1 PHẦN MỞ ĐẦU Tên đề tài: Xây dựng qui trình sản xuất và thử nghiệm lâm sàng màng sinh học từ cellulose vi khuẩn trị tổn thương mất da. Chủ nhiệm đề tài: GS.TS. Nguyễn Văn Thanh Đồng chủ nhiệm đề tài: TS. Huỳnh Thị Ngọc Lan Cơ quan chủ trì: ĐH Y Dược TP. HCM Thời gian thực hiện: 24 tháng Kinh phí được duyệt: 870 triệu Kinh phí đã cấp: 600 triệu đồng theo TB số: TB 284 / TBKHCN ngày 11 tháng 12 năm 2007 Mục tiêu - Xây dựng qui trình sản xuất màng sinh học từ cellulose vi khuẩn phối hợp với họat chất tái sinh mô của dầu mù u và tinh dầu tràm trà Úc trị tổn thương mất da với qui mô 1500 màng/ lô. - Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở kiểm nghiệm màng - Thử nghiệm lâm sàng màng sinh học đến hết giai đoạn 2 để làm cơ sở cho việc điều trị tổn thương mất da bằng màng sinh học. Nội dung 1. Xây dựng qui trình sản xuất màng trị tổn thương mất da từ cellulose vi khuẩn phối hợp với hoạt chất tái sinh mô từ dầu mù u và tinh dầu tràm trà Úc: Chúng tôi xây dựng các tiêu chuẩn về nguyên liệu và xây dựng các qui trình ở qui mô sản xuất 1500 màng / lô ✦ ✦✦ ✦ Chuẩn bị nguyên liệu và xây dựng tiêu chuẩn nguyên liệu: • Nguyên liệu nuôi cấy tạo màng cellulose bán thành phẩm: nguồn nguyên liệu để nuôi cấy Acetobacter xylinum là nước dừa già, nguồn protein, đường glucose và các loại muối khoáng, trong đó nguồn nước dừa già cần phải được xử lý và kiểm soát chất lượng trước khi sử dụng và cần xây dựng tiêu chuẩn nước dừa khô về mặt vi sinh. Nước dừa đạt tiêu chuẩn sẽ được xử lý cho trong và đưa đi tiệt trùng. 2 • Nguyên liệu tạo màng thành thành phẩm - Hoạt chất tái sinh mô: chiết xuất từ dầu mù u, xây dựng tiêu chuẩn họat chất này bao gồm các tiêu chuẩn lý hóa, thành phần acid béo và thử không gây kích ứng da. - Tinh dầu tràm trà Úc: xây dựng tiêu chuẩn về tinh dầu tràm trà Úc bao gồm tính kháng khuẩn trên các vi khuẩn hay gây nhiễm vết thương và tính kích ứng da. - Bao nhôm sử dụng để đóng gói - Các loại hóa chất sử dụng tinh chế màng: hóa chất tinh khiết ✦ ✦✦ ✦ Xây dựng các qui trình với qui mô sản xuất 1500 màng /lô • Xây dựng qui trình tạo màng cellulose thô từ vi khuẩn Acetobacter xylinum qui mô 1500 màng / lô - Xây dựng qui trình nhân giống vi khuẩn: sử dụng phương pháp nuôi cấy động với thể tích từ 8 lít đến 30 lít giống. Khảo sát các thông số động học của quá trình nhân giống để đạt khả năng tăng trưởng khoảng 100 lần, từ đó có thể sử dụng để nhân giống cho 200 lít đến 400 lít môi trường tạo màng cellulose. - Xây dựng qui trình nuôi cấy tạo màng cellulose thô: khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình tạo màng BC trong điều kiện nuôi cấy tĩnh. Qui trình này thực hiện trong các hộp nhựa kích thước 22m x 12cm x 10cm. Mỗi mẻ nuôi cấy sử dụng khoảng 200 hộp nhựa/ mẻ với số màng thu được khoảng 1500 màng kích thước 10 cm x 10 cm. • Xây dựng qui trình tinh chế màng cellulose thô qui mô 1500 màng / mẻ: màng cellulose thô có màu vàng nhạt bên trong còn chứa vi khuẩn Acetobacter xylinum và các tạp chất của môi trường nuôi cấy. Vì vậy cần phải phá vỡ các tế bào vi khuẩn và lọai độc tố. Màng cellulose sau khi tinh chế có màu trắng trong, đạt độ tinh khiết cao, đạt các tiêu chuẩn đã được nghiên cứu để chế tạo màng trị tổn thương mất da như không kích ứng da, có khả năng cản khuẩn, có độ bền cơ học cao và có khả năng hút dịch. • Xây dựng qui trình kiểm tra chất lượng sản phẩm cỡ mẫu 250 mẫu: kiểm tra chất lượng màng bán thành phẩm, màng thành phẩm theo đúng các tiêu chuẩn chất 3 lượng cơ sở đã đặt ra với các phương pháp kiểm nghiệm đã qui định của Dược điển Việt nam và các Dược điển có uy tín khác. • Xây dựng qui trình tạo màng trị bỏng thành phẩm ACETUL: màng cellulose tinh khiết được phối hợp với hoạt chất tái sinh mô từ dầu mù u và tinh dầu tràm trà Úc và các tá dược. Màng thành phẩm được đóng gói trong bao PE và bao nhôm và sau đó tiệt trùng bằng tia gamma. Theo dõi độ ổn định của sản phẩm: màng ACETUL sẽ được theo dõi các đặc tính của màng như khả năng kháng khuẩn, khả năng thấm hút dịch, khả năng cản khuẩn và thành phần hoạt chất tái sinh mô ở điều kiện tự nhiên (nhiệt độ phòng) trong thời gian 2 năm. 2. Thử nghiệm lâm sàng: thử nghiệm lâm sàng giai đoạn 1 và 2 - Lập hồ sơ thử nghiệm lâm sàng và đăng ký với Bộ Y tế - Thử nghiệm lâm sàng giai đọan 1: thử nghiệm trên 30 người khỏe mạnh nhằm thiết lập đánh giá sơ bộ về tính an tòan của chế phẩm trên người. - Thử nghiệm lâm sàng giai đọan 2: thử nghiệm lâm sàng ở qui mô vừa trên 50 bệnh nhân bị bỏng độ 2 nhằm đánh giá hoạt động trị liệu, tính an toàn của thuốc trên các bệnh nhân, chế độ điều trị thích hợp. 4 Chương 1. TỔNG QUAN 1.1. Sử dụng các loại màng che phủ vết thương mất da Việc điều trị những vết thương mất da nhất là những tổn thương do bỏng thật sự là một thách đố lớn. Ngay tại Mỹ cũng có đến 12 000 nạn nhân đã chết mỗi năm vì bỏng hoặc do những nguyên nhân mất da khác. Vào những tháng cao điểm, hàng ngày Viện bỏng Quốc gia phải điều trị cho khoảng 200 bệnh nhân bị các vết thương do bỏng, tai nạn giao thông, tai nạn nghề nghịêp. [8] Các tai nạn nêu trên đã tạo ra các thương tích rất nặng nề. Chấn thương bỏng làm gia tăng sự thẩm thấu nước, protein và các chất điện giải, dẫn đến tăng tiết dịch, tạo điều kiện gia tăng sự nhiễm trùng vết thương. Tiến trình lành vết thương mất da tùy thuộc rất nhiều vào quá trình điều trị chăm sóc vết thương. Một trong những yếu tố quan trọng không thể thiếu trong quá trình điều trị này là sử dụng các loại vật liệu che phủ vết thương.[72] Đã có nhiều công trình nghiên cứu chứng minh được rằng một vết thương hay một vết bỏng sẽ chóng lành khi nó được giữ trong một điều kiện thích hợp, nghĩa là cần có một lớp màng bảo vệ vết thương (wound dressing). Một lớp màng bảo vệ sẽ có ý nghĩa rất lớn trong việc giữ cho vết thương tránh khỏi sự nhiễm trùng, có một độ ẩm thích hợp, kích thích lành sẹo, bảo vệ những tế bào mới hình thành và quan trọng nhất là hạn chế tình trạng mất nước và chất điện giải liên tục do sự bay hơi từ bề mặt vết thương.[24],[39] Điều này sẽ giúp cải thiện toàn trạng vết thương. Đáp ứng nhu cầu này, đã có rất nhiều loại màng được nghiên cứu chế tạo và đã được chứng minh hiệu quả thực tế điều trị. 1.2. Các loại băng sử dụng che phủ vết thương Băng vết thương phải có một trong những chức năng sau: [25],[52],[74] (1) Có khả năng hút dịch rỉ và các độc tố trên bề mặt vết thương. (2) Duy trì môi trường ẩm cho vết thương; (3) Hấp phụ mùi; (4) Cho phép thông khí; (5) Tạo ra sự cách nhiệt; (6) Có khả năng cản vi khuẩn, bảo vệ vết thương khỏi sự nhiễm khuẩn; ( 7) Có tác động làm sạch vết thương (loại bỏ mô chết và những tiểu phân lạ); (8) Không độc, không kích ứng; (9) Lấy ra dễ dàng khỏi vết thương, không gây tổn 5 thương. Dựa trên nguồn gốc vật liệu, người ta chia màng ra làm các loại: băng gạc thiên nhiên, băng tổng hợp, băng sinh học. Theo cơ chế tác động có thể phân loại băng như sau: [17],[19] Bảng 1.1. Phân loại băng vết thương theo cơ chế tác động Loại băng Đặc tính Băng truyền thống Các loại băng truyền thống có khả năng che phủ vết thương, kh ả năng thấm hút và cản khuẩn kém (băng gạc) Chế phẩm tương tác Màng tổng hợp và những dạng phần lớn trong suốt, hơi nước v à khí oxy có khả năng thấm qua, ngăn cản vi khuẩn (hyaluronic acid, hydrogel, màng dạng bọt…) Các ch ế phẩm có hoạt tính sinh học (Bioactive products ) Các loại băng có chứa các chất có hoạt tính làm lành vết th ương (hydrocolloids, alginat, collagen, chitosan…) Băng truyền thống Băng gạc được làm từ sợi cotton thiên nhiên dưới dạng gạc hoặc vải. Thường dùng làm lớp che phủ đầu tiên cho vết thương tiết dịch nhiều, vết thương nhầy nhớt, xước da, vết bỏng nhẹ. Ưu điểm của băng gạc là không gây bít vết thương, thông thoáng, nhưng gạc cũng có nhiều khuyết điểm như không cản khuẩn, gạc hút dịch rỉ vết thương nhanh và trở nên khô, gây đau đớn cho bệnh nhân khi thay băng, không có tác dụng kích thích sự mau lành của vết thương. Băng gạc có thể được phối hợp với các chất khác như vaselin, chất sát khuẩn … Băng tổng hợp Băng tổng hợp còn được xem là những chế phẩm tương tác. Băng tổng hợp gồm các lọai: băng gạc dạng sợi polymer giống như những loại băng gạc truyền thống, băng dán vết thương (như băng dán kẽm), các dạng màng polymer. Các polymer tổng hợp có nguồn gốc từ sản phẩm dầu hỏa. Polymer tổng hợp có nhiều ưu điểm như có khả năng bám dính, che phủ toàn bộ viền vết thương, dễ dàng sử 6 dụng, nhưng nhược điểm chính là thiếu các đặc tính sinh học như thúc đẩy tiến trình liền vết thương thông qua kích thích các tế bào liên quan. Những màng này dùng che phủ vết bỏng sâu và vết loét trên da. Chúng tạo một môi trường trơ kiểm soát nhiệt độ và độ ẩm của vết thương đồng thời có khả năng cản khuẩn. Các loại băng có chứa chất kháng khuẩn Các băng loại này gồm có các dạng như gạc, vải, lưới từ sợi polymer tổng hợp được tẩm thêm những chất kháng khuẩn như iodin, hợp chất bạc, sulfamid [12],[47],[49]. Những chất này có khả năng sát khuẩn mạnh và phổ rộng. Các loại băng có chứa chất sát khuẩn thích hợp cho những vết thương ở pha viêm và pha tăng sinh ở những vết thương nhiễm khuẩn nặng. Các polymer dưới dạng màng film Màng film là một loại màng đồng nhất, bao gồm một lớp polymer, mặt bên được phủ 1 chất dính. Các polymer thường sử dụng là: polyurethan, polyethylen, polycaprolacton Màng film thích hợp cho vết thương nông. Tuy nhiên do thiếu khoang hấp thu, không cho hơi nước và khí thoát ra, gây tích tụ dịch tiết vết thương dưới lớp màng, đồng thời cho phép vi khuẩn xâm nhập vào bề mặt vết thương. Chính vì thế, chúng không phù hợp với vết thương rộng. Một số loại màng film từ polyurethan như: Tegaderm ® (3M Health Care Ltd.), Opsite Wound ® (Smith & Nephew plc.). Màng kép Màng này gồm hai hay nhiều lớp. Lớp ngoài cùng được thiết kế để tạo được độ bền, độ đàn hồi và kiểm soát sự thoát hơi nước. Trong khi lớp trong được thiết kế để tạo độ bám dính cao và độ đàn hồi như màng Granuflex, Biobrane. Màng này dễ dàng dính chặt vào bề mặt vết thương để phát huy tác dụng tăng sinh mô liên kết, mạch máu nhưng đồng thời lại gây ra nguy cơ nhiễm trùng và kéo dài giai đoạn co hẹp khép kín miệng vết thương.[13] Băng thấm và bán thấm tổng hợp: gồm có băng hydrogel và băng hydrocolloid Băng hydrogel: là một mạng lưới 3 chiều làm từ polymer ưa nước (có thể chứa được tới 90 % - 95 % nước).[34] Chúng được làm từ các vật liệu như gelatin hoặc 7 polysaccharid liên kết với các polymer. Các polymer thường sử dụng nhất là polyethylene oxid, polyacrylamid và polyvinylpyrolidin. Màng hút nước và có khả năng làm mát, làm giảm đau nên thường được sử dụng sơ cứu khi bị bỏng nhiệt. Trên các vết thương khô, màng hydrogel có khả năng tạo môi trường ẩm ướt làm cho vết thương mau lành. Một số loại màng hydrogel có chứa các hoạt chất có tác động trên tiến trình lành vết thương như màng Carrasorb ® chứa acetylat mannan có tác dụng kích thích các yếu tố như IL – 1, TNF - ; màng Tegaderm TM có chứa acid hyaluronic và chondrotin sulfat liên kết với glucosaminoglycan. Những chất nền này có tác dụng kích thích sự tạo thành mô hạt và làm tăng sự biểu bì hóa.[41] Băng Hydrocolloid: là hỗn hợp các thành phần dính và đàn hồi. Trong đó carboxy methyl cellulose được dùng làm tác nhân hút dịch rỉ vết thương phổ biến nhất. Một số sản phẩm trên thị trường như: Duoactive ® (Convatec Co.), Absocure ® (Nitto Medical Corp.), Duoderm. Các loại băng này không dính chặt vào nền vết thương nên khi thay băng sẽ không làm tổn thương biểu bì. Ngoài ra sau khi thấm hút dịch từ vết thương loại băng tổng hợp này sẽ tạo ra môi trường ẩm có lợi cho vết thương.[29],[30],[31] Màng có cấu trúc hạt: một số loại màng còn có cấu trúc từ các hạt tự nhiên phối hợp với sợi polymer như calcium alginat, chitin, dextran polymer, vải từ than hoạt. Màng alginat: thành phần là alginat natri chiết xuất từ tảo nâu. Alginat natri tan trong nước, có thể chuyển thành muối calci không tan. Màng được dùng trị bỏng, viêm loét chân và vết thương nhiễm trùng do chấn thương. Một số sản phẩm màng alginat trên thị trường hiện nay như: KaltoStat ® (Convatec Co.), Sorbsan ® (Alcare Company). [28],[62],[70] Màng chitin: chitin là một hợp chất cao phân tử cấu tạo bởi N-acetyl D- Glucosamin là thành phần chính của lớp vỏ loài giáp xác. Chitin được làm thành nhiều dạng như dạng xốp, sợi như cotton, dạng lớp, dạng sợi đan lại. Nhược điểm là màng không thấm hút dịch và dính vào vết thương.[21],[53] Màng maltodextrin: maltodextrin có cấu trúc D- glucose polysaccharide. Tính ưa nước của dạng bột này làm cho chúng bị lôi cuốn vào sâu bên trong vết thương và hòa tan các dịch rỉ bám vào vết thương từ đó làm gia tăng khả năng thấm hút dịch.[78] 8 Các loại băng tổng hợp vô định hình Hydrogel vô định hình: thành phần giống băng hydrogel, ngoại trừ polymer không liên kết để tạo thành phiến, chứa một lượng nhỏ collagen, alginate và phức hợp carbohydrate. Chúng tạo độ ẩm cho vảy khô của vết thương và tạo điều kiện thuận lợi giúp vảy tự phân hủy. Do độ nhớt của hydrogel ưa nước nên khó giữ chúng trên vết thương. Tuy nhiên, chúng có tốc độ phủ đầy biểu mô và đóng kín vết thương có thể so sánh với băng hydrocolloid. Băng tổng hợp dạng hơi: tạo thành lớp màng mỏng có khả năng thấm khi xịt vào vết thương. Băng tổng hợp dạng bọt: tạo thành màng xốp khi sử dụng. Đặc tính chính của màng xốp là độ xốp, sự cách ly và tăng sự bám dính vết thương. Những polymer như polyurethane dùng để tạo bọt bền sau khi tiếp xúc với vết thương. Những vật liệu này lấp đầy những khoang trên vết thương. Chúng mềm, có bề mặt xốp, có khả năng thấm hút khi tiếp xúc với vết thương. Dịch rỉ và mảnh vụn tế bào được hấp thu và giữ lại trong màng xốp. Sự trao đổi hơi nước và khí được điều chỉnh bằng sự thay đổi thể tích từng phần của polymer và mật độ liên kết. Một bất lợi của dạng này là sức bền căng kém và thiếu cấu trúc toàn vẹn. Màng sinh học: màng sinh học có nguồn gốc từ mô tự nhiên, gồm nhiều dạng, có thể là sự kết hợp giữa collagen, elastin và lipid. Hiện nay, nhiều loại polymer sinh học như collagen, fibrin, fibronectin, acid hyaluronic đã được dùng làm màng che phủ vết thương trên da. [32] Không giống như polymer tổng hợp, polymer sinh học trơ với vết thương do đó chúng đóng vai trò quan trọng trong tiến trình làm lành vết thương trên da. Màng sinh học có các khả năng: (1) Giữ ẩm tốt; (2) Giảm sự mất protein và chất điện giải của dịch tiết vết thương; (3) Cản khuẩn; (4) Giảm đau; (5) Tái tạo mô, giảm thời gian làm lành vết thương, đặc biệt vết thương sâu và rộng; (6) Ức chế sự tạo thành nguyên bào sợi quá mức, giảm sự co rút vết thương. Một số loại màng sinh học điển hình như màng collagen, màng ối đông khô 9 Màng collagen được thiết kế dưới dạng gel (Collasate ® , …) dạng màng sợi hoặc không sợi, dạng hạt (Collamend TM Veterinary Products Laboratory, Phoenix, AZ…), cấu trúc lỗ xốp. Sử dụng màng collagen dạng sợi từ bò cho thấy bề mặt vết thương trở nên khô do bị mất nước vì vậy màng không còn tác động như một màng thấm hút. Với dạng cấu trúc lỗ xốp cho phép mô mới được tái tạo ngay trong vật liệu, theo thời gian các mô bị tổn thương và mô cấy tiếp xúc chặt chẽ với nhau và không thể tách rời. Cuối cùng mô cấy sẽ bị thoái hoá và dần dần được thay thế bằng mô sẹo bình thường. Để tạo collagen dạng xốp, người ta đông khô collagen type I được xử lý trước bằng cách khử nước, chiếu xạ hoặc bằng các chất hoá học như carbodiimid, glutaraldehyd, formaldehyd, hoặc diisocyanat. Tuy nhiên, sự có mặt của các tác nhân trên hoặc các chất giải phóng từ sự phân hủy có thể làm cản trở tiến trình lành vết thương. Màng collagen có thể được phối hợp với kháng sinh. [65] Màng ối đông khô: cho tác dụng tốt và đã được ứng dụng trên lâm sàng. Màng ối có một số tác dụng trong điều trị vết thương mất da:[7] - Có tác dụng kích thích mô hạt để chuẩn bị cho ghép da tự thân - Kích thích biểu bì hóa đối với vết thương nông. - Tăng sinh mạnh mẽ mao mạch mới cải thiện nền ghép để tiếp nhận tốt da ghép. - Giữ cho vết thương ẩm. - Hấp thu các dịch rỉ, giảm mất dịch, điện giải, protein, năng lượng do bốc hơi. - Có hiệu quả kháng khuẩn tương đương mảnh ghép da tự thân 1.3. Chọn lựa các loại băng thích hợp cho vết thương Không có một loại băng đơn giản nào có thể thích hợp cho tất cả các loại vết thương cũng như tất cả các giai đoạn trong tiến trình lành vết thương. Vì vậy có thể sử dụng một số loại băng khác nhau phối hợp để giúp cho quá trình lành vết thương ở những giai đoạn khác nhau trong tiến trình lành vết thương mất da. Việc lựa chọn các loại băng do các bác sĩ điều trị quyết định dựa vào tính chất của vết thương và tính chất của loại băng. Giá cả của các loại băng cũng có thể ảnh hưởng đến việc lựa chọn này. Bảng 1.2. cho một số ví dụ về việc lựa chọn băng trong điều trị vết thương mất da. [19],[73] 10 Bảng 1.2. Các loại băng thích hợp cho một số dạng vết thương Loại vết thương Loại băng Vết thương s ạch, tiết d ịch nhiều hoặc trung bình • Băng gạc paraffin • Băng dạng sợi tổng hợp Vết thương s ạch, khô, tiết dịch ít • Băng plastic dạng film có lỗ • Băng d ạng film có khả năng thấm hút và thông thoáng Vết thương s ạch, có tiết dịch và tạo mô hạt • Hydrocolloid • Băng dạng bọt xốp • Alginat Vết thương b ị che phủ bởi lớp nhày, có nhi ễm trùng • Hydrocolloid • Hydrogel • Băng tẩm chất kháng khuẩn Vết th ương khô và đóng vảy • Hydrocolloids • Hydrogels 1.4. Sử dụng cellulose vi khuẩn chế tạo màng trị tổn thương mất da Một số loài vi khuẩn thuộc các chi khác nhau có khả năng tổng hợp cellulose (gọi là bacterial cellulose) như Acetobacter, Achromobacter, Aerobacter, Rhizobium. Trong các loài trên, Acetobacter xylinum là vi khuẩn tạo cellulose hữu hiệu nhất. 1.4.1. Đặc tính của cellulose vi khuẩn 1.4.1.1. Cấu trúc [...]... ph m n i dung c n t - Qui trình lên men thu BC 2.4 Xây d ng qui trình tinh ch màng BC thơ a i tư ng nghiên c u: màng BC ư c t o thành sau q trình lên men A xylinum b Qui mơ: m i lơ 1500 màng Th i gian: t 5/2008 n 11/2008 a i m: phòng thí nghi m Vi sinh Cơng ngh , BM Vi sinh – Ký sinh Khoa Dư c, H Y Dư c TP.HCM c Xây d ng qui trình tinh ch màng BC thơ c1 Phương pháp tinh ch màng BC thơ S d ng dung d... khu n, protein c a vi khu n và dư lư ng pepton trong mơi trư ng ni c y e S n ph m n i dung c n t - Qui trình tinh ch màng n nh 2.5 Xây d ng qui trình t o màng thành ph m Acetul, qui trình óng gói màng và ti t trùng màng b ng tia gamma a i tư ng nghiên c u: màng thành ph m Acetul b B trí thí nghi m Qui mơ: 1500 màng Th i gian: t tháng 1/2008 n tháng 1/ 2009 a i m: BM Vi sinh – Ký sinh Khoa Dư c, H Y... pH 4 và pH 7 Tìm s hi n di n c a vi khu n trong màng BC Kh o sát màng BC dư i kính hi n vi quang h c và kính hi n vi i n t qt t bình m i 35 Quan sát và so sánh màng BC thơ chưa x lý và màng BC ã qua x lý xác nh s hiên di n c a vi khu n trong màng BC trư c khi tinh ch và sau khi tinh ch Chu n b m u: Chu n b m u quan sát dư i kính hi n vi quang h c: c t màng thơ và màng tinh ch thành nh ng lát m ng,... trúc và kích thư c c a cellulose vi khu n Các k thu t phân tích ph h ng ngo i và ph c ng hư ng t h t nhân giúp xác nh d ng k t tinh c a cellulose vi khu n [45] Cellulose vi khu n có c u trúc siêu m n, ư ng kính s i b ng 1/100 ư ng kính c a s i cellulose th c v t So sánh ư ng kính c a s i cellulose vi khu n v i ư ng kính c a các s i nhân t o cho th y kích thư c c a s i cellulose vi khu n còn nh hơn c... t K t qu th nghi m tính kháng khu n c a tinh d u tràm trà Úc trên các vi khu n th nghi m 2.2 Xây d ng qui trình nhân gi ng vi khu n 28 a i tư ng nghiên c u • Ch ng vi khu n t o cellulose Acetobacter xylinum do Vi n Sinh h c nhi t i TP H Chí Minh cung c p Ki m tra tinh khi t c a gi ng vi khu n A xylinum, sau ó ho t hóa gi ng lư ng vi khu n 108 CFU/ ml mơi trư ng ni c y và s d ng ngu n gi ng này t th... BC còn có kh năng làm cho các t bào da phát tri n V i nh ng ưu i m này, màng BC ư c s n xu t và bán ra th trư ng và ư c s d ng trong i u tr các ® lo i v t thương m t da (ch ph m BioFill , Gengiflex A B ® , Bioprocess ®) [55] C Hình 1.5 S d ng màng BC i u tr v t thương A) Màng BC trư c khi s d ng; B) S d ng màng BC trong tu n 1; C) Hình thành bi u bì hóa v t thương p màng BC Ngu n: Oscar M Alvarez, Mayank... nghi m c1 Xây d ng qui trình t o màng thành ph m Acetul Xác nh các tiêu chu n c a màng BC tinh ch s d ng ch t o màng tr b ng Màng BC tinh ch dùng sau: t o màng tr b ng Acetul ph i t ư c nh ng tính ch t 36 - C m quan: m m m i, d o dai, m ng, có kh năng áp sát vào da, có tính che ph t t, có kh năng c n khu n - m thích h p, có kh năng hút nư c và HCTSM t các tiêu chu n này c n kh o sát: - Màng BC thơ... màng BC thơ Lo i b mơi trư ng: tách l y màng BC, ép màng b ng máy ép lo i b mơi trư ng 34 - Phá v và lo i b vi khu n trong m ng lư i cellulose: ngâm màng trong NaOH 3 % nóng trong 3 gi sau ó ti p t c ngâm trong NaOH 3 % nhi t phòng màng tr ng Ti p t c x lý màng trong dung d ch HCl 1% trung hòa NaOH cho t i pH trung tính r i ép màng lo i b nư c Sau khi tinh ch , s y màng trong t s y các n khi có m c n... n vi i n t qt JOEL-JSM-550: màng BC thơ và màng BC tinh ch ư c ơng khơ sau ó ư c ph m t l p b ch kim m ng trong mơi trư ng chân khơng Quan sát: quan sát m u b ng kính hi n vi i n t qt JOEL-JSM-550 và kính hi n vi quang h c Th nghi m ư c ti n hành t i Phòng thí nghi m chun sâu, Trư ng ih cC n thơ và B mơn Vi sinh Khoa Dư c H Y Dư c TP HCM d Các ch tiêu theo dõi - pH c a màng, các t p ch t glucose, vi. .. gi ư c v t ra kh i nư c b ng k p, gi màng cho ch y xu ng n a, cân l i màng xác màng n khi nư c trên màng khơng còn nh lư ng nư c hút ư c sau nh ng kho ng th i gian th nghi m Ph i h p các ho t ch t v i màng BC tinh ch t o màng tr b ng Acetul Ch t o màng BC ph i h p v i ho t ch t tái sinh mơ và các tá dư c áp ng u c u th ch t m m, m n, tr ng, trong, bám dính vào da t t, khơng b khơ nhanh khi ngồi khơng . 1 PHẦN MỞ ĐẦU Tên đề tài: Xây dựng qui trình sản xuất và thử nghiệm lâm sàng màng sinh học từ cellulose vi khuẩn trị tổn thương mất da. Chủ nhiệm đề tài: GS.TS. Nguyễn Văn Thanh. Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở kiểm nghiệm màng - Thử nghiệm lâm sàng màng sinh học đến hết giai đoạn 2 để làm cơ sở cho vi c điều trị tổn thương mất da bằng màng sinh học. Nội dung 1. Xây dựng. - Xây dựng qui trình sản xuất màng sinh học từ cellulose vi khuẩn phối hợp với họat chất tái sinh mô của dầu mù u và tinh dầu tràm trà Úc trị tổn thương mất da với qui mô 1500 màng/ lô. - Xây