Bộ giáo dục và đào tạo Bộ quốc phòng Học viện quân y NGUYN TH VN QUNH Nghiên cứu phát triển vắcxin viêm gan a bất hoạt Trên dòng tế bào mrc5 ở quy mô phòng thí nghiệm Chuyờn ngnh: Vi sinh y hc Mó s: 62. 72. 01.15 Tóm tắt luận án tiến sĩ y học Hà nội 2015 CÔNG TRÌNH HOÀN THÀNH TẠI HỌC VIỆN QUÂN Y Ngêi híng dÉn khoa häc: 1. GS. TSKH. Nguyễn Thu Vân. 2. TS. Đỗ Tuấn Đạt. Phản biện 1: GS.TS. Nguyễn Đình Bảng Phản biện 2: PGS.TS. Đinh Hữu Dung Phản biện 3: PGS.TS. Lê Thị Quỳnh Mai Luận án sẽ được bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp trường tại Học viện Quân y Vào hồi : giờ ngày tháng năm 2015 Có thể tìm hiểu luận án tại: 1. Thư viện Quốc gia 2. Thư viện Học viện Quân y DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN 1. Nguyễn Thị Vân Quỳnh, Đỗ Thủy Ngân, Nguyễn Thu Vân, Đỗ Tuấn Đạt (2013) ,“ Tính an toàn và sinh miễn dịch của vắc xin viêm gan A sản xuất trên nuôi cấy tế bào MRC5 tại Công ty Vắc xin và Sinh phẩm số 1”, Tạp chí Y học Việt Nam, 408 (1), tr. 108-110. 2. Nguyễn Thị Vân Quỳnh (2014), “Xác định nhiệt độ nuôi cấy tối ưu của chủng vi rút viêm gan A HM175 trên nuôi cấy tế bào MRC5”, Tạp chí Y học Việt Nam, 414 (2), tr. 28-30. CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN Desoxyribonucleic acid (Axít desoxyribonucleic) ARN Ribonucleic acid (Axít ribonucleic) CDC Centers of Diseases Control and Prevention (Trung tâm dự phòng và kiểm soát bệnh – Mỹ) ECACC The European Collection of Cell Cultures (Ngân hàng tế bào châu Âu) ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay (Kỹ thuật miễn dịch gắn men) FBS Fetal Bovine Serum (Huyết thanh bê bào thai) HAV Hepatitis A virus (Vi rút viêm gan A) MEM Minimum Essential Medium (môi trường tối thiểu) MOI Multiplicity of Infection (Liều gây nhiễm) MRC5 Medical Reseach Council (Tế bào lưỡng bội phổi người) MSV Master seed virus (Chủng vi rút giống gốc) p Passage (Đời cấy truyền) PCR Polymerase chain reaction (Phản ứng chuỗi polymerase) PFU Plaque Forming Unit SDS-PAGE Sodium-dodecyl-sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (Điện di trên gel polyacrylamid) VABIOTECH Công ty Vắc xin và Sinh phẩm số 1 VGA Viêm gan A VXVGA Vắc xin viêm gan A WSV Working seed virus (Chủng vi rút sản xuất) WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế thế giới) 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm gan A (VGA) là bệnh truyền nhiễm thường gặp do vi rút viêm gan A gây nên. Bệnh phổ biến trên toàn thế giới và có thể phát triển thành dịch trong cộng đồng đặc biệt ở các nước đang phát triển. Việt Nam là quốc gia nằm trong vùng lưu hành cao của vi rút VGA với hơn 90% dân số phơi nhiễm với vi rút. Bệnh có thể dự phòng được bằng vắc xin. Vắc xin viêm gan A (VXVGA) đã được sản xuất bởi một số nước tiên tiến trên thế giới bằng công nghệ sử dụng tế bào MRC5 (MRC5- tế bào lưỡng bội phổi người), với các ưu điểm: - Tế bào MRC5 có nguồn gốc từ người nên sử dụng dòng tế bào này để sản xuất vắc xin sẽ hạn chế các nguy cơ gây dị ứng cho người sử dụng so với các dòng tế bào có nguồn gốc từ động vật. - Sử dụng tế bào MRC5 để sản xuất vắc xin thì có thể chủ động và dễ mở rộng quy mô sản xuất . - Tế bào MRC5 có thể tạo thành hệ thống ngân hàng tế bào với sự kiểm tra chất lượng đầy đủ và không có đặc tính sinh khối u. - Tế bào MRC5 đã được cấp phép sản xuất nhiều loại vắc xin trên TG với chất lượng tốt. Việt Nam chưa sản xuất vắc xin viêm gan A trên MRC5, hơn nữa việc chuyển giao công nghệ sản xuất vắc xin viêm gan A vào Việt Nam còn khó khăn. Để tiến tới tự lực sản xuất vắc xin viêm gan A trên tế bào MRC5 ở Việt Nam nhằm nhằm giảm giá thành của vắc xin so với vắc xin nhập ngoại và đáp ứng nhu cầu vắc xin phòng bệnh cho cộng đồng, đề tài: “Nghiên cứu phát triển vắc xin viêm gan A bất hoạt trên dòng tế bào MRC5 ở quy mô phòng thí nghiệm” được tiến hành với 3 mục tiêu : MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1. Thích ứng chủng vi rút viêm gan A HM 175 trên tế bào MRC5 để sản xuất vắc xin viêm gan A. 2. Xây dựng quy trình sản xuất vắc xin viêm gan A bất hoạt trên nuôi cấy tế bào MRC5 quy mô phòng thí nghiệm. 2 3. Đánh giá chất lượng vắc xin viêm gan A trong quá trình sản xuất và vắc xin thành phẩm. CÁC ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN 1. Thích ứng và xác định được các đặc tính nhân lên của chủng trên dòng tế bào MRC5 trong điều kiện tại Việt Nam. 2. Tạo được hệ thống chủng giống sản xuất VXVGA trên dòng tế bào MRC5 đạt tiêu chuẩn chất lượng cho chủng giống vi rút sản xuất vắc xin; 3. Xây dựng được quy trình gây nhiễm, nuôi cấy và thu hoạch vi rút tối ưu để sản xuất vắc xin; 4. Sản xuất 03 loạt VXVGA trên tế bào MRC5 đạt tiêu chuẩn của Tổ chức Y tế thế giới (WHO) và tiêu chuẩn cơ sở. 5. Quy trình sản xuất vắc xin hoàn thiện sẽ giúp Việt Nam có thể tự chủ sản xuất VXVGA trên tế bào MRC5 trong nước, giảm giá thành và chủ động trong dự phòng bệnh cho cộng đồng. CẤU TRÚC LUẬN ÁN Luận án gồm có 112 trang không kể phụ lục, gồm 4 chương, 24 bảng, 4 biểu đồ, 15 hình, 103 tài liệu tham khảo. Bố cục luận án gồm:  Đặt vấn đề 02 trang;  Chương 1: Tổng quan tài liệu 30 trang;  Chương 2: Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 24 trang;  Chương 3: Kết quả nghiên cứu 25 trang;  Chương 4: Bàn luận 27 trang;  Kết luận 02 trang; Kiến nghị 01 trang; Danh mục các công trình nghiên cứu có liên quan 01 trang.  Tài liệu tham khảo (tổng số 103 tài liệu, 25 tài liệu tiếng Việt, 78 tài liệu tiếng Anh). 3 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Những hiểu biết hiện nay về vi rút viêm gan A * Đặc điểm sinh học của vi rút viêm gan A: Vi rút viêm gan A được Feinstone phát hiện lần đầu tiên vào năm 1973 bằng phương pháp hiển vi điện tử miễn dịch. Vi rút viêm gan A nhỏ, thuộc họ Picornaviridae, có lõi là 1 sợi ARN đơn và capsid đối xứng hình khối với 4 protein cấu trúc VP1, VP2, VP3, VP4. Vi rút VGA được phân loại thành 07 kiểu gen (từ I đến VII). Hầu hết các chủng vi rút gây bệnh ở người thuộc kiểu gen I (80%) và III. Vi rút VGA chỉ có 1 týp huyết thanh. Vi rút VGA nhân lên trong tế bào chất của tế bào gan và giải phóng theo cơ chế nẩy chồi. Vi rút VGA nhân lên chậm, kéo dài và sản lượng vi rút thấp. Do đó, việc nhân nuôi vi rút để sản xuất vắc xin gặp nhiều khó khăn. Cho đến năm 1995, vắc xin VGA bất hoạt đầu tiên mới được cấp phép sử dụng trên người. * Đặc điểm sinh bệnh học, dịch tễ viêm gan vi rút A : Đường lây bệnh chủ yếu của vi rút VGA là đường phân – miệng. Sau khi xâm nhập vào đường tiêu hóa, vi rút vào máu sau đó nhân lên ở tế bào gan. Trên thế giới : Tỷ lệ nhiễm vi rút VGA khác nhau ở các khu vực, dao động từ 15-100% dân số và có liên quan chặt chẽ với tình trạng kinh tế, xã hội và vệ sinh môi trường. Ước tính có khoảng 1,5 triệu người mắc VGA cấp tính hàng năm và số lượng nhiễm trùng vi rút VGA thật sự có thể cao hơn gấp 10 lần. Việt Nam là nước có mức độ lưu hành cao của vi rút VGA. Tỷ lệ nhiễm vi rút VGA trong cộng đồng là 97%, tỷ lệ nhiễm tăng dần theo tuổi, từ 62% ở nhóm dưới 5 tuổi, tới gần 100% ở nhóm trên 10 tuổi. Các biện pháp dự phòng : Để phòng chống bệnh VGA cần thực hiện nhiều biện pháp đồng thời : vệ sinh an toàn thực phẩm, cung cấp nước sạch, cải thiện môi trường sống, phát hiện sớm, cách ly và điều trị tích cực bệnh nhân VGA. Phòng bệnh khẩn cấp bằng cách sử dụng Glubolin miễn dịch. Tạo miễn dịch chủ động bằng vắc xin là biện pháp dự phòng có hiệu quả làm giảm tỷ lệ mắc VGA trong cộng đồng, với thời gian bảo vệ kéo dài. 4 1.2. Các loại vắc xin viêm gan A và quy trình sản xuất Nghiên cứu phát triển VXVGA bắt đầu từ bước chọn chủng, xây dựng quy trình nuôi cấy, quy trình tinh chế, bất hoạt và bổ sung tá chất, chất bảo quản để tạo thành vắc xin. Bảng 1.1: Các vắc xin viêm gan A bất hoạt được lưu hành Vắc xin (Hãng sản xuất) Loại tế bào Chủng virut Phương pháp cô đặc và tinh khêt Phương pháp Bất hoạt Tá chất Chất bảo quản HAVRIX, TWINRIX (GSK) MRC5 HM175 Siêu lọc và sắc ký lọc gel Formallin 1/4000/37oC/ 15 ngày Al(OH)3 2-phenoxyl- ethanol AVAXIMTM (Aventis Pasteur) MRC5 GBM Sắc ký trao đổi ion va sắc ký lọc gel Formallin 1/4000/37oC/ 14ngày Al(OH)3 2-phenoxyl- ethanol EPAXAL BERNA® (Crucell ) MRC5 RG-SB - Formallin Visosom e virus cúm H1N1 Kháng sinh VAQTA® (Merck) MRC5 CR326 Tủa PEG và sắc ký lỏng Formallin 37oC/ 5 ngày Al(OH)3 2-phenoxyl- ethanol HAVAX (VABIOTECH , Việt Nam) PMMK HM175 Siêu lọc & thẩm tích Formallin 37oC/ 4ngày Al(OH)3 2-phenoxyl- ethanol (VABIOTECH: Công ty Vắc xin và Sinh phẩm số 1) Nuôi cấy thành công vi rút VGA trên tế bào mở ra sự phát triển các VXVGA. Vắc xin VGA bất hoạt đầu tiên được cấp phép và sử dụng năm 1995 ở Mỹ. Hiện nay có 4 loại VXVGA bất hoạt được cấp phép đó là Avaxim, Epaxal, Havrix,Vaqta - sản xuất từ nhân nuôi các chủng vi rút viêm gan A (HAV) khác nhau trên MRC5, sau đó hỗn dịch vi rút thu hoạch được cô đặc và tinh khiết rồi được bất hoạt bằng formallin bổ sung chất bảo quản, tá dược và đóng lọ. Đáng chú ý là 1 quy trình tinh chế vi rút viêm gan A có thể là sự phối hợp của nhiều phương pháp tinh chế như phối hợp sắc ký trao đổi ion và sắc ký lọc qua gel; hoặc cô đặc bằng tủa PEG kết hợp với sắc ký lỏng, hoặc siêu lọc và sắc ký lọc gel hoặc cô đặc và tinh chế bằng siêu ly tâm tùy theo “bí quyết” của nhà sản xuất VXVGA. Đa số các nghiên cứu về VXVGA đều tập trung vào vắc xin bất hoạt vì tính an toàn cao của loại vắc xin này. 5 VXVGA sống giảm độc lực với tên thương mại là MEVAX sản xuất từ chủng H2 được sản xuất và sử dụng ở Trung Quốc. * Phát triển VXVGA thường qua 4 bước cơ bản: Vi rút viêm gan A phải trải qua quá trình thích ứng (chọn chủng) để có thể phát triển trên nuôi cấy tế bào với lượng kháng nguyên đủ lớn để đưa vào sản xuất vắc xin và cuối cùng là kiểm định chất lượng vắc xin. Đầu tiên vi rút cần phải trải qua quá trình thích ứng với sự nhân lên trong nuôi cấy tế bào, với đặc điểm nhân lên chậm, kéo dài kèm theo sản lượng vi rút thấp – là một trở ngại lớn trong việc nhân nuôi vi rút viêm gan A cho sản xuất vắc xin. Mặt khác, hiệu suất vi rút thu được phụ thuộc vào các điều kiện nuôi cấy như môi trường, liều gây nhiễm, nhiệt độ và pH nuôi cấy. Do đó trong giai đoạn thích ứng cần xác định được các điều kiện tối ưu để vi rút phát triển tốt trên nuôi cấy tế bào. Quy trình sản xuất VXVGA trên nuôi cấy tế bào bao gồm : Nhân nuôi tế bào, gây nhiễm và nhân nuôi vi rút, cô đặc và tinh chế, bất hoạt vi rút và pha vắc xin. 1.3. Các phương pháp kiểm tra chất lượng vắc xin viêm gan A Kiểm tra chất lượng vắc xin là yêu cầu bắt buộc vì vắc xin khi đưa ra sử dụng phải đảm bảo an toàn và có công hiệu bảo vệ. Việc kiểm định chất lượng được thực hiện từ nguyên liệu nguồn, mỗi công đoạn của quá trình sản xuất, ở bán thành phẩm và sản phẩm cuối cùng. * Kiểm tra các nguyên liệu nguồn (tế bào, chủng giống vi rút) sử dụng cho sản xuất vắc xin. - Hệ thống ngân hàng tế bào bao gồm tế bào giống gốc và tế bào giống sản xuất được kiểm tra chất lượng đầy đủ. - Hệ chủng sản xuất vắc xin VGA (Chủng vi rút giống gốc -MSV và chủng vi rút sản xuất -WSV) được lựa chọn, kiểm tra nhận dạng vi rút, hiệu giá vi rút, các đặc tính di truyền sau khi thích ứng và tính sinh miễn dịch. Ngoài các yêu cầu cơ bản của chủng giống như vô khuẩn, vô nấm, không nhiễm Mycoplasma và các vi rút ngoại lai. * Kiểm tra chất lượng vắc xin trong quá trình sản xuất Kiểm tra chất lượng tế bào MRC5 trước khi cấy vi rút; kiểm tra các mẻ gặt đơn; kiểm tra quá trình bất hoạt; kiểm tra bán thành phẩm * Kiểm tra chất lượng vắc xin viêm gan A thành phẩm - Các phương pháp kiểm tra sinh học: Kiểm tra vô khuẩn; kiểm tra an toàn chung trên chuột nhắt và chuột lang; kiểm tra chất gây sốt; kiểm tra công hiệu vắc xin VGA 6 - Các phương pháp kiểm tra hóa lý: Xác định pH, hàm lượng protein, hàm lượng nhôm, hàm lượng formallin, 2-phenoxylethanol trong vắc xin. CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Vật liệu - Chủng vi rút viêm gan A HM 175 (HAV HM175) do Trung tâm kiểm soát bệnh tật Atlanta - Mỹ (CDC) cung cấp. - Tế bào lưỡng bội phổi người MRC5, P19 (P – đời cấy truyền) do ngân hàng tế bào châu Âu (ECACC-European Collection of Cell Cultures) cung cấp. Tế bào thận khỉ thường trực Frhk-4 do CDC cung cấp. - VXVGA mẫu chuẩn quốc gia iR/HA-02 do Viện Kiểm định Quốc gia cung cấp. Động vật thí nghiệm, môi trường, hóa chất, sinh phẩm, dụng cụ và trang thiết bị cần thiết để kiểm định chất lượng chủng giống, nuôi cấy tế bào, cô đặc và tinh chế vi rút. 2.2. Phương pháp nghiên cứu: thử nghiệm phòng thí nghiệm. Sơ đồ thiết kế nghiên cứu Thích ứng và tạo chủng Xây dựng quy trình sản xuất Kiểm tra chất lượng Chủng gốc ↓ Quy trình nuôi cấy tế bào ↓ - Vô khuẩn, - Mycoplasma, - Vi rút ngoại lai Xác định khả năng nhân lên và các điều kiện nuôi cấy tối ưu của chủng gốc trên tế bào MRC5 ↓ Quy trình gây nhiễm vi rút ↓ Cấy truyền liên tiếp với các điều kiện tối ưu đã xác định ↓ Nuôi cấy và thu hoạch vi rút ↓ - Vô khuẩn - Hiệu giá vi rút Sản xuất chủng giống và kiểm tra chất lượng ↓ Tinh sạch hỗn dịch vi rút ↓ - Hiệu giá vi rút Sản xuất chủng sản xuất và kiểm tra chất lượng Bất hoạt vi rút ↓ - Kiểm tra bất hoạt - Hàm lượng protein - Vô khuẩn Pha vắc xin - Các thành phần hóa học, vô khuẩn, chất gây sốt, an toàn chung, công hiệu. [...]... gây sốt, thành phần h a học c a một vắc xin VGA bất hoạt sản xuất trên tế bào KẾT LUẬN Từ kết quả nghiên cứu trên, chúng tôi rút ra các kết luận sau: 1 Chủng vi rút viêm gan A HM175 nhân lên tốt trên tế bào MRC5 ở điều kiện nuôi cấy tối ưu: Liều gây nhiễm là 0,005 MOI; Nhiệt độ 35oC; Thời gian hấp phụ vi rút là 2 giờ - Việc cấy truyền vi rút viêm gan A chủng HM175 trên tế bào MRC5 ở các đời thứ 3, 4,... xuất trên MRC5 đời P1 và sản xuất vắc xin ở đời P2 - Tạo được ngân hàng chủng vi rút giống gốc và giống sản xuất đạt tiêu chuẩn c a chủng giống sản xuất vắc xin viêm gan A trên tế bào 2 Xây dựng được quy trình sản xuất vắc xin viêm gan A trên nuôi cấy tế bào MRC5 ở quy mô phòng thí nghiệm: Sử dụng môi trường không huyết thanh LH3E pH 7,4-7,6 cho nhân nuôi vi rút; Liều gây nhiễm cho nuôi cấy sản xuất vắc. .. kiểm tra chất lượng vắc xin viêm gan A trên nuôi cấy tế bào MRC5 trong quá trình sản xuất và vắc xin thành phẩm 2.2.3.1 Kiểm tra chất lượng vắc xin trong quá trình sản xuất * Kiểm tra chất lượng tế bào MRC5: Kiểm tra vô khuẩn; Kiểm tra Mycoplasma; Kiểm tra các vi rút ngoại lai * Kiểm tra hiệu giá vi rút : Bằng phương pháp chuẩn độ hiệu giá vi rút trên tế bào * Kiểm tra bất hoạt vi rút: (Theo thường quy. .. xuất vắc xin viêm gan A bất hoạt trên nuôi cấy tế bào MRC5 quy mô phòng thí nghiệm - Các quy trình nghiên cứu: quy trình nuôi cấy vi rút, quy trình thu hoạch vi rút bao gồm: Xác định liều gây nhiễm vi rút tối ưu; Xác định môi trường nuôi cấy vi rút không ch a huyết thanh tối ưu; pH tối ưu c a môi trường này; Xác định thời gian và số lần thu hoạch vi rút - Các quy trình kế th a thành công c a quy trình... giới đề ra cho loại vắc xin này Kết quả thử nghiệm cũng cho thấy sự ổn định c a quy trình sản xuất VXVGA bất hoạt Tóm lại: 03 loạt vắc xin VGA trên nuôi cấy tế bào MRC5 đã được sản xuất d a trên quy trình xây dựng được Các thử nghiệm kiểm tra chất lượng vắc xin theo các yêu cầu chung về chế phẩm sinh học c a Tổ chức Y tế thế giới và Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin đã đạt được các yêu cầu về tính an toàn,... dịch c a vắc xin VGA trên nuôi cấy tế bào MRC5 với vắc xin VGA mẫu chuẩn Quốc gia cho thấy cả 03 loạt VXVGA đạt yêu cầu công hiệu Công hiệu tương quan c a vắc xin thử nghiệm so với vắc xin chuẩn là 2,2; 2,24 và 2,33 VXVGA trên nuôi cấy tế bào MRC5 đạt tiêu chuẩn chấp thuận * Kết quả kiểm tra các thành phần h a học Bảng 3.21 Kết quả kiểm tra các thành phần h a học trong vắc xin Thử nghiệm pH Protein (µg/ml)... rút sau bất hoạt đều bằng 0 PFU/ml trên thử nghiệm tạo đám hoại tử, chứng minh vi rút đã hoàn toàn bị bất hoạt Để bất hoạt vi rút VGA, các nhà sản xuất VXVGA đều sử dụng formalin Cả 03 loạt sản xuất thử nghiệm đều đạt yêu cầu về thử nghiệm bất hoạt. điều đó chứng tỏ quy trình bất hoạt vi rút 1/2000 ở 37oC trong 96 giờ là đảm bảo an toàn * Kết quả pha vắc xin c a các loạt sản xuất Vắc xin được pha về... nuôi cấy cho HAV HM175 trên tế bào MRC5 trong môi trường có huyết thanh * Sự nhân lên c a vi rút trên tế bào MRC5 Hiệu giá vi rút (1.000.000 PFU/ml) Hình 3.1 Hình ảnh vi rút viêm gan A trong tế bào MRC5 trên kính hiển vi điện tử Hình ảnh đặc trưng c a vi rút VGA: hình cầu, kích thước 28 nm (mũi tên) nằm trong bào tương tế bào chứng minh vi rút VGA đã xâm nhập và nhân lên trong tế bào * Liều gây nhiễm... 2.2.1 Thích ứng vi rút viêm gan A HM175 trên tế bào MRC5 2.2.1.1 Xác định các điều kiện nuôi cấy tối ưu cho HAV HM175 trên tế bào MRC5 trong môi trường có huyết thanh - Xác định sự nhân lên c a vi rút trên tế bào MRC5 bằng kỹ thuật hiển vi điện tử - Xác định các điều kiện nuôi cấy: như liều gây nhiễm, nhiệt độ nuôi cấy, thời gian hấp phụ vi rút (với các thông số nghiên cứu được xuất phát từ các nghiên cứu. .. quy trình tinh sạch vi rút VGA trong sản xuất Havax từ tế bào thận khỉ c a Công ty Vắc xin và Sinh phẩm số 1 bao gồm: quy trình ly tâm, cô đặc thẩm tích hỗn dịch vi rút; bất hoạt vi rút và quy trình pha vắc xin * Nuôi cấy và chuẩn bị tế bào MRC5 Nuôi cấy và cấy truyền tế bào theo hướng dẫn c a ECACC từ đời p26 đến đời p32 Khi tế bào một lớp mọc kín 80% bề mặt nuôi cấy, tiến hành gây nhiễm vi rút với . phát triển vắc xin viêm gan A bất hoạt trên dòng tế bào MRC5 ở quy mô phòng thí nghiệm được tiến hành với 3 mục tiêu : MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1. Thích ứng chủng vi rút viêm gan A HM 175 trên. tế bào MRC5 để sản xuất vắc xin viêm gan A. 2. Xây dựng quy trình sản xuất vắc xin viêm gan A bất hoạt trên nuôi cấy tế bào MRC5 quy mô phòng thí nghiệm. 2 3. Đánh giá chất lượng vắc. dục và đào tạo Bộ quốc phòng Học viện quân y NGUYN TH VN QUNH Nghiên cứu phát triển vắcxin viêm gan a bất hoạt Trên dòng tế bào mrc5 ở quy mô phòng thí nghiệm Chuyờn ngnh: