B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I - T TH KIM CHUNG M T S ð C ðI M D CH T H C C A B NH CRD GÀ B N ð A PHÂN L P, GIÁM ð NH ð C TÍNH SINH H C C A MYCOPLASMA VÀ CÁC CH NG VI KHU N K PHÁT LU N VĂN TH C SĨ NÔNG NGHI P HÀ N I - 2012 B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I - T TH KIM CHUNG M T S ð C ðI M D CH T H C C A B NH CRD GÀ B N ð A PHÂN L P, GIÁM ð NH ð C TÍNH SINH H C C A MYCOPLASMA VÀ CÁC CH NG VI KHU N K PHÁT LU N VĂN TH C SĨ NÔNG NGHI P Chuyên ngành: Thú y Mã s : 60.62.50 Ngư i hư ng d n khoa h c: TS NGUY N BÁ HIÊN HÀ N I - 2012 L I CAM ðOAN Tơi xin cam đoan r ng, s li u k t qu nghiên c u lu n văn trung th c chưa t ng ñư c s d ng ñ b o v m t h c v Tơi xin cam đoan r ng, thơng tin trích d n lu n văn ñã ñư c ch rõ ngu n g c Hà N i, ngày … tháng … năm 2012 Tác gi T Th Kim Chung Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… i L I C M ƠN M ñ u c a Lu n văn cho tơi xin đư c chân thành c m ơn s giúp ñ c a th y, cô giáo B môn Vi sinh v t – Truy n nhi m, th y cô giáo khoa Thú y, cán b qu n lý t i Vi n Sau ñ i h c, trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i, toàn th th y giáo, giáo gi ng d y tơi th i gian h c Cao h c t i trư ng ð c bi t xin chân thành c m ơn Th y giáo - TS Nguy n Bá Hiên t n tình hư ng d n, đóng góp nhi u ý ki n quý báu, t o ñi u ki n thu n l i cho su t trình h c t p hồn thành lu n văn Tơi xin chân thành c m ơn ñ ng nghi p, b n bè gia đình giúp đ , đ ng viên đ tơi có th hồn thành chương trình h c t p hoàn thành Lu n văn t t nghi p Hà N i, ngày 12 tháng 10 năm 2012 Tác gi T Th Kim Chung Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… ii M CL C L i cam ñoan i L i c m ơn ii M c l c .iii B ng ch vi t t t v Danh m c b ng vi Danh m c hình iix M ð U Ph n I: T NG QUAN TÀI LI U 1.1 B NH CRD (Chronic Respiratory Disease) .3 1.2 M M B NH MYCOPLASMA GALISEPTICUM 18 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN C U B NH DO MYCOPLASMA GIA C M 20 Ph n II: ð I TƯ NG - N I DUNG - NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 24 2.1 ð I TƯ NG NGHIÊN C U 24 2.2 N I DUNG NGHIÊN C U 24 2.3 NGUYÊN LI U NGHIÊN C U 24 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U .28 Ph n III: K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 38 3.1 M T S ð C ðI M D CH T C A B NH DO MYCOPLASMA GÂY RA GÀ B N ð A NUÔI T I HÀ N I VÀ VÙNG PH C N 38 3.1.1 K t qu xác ñ nh t l nhi m Mycoplasma gallisepticum gà b n ñ a b ng ph n ng ngưng k t nhanh phi n kính 38 3.1.2 Tri u ch ng lâm sàng, b nh tích đ i th đ c trưng c a gà nghi m c CRD 41 3.1.3 K t qu xác ñ nh t l gà nghi m c b nh CRD theo l a tu i 43 3.1.4 K t qu xác ñ nh t l gà nghi m c b nh CRD theo gi ng 45 3.1.5 K t qu xác ñ nh t l gà nghi m c b nh CRD theo hình th c chăn ni 47 3.1.6 K t qu xác ñ nh t l gà nghi m c b nh CRD theo tháng 49 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… iii 3.1.7 K t qu xác ñ nh t l gà nghi m c b nh CRD ñ a bàn ñi u tra 50 3.2 PHÂN L P VÀ GIÁM ð NH M T S ð C TÍNH SINH H C C A MYCOPLASMA GÂY B NH CRD GÀ B N ð A .52 3.2.1 Phân l p Mycoplasma t b nh ph m gà nghi m c CRD 52 3.2.2 K t qu giám ñ nh Mycoplasma gallisepticum phân l p ñư c t b nh ph m b ng phương pháp sinh v t hóa h c 54 3.2.3 Giám ñ nh Mycoplasma gallisepticum b ng phương pháp PCR 56 3.3 PHÂN L P VÀ GIÁM ð NH M T S ð C TÍNH SINH H C C A CÁC CH NG VI KHU N K PHÁT TRONG B NH CRD GÀ B N ð A 63 3.3.1 Phân l p vi khu n k phát b nh CRD gà b n ñ a 63 3.3.2 K t qu ki m tra m t s đ c tính sinh v t hóa h c c a ch ng vi khu n k phát v i Mycoplasma gallisepticum 64 3.4 K T QU KI M TRA TÍNH M N C M V I KHÁNG SINH C A MYCOPLASMA GALLISEPTICUM VÀ NH NG CH NG VI KHU N K PHÁT ð XU T PHÁC ð ðI U TR B NH 67 3.4.1 K t qu ki m tra s m n c m v i kháng sinh c a m t s ch ng Mycoplasma gallisepticum phân l p ñư c 67 3.4.2 K t qu ki m tra s m n c m v i kháng sinh c a m t s vi khu n k phát v i Mycoplasma gallisepticum ñ xu t kháng sinh s d ng phác ñ ñi u tr b nh 69 K T LU N VÀ ð NGH 75 TÀI LI U THAM KH O 77 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… iv DANH M C CÁC CH VI T T T CRD : Chronic Respiratory Disease ADN : Acid Deoxyribonucleic ELISA : Enzyme Linked Immunosorbent Assey EMB : Eosin Methylene Blue MA : Mycoplasma Agar MB : Mycoplasma Broth MG : Mycoplasma gallisepticum MS : Mycoplasma synoviae OIE : Office International des épizooties (t ch c d ch t th kgP : kilôgam th tr ng PCR : Polymerase Chain Reaction (ph n ng nhân gen) PPLO : Pleuro – Pneumonia Like Organisms RNA : Acid Ribonucleic TE : Tris - EDTA gi i) VSV – TN : vi sinh v t – truy n nhi m Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… v DANH M C CÁC B NG B ng 3.1 K t qu xác ñ nh t l nhi m Mycoplasma gallisepticum gà b n ñ a b ng ph n ng ngưng k t nhanh phi n kính 39 B ng 3.2 Tri u ch ng lâm sàng, b nh tích đ i th đ c trưng c a gà nghi m c b nh CRD 41 B ng 3.3 K t qu xác ñ nh t l gà nghi m c b nh CRD theo l a tu i 44 B ng 3.4 K t qu xác ñ nh t l gà nghi m c b nh CRD theo gi ng 46 B ng 3.5 K t qu xác ñ nh t l gà nghi m c b nh CRD theo hình th c chăn ni 48 B ng 3.6 K t qu xác ñ nh t l gà nghi m c b nh CRD theo tháng ñi u tra 49 B ng 3.7 K t qu xác ñ nh t l gà nghi m c b nh CRD ñ a bàn ñi u tra 50 B ng 3.8 K t qu phân l p Mycoplasma t b nh ph m gà nghi m c CRD 52 B ng 3.9 K t qu giám ñ nh Mycoplasma gallisepticum phân l p ñư c t b nh ph m b ng phương pháp sinh v t, hóa h c 55 B ng 3.10 K t qu giám đ nh Mycoplasma gallisepticum t mơi trư ng phân l p b ng phương pháp PCR 60 B ng 3.11 K t qu ch n đốn Mycoplasma gallisepticum t b nh ph m b ng phương pháp PCR 62 B ng 3.12 K t qu phân l p m t s vi khu n k phát v i Mycoplasma gallisepticum b nh ph m 63 B ng 3.13 K t qu ki m tra m t s ñ c tính sinh v t hóa h c c a Streptococcus spp 64 B ng 3.14 K t qu ki m tra m t s đ c tính sinh v t hóa h c c a Pasteurella multocida 65 B ng 3.15 K t qu ki m tra m t s đ c tính sinh v t hóa h c c a Escherichia coli 66 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… vi B ng 3.16 K t qu ki m tra s m n c m v i kháng sinh c a m t s ch ng Mycoplasma gallisepticum ñư c phân l p 68 B ng 3.17 K t qu ki m tra s m n c m v i kháng sinh c a m t s vi khu n k phát v i Mycoplasma gallisepticum 70 B ng 3.18 K t qu th nghi m kháng sinh ñi u tr b nh CRD gà b n ñ a 73 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… vii DANH M C CÁC HÌNH Hình 3.1 K t qu dương tính c a ph n ng ngưng k t nhanh phi n kính v i kháng nguyên chu n Mycoplasma gallisepticum 40 Hình 3.2 Tích d ch khí qu n 43 Hình 3.3 Viêm túi khí 43 Hình 3.4 Mycoplasma mơi trư ng nư c th t (MB) 53 Hình 3.5 Mycoplasma môi trư ng th ch (MA) 53 Hình 3.6 Khu n l c Mycoplasma dư i kính hi n vi quang h c (x40) 54 Hình 3.7 Vi khu n Mycoplasma dư i kính hi n vi quang h c (x100) 54 Hình 3.8 K t qu PCR phát hi n Mycoplasma gallisepticum theo qui trình c a OIE., 2008 58 Hình 3.9 Khu n l c c a Mycoplasma gallisepticum môi trư ng MA 59 Hình 3.10 K t qu giám đ nh Mycoplasma gallisepticum môi trư ng phân l p b ng phương pháp PCR 60 Hình 3.11 K t qu phát hi n Mycoplasma gallisepticum t b nh ph m b ng phương pháp PCR 61 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… viii B ng 3.17 K t qu ki m tra s m n c m v i kháng sinh c a m t s vi khu n k phát v i Mycoplasma gallisepticum Streptococcus spp Lo i kháng sinh P multocida Escherichia coli (n=59) (n=65) (n=53) S ch ng T l S ch ng T l S ch ng T l m nc m (%) m nc m (%) m nc m (%) Amoxicillin 43 72,88 55 84,62 43 81,13 Colistin 11 18,64 33 50,77 38 71,70 Doxycyclin 48 81,36 55 84,62 46 86,79 Enrofloxacin 47 79,66 59 90,77 47 88,68 Gentamicin 49 83,05 57 87,69 44 83,02 Tetracycline 15 25,42 56 86,15 43 81,13 Tiamulin 45 76,27 52 80,00 42 79,25 Tilmicosin 49 83,05 61 93,85 48 90,57 Tylosin 47 79,66 58 89,23 45 84,91 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 70 Như v y lo i m m b nh chúng tơi ki m tra tính m n c m kháng sinh, có Tilmicosin m n c m cao v i c lo i Ti p theo Enrofloxacin m n c m cao v i 3/4 lo i Doxycycline tác d ng t t v i Tiamulin Tylosin, Gentamicin tác d ng t t ch v i lo i m m b nh V vi c s d ng kháng sinh ñi u tr b nh CRD gia c m, Standley (2001) ñã th nghi m cho u ng Enrofloxacin liên t c 14 ngày v i li u 10mg/kg th tr ng, sau ñi u tr tu n t l nhi m Mycoplasma gallisepticum gà ch gi m 40% Lê Th H i Y n (2003) ñã s d ng phác ñ nêu cho u ng liên t c 30 ngày làm gi m t l nhi m Mycoplasma gallisepticum đàn gà thí nghi m t 100% xu ng cịn 52,5% sau 30 ngày u tr Nhi u tác gi khác nghiên c u v vi c s d ng Enrofloxacin phòng tr b nh Khi s d ng Enrofloxacin phòng cho ñàn gà th t k t qu bi u hi n gà 45 ngày tu i không th y có Mycoplasma gallisepticum so v i tình tr ng lưu hành 15,9% Mycoplasma gallisepticum đàn gà khơng đư c phòng (P