MỞ ĐẦU 1. Tính cấp thiết của đề tài Phân vi sinh có nhiều ưu điểm so với phân hóa học, ngoài tác dụng nâng cao năng suất và chất lượng cây trồng, tiết kiệm phân vô cơ, giảm chi phí sản suất thì phân vi sinh còn góp phần quan trọng trong việc bảo vệ môi trường và phát triển nông nghiệp bền vững. Tuy nhiên tình hình sản xuất phân vi sinh ở nước ta vẫn chưa đáp ứng đủ nhu cầu thực tiễn sản xuất của nền nông nghiệp, do quy mô sản xuất nhỏ, chất lượng sản phẩm chưa hoàn thiện và ổn định. Do đó, nghiên cứu để hoàn thiện và nâng cao chất lượng phân vi sinh là việc làm hết sức cần thiết. Trong đó, việc phân lập và tuyển chọn các chủng vi sinh vật là khâu đầu tiên và quan trọng trong quy trình tạo ra chế phẩm [5]. Hướng đến một nền sản xuất nông nghiệp sinh thái bền vững, trong vài chục năm gần đây ngày càng gia tăng các nghiên cứu vi khuẩn có ích khu trú trong rễ cây trồng không thuộc cây họ đậu, đặc biệt ở cây ngũ cốc. Theo Doebereiner, vi khuẩn Azospirillum ở trong rễ cây không gặp phải sự cạnh tranh nguồn Carbon như vi khuẩn khu trú trên bề mặt rễ và có thể cung cấp đạm cho cây trồng mà không phải nhờ đến khi tế bào chết [35]. Nhóm Azospirillum là vi khuẩn sống trong rễ các loại cây ngũ cốc như lúa, ngô. Nhóm vi khuẩn này có khả năng cố định N, tổng hợp nhiều chất kích thích sinh trưởng thực vật IAA, GA 3 … góp phần nâng cao độ phì nhiêu của đất, kích thích tăng trưởng, tăng năng suất cây trồng, hạn chế bón phân hóa học và phát triển nền nông nghiệp sinh thái bền vững [35] Ở Việt Nam đã có một số nghiên cứu, phân lập các chủng vi khuẩn thuộc chi Azospirillum trong rễ lúa. Bên cạnh đó, ngô là một đối tượng có vòng đời sinh trưởng và phát triển tương đối ngắn, ít đầu tư, hiệu quả kinh tế cao, được trồng phổ biến. Tuy nhiên, những nghiên cứu về vi khuẩn cố định đạm Azospirillum trong rễ cây ngô còn rất ít. Đặc biệt, hiện nay chưa có một nghiên 1 cứu nào về thành phần loài của chi Azospirillum trong rễ cây ngô tại một số địa phương của tỉnh Đăk Nông. Xuất phát từ thực tế đó, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: “Phân lập, tuyển chọn một số chủng vi khuẩn cố định đạm Azospirillum trong rễ cây ngô tại một số địa điểm của tỉnh Đăk Nông”. 2. Mục tiêu của đề tài - Phân lập và tuyển chọn được một số chủng Azospirillum cố định đạm trong rễ cây ngô. - Xây dựng qui trình nhân sinh khối một số chủng Azospirillum có hoạt tính cố định đạm làm phân sinh học chuyên dụng cho cây ngô. 3. Ý nghĩa của đề tài Ý nghĩa khoa học Xác định được một số chủng Azospirillum có khả năng cố định đạm, sống nội sinh trong rễ cây ngô. Ý nghĩa thực tiễn Kết quả của đề tài là cơ sở cho việc lựa chọn các chủng Azospirillum sống nội sinh trong rễ cây ngô có hoạt tính cố định đạm để sản xuất phân vi sinh có hiệu quả, nâng cao độ phì nhiêu của đất, hạn chế bón phân hóa học, tăng năng suất cây ngô và góp phần phát triển một nền nông nghiệp sinh thái bền vững. 2 PHẦN I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu về cây ngô 1.1.1 Phân loại thực vật Ngô có tên khoa học là Zea mays L (Zea: Từ Hi Lạp để chỉ cây ngũ cốc và từ Mays là từ “Mahix” tên gọi cây ngô của người bản địa da đỏ [7]. Cũng có thể Mays là từ “Maya” tên một bộ tộc da đỏ ở vùng Trung Mỹ - xuất xứ của cây ngô) [18]. Cây ngô thuộc: Ngành : Maopholiophyta Lớp : Liliopsida Bộ : Poales Chi : Zea Loài : Mays 1.1.2 Đặc điểm hình thái cây ngô [7],[15],[16] Rễ ngô: trong quá trình sinh trưởng phát triển, cây ngô có 3 loại rễ. Đó là: rễ mầm, rễ đốt và rễ chân kiềng. Thân ngô: thân đặc, đường kính thân khoảng 2 – 4cm tùy thuộc vào giống, mùa vụ và trình độ thâm canh, thân có nhiều lóng. Trong điều kiện bình thường ngô cao từ 1,8 – 2m, từ khi mọc đến khi cây có 6 – 7 lá thân phát triển chậm, từ lúc 8 – 9 lá đến nhú cờ, nở hoa cây phát triển nhanh và đến khi hoa đực phơi màu, bắp phun râu cây vẫn tiếp tục lớn. Sau khi thụ phấn thì thân ngừng phát triển. Lá ngô: gồm có lá mầm, lá thân, lá ngọn và lá bẹ. Lá được chia thành các bộ phận như: bẹ lá, phiến lá và thìa lá. Phiến lá rộng và dài, mép lá gợn sóng, có nhiều lông tơ. Gân lá song song. Lá mang bắp có chiều dài dài nhất. Hoa ngô: gồm hoa đực ( bông cờ) và hoa cái. Bông cờ có nhiều nhánh, mỗi nhánh có nhiều hoa xếp thành từng chùm, mỗi chùm có hai hoa, mỗi hoa có 3 nhị đực, mỗi nhị đực có 1 bao phấn, một bao phấn có hai ô, một ô chứa từ 1000 – 2500 hạt phấn. Hoa cái sinh ra từ nách lá gồm có lõi bắp có nhiều 3 đốt ngắn có lá bao bi, mỗi hoa cái có một râu. Hoa cái mọc từng đôi trên hoa tự. Mỗi chùm hoa có hai hàng hoa nhưng hoa thứ hai bị thoái hóa chỉ một hoa hình thành hạt, một đôi chùm hoa cho hai hàng hạt nên hàng hạt ở trên bắp luôn luôn chẵn. Hạt ngô: thuộc loại quả dĩnh, gồm các bộ phận chính là vỏ hạt, lớp alơron, phôi và nội nhũ, phía dưới của hạt có gốc hạt là phần dính liền hạt với lõi ngô. Hạt ngô được hình thành gồm các giai đoạn: từ thụ phấn đến chín sữa là 10 – 15 ngày, từ chín sữa đến chín sáp là 15 – 20 ngày và từ chín sáp đến chín hoàn toàn là 10 – 15 ngày. 1.1.3 Yêu cầu sinh thái của cây ngô [18],[22] 1.1.3.1 Yêu cầu nhiệt độ Ngô là cây trồng ưa khí hậu ẩm, nhiệt độ thích hợp vào khoảng 20 0 C - 28 0 C. Nhiệt độ có thể ảnh hưởng đến thời gian sinh trưởng của cây ngô. Trong cả chu kỳ sống cũng như trong từng thời kỳ sinh trưởng phát triển của cây ngô cần một lượng tích nhiệt nhất định. Đủ lượng nhiệt cây mới sinh trưởng phát triển bình thường. Tùy vào từng giống khác nhau mà cần một lượng nhiệt khác nhau. Giống càng chín muộn thì cần lượng tích nhiệt càng cao. 1.1.3.2 Yêu cầu về ánh sáng Ngô là cây có nguồn gốc nhiệt đới thuộc nhóm cây ngày ngắn. Ánh sáng là yếu tố quan trọng cho sinh trưởng và phát triển của cây ngô, tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình tích luỹ chất dinh dưỡng và ảnh hưởng đến độ dài của quá trình sinh trưởng. Trung bình cần 12 giờ chiếu sáng/ngày. Nghiên cứu phản ứng của cây ngô với độ dài ngày cho thấy cây ngô hình thành các kiểu hình thái khác nhau. D.Azit đã chỉ ra rằng: Các giống ngô ở châu Âu do kết quả chọn lọc đã hoàn thành được chu kỳ ánh sáng trong điều kiện ngày dài, loại trừ được yêu cầu ngày ngắn. Cuperman và Razumov cho rằng rút ngắn thời gian chiếu sáng ban ngày đến 12 giời sẽ thúc đẩy sự trổ cờ và hình thành bắp. 4 Ánh sáng ảnh hưởng đến sinh trưởng của cây ngô ở hai mặt là số giờ chiếu sáng và chất lượng ánh sáng. Những tia sáng dài đã kìm hãm sự sinh trưởng của cây ngô, các tia sáng ngắn lại thúc đẩy sự phát triển. Nghiên cứu của Cuperman đã xác định thời gian chiếu sáng và chất lượng ánh sáng đã gây ảnh hưởng rất lớn đến sự phát triển của bắp và bông cờ của cây ngô. Trong điều kiện chiếu sáng bằng ánh sáng trắng và xanh lam thì sự phát triển của cây diễn ra nhanh nhất. Trong diều kiện chiếu sáng bằng ánh sáng đỏ thì sự phát triển của bông cờ hầu như không bị ảnh hưởng nhưng sự hình thành của bắp chậm lại. Ánh sáng lục kìm chế sự sinh trưởng và phát dục của bắp. 1.1.3.3 Yêu cầu về nước Ngô là cây trồng cạn, bộ rễ ngô phát triển rất mạnh, hút nước khỏe và sử dụng tiết kiệm nước. Cây ngô sinh trưởng nhanh tạo ra sinh khối lớn. Do vậy cây cần một lượng nước rất lớn. Trung bình cây ngô trong một chu kỳ sống cần khoảng 200 lít nước để sinh trưởng và phát triển. Ở các thời kì sinh trưởng khác nhau cây ngô yêu cầu lượng mưa và lượng nước tưới khác nhau. Cây ngô không chịu được úng, độ ẩm của đất quá cao, lớn hơn 80% có ảnh hưởng xấu đến sinh trưởng phát triển của cây ngô, đặc biệt là từ lúc cây mọc đến khi cây được 8 lá. Vào giai đoạn này chỉ cần ngập nước 1 – 2 ngày cây ngô cũng có thể bị chết úng. Ẩm độ thích hợp khoảng 70%. 1.1.3.4 Yêu cầu về đất Đất rất quan trọng trong sản xuất ngô, đất trồng ngô phải tơi xốp, nhiều mùn, hàm lượng dinh dưỡng cao, dễ thoát nước, tầng canh tác dày, pH từ 6 – 7, thuận lợi cho việc tưới nước vào mùa khô và tiêu nước vào mùa mưa. Hầu hết, ngô được trồng ở trên đất cạn, không ngập nước, đất có thành phần cơ giới nhẹ, đất cát pha, trên các loại đất vụ trước trồng các cây họ đậu, hoặc các cây phân xanh cải tạo đất. 1.1.3.5 Yêu cầu chế độ không khí trong đất Để thu hoạch sản lượng ngô cao, ngoài việc cung cấp nước và dinh dưỡng còn phải chú ý đến chế độ không khí ở trong đất. Chế độ không khí 5 ảnh hưởng gián tiếp thông qua nhiều khâu khác nhau như là vi sinh vật, quá trình biến đổi hóa học trong đất. Cây ngô đặc biệt là rễ ngô phát triển tốt trong điều kiện háo khí, nếu đất chặt bí thiếu tơi xốp thì rễ ngô phát triển kém, ăn nông, rễ ngắn ít lông hút, khả năng hút dinh dưỡng khoáng và nước kém. Dẫn đến tình trạng cây ngô thiếu dinh dưỡng sẽ sinh trưởng, phát triển kém. 1.1.4 Vai trò các chất dinh dưỡng với cây ngô[17],[21] 1.1.4.1 Vai trò của đạm Đạm là yếu tố dinh dưỡng quan trọng nhất, đóng vai trò tạo năng suất và chất lượng của ngô, 66% đạm được tích luỹ trong hạt. Cây ngô hút đạm tăng dần từ khi cây có 3 – 4 lá tới trước trổ cờ. Ở nước ta, một số kết quả nghiên cứu cho thấy thời kỳ hút đạm mạnh nhất là 6 – 12 lá và trước khi trổ cờ, nếu các giai đoạn này mà thiếu đạm thì năng suất giảm rõ rệt. Triệu chứng thiếu đạm ở ngô: cây thấp, lá nhỏ có màu vàng, các lá già có vệt xém đỏ, cây sinh trưởng chậm, cằn cỗi, cờ ít, bắp nhỏ, năng suất thấp. 1.1.4.2 Vai trò của lân Lân có vai trò quan trọng với cây ngô tuy nhiên khả năng hút lân ở giai đoạn cây non lại rất yếu. Thời kỳ 3 – 4 lá, cây ngô hút không được nhiều lân, đó là thời kỳ khủng hoảng lân của ngô, nếu thiếu lân trong giai đoạn này sẽ làm giảm năng suất nghiêm trọng. Cây ngô hút nhiều lân nhất ( khoảng 62% tổng lượng lân yêu cầu) ở thời kỳ 6 – 12 lá sau đó giảm đi ở các thời kỳ sau. Triệu chứng thiếu lân của ngô biểu hiện bằng màu huyết dụ trên bẹ lá và gốc cây, trái cong queo. Trường hợp thiếu nặng lá sẽ chuyển vàng và chết. Hiện tượng này xảy ra ở lá già trước, sau đó chuyển sang lá non và phổ biến ở ngô vụ đông trong điều kiện thời tiết khắc nghiệt. 1.1.4.3 Vai trò của kali Kali có vai trò rất quan trọng tới sự sinh trưởng, phát triển và năng suất của ngô. Kali tích luỹ nhiều ở thân, lá (khoảng 80%) và tích luỹ trong hạt 6 ít hơn. Cây ngô hút kali mạnh ngay từ giai đoạn sinh trưởng ban đầu. Từ khi cây mọc tới trổ cờ ngô đã hút khoảng 70% lượng kali cây cần. Thiếu kali, protein và sắt sẽ tích tụ gây cản trở quá trình vận chuyển chất hữu cơ. Thiếu kali là nguyên nhân rễ ngang phát triển mạnh, rễ ăn sâu kém phát triển, do đó cây dễ đổ. Thiếu kali thể hiện ở các triệu chứng như chuyển nâu và khô dọc theo mép và chóp lá, bắp nhỏ, nhiều hạt lép ở đầu bắp (bắp đuôi chuột) và năng suất thấp. 1.1.4.4 Vai trò các nguyên tố vi lượng Đối với cây ngô, các chất vi lượng thường thiếu là kẽm và molypđen. Thiếu kẽm lá có màu trắng (bệnh bạch tạng), giữa các gân lá có những dải màu vàng sáng, các lóng ngắn lại. Hiện tượng thiếu kẽm thường xảy ra trên đất kiềm, nghèo mùn, đất giàu lân dễ tiêu hay bón quá nhiều lân. Thiếu molypđen lá chuyển xanh nhạt, lá non teo lại và héo, nặng hơn lá ngọn không bung ra được, có nhiều vết xém vàng. 1.2 Tổng quan về vi khuẩn cố định Nitơ (N ) Vi sinh vật cố định N có một vai trò quan trọng trong chu trình tuần hoàn N 2 và cung cấp một lượng N đáng kể cho cây trồng. Theo tính toán của các nhà khoa học, các nhóm vi sinh vật cố định N BNF (Biological nitrogen fixation) có thể cung cấp tới 240 x 10 6 tấn N/năm trên cả hành tinh, gấp 6 lần lượng N mà cả thế giới sản xuất bằng con đường hóa học. Vi sinh vật cố định N là các nhóm vi sinh vật có khả năng chuyển hóa khí N 2 dồi dào trong không khí (79%) thành dạng NH 4 + cung cấp cho cây. Vi khuẩn cố định N gồm có hai nhóm lớn:[5]. - Vi khuẩn cố định N tự do gồm: + Vi khuẩn cố định N tự do hiếu khí: Azotobacter và Beijerinskia sp. + Vi khuẩn cố định N kỵ khí: Vi khuẩn thuộc nhóm Clostridium. 7 - Vi khuẩn cố định N cộng sinh như cộng sinh với rễ cây họ đậu Rhizobium, cộng sinh với rễ lúa Azoarcus, 1.2.1 Vi khuẩn cố định N tự do 1.2.1.1 Vi khuẩn cố định N tự do hiếu khí Nhóm này gồm hai chi chính là Beijerinskia sp và Azotobacter sp.[5] - Beijerinskia sp. Được phân lập bởi Starkey (1939), là loại có đặc điểm giống với Azotobacter sp. Tế bào có hình dạng thay đổi như hình cầu, hình que, hình bầu dục. Beijerinski là vi khuẩn gram âm, không sinh bào tử. Có khả năng sống tốt trong môi trường axit ( pH=3). Vi khuẩn có khả năng cố định được 16 - 20 mg N khi đồng hóa hết 1g dinh dưỡng Carbon. Ngoài khả năng cố định N chúng còn có khả năng tổng hợp các chất kích thích sinh trưởng cho cây trồng. - Azotobacter sp. Là vi khuẩn gram âm, không sinh bào tử có khả năng cố định N tự do. Khi chưa trưởng thành tế bào thường có hình que, sinh sản bằng cách phân cắt, di chuyển nhờ tiêm mao. Khi trưởng thành mất khả năng di chuyển, kích thước thu nhỏ thành dạng cầu được bao bọc bởi một lớp nhầy. Khuẩn lạc của Azotobacter có dạng cầu lồi, nhẵn bóng, có khi nhăn nheo. Các nòi phân lập từ tự nhiên có khả năng cố định 10 - 15mg N khi tiêu thụ hết 1g dinh dưỡng Carbon. Một số nòi tuyển chọn có khả năng cố định tới 30mg/1g dinh dưỡng Carbon. Trong đất, Azotobacter tập trung ở vùng đất xung quanh rễ cây. Ngoài khả năng cung cấp dinh dưỡng N cho cây nó còn có khả năng kích thích nảy mầm, kích thích sinh trưởng. Trong đất, Azotobacter thường phổ biến các nòi sau: 8 + Azotobacter chrococum: kích thước tế bào 2,0 x 3,1 micromet, có khả năng di động khi còn non. Khi già hình thành nang xác. Khuẩn lạc có màu nâu hoặc đen khi về già, không khuếch tán ra môi trường. + Azotobacter beijerinckii: có kích thước 2,4 x 4,6 micromet. Không có khả năng di động và hình thành nang xác. Khuẩn lạc khi già có màu nâu sáng, sắc tố không khuếch tán ra môi trưòng nuôi cấy. + Azotobacter vinelandii: tế bào có kích thước 1,5 x 3,4 micromet, có khả năng di động và hình thành nang xác. Khuẩn lạc màu lục huỳnh quang, sắc tố khuếch tán vào môi trường. + Azotobacter agilis: tế bào có kích thước 2,8 x 3,3 micromet, có khả năng di động, không hình thành nang xác, khuẩn lạc màu vàng lục huỳnh quang, sắc tố khuếch tán vào môi trường [5]. 1.2.1.2 Vi khuẩn cố định N tự do kỵ khí Clostridium Clostridium được phát hiện lần đầu tiên bởi Vinogradxki (1893). Vi khuẩn Clostridium có kích thước 2,5 – 7,5 x 0,7 – 1,3 micromet, có thể đứng riêng rẽ hoặc kẹp đôi thành chuỗi ngắn. Bào tử hình bầu dục, có khả năng chịu được nhiệt độ cao và khô hạn. Clostridium có khả năng tích lũy được 10 - 15mg N phân tử khi đồng hóa hết 1g đường Carbon [5]. 1.2.2 Vi khuẩn cố định N cộng sinh 1.2.2.1 Các vi khuẩn sống cộng sinh với cây họ Đậu Vi khuẩn cố định N cộng sinh với cây họ đậu còn gọi là vi khuẩn nốt sần. Chúng hình thành các nốt sần với rễ cây họ đậu như cây đậu tương, lạc, điền thanh, muồng, cốt khí, trinh nữ, chúng sử dụng dinh dưỡng carbon của cây và cố định N không khí để sử dụng và cung cấp một phần cho cây chủ. Gồm có: Rhizobium, Bradyrhizobium, Azorhizobium và Sinorhizobium[9]. - Rhizobium 9 Năm 1868, nhà khoa học Hà Lan M.W.Beijrinck đã phân lập được loài vi khuẩn sống cộng sinh trong nốt sần ở rễ một cây thuộc bộ đậu, ông đã đặt tên là Basilusradicicola. Năm 1889, vi khuẩn này được xếp vào chi Rhizobium ( B.Frank, 1989). Trên môi trường đặc, chúng có khuẩn lạc trơn bóng, nhầy, khi còn non có khả năng di động nhờ tiêm mao, khi tế bào già trở nên bất động. Rhizobium thuộc loại hảo khí ưa pH trung tính hoặc kiềm ( pH từ 6,5 - 7,5), nhiệt độ thích hợp 24 – 26 0 C. Chúng xâm nhiễm vào rễ cây bộ đậu thông qua lông hút, đôi khi qua vết thương ở vỏ rễ. Dưới ảnh hưởng của vi khuẩn, rễ tiết ra enzyme polyalacturonase phân huỷ thành lông hút tạo điều kiện cho vi khuẩn xâm nhập vào rễ. Theo tính toán của các nhà khoa học nhóm vi khuẩn này có khả năng cung cấp cho cây 80 -120kg N/ ha. - Bradyrhizobium Vi khuẩn hình que, kích thước trung bình 0,5 - 0,9 x 1,2 - 3,0 µm, thường chứa chất dự trữ PHB. Trên môi trường đặc, khuẩn lạc của chúng có dạng trơn, bóng, nhầy, không màu. Bradyrhizobium là vi khuẩn hiếu khí, tuy nhiên chúng có thể phát triển được ngay trong trường hợp chỉ có một áp lực oxy rất thấp khoảng 0,001atm. Chúng phát triển thích hợp ở pH= 6,5 - 7,5. Nhiệt độ phát triển thích hợp là 24 – 26 0 C, nhiệt độ 37 0 C sự phát triển của chúng bị cản trở một cách rõ rệt. - Azorhizobium Azorhizobium là một giống mới được đề nghị với một loài là Azorhizobium caulinodans chính là các vi khuẩn cộng sinh ở rễ và thân của Sesbania rostrata - Sinorhizobium Gồm các vi khuẩn phát triển nhanh, cộng sinh ở nốt rễ cây đậu nành được phân lập từ Trung Quốc. Giống Sinorhizobium gồm có 2 loài là Sinorhizobium fredii và Sinorhizobium xinjiangensis. 1.2.2.2 Các vi khuẩn sống cộng sinh với cây không thuộc họ Đậu 10 [...]... vi khuẩn Azospirillum chủng K25 - Nghiệm thức 4: không bón phân đạm, nhiễm vi khuẩn Azospirillum chủng D06 - Nghiệm thức 5: bón 50% phân đạm, nhiễm vi khuẩn Azospirillum chủng K17 - Nghiệm thức 6: bón 50% phân đạm, nhiễm vi khuẩn Azospirillum chủng K25 - Nghiệm thức 7: bón 50% phân đạm, nhiễm vi khuẩn Azospirillum chủng D06 27 - Nghiệm thức 8: bón 75% phân đạm, nhiễm vi khuẩn Azospirillum chủng K17... trên cây ngô 3 Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân sinh khối của các chủng Azospirillum được tuyển chọn 2.2 Vật liệu và địa điểm nghiên cứu 2.2.1 Vật liệu và thiết bị nghiên cứu * Vật liệu: - Các chủng vi khuẩn cố định đạm Azospirillum được phân lập từ rễ cây ngô trong giai đoạn trổ cờ tại huyện Krông Nô, Cư Jut, Đăk Mil thuộc tỉnh Đăk Nông - Giống ngô lai C919 cung cấp bởi Công ty Monsanto Vi t Nam - Vi. .. thái, đặc điểm sinh học của các chủng Azospirillum Mô tả các đặc điểm hình thái của các chủng dưới kính hiển vi, xác định đặc điểm sinh học và định danh theo khoá phân loại của Bergey 1994 2.3.4 Phương pháp xác định khả năng tạo IAA của các chủng Azospirillum Đánh giá khả năng tạo IAA của các chủng Azospirillum dựa trên nồng độ IAA có trong dich chiết từ dịch nuôi cấy vi khuẩn Nồng độ IAA có trong dịch... (1999) nghiên cứu ảnh hưởng của các chủng cố định N trong rễ lúa đến sinh trưởng của mầm lúa CR 203 Nhóm tác giả đã phân lập được 78 chủng cộng sinh với rễ lúa Các chủng này có đặc điểm của chi Azospirillum Các chủng này kích thích sự nảy mầm và rễ của lúa CR 203 [1] Lăng Ngọc Dậu (2004) đã nghiên cứu khả năng tạo IAA của vi khuẩn Azospirillum lipoferum, tiến hành nuôi cấy chủng vi khuẩn này trên môi trường... tương quan giữa chỉ số mật độ quang OD với sinh khối tế bào, nồng độ IAA được xử lý trên phần mềm EXCELL 2003 của Microsoft Các biểu đồ khác cũng được xử lý trên phần mềm này 29 PHẦN III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân lập các chủng vi khuẩn Azospirillum trong rễ cây ngô tại một số địa điểm của tỉnh Đăk Nông Vòng pellicle Hình 3.1 Phân lập vi khuẩn từ môi trường bán đặc Nfb Sau khi phân lập và làm thuần,... dịch trong để đo lượng IAA được vi khuẩn tổng hợp và tiết ra môi trường bằng phương pháp so màu Salkowski ở bước sóng 530 nm, thí nghiệm được lặp lại 3 lần 2.3.5 Phương pháp tuyển chọn các chủng Azospirillum có khả năng cố định đạm bằng nghiên cứu thử nghiệm trên cây ngô Đánh giá hoạt tính cố định đạm của các chủng Azospirillum dựa trên N tổng số có trong lá và các chỉ tiêu sinh trưởng của cây ngô N... dụ như khi các vi khuẩn Burkholderia sống cộng sinh với cây luá sẽ cố định đạm khoảng 19% tổng lượng đạm cần thiết cho nhu cầu của cây lúa Năng suất của cây lúa có chủng loài Burkholderia vietnamiensis tương đương với năng suất của cây lúa không chủng loài Burkholderia vietnamiensis nhưng có bón phân đạm 25 - 30kg/ha (Van et al, 2000) 1.3 Tình hình nghiên cứu ngoài nuớc Hiệu quả của vi c nhiễm chế... giá khả năng cố định đạm của các chủng vi khuẩn Azospirillum được tuyển chọn trên đồng ruộng Hạt ngô lai C919 được khử trùng bằng H 2O2 3% trong 3 phút, rửa lại 4 lần với nước cất Sau đó, cho hạt vào đĩa petri có bông đã được khử trùng, với một ít nước và ủ cho tới khi hạt nứt mộng chuẩn bị nảy mầm Rửa sạch hạt bằng nước cất Các chủng vi khuẩn Azospirillum đã được tuyển chon được nuôi trong ống nghiệm... Nghiệm thức 2: Không bón phân, nhiễm vi khuẩn Azospirillum Các chỉ tiêu theo dõi cây ngô sau khi gieo 45 ngày: Chiều cao cây, số lá trên cây, chiều dài lá, đường kính gốc, chiều dài rễ, khối lượng tươi, khô Các chỉ tiêu phân tích: Hàm lượng đạm tổng số, hàm lượng diệp lục trong lá * Phương pháp xác định hàm lượng đạm tổng số: Theo phương pháp Kjeldanl [2],[14] * Phương pháp xác định hàm lượng diệp lục:... Phương pháp định danh các chủng Azospirillum được tuyển chọn bằng kỹ thuật PCR 23 Nuôi cấy vi khuẩn ở pha log (sau 36 h), ly trích DNA vi khuẩn và tiến hành nhân DNA bằng máy PCR rồi chạy điện di sản phẩm So sánh độ lớn DNA vi khuẩn với thang chuẩn và với mẫu đối chứng dương Azospirillum lipoferum AL10 Nếu độ dài của DNA vi khuẩn cần nhận diện là 400bp, giống mẫu đối chứng dương thì đó là vi khuẩn Azospirillum . tỉnh Đăk Nông. Xuất phát từ thực tế đó, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: Phân lập, tuyển chọn một số chủng vi khuẩn cố định đạm Azospirillum trong rễ cây ngô tại một số địa điểm của tỉnh. vi khuẩn cố định đạm Azospirillum trong rễ cây ngô còn rất ít. Đặc biệt, hiện nay chưa có một nghiên 1 cứu nào về thành phần loài của chi Azospirillum trong rễ cây ngô tại một số địa phương của. điểm của tỉnh Đăk Nông . 2. Mục tiêu của đề tài - Phân lập và tuyển chọn được một số chủng Azospirillum cố định đạm trong rễ cây ngô. - Xây dựng qui trình nhân sinh khối một số chủng Azospirillum