PHÂN TÍCH HĨA HỌC THỰC PHẨM Đề tài: SẮC KÍ CỘT Nhóm thực hiện: Nhóm GVHD: Định nghĩa sắc ký • q trình tách dựa phân bố liên tục cấu tử chất phân tích hai pha • cấu tử chất phân tích di chuyển với tốc độ khác tách khỏi Phân loại theo cách SK PT ion Sắc kí hấp thụ PT tiền lưu đẩy SK rây phân tử Sắc kí PT phân bố rửa lỏng – giải lỏng Theo c Th chế tách th Đặc điểm chung c sắc kí SẮC KÍ CỘT Phương pháp dùng để tách chất (cấu tử) khỏi hỗn hợp dựa vào tính phân cực chất SẮC KÍ CỘT Chất nhồi ( pha tĩnh: hấp thụ, trao đổi ion, phân bố gel) nhồi vào cột, dùng để phân chia chất hỗn hợp tinh chế chất Hòa tan hỗn hợp chất nghiên cứu vào dung môi ( pha động) với lượng vừa đủ, nạp lên cột theo cách phù hợp cho chất nghiên cứu lan thành lớp phẳng lên cột, sau tiến hành sắc PHÂN LOẠI Sắc kí trao đổi ion Sắc kí hấp phụ SẮC KÍ CỘT LOGO Cơ chế sắc ký trao đổi ion Sự trao đổi ion gắn kết có tính chất thuận nghịch phân tử có mang điện tích Các phản ứng trao đổi xảy ion pha tĩnh ion dung dịch, ion ngược dấu với điện tích nhóm chức giữ lại cột, ion khác khỏi cột LOGO Cơ chế sắc ký trao đổi ion Phản ứng xảy ra: RG- + S+ Ỉ RG-S+ + C+ Hoặc RG+ +S- -Ỉ RG+S- + CTrong đó: R pha tĩnh hay gọi nhựa (resin) G nhóm chức mang điện tích cố định C đối ion G S chất hữu có mang điện tích trái dấu với G (a) Những hạt mang điện tích dương trao đổi ion âm với dung dịch đệm Protein tích điện âm ion dương tương tác với (b) Khi protein gắn với hạt, protein thay ion âm tương tác với hạt hạt thay ion dương tương tác với protein Cỡ lớn Dài: 10-30cm Đường kính trong: 4-10mm Cỡ hạt pha tĩnh: 5-10μm N=40000-60000 đĩa/met Cỡ nhỏ Dài: 3-7,5cm Đường kính trong: 1-2mm Cỡ hạt pha tĩnh: 3-5μm N=100000 đĩa/met  Chất nhồi cột (pha tĩnh-stationary phase) Silica (silic dioxyd) kết tụ lại thành silicagel Silicagel ao lớp mỏng hữu liên kết (hóa học hữu cơ) liên kết với bề mặt Nhôm oxyd, polymer, nhựa trao đổi ion Có loại silicagel: + Silicagel pha thuận: gồm Si có đính nhóm OH + Silicagel pha đảo: gồm Si có đính dây alkan R Silicagel pha thuận Là chất phân cực thường dùng làm pha tĩnh để phân tách chất, phù hợp với pha động, chạy tới lượng mẫu nhỏ lớp sắc ký mỏng Kích thước lỗ 40-60 100Å Trong vài trường hợp kích thước hạt nhỏ làm giảm hiệu q trình tách chiết Diện tích bề mặt 0.4-0.6g/cm3, nhiều 2.2g/cm3 Tính hấp thụ silicagel nhóm OH bề mặt định Nhóm OH trung tâm hấp thụ Khả tách silicagel tốt tẩm bạc nitrat 10-12%, dd acid boric, amoniac, dd đệm phosphat Silicagel pha đảo Đây silicagel có gắn chuỗi cacbon dài thường 18C, 8C Các hợp chất rửa giải khỏi theo thứ tự: Hợp chất chứa nhóm -COOH alkan     Ancol/phenol Hợp chất halogen amin Eter/aldehyl Khơng cần phải hoạt hóa trước dùng Hệ thiết lập cân nhanh chóng Dung dịch thân nước qua Tách tốt chất phân cực cetone CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH SẮC KÍ CỘT BƯỚC Sau chọn cột, làm khô cân silicagel cần dùng, pha dung môi chạy hệ hịa tan silicagel vào dung mơi Lấy miếng nhỏ bơng gịn nhồi đáy cột để chặn silicagel lại NHỒI CỘT Tiến hành khuấysilicagel dung môi pha sẵn rót nhẹ nhàng vào cột Tiến hành rót thêm dung mơi (từ erlen bên dưới) để ổn định hệ, chế chế lại nhiều lần đến hệ ổn định, cột không bị nứt hay gãy xem việc nhồi cột hồn thành Khóa cột lại Nạp mẫu ướt hỗn hợp cần phân tích tan dung mơi chạy cột nên cần cho mẫu vào Dùng lượng silicagel cho vào erlen để hấp thu mẫu, sau cho hết vào bình quay để quay đuổi dung mơi thu silicagel khơ có chứa mẫu Nạp mẫu khô: Mẫu không tan dung môi chạy cột phải hịa tan mẫu vào dung mơi gián tiếp erlen Nạp hết silicagel vào cột cho dung môi chạy cột vào NẠP MẪU VÀO CỘT BƯỚC Khi hồn tất việc nạp mẫu lót miếng bơng gịn bên mẫu chất để ổn định hệ Tiếp tục châm dung môi vào Từ từ thay đổi độ phân cực hệ CHÚ Ý Không thay đổi đột ngột chuyển từ không phân cực sang phân cực lại quay lại không phân cực, làm gãy cột phải nhồi lại từ đầu, hết chất Bước Mở khóa, lúc cột bắt đầu tách chất, hứng lượng dung mơi chảy có theo chất tách hũ bi, lần hứng khoảng 1/5 hũ (mỗi hủ bi chứa khoảng 50-200mL tùy kích thước lớn nhỏ) Sau đem chấm hủ bi, hủ có vệt tương tự gom lại, chất Tiếp tục cuối ta tách chất mong muốn ƯU ĐIỂM Phương pháp thường làm cho trình tách bị chậm Hiệu thấp so với sắc ký lỏng cao áp NHƯỢC ĐIỂM Pha tĩnh sử dụng chất dễ tìm cho hiệu cao ví dụ như: silicagel, nhơm oxit, xenlulose, Các dụng cụ để sắc ký rẻ tiền, dễ kiếm Có thể triển mẫu tương đối lớn Ứng dụng sắc ký cột Phântíchcác ion trongnước, nướcthải, đất ( Na, Ca, K, Mg, Ni, Cd, Pb, Fe, F-, Cl-, , , ) sắc ký cột thích hợp để tách hoạt chất từ nguyên liệu thực vật Để tách hay tinh chế hỗn hợp chất tự nhiên Ancaloit, … KẾT LUẬN Như vậy, sắc kí nói chung sắc kí cột nói riêng kĩ thuật áp dụng nhiều lĩnh vực điển hình chun ngành cơng nghệ thực phẩm Nhờ có mà ta phân tách nhiều cấu tử hỗn hợp xác định hàm lượng chúng cách đơn giản nhanh chóng Góp phần tạo điều kiện cho ngành hóa học thực phẩm phát triển TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Hà Dun Tư, Phân tích hóa học thực phẩm, NXBKH&KT Hà Nội, 2009 [2]http://vi.scribd.com/doc/73184150/TI% E1%BB%82U-LU%E1%BA%ACN-S%E1%BA%AFc-k% BD-trao-%C4%91%E1%BB%95i-ion [3]i.scribd.com/doc/138854023/Sắc-ki-cột-laphương-phap-dung-để-tach-cac-chất-doc#scribd ... phân tử Sắc kí PT phân bố rửa lỏng – giải lỏng Theo c Th chế tách th Đặc điểm chung c sắc kí SẮC KÍ CỘT Phương pháp dùng để tách chất (cấu tử) khỏi hỗn hợp dựa vào tính phân cực chất SẮC KÍ CỘT... lên cột, sau tiến hành sắc PHÂN LOẠI Sắc kí trao đổi ion Sắc kí hấp phụ SẮC KÍ CỘT LOGO Cơ chế sắc ký trao đổi ion Sự trao đổi ion gắn kết có tính chất thuận nghịch phân tử có mang điện tích. ..Định nghĩa sắc ký • q trình tách dựa phân bố liên tục cấu tử chất phân tích hai pha • cấu tử chất phân tích di chuyển với tốc độ khác tách khỏi Phân loại theo cách SK PT ion Sắc kí hấp thụ PT