Lớp CĐ Kiểm Nghiệm VSATTP ĐH Kỹ thuật Y Yế Hải Dương Bài 8 Sắc ký khí Kỹ thuật Sắc ký - Khối Phổ PGS Phạm gia Huệ Hà Nội 24-02-2009 Sắc ký khí • SK /Khí: – Pha động = khí (khí mang) – Phân tích chất khí, hơi • Phân loại: – SK khí-lỏng (GLC) = SK Phân bố – SK khí-rắn (GSC)= SK Hấp phụ • Phát triển nhanh, mạnh nhờ: - kỹ thuật tạo dẫn chất dễ bay hơi - kỹ thuật phối hợp GC-MS, GC-IR Máy Sắc ký khí Máy Sắc ký khí • Khí mang: Nitơ, Heli, Argon, Hydro bom khí, chai khí, máy sinh khí nitơ rất tinh khiết (loại tạp, hơi ẩm) • Bộ phận tiêm mẫu: bay hơi mẫu t o bộ tiêm > t o cột Qua tấm đệm (septum) silicon Chia dòng (split) 1/10, 1/100 Không chia dòng (splitless) tiêm vài mcl bộ tiêm mẫu tự động Cột sắc ký – Cột nhồi: • K loại, ttinh; 1-4 m x 1-4 mm • hạt 60-100 mesh (250 – 150 mcm) – Cột mao quản (cột hở): hay dùng • T tinh, silica : 10 – 100 m 0,1 – 0,5 mm • Cột FSOT (fused silica open tubular) • Cột SCOT / PLOT • Cột WCOT 0,3mm 4mm Cột nhồi Cột Mao quản SCOT / PLOT WCOT Chất nhồi cột • Chất mang (support) : chất rắn để mang pha tĩnh – Hạt nhỏ, xốp, 1-10 m 2 /g, trơ, chịu nhiệt – Hay dùng diatomit – cỡ hạt hay tính theo mesh (số lỗ / in 2 của rây) VÍ DỤ: hạt 60-80 mesh ~ cỡ hạt 250 – 170 mcm • Pha tĩnh lỏng : lỏng ở nhiệt độ phân tích – Bao hay liên kết (bonded, cross-linked) trên pha tĩnh – Có độ phân cực khác nhau, có hệ số phân bố khác nhau với các chất phân tích. – Hay dùng các dẫn chất polydimethyl siloxan (các loại OV, SE), polyethylenglycol PEG (Carbowax) – Pha tĩnh rắn: Hay dùng các gel rây phân tử, các polyme xốp Detector Detector vạn năng: • Detector dẫn nhiệt TCD: nhạy trung bình • Detector ion hoá ngọn lửa FID: hay dùng nhất, nhạy khoảng gấp 3 lần TCD, không phát hiện 1 số chất Detector đặc hiệu: • Detector nhiệt ion NPD: nhạy với chất có N, P • Detector bắt điện tử ECD: nhạy với chất ái điện tử, dẫn chất clo, thơm đa vòng • Detector đo quang ngọn lửa: nhạy với hợp chất S và P Ứng dụng • Phân tích các chất khí, dễ bay hơi, bền nhiệt • Định tính, thử tinh khiết, định lượng • SK khí-lỏng (GLC) dùng phổ biến: ít tốn kém, nhanh, nhạy; nhiều khi phải tạo dẫn chất (tạo chất bay hơi được hoặc phát hiện được) • SK khí rắn (GSC): dùng với chất không phân tích được bằng GLC như: các oxid nitơ, oxid carbon, H 2 S, CS 2 , Kỹ thuật Sắc ký Khối phổ • Giới thiệu sơ lược về khối phổ • Giới thiệu kỹ thuật GC-MS • Giới thiệu kỹ thuật LC-MS Các thành phần một máy MS Nguồn ion PT khối Detector ion Phổ Khối m/z Signal Intensity Nạp mẫu R R L L K K Chân không cao X X ử lý và lưu dữ liệu ử lý và lưu dữ liệu Tránh ion PT va chạm với các phân tử trong không khí [...]... lệ với cường độ tín hiệu GC-MS Tách bằng GC Xác định bằng MS Có thư viện phổ chuẩn Interface Mass spectrometer acts as a detector for GC GC - MS GC-MS • Tách bằng GC Xác định bằng MS • Sắc đồ có các dạng khác nhau: – TIC: đo tổng các ion – SIM: đo 1 ion chọn lọc – MIM: đo 1 số ion chọn lọc • Định tính: dựa vào vị trí pic trên sắc đồ, hoặc dựa vào phổ MS của píc đó (so với phổ chuẩn), xác định được chất... định được chất chưa biết • Định lượng dựa vào diện tích/ chiều cao pic trên sắc đồ eugenol Isoeugenol Pic dung môi Pic tạp đọc phổ MS Methyl salicylat Sắc đồ TIC một chất tạo hương Khối phổ đồ của pic 119s LC-MS • Tách bằng LC Xác định bằng MS • Khó khăn: loại ảnh hưởng của dung môi và các thành phần trong pha động; ít thư viện phổ • Để ghép nối giữa LC và MS: • giao diện ion hoá hoá học ở áp suất thường... LC-MS • Phát hiện tạp chất trong các thuốc tổng hợp, • LC: pha động ACN-amoni ethanoat, C18 • giao diện phun điện • Sắc đồ TIC: ion mẹ rửa giải ở phút thứ 17,7 và các pic tạp ra trước và sau đó • • MS: Chất ra ở 8,35 ph cho phổ khối có các pic thuộc ion (M+H)+ xuất hiện ở m/z = 225 và 227 theo tỷ lệ 3:1 cho thấy sự có mặt của nguyên tử clo Chất tạp là quinazolin có 3 nhóm thế Ví dụ Ứng dụng LC-MS Sắc. .. (electrospray) Ion hoá hoá học ở áp suất thường APCI • Nitơ được dùng để phun sương pha động tạo thành một sol khí hay khí dung (aerosol) của khí nitơ và các giọt nhỏ dung môi • Sol khí này dược đưa qua một khu vực được đốt nóng Ở đây dung môi bị loại và các chất được ion hoá nhờ các phản ứng ion-phân tử ở áp suất khí quyển, các electron và các ion sơ cấp được tạo ra do phóng điện Giao diện phun điện ES Các giọt... vết các mảnh trong cấu trúc của phân tử M • Pic lớn nhất trên phổ MS là pic cơ bả n (coi như có cường độ 100%) intensity) Cường độ pic khác tính theo % của pic cơ bản Phổ ion hoá hoá học của pentobarbital Pic của ion phân tử MH+ ở m/z 227 (M+1) là pic lớn thứ nhì Ít các pic của mảnh so với phổ EI 2 Bộ Phân tích Khối • Quả tim của máy khối phổ, có nhiệm vụ tách các ion có trị số m/z khác nhau thành... (phân tử hay các mảnh)  Hai kỹ thuật :  Bắn phá electron (Electron Impact - EI): tạo ion dùng chùm electron năng lượng cao: phương pháp cứng, cho nhiều mảnh nhỏ  Ion hoá hoá học (chemical ionization (CI) tạo ion thông qua phản ứng với các ion thuốc thử còn mảnh ion mẹ (phân tử): Bắn phá bằng Electron (EI) Sợi đốt + PT khối + Khu vực Chùm electron Gia tốc ion Pic cơ bản Phổ MS của pentobarbital, bắn . VSATTP ĐH Kỹ thuật Y Yế Hải Dương Bài 8 Sắc ký khí Kỹ thuật Sắc ký - Khối Phổ PGS Phạm gia Huệ Hà Nội 2 4-0 2-2 009 Sắc ký khí • SK /Khí: – Pha động = khí (khí mang) – Phân tích chất khí, hơi • Phân. loại: – SK kh - lỏng (GLC) = SK Phân bố – SK kh - rắn (GSC)= SK Hấp phụ • Phát triển nhanh, mạnh nhờ: - kỹ thuật tạo dẫn chất dễ bay hơi - kỹ thuật phối hợp GC-MS, GC-IR Máy Sắc ký khí Máy Sắc ký. được) • SK khí rắn (GSC): dùng với chất không phân tích được bằng GLC như: các oxid nitơ, oxid carbon, H 2 S, CS 2 , Kỹ thuật Sắc ký Khối phổ • Giới thiệu sơ lược về khối phổ • Giới thiệu kỹ thuật