh lý của cây Đinh lăng in vitro Thí nghiệm này chúng tôi bước đầu nghiên cứu một số đặc điểm hình thái giải phẫu, sinh lý của cây Đinh lăng in vitro nhằm đánh giá các đặc điểm này của cây Đinh lăng in vitro so với cây trồng ngoài tự nhiên có nhiều sự khác biệt gì hay không Thí nghiệm được tiến hành tại phòng... Javen) Đánh giá sinh trưởng mẫu Đinh lăng in vitro (Nuôi cấy mẫu trên môi trường MS cơ bản, theo dõi chỉ tiêu sau 30 ngày nuôi cấy) Quy trình tạo mẫu đinh lăng in vitro Sơ đồ 2.1 Sơ đồ nghiên cứu tạo vật liệu in vitro ở cây Đinh lăng 2.3.2 Bố trí thí nghiệm Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi công thức được nhắc lại 3 lần, 40 mẫu/công thức 22 2.3.2.1 Thí nghiệm 1: Tạo vật liệu in. .. - Polyscias fruticosa (L. ) Harms 1.1.1 Phân loại Ngành: Magnoliophyta (Ngọc lan) Lớp: Magnolyopsida (Ngọc lan) Bộ: Araliales (Nhân sâm) Họ: Araliaceae (Nhân sâm hay Ngũ gia b ) Loài: Polyscias fruticosa (L. ) Harms (Đinh lăng, cây gỏi cá, Nam dương lâm, ) [1] 1.1.2 Mô tả Cây Đinh lăng - Polyscias fruticosa (L. ) Harms là cây bụi cao 0,5 – 2 m Thân tròn sần sùi, không có gai Rễ phù như củ Lá kép mọc cách,... Vật liệu và thiết bị nghiên cứu 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu Mẫu cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L. ) Harms) được thu ngoài tự nhiên tại khu vực phường Xuân Hòa, thị xã Phúc Yên, tỉnh Vĩnh Phúc Cây được trồng, chăm sóc trong chậu, khi cây có chồi non khoảng 3-4 cm thì tiến hành thu mẫu cho nghiên cứu về nuôi cấy mô tại Phòng Nuôi cấy mô tế bào thực vật, Trung tâm Hỗ trợ Nghiên cứu Khoa học & Chuyển . cứu đề tài: Nghiên cứu nhân giống cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L. ) Harms) bằng kĩ thuật in vitro. ” 2. Mục đích nghiên cứu Nhân giống cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L. ) Harm) bằng. (Polyscias fruticosa (L. ) Harms) trong nhân giống in vitro. - Ảnh hưởng của α – NAA đến khả năng ra rễ của cây Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L. ) Harms) trong nhân giống in vitro. - Nghiên cứu một. Mặt khác, Đinh lăng có nhiều loại khác nhau như: Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fruticosa (L. ) Harms), Đinh lăng lá tròn (Polyscias balfouriana), Đinh lăng trổ (Polyscias guilfoylei) [1]. Sự khác