BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI *** VŨ HỮU TUỆ ðIỀU TRA VÀ XÁC ðỊNH BỆNH XOĂN VÀNG LÁ CÀ CHUA TẠI MỘT SỐ TỈNH ðỒNG BẰNG SÔNG HỒNG NĂM 2012 - 2013 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI - 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI *** VŨ HỮU TUỆ ðIỀU TRA VÀ XÁC ðỊNH BỆNH XOĂN VÀNG LÁ CÀ CHUA TẠI MỘT SỐ TỈNH ðỒNG BẰNG SÔNG HỒNG NĂM 2012 - 2013 CHUYÊN NGÀNH: BẢO VỆ THỰC VẬT MÃ SỐ : 60.62.01.12 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. HÀ VIẾT CƯỜNG HÀ NỘI - 2013 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và chưa được sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng, mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Tác giả Vũ Hữu Tuệ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, ngoài sự cố gắng nỗ lực của bản thân, tôi nhận được rất nhiều sự quan tâm giúp đỡ nhiệt tình của các thầy cô, bạn bè, người thân và các cơ quan đơn vị. Trước tiên tôi xin chân thành cảm ơn các thầy, cô trong khoa Nông học, cán bộ trung tâm bệnh cây nhiệt đới và ban sau đại học trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội đã trực tiếp giảng dạy, trang bị những kiến thức bổ ích trong suốt thời gian qua. Đặc biệt, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Hà Viết Cường. người đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ và động viên tôi trong quá trình thực hiện đề tài và hoàn thiện luận văn. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè, và người thân giúp đỡ tôi tận tình trong thời gian thực hiện đề tài. Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Vũ Hữu Tuệ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC BIỂU ðỒ vii DANH MỤC HÌNH ẢNH viii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ix MỞ ðẦU 1 Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 3 1.1. Tình hình nghiên cứu ngoài nước 3 1.1.1. Triệu chứng bệnh 3 1.1.2. Tác nhân gây bệnh là một phức hợp loài 3 1.1.3. Hình thái của begomovirus gây bệnh xoăn vàng lá cà chua 5 1.1.4. Đặc điểm bộ gen của begomovirus gây bệnh xoăn vàng lá cà chua 5 1.1.5. Lan truyền của begomovirus 7 1.1.6. Môi giới truyền bệnh virus TYLCV: bọ phấn (Bemisia tabaci) 8 1.1.7 Phương pháp lây nhiễm nhân tạo bằng agroinoculatiion 9 2.2. Tình hình nghiên cứu trong nước 12 Chương 2. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 ðối tượng, ñịa ñiểm và thời gian nghiên cứu 15 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.2 Địa điểm và thời gian nghiên cứu 15 2.2 Vật liệu nghiên cứu 15 2.2.1 Thu thập mẫu, cây thí nghiệm và côn trùng môi giới 15 2.2.2 Thiết bị, dụng cụ và hoá chất nghiên cứu 15 2.3 Nội dung nghiên cứu 16 2.4 Phương pháp nghiên cứu 16 2.4.1 Phương pháp điều tra ngoài đồng ruộng 16 2.4.2 Phương pháp thu thập, bảo quản mẫu bệnh virus hại cà chua 16 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv 2.4.3 Lây nhiễm nhân tạo bệnh xoăn vàng lá cà chua bằng bọ phấn 17 2.4.4 Lây nhiễm nhân tạo bằng agroiculation 17 2.4.5 Giám định virus bằng ELISA 18 2.4.6 Phương pháp giám định virus gây bệnh bằng phương pháp PCR 19 2.5 Phương pháp tính và xử lý số liệu 21 2.5.1 Điều tra ngoài đồng ruộng 21 2.5.2 Thí nghiệm trong nhà lưới 22 Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 Kết quả ñiều tra bệnh do virus hại cà chua tại Hà Nội và một số tỉnh thuộc ñồng bằng Sông Hống năm 2012 - 2013 23 3.1.1 Mô tả triệu chứng bệnh 23 3.1.2 Tình hình bệnh virus hại cà chua dựa vào loại hình triệu chứng tại một số tỉnh thuộc đồng bằng Sông Hồng năm 2012 – 2013 25 3.1.3 Kết quả điều tra tình hình bệnh xoăn vàng lá cà chua và mật độ bọ phấn trên cà chua tại Hà Nội và một số tỉnh thuộc đồng bằng Sông Hồng năm 2012 - 2013 27 3.2 Kết quả lây nhiễm bệnh nhân tạo bệnh xoăn vàng lá cà chua bằng phương pháp agroinoculation và truyền qua bọ phấn 42 3.2.1 Kết quả lây nhiễm bệnh nhân tạo bệnh xoăn vàng lá cà chua bằng phương pháp truyền qua bọ phấn 42 3.3.2 Kết quả lây nhiễm bệnh nhân tạo bệnh xoăn vàng lá cà chua bằng phương pháp agroinoculation. 44 3.3 Kết quả kiểm tra các mẫu bệnh virus hại cà chua thu thập ngoài ñồng ruộng bằng kỹ thuật ELISA và PCR 45 3.3.1 Thu thập và bảo quản mẫu bệnh virus gây hại trên cà chua 45 3.3.2 Kết quả kiểm tra ELISA mẫu bệnh hại cà chua 47 3.3.3 Kết quả kiểm tra PCR xác định begomovirus gây hại cà chua 52 Chương 4. KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… v DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1. Tình hình bệnh virus hại cà chua theo loại hình triệu chứng tại một số tỉnh thuộc đồng bằng Sông Hồng vụ xuân hè 2013 26 Bảng 3.2. Diễn biến của bệnh xoăn vàng lá và mật độ bọ phấn trên giống cà chua Perfect 89 và Racha vụ xuân hè năm 2013 tại xã Cổ Bi - Gia Lâm – Hà Nội 28 Bảng 3.3. Diễn biến bệnh xoăn vàng lá và mật độ bọ phấn trên giống cà chua Magic và VT 3 vụ xuân hè năm 2013 tại xã Đa Tốn – Gia Lâm – Hà Nội 30 Bảng 3.4. Diễn biến bệnh xoăn vàng lá và mật độ bọ phấntrên giống cà chua Magic và DV 2962 vụ xuân hè năm 2013 tại Văn Lâm – Hưng Yên 33 Bảng 3.5 : Diễn biến của bệnh xoăn vàng lá và mật độ bọ phấn trên giống cà chua Grandeeva 3963 và Mec VL3500 năm 2012 – 2013 tại Hải Cường - Hải Hậu – Nam Định 35 Bảng 3.6: Diễn biến bệnh xoăn vàng lá trên giống cà chua VL988, L66 vụ đông xuân năm 2012 – 2013 tại Bình Nghĩa- Bình Lục- Hà Nam 38 Bảng 3.7: Diễn biến bệnh xoăn vàng lá trên giống cà chua BM199, VL642 năm 2012 – 2013 tại Quỳnh Vân – Quỳnh Phụ - Thái Bình 40 Bảng 3.8. Kết quả lây nhiễm bệnh nhân tạo bệnh xoăn vàng lá cà chua bằng phương pháp truyền qua bọ phấn 43 Bảng 3.9. Kết quả lây nhiễm bệnh nhân tạo bệnh xoăn vàng lá cà chua bằng phương pháp agroinoculation 44 Bảng 3.10: Kết quả kiểm tra ELISA mẫu bệnh hại cà chua thu thập ngoài đồng ruộng năm 2012 - 2013 49 Bảng 3.11. Các mồi chung và mồi đặc hiệu phát hiện begomovirus gây bệnh xoăn vàng lá cà chua 53 Bảng 3.12. Kết quả kiểm tra PCR phát hiện begomovirus bằng cặp mồi ccung BegoAFor1/BegoARev1 trên các mẫu cà chua 54 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi Bảng 3.13. Kết quả kiểm tra PCR phát hiện Tomato leaf curl Hainan virus bằng cặp mồi đặc hiệu ToLCHnVFor1 và ToLCHnVRev2 trên các mẫu cà chua dương tính với begomovirus 57 Bảng 3.14. Kết quả kiểm tra PCR phát hiện Tomato leaf curl Vietnam (ToLCVV) bằng cặp mồi đặc hiệu To-F4 và To-R4 trên các mẫu cà chua dương tính với begomovirus 59 Bảng 3.15. Kết quả kiểm tra PCR phát hiện Tomato yellow leaf curl Kanchanabury virus (TYLCKaV) bằng cặp mồi đặc hiệu TYKa-A-F1 và TYKa-A-R1 trên các mẫu cà chua dương tính với begomovirus 61 Bảng 3.16. Kết quả kiểm tra PCR phát hiện mẫu begomovirus VNP93 bằng cặp mồi đặc hiệu VNP93-A-F và VNP93-A-R trên các mẫu cà chua dương tính với begomovirus 64 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC BIỂU ðỒ Biểu Đồ 3.1 : Diễn biến bệnh xoăn vàng lá và mật độ bọ phấn trên giống cà chua Perfect 89 và Racha vụ xuân hè năm 2013 tại xã Cổ Bi – Gia Lâm – Hà Nội 29 Biểu đồ 3.2: Diễn biến bệnh xoăn vàng lá và mật độ bọ phấn trên giống cà chua Magic và VT 3 vụ xuân hè năm 2013 tại xã Đa Tốn – Gia Lâm – Hà Nội 31 Biểu đồ 3.3: Diễn biến bệnh xoăn vàng lá và mật độ bọ phấntrên giống cà chua Magic và DV 2962 vụ xuân hè năm 2013 tại Văn Lâm – Hưng Yên 34 Biểu đồ 3.4: Diễn biến của bệnh xoăn vàng lá và mật độ bọ phấn trên giống cà chua Grandeeva 3963 và Mec VL3500 năm 2012 – 2013 tại Hải Cường - Hải Hậu – Nam Định 36 Biểu đồ 3.5: Diễn biến bệnh xoăn vàng lá trên giống cà chua VL988, L66 năm 2012 – 2013 tại Bình Nghĩa- Bình Lục- Hà Nam 39 Biểu đồ 3.6: Diễn biến bệnh xoăn vàng lá trên giống cà chua BM199, VL642 năm 2012 – 2013 tại Quỳnh Vân – Quỳnh Phụ - Thái Bình 41 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… viii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 3.1. Triệu chứng khảm vàng 25 Hình 3.2. Triệu chứng xoăn vàng lá 25 Hình 3.3. Triệu chứng khảm dương xỉ 25 Hình 3.4. Triệu chứng cuốn lá, cây lùn 25 Hình 3.5: Điều tra và lẫy mẫu tại Thái Bình. 46 Hình 3.6: Điều tra và lẫy mẫu tại Hà Tây. 46 Hình3. 7: Cây cà chua có rìa mép lá cong và lá bị biến vàng 47 Hình 3.8: Kiểm tra ELISA phát hiện TYLCV, TYLCTHV và TSWV trên cà chua 48 Hình 3.9: Chiết DNA và thực hiện phản ứng PCR phát hiện begomovirus trên cà chua 55 Hình 3.10: Kiểm tra PCR phát hiện các begomovirus từ mẫu cà chua bằng cặp mồi chung BegoAfor1/BegoARev1 56 Hình 3.11: PCR phát hiện Tomato leaf curl Vietnam (ToLCVV) bằng cặp mồi đặc hiệu To-F4 và To-R4 trên các mẫu cà chua dương tính với begomovirus 60 Hình 3.12: PCR phát hiện Tomato yellow leaf curl Kanchanabury virus (TYLCKaV) bằng cặp mồi đặc hiệu TYKa-A-F1 và TYKa-A-R1 trên các mẫu cà chua dương tính với begomovirus 62 Hình 3.14: PCR phát hiện virus VNP93 bằng cặp mồi đặc hiệu VNP93-A-F và VNP93-A-R trên các mẫu cà chua dương tính với begomovirus 65 [...]... ho ch Lá cây b b nh thư ng cong lõm và b bi n vàng t mép lá vào trong Tri u ch ng ñi n hình thư ng quan sát th y lá bánh t , lá non g n ng n Cây b b nh các lá ng n nh , mép lá cong lên và xoăn l i, lá có d ng hình thìa Lúc ñ u ph n th t lá vàng, gân lá xanh, sau ñó bi n vàng toàn b lá Toàn b ph n ng n xoăn vàng, m c th ng ñ ng, hơi giòn d gãy B nh xu t hi n càng s m trên ñ ng ru ng thì thi t h i càng... ho ch qu Lá m i b b nh thư ng có v t kh m xanh vàng xen k Lá b b nh thư ng vàng t g c lá, lá hơi cong xu ng, b m t lá g gh D ng tri u ch ng quan sát rõ trên lá bánh t , lá g n ng n Qu trên cây b b nh thư ng nh , b kh m vàng loang l ho c b bi n vàng ñôi khi có v t ñ m Cây nhi m b nh ch m sinh trư ng phát tri n hơn cây không nhi m b nh * Tri u ch ng xoăn vàng lá (hình 4.2) B nh xoăn vàng lá xu t hi... cao hơn nhi u so v i b nh kh m lá dương x và kh m vàng lá B nh gây h i khá n ng trên ñ ng ru ng: b nh virus xoăn vàng lá gây thi t h i ñ n 80 - 90% năng su t Cây cà chua b b nh virus xoăn vàng lá s làm cho hoa và n b r ng nhi u, qu x p, khô nư c ph m ch t kém, năng su t th p Vì v y phòng tr b nh virus xoăn vàng lá góp ph n làm tăng năng su t, s n lư ng cà chua Các k t qu nghiên c u nư c ta hi n nay,... M ð U Cây cà chua b t n công b i r t nhi u loài virus Trong s b nh virus h i cà chua vùng nhi t ñ i và c n nhi t ñ i, b nh xoăn vàng lá ñư c xem là m t b nh c c kỳ quan tr ng Cây b nh bi u hi n nhi u tri u ch ng: cu n lá (cong l i hình thìa); mép lá (ñ c bi t lá non) bi n vàng; lá nh h p; cây nhi m s m còi c c v i t l ñ u qu r t th p (Pico et al., 1996) Nguyên nhân gây b nh xoăn vàng lá cà chua khá... t Nam, b nh xoăn vàng lá ñư c xem là b nh quan tr ng nh t Hi n nay t l nhi m b nh xoăn lá trên các ru ng tr ng cà chua thư ng r t cao, có khi t i 100 % Vi t Nam, ñã có ít nh t 5 loài begomovirus ñư c xác ñ nh gây ra b nh xoăn vàng lá cà chua Loài th nhât là Tomato leaf curl Vietnam virus (ToLCVV), ñư c phân l p t cây cà chua b b nh xoăn lá 2001 (Green et al., 2001) Loài th mi n B c vào năm hai là Tomato... nh virus xoăn lá cà chua hi n v n là b nh h i nguy hi m trên cây cà chua, nh hư ng ñ n ngh tr ng cà chua cũng như s n ph m cà chua thương ph m c a Vi t Nam Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 14 Chương 2 V T LI U, N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 ð i tư ng, ñ a ñi m và th i gian nghiên c u 2.1.1 ð i tư ng nghiên c u * B nh xoăn vàng lá cà chua 2.1.2... xoăn lá cà chua ñư c ghi nh n ñ u tiên trên th gi i t cu i nh ng năm 40 t i Israel Các v d ch b nh ñã xu t hi n r i rác vào nh ng năm 60,tr thành nghiêm tr ng vào ñ u nh ng năm 70 khi thi t h i năng su t có th ñ t 100 % Vào cu i nh ng năm 70, t t c các vùng tr ng cà chua t i Trung ðông ñã b nhi m b nh B nh ñã ñư c báo cáo t i vùng ðông Nam Á (Thái Lan và c ðài Loan), châu Phi và Châu Âu vào nh ng năm. .. u ñ xác ñ nh s begomovirus lư ng Vi t Nam v n còn ít Hơn n a, Vi t Nam ñã ñư c xác ñ nh là trung tâm ña d ng c a begomovirus, do v y vi c xác ñ nh s lư ng loài begomovirus là c c kỳ quan tr ng ð góp ph n th c hi n yêu c u c p thi t ñó, dư i s hư ng d n c a TS Hà Vi t Cư ng, chúng tôi th c hi n ñ tài: “ði u tra và xác ñ nh b nh xoăn vàng lá cà chua t i m t s t nh ñ ng b ng Sông H ng năm 2012 - 2013 ... ng, giai ño n sinh trư ng và ñi u ki n sinh lý c a cây t i th i ñi m nhi m b nh (Pico et al., 1996) Tri u ch ng s m nh t là lá cong xu ng dư i vào phía bên trong V sau, lá không có hình d ng, nh h p, bi n vàng t mép và chót lá lan vào gi a gân; lá cu n cong lên phía trên thành hình thuy n; lá non bi n vàng m nh, giòn và nh h p Cu ng lá có th xo n v n Cây lùn còi c c, m c nhi u cành nhánh nh , ñ t thân... virus xoăn vàng lá thì khu v c ðông nam châu Á là m t trong các khu v c xu t hi n ph bi n lo i virus này Vi t Nam n m trong kh i các nư c ðông nam Á nư c ta, b nh virus h i cà chua ñư c phát hi n vào năm 1967 - 1968 Năm 1968, Nguy n Thơ - ðHNN Hà N i và Bùi Văn Ích - Vi n BVTV ñã xác ñ nh ch t 3-4 con b ph n ti p xúc cây b nh và lây lên cây kh e ñã có kh năng truy n b nh TYLCV t t B nh virus xoăn vàng lá . “ ðiều tra và xác ñịnh bệnh xoăn vàng lá cà chua tại một số tỉnh ñồng bằng Sông Hồng năm 2012 - 2013 Mục ñích Xác định chính xác thành phần begomovirus tại một số tỉnh đồng bằng Sông Hồng năm. quả điều tra tình hình bệnh xoăn vàng lá cà chua và mật độ bọ phấn trên cà chua tại Hà Nội và một số tỉnh thuộc đồng bằng Sông Hồng năm 2012 - 2013 27 3.2 Kết quả lây nhiễm bệnh nhân tạo bệnh. Hồng năm 2012 – 2013. Yêu cầu - Điều tra bệnh xoăn vàng lá tại một số tỉnh thuộc ĐBSH - Thu thập các mẫu bệnh ngoài đồng ruộng thuộc địa bàn điều tra và một số tỉnh miền Bắc. - Xác định begomovirus