Đang tải... (xem toàn văn)
Trong phân tích, kiểm nghiệm vi sinh vật, môi trường cần cho việc tăng sinh, phân lập, phân biệt, nhân giống, cấy chuyền, bảo quản, định danh vi sinh vật… Môi trường cần chứa đầy đủ các thành phần về nguồn carbon, đạm, khoáng và vi lượng … và có các điều kiện lý hóa thích hợp Theo nguồn gốc - Tự nhiên - Tổng hợp - Bán tổng hợp * Theo trạng thái vật lý - Lỏng (Brothe) - Rắn - Bán lỏng (bán rắn)
CHƯƠNG 1 CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM CHƯƠNG 1 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH VI SINH VẬT I. 1. HÓA CHẤT VÀ MÔI TRƯỜNG PHÂN TÍCH VI SINH VẬT - Trong phân tích, kiểm nghiệm vi sinh vật, môi trường cần cho việc tăng sinh, phân lập, phân biệt, nhân giống, cấy chuyền, bảo quản, định danh vi sinh vật… - Môi trường cần chứa đầy đủ các thành phần về nguồn carbon, đạm, khoáng và vi lượng … và có các điều kiện lý hóa thích hợp * Theo nguồn gốc - Tự nhiên - Tổng hợp - Bán tổng hợp * Theo trạng thái vật lý - Lỏng (Brothe) - Rắn - Bán lỏng (bán rắn) PHÂN LOẠI MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VSV PHÂN LOẠI MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VSV * Theo mục đích - Môi trường tiền tăng sinh - Môi trường tăng sinh - Môi trường chọn lọc - Môi trường phân biệt - Môi trường thử nghiệm sinh hóa PHƯƠNG PHÁP PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG • Môi trường tự pha chế – Chẩn bị nguyên liệu: Cân, đong thành phần – Pha chế: Hòa tan, bổ sung agar (môi trường rắn) – Lọc – Điều chỉnh pH – Phân phối vào dụng cụ – Hấp khử trùng (121 0 C/30p) • Môi trường đông khô: Được sử dụng phổ biến trong các phòng kiểm nghiệm vi sinh – Cân lượng môi trường – Bổ sung nước (theo tỷ lệ), hòa tan – Phân phối vào dụng cụ chứa – Hấp khử trùng (121 0 C/15’) Note: Thông thường môi trường được pha chế có giá trị pH thích hợp, không cần phải hiệu chỉnh pH sau khi được pha chế . Vi khuẩn gram dương trên môi trường chọn lọc CAN (Colistan Nalidixic Acid Agar ) S. epidermidis và S. aureus trên môi trường chọn lọc – phân biệt Mannitol Salt Agar (MSA) [...]... nước muối sinh lý (0,85%), trong buffer nếu cần I 3 THỬ NGHIỆM SINH HÓA Trong kỹ thuật phân tích vi sinh vật - Định danh vi sinh vật: dựa vào - Các đặc điểm về kiểu hình - Các p/ư sinh hóa được thực hiện bởi các chủng vi sinh vật - Các p/ư sinh hóa có thể thực hiện theo 3 cách: - Truyền thống - Bộ KIT TRUYỀN THỐNG Thử nghiệm khả năng lên men Xác định khả năng sử dụng một nguồn carbon nhất định bởi... kiểm Các sp bao bì, nylon, thủy tinh … - Kiểm tra độ kín của bao bì - Lau cồn phía ngoài - Đưa vào phòng vô trùng để kiểm VẬN CHUYỂN VÀ BẢO QUẢN MẨU THỰC PHẨM Trong quá trình vận chuyển: - Mẫu phải được bảo quản ở -200C cho đến khi phân tích (0-40C) - Mẫu phải xét nghiệm trong vòng 36h (6h) - Vi sinh vật có thể bị tổn thương nên trong nhiều trường hợp cần giai đoạn tăng sinh CHUẨN BỊ MẪU THỰC PHẨM... chấp nhận - Nếu tất cả các mẫu ≤m hoặc ≤c mẫu trong n mẫu thử nằm trong khoảng >m và ≤M: Chấp nhận lô hàng - Nếu >c mẫu trong n mẫu thử nằm trong khoảng >m và ≤M Hoặc có một mẫu >M: Từ chối lô hàng - Lựa chọn kế hoạch lấy mẫu - Kế hoạch 2 thuộc tính: Đối tượng vsv quan tâm không được phép có trong thực phẩm; - Kế hoạch 3 thuộc tính: Nếu cho thực phẩm một số lượng nhất định vsv trong một đơn vị thể tích... khả năng sinh Indol Môi trường kiểm tra khả năng lên men Dextrose (Glucose) I.2 KỸ THUẬT LẤY MẪU, VẬN CHUYỂN MẪU VÀ BẢO QUẢN MẪU THỰC PHẨM KẾ HOẠCH LẤY MẪU THỰC PHẨM cần có các yếu tố Một kế hoạch lấy mẫu chi tiết sau: n, c, m, M - n: số mẫu thử - c: số mẫu được phép nằm trong khoảng lân cận giới hạn (m ≤ c ≤ M) - m: khoảng chấp nhận (mật độ vi sinh M;... số lượng nhất định vsv trong một đơn vị thể tích KẾ HOẠCH THU MẪU THỰC PHẨM Mẫu: - Phải mang tính đại diện (nhiều thời điểm, vi trí) - Đ/v mẫu tp đã biết: sử dụng que bông vô trùng quét 1 diện tích bề mặt nhất định or cắt lát 2-3mm) - Tránh sự tạp nhiễm vi sinh vật ngoại lai (chứa mẫu trong các bình bằng nhựa có nắp vô trùng) Phương pháp lấy mẫu thịt Số lượng mẫu cần lấy1 Nơi lấy mẫu Thời điểm lấy... (2-50C trong 18h, 450C trong 15 phút kết hợp lắc bình chứa mẫu để tăng tốc độ giải đông và đồng nhất nhiệt độ trong mẫu) - Đồng nhất mẫu Đk vô trùng, mẫu lỏng (lắc kỹ), mẫu rắn (stomacher) - Cân mẫu Đk vô trùng, sai số cho phép ± 0,1g Stomacher SP đặc hoàn toàn: 10g(25g) mẫu → nghiền nát trong cối sứ vô trùng → Erlen có chứa sẵn bi thủy tinh và 90ml (225ml) nước cất vô trùng hoặc nước muối sinh lý... khoảng không chấp nhận (mật độ vi sinh >M; thông thường 10 x m ≤ M Ví dụ: Tiêu chuẩn về tổng số vsv trong sp trứng được thanh trùng Pasteur: n=5, c=2, m= 5.104, M= 106 CFU/25g - Kế hoạch 2 thuộc tính - Chỉ nêu ra m - Nếu tất cả các mẫu ≤m hoặc ≤c mẫu trong n mẫu thử >m: Chấp nhận lô hàng - Nếu >c mẫu trong số n mẫu thử >m: từ chối lô hàng - Kế hoạch 3 thuộc tính - Đặt ra cả m và M - Chỉ tiêu “m” thường... Enterobacteriacea 7 - 12 e - Salmonella - Campylobacter - VKHK TS - E.coli - Salmonella 7 - 12 - VSV khác khi yêu cầu Cơ sở Trong kho lạnh, tại thời Cho 1 kho lạnh - VKHK ưa lạnh bảo quản điểm bảo quản mẫu Mẫu lấy 5 đơn vị mẫu (Kho lấy là thịt lạnh hoặc lạnh tại 5 vị trí Enterobacteriacea Các sản phẩm lạnh đông: - Lau cồn phía ngoài PE - Đặt vào khay tráng men đã vô trùng - Đưa vào buồng vô trùng để rã đông tự... tiêu thụ/sơ chế hoặc trước khi làm lạnh, mẫu được thu thập trong vòng 30 phút CSGM lợn Sau khi khám thịt, trước khi đưa thân thịt đi tiêu thụ/sơ chế hoặc trước khi làm lạnh, mẫu được thu thập trong vòng 30 phút CSGM cừu, dê, chó, ngựa Sau khi khám thịt, trước khi đưa thân thịt đi tiêu thụ/sơ 4chế hoặc trước khi làm 1- 3 6 lạnh, mẫu được thu thập trong vòng 30 phút 13 13 46 46 Qui mô lớn Chỉ tiêu VSV kiểm... pha loãng 10-1 (10-2) Các sp vừa đặc vừa lỏng: Cân 100g mẫu (cả cái lẫn nước) → cối nhỏ vô trùng, nghiền → cân 10g (dịch nghiền) → Erlen (90ml NMSL + bi thủy tinh) → lắc đều, để lắng cặn → hút phần dịch để cấy mẫu Sp lỏng hoàn toàn: - Sử dụng trực tiếp mẫu hoặc pha loãng tùy theo mức độ nhiễm bẩn - Lắc kỹ bình chứa mẫu, hút 10ml mẫu cho vào Erlen có sẵn 90ml nước cất hay nước muối sinh lý tiệt trùng