2 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ THÀNH ĐOÀN TP. HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO NGHIỆM THU BƢỚC ĐẦU KHẢO SÁT BỆNH JOHNE’S (PARATUBERCULOSIS) TRÊN ĐÀN BÕ SỮA HUYỆN CỦ CHI – TP. HỒ CHÍ MINH CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG ThS. Hồ Quế Anh PGS.TS. Lê Xuân Cƣơng CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 04/ 2014 3 MỤC LỤC Trang TÓM TẮT 5 ABSTRACT 6 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 7 DANH MỤC CÁC BẢNG 8 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ 9 PHẦN MỞ ĐẦU 10 1. Tên đề tài/dự án 10 Chủ nhiệm đề tài/dự án: Cơ quan chủ trì: Thời gian thực hiện: Kinh phí được duyệt: Kinh phí đã cấp: theo Thông báo số /TB-SKHCN 2. Mục tiêu 10 3. Nội dung 10 CHƢƠNG I- TỔNG QUAN 11 1.1- Những nghiên cứu ngoài nước 11 1.1.1 – Đặc điểm chung của bệnh 11 1.1.2 Phương pháp chẩn đoán bệnh và phát hiện bệnh Johne’s 12 1.1.3 Tình hình nhiễm bệnh Johne’s của bò sữa ở một số nước 14 1.2- Những nghiên cứu trong nước 15 1.3- Tính cấp thiết của đề tài 15 CHƢƠNG II. NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP 15 2.1. Nội dung 1: Xác định hiện trạng nhiễm MAP trên đàn bò 15 sữa tại huyện Củ Chi, TPHCM 4 2.1.1. Mô tả nội dung 15 2.1.2. Phương pháp nghiên cứu 16 2.1.3. Thiết bị và vật liệu sử dụng 17 2.1.4. Qui trình kỹ thuật Elisa phát hiện kháng thể kháng 18 bệnh paratuberculosis 2.1.5. Các chỉ tiêu theo dõi 19 2.2. Nội dung 2: Đánh giá sơ bộ một số yếu tố lây lan và 19 nguy cơ gây bệnh paratuberculosis trên bò sữa trong khu vực điều tra và trên toàn huyện Củ Chi, TPHCM. CHƢƠNG III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 20 3.1. Kết quả điều tra tình hình chăn nuôi bò sữa ở nông 20 hộ thuộc 3 xã khảo sát bệnh Johne's 3.2. Kết quả kiểm tra kháng thể kháng MAP và các yếu 25 tố lây lan, gây bệnh trên bò sữa trong khu vực khảo sát 3.2.1. Nội dung 1: Xác định hiện trạng nhiễm bệnh 25 Mycobacterium paratuberculosis trên đàn bò sữa tại huyện Củ Chi, TPHCM 3.2.2. Nội dung 2: Đánh giá sơ bộ một số yếu tố lây lan và 29 nguy cơ gây bệnh paratuberculosis trên bò sữa trong khu vực điều tra huyện Củ Chi, TPHCM CHƢƠNG IV. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 37 4.1. Kết luận 37 4.2. Đề nghị 37 PHỤ LỤC 38 1. Phụ lục chuyên môn 38 2. Phụ lục sản phẩm 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 5 TÓM TẮT Thu thập 386 mẫu máu bò đang cho sữa, ở 67 nông hộ tại 03 xã có lượng bò sữa nhiều nhất huyện Củ Chi (số liệu tháng 10/2012): Tân Thạnh Đông (tổng đàn: 16.850 con), Tân Thạnh Tây (tổng đàn: 4.236 con), Trung An (tổng đàn: 3.905con). Kết quả kiểm tra kháng thể kháng Mycobacterium paratuberculosis (MAP) bằng phương pháp ELISA có 16 mẫu dương tính (16/386 mẫu), chiếm 4,15%. Tân Thạnh Đông có số mẫu dương tính cao nhất (13/16 mẫu dương tính). Sự lưu hành MAP trên nông hộ ở mức khá cao, 21,54% (14/67 hộ). Đặc biệt tại Tân Thanh Đông, nơi chăn nuôi bò sữa cao nhất TPHCM số hộ khảo sát có kết quả dương tính với MAP chiếm 30,56% (11/36 hộ), Tân Thạnh Tây là 7,14% (1/14 hộ) và Trung An 13,33% (2/15 hộ). Có mối tương quan thuận giữa sự dương tính của MAP với các triệu chứng lâm sàng như tiêu chảy, viêm vú và sinh sản thấp. Có 08 con có các dấu hiệu lâm sàng trên dương tính với MAP (chiếm 50,0%), trong đó có 04 con bị tiêu chảy cho kết quả dương tính với MAP, chiếm 25% trên nhóm dương tính và 5,97% so với nhóm khảo sát. Mối nguy lây lan đến từ việc không phân khu nuôi dưỡng riêng biệt cho từng nhóm bò dẫn đến sự lây nhiễm MAP dễ dàng hơn và hệ thống dẫn nước thải nằm hẳn trong chuồng tạo điều kiện cho MAP hiện diện liên tục trong chuồng và dễ dàng xâm nhập vào cơ thể. 6 ABSTRACT Survey of paratuberculosis in dairy cattle at Cu Chi province – Ho Chi Minh City A total of 386 cross-bred Holland Friesian cattles at the milking period, from 67 farms was studied. The blood samples were collected in 36 farms located at Tan Thanh Dong, 14 farms located at Tan Thanh Tay and 15 farms in Trung An Commune Cu Chi Distrist, Ho Chi Minh City. Sixteen of 386 (4,15%) animals were positive for ELISA test and Tan Thanh Dong showed the highest positive (13/16 positive cattles). Prevalence of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) in farms was 21,54% (14/67 farms) in which Tan Thanh Dong also exhibited the highest value with 30,56% (11/36 farms), followed by Tan Thanh Tay with 7,14% (1/14 farms) and Trung An with 13,33% (2/15 farms). There was positive correlation between positive value and clinical signs, such as diarrhoea, mastitis and low reproduce. Eight in sixteen positive cattles displayed clinical signs. Diarrhea was observed as the typical symptom as the four in sixteen infected cattles were positive with MAP (25,0%). The great risk factors in spreading Johne’s are no distribution area for each group of cows and wastewater systems located in the barn so that pathogens was created good conditions for their existence. Keywords: Mycobacterium paratuberculoisis, cattle, ELISA. 7 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT THUẬT NGỮ TIẾNG VIẾT AGID Agar Gel Immunodiffusion ELISA Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay MAP Mycobacteriurn Avium Subspecies Paratuberculosis PCR Polymerase Chain Reaction TPHCM Thành phố Hồ Chí Minh XN Xét nghiệm 8 DANH MỤC CÁC BẢNG SỐ TÊN BẢNG SỐ LIỆU TRANG 1 Bảng 1 Quy mô điều tra khảo sát 16 2 Bảng 2: Phân bổ số lượng mẫu thu thập 16 3 Bảng 3 Tình hình chung 20 4 Bảng 4 Phương thức chăn nuôi. 21 5 Bảng 5 Biện pháp vệ sinh chuồng trại 22 6 Bảng 6 Biện pháp phòng bệnh. 13 7 Bảng 7 Các dấu hiệu lâm sàng của bệnh Johne's thường có tại trại 24 8 Bảng 8 Kết quả kiểm tra kháng thể MAP/máu bò sinh sản đang cho sữa. 25 9 Bảng 9 Mức độ nhiễm bệnh Johne's tại địa bàn điều tra. 27 10 Bảng 10 Mối liên hệ giữa các dấu hiệu lâm sàng và kết quả xét nghiệm kháng thể MAP. 28 11 Bảng 11 Quy mô đàn bò (con/hộ) và nguồn gốc đàn bò sữa liên quan tới bệnh Johne's tại vùng điều tra. 29 12 Bảng 12 Phương thức chăn nuôi liên quan tới bệnh Johne's tại vùng điều tra. 31 13 Bảng 13 Phương thức vệ sinh chuồng trại liên quan tới bệnh Johne's tại vùng điều tra. 34 14 Bảng 14 Biện pháp phòng bệnh liên quan tới bệnh Johne's tại vùng điều tra 36 9 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ SỐ TÊN HÌNH ẢNH TRANG 1 Hình 1: Bộ KIT ELISA dùng để phát hiện kháng thể kháng MAP 17 2 Hình 2: Hộ có quy mô chăn nuôi trên 30 con 30 3 Hình 3: Hộ có quy mô chăn nuôi từ 10-30 con 30 4 Hình 4: Hộ có quy mô chăn nuôi dưới 10 con 30 5 Hình 5 : Dạng kiểu chuồng có sử dụng chất lót nền 32 6 Hình 6: Phương thức chăn nuôi cầm cột với máng ăn uống riêng lẻ 33 7 Hình 7: Phương thức chăn nuôi không cầm cột, không có máng ăn uống riêng lẻ 33 8 Hình 8: Kiểu chuồng có hệ thống nước thải nằm hẳn trong chuồng 35 9 Hình 9: Kiểu chuồng có hệ thống nước thải nằm ngoài chuồng 35 10 PHẦN MỞ ĐẦU 1. Tên đề tài: Bước đầu khảo sát bệnh Johne’s (paratuberculosis) trên đàn bò sữa huyện Củ Chi - Thành phố Hồ Chí Minh. Chủ nhiệm đề tài: ThS. Hồ Quế Anh Cơ quan chủ trì: Trung tâm Phát triển Khoa học và Công nghệ Trẻ Thời gian thực hiện đề tài: 12/2012 đến tháng 12/2013 Kinh phí đƣợc duyệt: 80.000.000 đồng Kinh phí đã cấp: theo TB số : TB-SKHCN ngày / / 2. Mục tiêu: Xác định hiện trạng nhiễm Mycobacterium paratuberculosis tại địa bàn chăn nuôi bò sữa chủ yếu khu vực TPHCM. Mục tiêu cụ thể - Xác định hiện trạng nhiễm MAP trên đàn bò sữa tại huyện Củ Chi, TPHCM. - Đánh giá sơ bộ một số yếu tố lây lan và nguy cơ gây bệnh paratuberculosis trên bò sữa trong khu vực điều tra. 3. Nội dung: Công việc dự kiến Công việc đã thực hiện 1. Xác định hiện trạng nhiễm MAP trên đàn bò sữa tại huyện Củ Chi, TPHCM Điều tra thu thập một số thông tin liên quan đến bệnh Johne’s: 80 phiếu Lấy mẫu tiến hành phân tích xác định tình trạng nhiễm MAP bằng phương pháp ELISA: 400 mẫu máu - 80 phiếu - 400 mẫu máu 2. Đánh giá sơ bộ một số yếu tố lây lan và nguy cơ gây bệnh paratuberculosis trên bò sữa trong khu vực điều tra huyện Củ Chi, TPHCM: 01 báo cáo - 01 báo cáo 11 CHƢƠNG I- TỔNG QUAN 1.1- Những nghiên cứu ngoài nƣớc 1.1.1 – Đặc điểm chung của bệnh Theo định nghĩa bệnh Johne’s (paratuberculosis) của từ điển bách khoa toàn thư Việt Nam (cập nhật ngày 20/06/2012) thì bệnh Johne’s có tên gọi là bệnh viêm ruột phó lao. Đây là bệnh truyền nhiễm ở bò và loài nhai lại nhỏ (dê, cừu) do vi khuẩn Mycobacteriurn Avium Subspecies Paratuberculosis (MAP) gây ra [1] . Bệnh này phổ biến ở Châu Âu, lan sang các nước do nhập khẩu bò giống thuần chủng từ Châu Âu. Tuy ít gây chết, nhưng tổn thất lớn về kinh tế do bệnh kéo dài [1] . Bệnh Johne’s thường bắt đầu như là một bệnh nhiễm trùng ở bê và thường không thấy dấu hiệu gì cho đến khi bò được 2-5 năm tuổi (đôi khi lớn tuổi hơn). Việc nhiễm bệnh khó phát hiện được trong giai đoạn đầu. Trước khi các triệu chứng lâm sàng rõ ràng, bò bị nhiễm đã có thể bài xuất vi khuẩn ra môi trường gây ô nhiễm các khu vực đẻ, chỗ ở và lây nhiễm sang con khác trong đàn. Vi khuẩn này gây ra hiện tượng viêm đường ruột, dẫn đến con vật tiêu chảy, giảm cân nặng và sản lượng sữa giảm. Dù không có triệu chứng bệnh rõ ràng nhưng những con bò mắc bệnh thường sản xuất sữa giảm, tỷ lệ loại thải cao, khả năng sinh sản kém và bệnh viêm vú tăng cao [2] . Dấu hiệu của bệnh Johne’s bao gồm giảm cân và tiêu chảy, ăn uống bình thường. Vài tuần sau khi khởi phát bệnh tiêu chảy, có thể có hiện tượng sưng dưới hàm. Hiện tượng này có là do mất protein từ máu vào đường tiêu hóa. Bò bệnh giai đoạn này thường sống không lâu, có thể chỉ được vài tuần [3] . Do bản chất tiềm ẩn của nó, phần lớn bệnh Johne’s không được chú ý nhiều trong chăn nuôi bò sữa và các triệu chứng của nó có thể không quen thuộc với hầu hết người chăn nuôi. Một đàn bò chỉ cần có 10% số bò mắc bệnh với [...]... nuôi bò sữa các nước này Trong khi đó tại Việt Nam căn bệnh này hầu như chưa được biết đến, chưa có ghi nhận hay nghiên cứu nào liên quan đến nó CHƢƠNG II- NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP 2.1- Nội dung 1: Xác định hiện trạng nhiễm MAP trên đàn bò sữa tại huyện Củ Chi, TPHCM 2.1.1- Mô tả nội dung: Địa bàn khảo sát tình hình nhiễm bệnh Johne’s (paratuberculosis) trên đàn bò sữa 03 xã có lượng bò sữa nhiều nhất huyện. .. có khoảng 16 con bò đang trong giai đoạn II và 40 con ở giai đoạn 1 Như vậy trên thực tế , tỉ lệ nhiễm bệnh Johne’s của đàn bò sữa tại TPHCM đang ở mức khá cao 3.2.2 Nội dung 2: Đánh giá sơ bộ một số yếu tố lây lan và nguy cơ gây bệnh paratuberculosis trên bò sữa trong khu vực điều tra huyện Củ Chi, TPHCM Bảng 11.- Quy mô đàn bò (con/hộ) và nguồn gốc đàn bò sữa liên quan tới bệnh Johne's tại vùng điều... chẩn đoán bệnh Johne’s trên đàn bò sữa Vào năm 1990, Milner đã sử dụng phương pháp ELISA kiểm tra trên 3 đàn bò đã nhiễm bệnh với số lượng bò thí nghiệm là 327 con, kết quả có 57% dương tính với độ đặc hiệu lên đến 98,9% ELISA giữ vai trò quan trọng trong chẩn đoán bệnh Johne’s trên bò sữa [4] Năm 1991, một cuộc khảo sát huyết thanh học trên bò thịt của bang Louisiana, 1581 mẫu huyết thanh ở 152 đàn đã... lệ trung bình 21,53% số hộ kiểm tra máu bò, riêng xã Tân Thạnh Đông có tỷ lệ nhiễm cao hơn (30,56% số hộ kiểm tra máu bò) Tuy mức độ nhiễm bệnh cao thấp khác nhau, nhưng rõ ràng đã có bệnh Johne's trong đàn bò sữa tại cả 3 địa bàn điều tra Một cuộc khảo sát ngẫu nhiên trên đàn bò sữa Anh, mẫu máu của 13.688 con bò, trên 136 đàn được xét nghiệm bằng ELISA có 89 đàn (65%) dương tính với MAP [26] Tại Sudan... và dương tính MAP là 4,15% trên số bò được kiểm tra kháng thể MAP Tuy kết quả dương tính không cao, chỉ vào mức 4,15% trên tổng số con lấy mẫu - nhưng cho thấy MAP đã hiện diện trên đàn bò sữa của huyện Củ Chi Đặc biệt, đàn bò chúng tôi lấy mẫu chỉ trên nhóm bò trưởng thành, đang cho sữa, ở nhóm này thường có tỷ lệ bệnh ở mức thấp vì trong quá trình phát triển đàn, những con bệnh đã bị loại thải dần... Systems) cho thấy, đàn bò sữa tổn thất trung bình 40 đô la/ 1con với đàn có tỉ lệ bệnh lâm sàng thấp, ở đàn tỷ lệ lâm sàng ca - tổn thất trên 227 đô la/con [14] Một phần tư đàn bò sữa ở Mỹ có tỷ lệ nhiễm bệnh Johne's tương đối cao Mặc dù hầu hết các đàn bò thịt ở Mỹ không bị nhiễm bệnh Johne’s nhưng người ta ước tính rằng 08 trong số 100 đàn bò thịt ở Mỹ (8%) có thể bị nhiễm căn bệnh này [2] Năm 2003,... chảy 6,25% , bò tiêu chảy tái phát nhiều lần 78,75% , bò tiêu chảy, giảm cân, ăn bình thường 48,75% ở mức khá phổ biến 24 3.2 Kết quả kiểm tra kháng thể kháng MAP và các yếu tố lây lan, gây bệnh trên bò sữa trong khu vực khảo sát 3.2.1 Nội dung 1: Xác định hiện trạng nhiễm bệnh Mycobacterium paratuberculosis trên đàn bò sữa tại huyện Củ Chi, TPHCM Bảng 8.- Kết quả kiểm tra kháng thể MAP/máu bò sinh sản... 1.350 đàn bò thịt và bò sữa nhiễm bệnh; và tác động của nó tập trung ở ngành công nghiệp sữa, đặc biệt là ở tiểu bang Victoria [15] Ở Ấn Độ, năm 2007, khi xét nghiệm 115 bò sữa bằng kỹ thuật m-ELISA có 32,1% bò dương tính với bệnh Johne’s [16] Ở Cameroon, khi kiểm tra 4.000 con bò sữa bằng kỹ thuật ELISA từ năm 2007-2010, cho kết quả dương tính là 132 con và lượng bò này chủ yếu được nhập bò từ Pháp... gây bệnh paratuberculosis trong phạm vi khu vực khảo sát 19 CHƢƠNG III- KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1- Kết quả điều tra tình hình chăn nuôi bò sữa ở nông hộ thuộc 3 xã khảo sát bệnh Johne's Bảng 3.- Tình hình chung Chỉ tiêu Tân Thạnh Tân Thạnh Trung Đông Tây An ∑ 3 xã Số hộ điều tra (hộ) 50/1627 15/408 15/339 80/2374 Tổng đàn bò (con) 696 233 295 1224 - Bình quân số bò/ hộ (con) 13,9 15,5 19,7 15, 3 Bò sinh... (paratuberculosis) trên đàn bò sữa 03 xã có lượng bò sữa nhiều nhất huyện Củ Chi (số liệu tháng 10/2012): Tân Thạnh Đông (tổng đàn: 16.850 con), Tân Thạnh Tây (tổng đàn: 4.236 con), Trung An (tổng đàn: 3.905con) Số hộ chăn nuôi được khảo sát thông tin: 80 hộ/2374 hộ Quy mô cụ thể như sau: 15 Bảng 1: Quy mô điều tra khảo sát Qui mô đàn/ xã Số bò Số bò Số bò Tổng cộng < 10 con 10-30 con > 30 con Tân Thạnh Đông 20 hộ . MAP trên đàn bò sữa tại huyện Củ Chi, TPHCM 2.1.1- Mô tả nội dung: Địa bàn khảo sát tình hình nhiễm bệnh Johne’s (paratuberculosis) trên đàn bò sữa 03 xã có lượng bò sữa nhiều nhất huyện Củ. tố lây lan, gây bệnh trên bò sữa trong khu vực khảo sát 3.2.1. Nội dung 1: Xác định hiện trạng nhiễm bệnh 25 Mycobacterium paratuberculosis trên đàn bò sữa tại huyện Củ Chi, TPHCM 3.2.2. Nội. NHÂN DÂN TP. HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ THÀNH ĐOÀN TP. HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO NGHIỆM THU BƢỚC ĐẦU KHẢO SÁT BỆNH JOHNE’S (PARATUBERCULOSIS) TRÊN ĐÀN BÕ SỮA HUYỆN CỦ CHI – TP. HỒ CHÍ