TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM TIỂU LUẬN KỸ THUẬT GEN TRONG CHUẨN ĐOÁN BỆNH SỚM Ở NGƯỜI GVHD: PGS.TS. Khuất Hữu Thanh SVTH : Nguyễn Thị Hiền Nguyễn Thị Láng Kỹ thuật gen trong chuẩn đoán một số bệnh  Ung thư vòm họng do virut Epstein-Barr  Bệnh lao do vi khuẩn Mycobacterium tuberculosis  Sốt xuất huyết  chẩn đoán trước sinh bệnh Teo cơ tủy(SMA) Loạn dưỡng cơ Duchenne(DMD) Bệnh alpha- Thalassemia Tăng thượng thận bẩm sinh(CAH) …. Chuẩn đoán bệnh Trực tiếp Quan sát bệnh phẩm qua kính hiển vi Nuôi cấy, phân lập vi sinh vật gây bệnh Huyết thanh bệnh nhân Kháng nguyên đặc hiệu của vsv trong mẫu bệnh phẩm ứng dụng kỹ thuật gen, phát hiện DNA, RNA của vsv trong mẫu bệnh phẩm Kỹ thuật gen  Gen là đơn vị chức năng cơ sở của bộ máy di truyền chiếm một locus nhất định trên nhiễm sắc thể và xác định một tính trạng nhất định. Các gen là những đoạn vật chất di truyền mã hóa một tính trạng nhất định. Các gen là những đoạn vật chất di truyền mã hóa cho những sản phẩm riêng lẻ như các mRNA được sử dụng trực tiếp cho tổng hợp các enzym, các protein cấu trúc hay các chuỗi polypeptide để gắn lại tạo ra protein có hoạt tính sinh học. Ngoài ra, gen còn mã hóa cho các tRNA, rRNA, mRNA… Kỹ thuật gen - Phương pháp PCR PCR (polymerase chain reaction): “phản ứng chuỗi trùng hợp” hay “phản ứng khuếch đại gen” Nguyên lý phương pháp PCR  Dùng nhiệt độ cao tháo xoắn thay cho enzim helicase.  Kết hợp với enzim DNA polymerase chịu nhiệt để tổng hợp DNA mới trong môi trường thích hợp.  Hệ thống điều nhiệt thích hợp cùng với các đoạn mồi được thiết kế chuyên biệt, chủ động. Kỹ thuật PCR Kỹ thuật Multiplex PCR  Là phương pháp PCR sử dụng đồng thời cùng 1 lúc nhiều cặp mồi đặc hiệu khác nhau Ung thư vòm họng  Nguyên nhân: có rất nhiều giả thiết, nhưng chủ yếu được chia thành ba nhóm: do virut Epstein-Barr, do di truyền và do các yếu tố môi trường, tập quán ăn uống, hoá chất Virut Epstein-Barr  Hệ gen của EBV là chuỗi ADN xoắn kép, mạch hở, kích thước khoảng 172 kb. Hệ gen của EBV gồm 6 tổ hợp gen mã hóa cho các loại protein kháng nguyên, ký hiệu là EBNA (EBNA-1, EBNA-2, EBNA-3A, EBNA- 3B, EBNA-3C và EBNA- LP) và 3 tổ hợp gen mã hóa cho protein màng là LMP-1, LMP-2A và LMP-2B Trình tự mARN gen LMP-1 của EBV (1.116 bp) [...]... thừa adrogen thượng thận Chẩn đoán trước sinh bệnh tăng thượng thận bẩm sinh  Vùng gen mã hóa cho E 21-OH gồm 2 gen: gen CYP21 và gen giả CYP21P Vùng gen này nằm trên cánh ngắn NST6  Gen CYP21P là gen bất hoạt, gen CYP21 mã hóa cho E 21-OH  Qua quá trình phân bào giảm nhiễm, sự bắt chéo không đồng đều giữa các cặp NST làm cho trình tự ở vùng gen giả chuyển sang gen CYP21 gây nên đột biến trên gen ... nền Chuẩn đoán sốt xuất huyết  Sốtxuất thuyết là do virus Dengue (có 4 type: 1, 2, 3, 4) Là bệnh lý nguy hiểm đe doạ tính mạng cần được chẩn đoán phát hiện sớm  Phương pháp ELISA phát hiện IgM không thể giúp chẩn đoán sơm nhiễm Dengue (phải sau ngày thứ 4 của bệnh)  RT-PCR Dengue có thể giúp chẩn đoán sớm SXH ngay trong những ngày đầu của bệnh, và còn định được type Dengue  Chẩn đoán phát hiện sớm. .. dõi bệnh Chẩn đoán trước sinh bệnh thiếu máu huyết tán Alpha - Thalassemia  Alpha -Thalassemia: bệnh di truyền lặn NST thường do đột biến gen HbA, nằm trên cánh ngắn NST 16(16p13.3) gây giảm hoặc mất tổng hợp chuỗi alpha globin  Alpha -Thalassemia là một trong những bệnh huyết sắc tố phổ biến nhất, là nguyên nhân hàng đầu gây hiện tượng phù thai Chẩn đoán trước sinh bệnh Alpha-Thalassemia  Vùng gen. .. Sản phẩm của toàn bộ gen LMP-1 có kích thước 1,3 - 1,35 kb Chuẩn đoán vi khuẩn lao kháng thuốc  Theo thông báo của Tổ chức Y tế Thế giới, bệnh lao đang là vấn đề khẩn cấp toàn cầu, mỗi năm trên thế giới có thêm gần 9 triệu người mắc bệnh lao (trong đó có 1 triệu là trẻ em) và gần 2 triệu người chết do lao Vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis  Tách chiết DNA trong mẫu đàm bệnh nhân http://giangduongykhoa.wordpress.com/category/lao-ph%E1%BB%95i/... hoặc người thân mắc các bệnh như teo cơ tủy, tăng sản thượng thận bẩm sinh Kỹ thuật tiến hành  Nuôi cấy tế bào dịch ối: dịch ối được nuôi cấy trong dung dịch Amniomax Fluid Sau 10-14 ngày, thu hoạch các tế bào dịch ối và rửa sạch bằng dung dịch PBS 1X  Tách chiết DNA từ mẫu ngoại vi và tế bào dịch ối sau nuôi cấy  Kỹ thuật Multiplex PCR: nhận biết sự mất đoạn của 5 đột biến mất đoạn lớn Kỹ thuật. .. hàng gen để so sánh với trình tụ gen alpha thalassemia chuẩn Kết quả Kết quả Nhận xét  Trong 7 đột biến sàng lọc, alen đột biến dạng SEA gặp với tần suất cao nhất 59%, đột biến HBQs 17,6%, HbCs 11,8%, α4.2: 5,9% Chẩn đoán trước sinh bệnh tăng thượng thận bẩm sinh  Tăng thượng thận bẩm sinh (TSTTBS-CAH) là bệnh dii truyền lặn trên NST thường, chủ yếu do thiếu hụt hoạt động của enzyme 21-OH, gen CYP21A... đột biến trên gen  95% đột biến trên gen CYP21 là do đột biến chuyển đoạn từ gen giả CYP21P, 5% còn lại là do tự gen CYP21 bị đột biến Đối tượng nghiên cứu  2 mẫu dịch ối của 2 gia đình có con đầu đã được chẩn đoán lâm sàng bị bệnh tăng thượng thận bẩm sinh Phương pháp nghiên cứu  Mẫu bệnh phẩm: 15ml dịch ối  Phân tích gen CYP21  Nuôi cấy tế bào dịch ối: trong dung dịch Amniomax fluid là môi trường... Mutation System Polymereas Chain Reaction): là kỹ thuật Multiplex PCR được sử dụng để sàng lọc các đột biến Dùng các mồi đặc hiệu có trình tự đầu 3’ bổ sung với alen đột biến và một mồi chung ngược chiều với một đặc hiệu alen Sự có mặt của đột biến được thể hiện bằng sản phẩm DNA khuếch đại với các kích thước khác nhau Kỹ thuật thực hiện  Giải tự vùng gen alpha-globin và phân tích kết quả: giải trình... ngày  Tách chiết DNA từ tế bào dịch ối: bằng các kit tách DNA của Qiagen Đức Phương pháp nghiên cứu  Sàng lọc các đột biến thường gặp bằng kỹ thuật MLPA: sử dụng kit MLPA P050B2 sàng lọc 6 đột biến thường gặp: P30L(exon1), mất đoạn 8bp(exon3), I172N(exon4), exon 6 cluster, Q318, mất toàn bộ gen CYP21, mất đoạn 30kb  Giải trình tự gen CYP21 và phân tích kết quả Kết quả Gia đình 1: ... bệnh Alpha-Thalassemia  Vùng gen α-globin gồm 2 gen: HbA1 và HbA2  Các đột biến thường gặp gây Alpha-Thalassemia gồm: mất đoạn lớn dạng SEA, thailand, philipin, α4.2, α3.7 và các đột biến điểm HbQs, HbCs  Đột biến trên vùng gen α-globin gồm 2 nhóm: gây mất hoàn toàn số lượng chuỗi α globin và làm giảm số lượng chuỗi α globin Chẩn đoán trước sinh bệnh Alpha-Thalassemia Đối tượng nghiên cứu  Sản . NGHỆ THỰC PHẨM TIỂU LUẬN KỸ THUẬT GEN TRONG CHUẨN ĐOÁN BỆNH SỚM Ở NGƯỜI GVHD: PGS.TS. Khuất Hữu Thanh SVTH : Nguyễn Thị Hiền Nguyễn Thị Láng Kỹ thuật gen trong chuẩn đoán một số bệnh  Ung thư. sinh(CAH) …. Chuẩn đoán bệnh Trực tiếp Quan sát bệnh phẩm qua kính hiển vi Nuôi cấy, phân lập vi sinh vật gây bệnh Huyết thanh bệnh nhân Kháng nguyên đặc hiệu của vsv trong mẫu bệnh phẩm ứng dụng kỹ thuật. chẩn đoán sơm nhiễm Dengue (phải sau ngày thứ 4 của bệnh)  RT-PCR Dengue có thể giúp chẩn đoán sớm SXH ngay trong những ngày đầu của bệnh, và còn định được type Dengue  Chẩn đoán phát hiện sớm