 HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN VÀ KHÁNG UNG THƯ VÚ MCF-7 CỦA MỘT SỐ CAO TRÍCH VÀ HỢP CHẤT CÔ LẬP ĐƯỢC TỪ CÁC CÂY THUỘC CHI HEDYOTIS PHẠM NGUYỄN KIM TUYẾN ( * ) NGUYỄN KIM PHI PHỤNG ( ** ) PHẠM ĐÌNH HÙNG ( *** )  Kết quả thử nghiệm tính kháng khuẩn cho thấy cao etanol của H. nigricans có hoạt tính trên ba chủng B. subtilis, E. coli và S. typhi. Kết quả thử nghiệm độc tính Brine Shrimp và khả năng gây độc tế bào trên dòng tế bào ung thư vú MCF-7 cho kết quả khá tương đồng, ngoại trừ arbutin (LC 50 =20  g/ml) và rutin (LC 50 =50  g/ml) có độc tính Brine Shrimp mạnh nhưng không độc đối với dòng tế bào ung thư vú MCF-7 (I%= 1,33 đối với arbutin và I%= 3,53 đối với rutin). Hai hợp chất 4'-butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon (I%= 92,60) và  -amyrin (I%= 98,23) cho hoạt tính mạnh nhất trên dòng tế bào ung thư vú MCF-7. Các nghiên cứu về hoạt tính của chi Hedyotis vẫn đang được tiếp tục. ABSTRACT The ethanol extract of H. nigricans exhibited strong antibaterial activity on Bacillus subtilis, Escherichia coli and Salmonela typhi. Arbutin and rutin exhibited strong Brine shrimp toxicity (LC 50 20  g/ml and 50  g/ml, respectively) but showed mild inhibition on breast cancer cell MCF-7 (1.33 and 3.53% inhibition, respectively). The remaining extracts and compounds showed the correlation on Brine Shrimp toxicity and cytotoxicity against breast cancer cell MCF- 7. Two compounds, 4'-butyloxy-5,7-dihydroxyflavanone and  -amyrin (92.60 and 98.23 % inhibition, respectively) showed the strongest cytotoxicity against breast cancer cell MCF-7. The further researche sare underinvestigated.   HedyotisH. corymbosa, H. diffusa v.v.   [4-   ( * ) TS, ( ** ) Th.S, T ( *** ) TS, Khoa Hóa, T -OV- -MEL- - -  Hedyotis                 Hedyotis  H. auricularia, H. biflora và H. nigricansloài Hedyotis      Hedyotis  0,14 -12].  - Hedyotis.   kháng kí Plasmodium falciparumEscherichia coli (Gram âm), Salmonela typhi (Gram âm), Staphylococus Bacillus subtilis (Gram -7.  Hedyotis cho H. auricularia và H. nigricans  Plasmodium falciparumH. biflora Hedyotis  COOH HO 3 9 12 13 18 19 20 23 24 25 29 30 26 COOH HO 3 9 12 13 18 19 20 23 24 25 29 30 26 HO 3 9 12 13 18 19 20 23 24 25 29 30 26 (13) (11) (12) O 3 18 20 21 19 22 24 28 29 26 27 25 23 5 6 11 15 Glc (15) OH O HO HO OH OH 1' 2' 3' 4' 5' 6' O H 1 2 3 4 5 6 (14) (21) S OH O 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 O O OH OH 1 2 3 4 10 11 12 9 13 14 5 6 7 8 (16) (20) OOH O 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 O OH HO O 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 O OH O 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 1 HO OMe (17) (19) (18) O OH OH HO O O HO HO H OH O H H OH O OH HO HO H 3 C O 1" 1"' OOH MeO O OMe 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 MeO OMe OOH HO O OH 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 (24) (22) SOH MeO O OMe 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 MeO OMe (23) OOH HO O OC 4 H 9 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 (25) S OH HO O OC 4 H 9 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 (26) Hình 1 Plasmodium falciparum Hedyotis. E. coli, S. typhi, S. aureus và B. subtilis  Hedyotis 1           H. auricularia        S. aureus và E. coli.  H. nigricans B. subtilis, E. coli và S. typhi. Bảng 1Hedyotis   1.  2. Staphylococus aureus 3. Bacillus subtilis 4. Escherichia coli 5. Salmonela typhi 6. H. auricularia 7. 3 8. 1 9. 2 10. - 11. H. biflora 12. - 13. - 14. 1 15. 1 16. H. nigricans 17. - 18. 3 19. 2 20. 3 Ghi chú: (-    nghi tính Brine shrimp c các cao trích và m  hp c trình bày trong ng 2.  q c tính n LC 50 (  g/ml) là n  (  g/ml) gây  50%   Artemia salina  nghim.   tính Brine shrimp thì         ao  cho  Brine shrimp m nh cao etanol và cao cloroform c loài H. auricularia; cao etanol, cao cloroform, cao etyl acetat và nh là cao metanol c loài H. nigricans.  p  cho  tính Brine shrimp m   arbutin, -amyrin, 1,4-dihydroxy-9,10-antraquinon, 5- hydroxyflavon, 5,7,4'-trihydroxyisoflavon, rutin, 5,7-dihydroxyflavon, 5-hydroxythioflavon, 5,7-dihydroxyflavon, 4'-butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon, 5,7,4'-trihydroxyflavanon, acid oleanolic v là acid ursolic.    nghim k ng gây   bào trên dòng  bào ung  vú MCF-7  các cao trích và m  hp  c trình bày trong  2.   c tính giá  I%,   k ng kháng phân bào c  th. Giá  càng ln,    tính càng m   cao  có ho tính   cao etanol thô ban r H. auricularia và  là cao metanol ca H. nigricans. Trong  các h  nghim, hai hp  4'-butyloxy- 5,7-dihydroxyflavanon (I%= 92,60) và  là -amyrin (I%= 98,23) cho  tính m  hai hp  5,7,4'-trihydroxyflavanon và 5,7,4'-trihydroxyisoflavon cho  tính khá trên dòng  ung  vú MCF-7. Th nghim  tính Brine shrimp và k ng gây   trên dòng    vú MCF-7 cho k  khá tng g, ng  hp  arbutin (LC 50 =20  g/ml) và rutin (LC 50 =50  g/ml)  tính Brine shrimp m nhng không   vi dòng  ung  vú MCF-7 (I%= 1,33  vi arbutin và I%= 3,53  vi rutin). So sánh  tính kháng ung  trên dòng  bào ung  vú MCF-7  m p  thioflavon và flavon tng n tron các hp   nghim, hai  h 5- hydroxythioflavon (I%= 21,83) và 5-hydroxyflavon (I%= 20,39); 3,7,2',4'- tetrametoxy-5- hydroxythioflavon (I%= 9,89) và 3,7,2',4'-tetrametoxy-5-hydroxyflavon (I%= 9,59) cho  tính g  tng  nhau, trong khi   4'-butyloxy-5,7- dihydroxythioflavon (I%= 28,04) cho  tính  hn  so vi 4'-butyloxy-5,7- dihydroxyflavanon (I%=92,60). Bảng 2:   t nghim  tính Brine shrimp và k ng gây   bào trên dòn ung  vú MCF-7  các cao trích và hp  tinh k 21. N 0 22.  23.  24.  25. Brine shrimp 26. LC 50 (g/ml) 27.   28.  vú 29. MCF-7 (I%) 30. 1 31.  32. 10 33. 97,10 34. 2 35. H. auricularia 36. 100 37. 40,86 38. 3 39. Cao cloroform H. auricularia 40. 100 41. 47,97 42. 4 43. H. biflora 44. 1000 45. - 4,78 46. 5 47. Cao metanol H. biflora 48. 500 49. 9,63 50. 6 51. H. nigricans 52. 100 53. 24,27 54. 7 55. Cao etH. nigricans 56. 500 57. 1,25 58. 8 59. Cao cloroform H. nigricans 60. 100 61. 31,07 62. 9 63. Cao etyl acetat H. nigricans 64. 100 65. 13,54 66. 10 67. Cao metanol H. nigricans 68. 10 69. 65,13 70. 11 71. Acid ursolic 72. 0,1 73. 64,59 74. 12 75. Acid oleanolic 76. 10 77. 19,16 78. 13 79. -Amyrin 80. 10 81. 98,23 82. 14 83. Arbutin 84. 20 85. 1,33 86. 15 87.  -Sitosterol 3-  -O-D-glucopyranosid 88. 500 89. - 3,34 90. 16 91. 1,4-Dihydroxy-9,10-antraquinon (Quinizanin) 92. 100 93. 23,63 94. 17 95. 5,7-Dihydroxyflavon (Chrysin) 96. 100 97. 19,69 98. 18 99. 3,5,7,3',4'-Pentametoxyflavon 3-rutinosid (Rutin) 100. 50 101. 3,53 102. 19 103. -Trihydroxyisoflavon (Biochanin A) 104. 20 105. 73,37 106. 20 107. 5-Hydroxyflavon (Primuletin) 108. 100 109. 20,39 110. 21 111. 5-Hydroxythioflavon 112. 100 113. 21,83 114. 22 115. 3,7,2',4'-Tetrametoxy-5-hydroxyflavon 116. 500 117. 9,59 118. 23 119. 3,7,2',4'-Tetrametoxy-5-hydroxythioflavon 120. 500 121. 9,89 122. 24 123. 5,7,4'-Trihydroxyflavanon (Naringenin) 124. 50 125. 71,92 126. 25 127. 4'-Butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon 128. 50 129. 92,60 130. 26 131. 4'-Butyloxy-5,7-dihydroxythioflavon 132. 100 133. 28,04 Riêng hp ct 5,7,4'-trihydroxyflavanon (I%=71,92) sau khi c     alkyl hóa thành -butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon (I%= 92,60) cho ho tính mh hn  rõ. Da trên k  nghiên cu   Thành  các thioflavon có  tính kháng k m hn và có k ng c    ra NO trên  bào vi  kinh m BV-2 ng so vi các flavon tng ng. Tuy nhiên, vi  tính kháng dòng  bào un vú MCF-7, các hp  thioflavon  nghim cho h tính ng   hn so vi hp  flavon tng ng.      3.  1.1. Các cao trích và các hp ch tinh khit  nghim h tính sinh  thu c v kho sát thành  hóa   ba loài cây  chi Hedyotis là H. auricularia (L.) Lam., H. biflora (L.) Lam. và H. nigricans (L.) Lam ) [9-12]. Các hp  thioflavon     ng gia các flavon tng ng và tác  Lawesson trong  k vi sóng không dung môi [13] . 1.2.  tính kháng kí sinh trùng  rét Plasmodium falciparum: gi m th  Phòng thí nghim Sinh  kí sinh trùng và Sinh hóa     tàng thc v  g hòa Pháp, do  s  Quang thc  1.3.  tính kháng khu gi m   Phòng thí nghim Công ng sinh  phân t, Khoa Sinh, Trng   Khoa   nhiên, TP. HCM. 1.4.   tính Brine shrimp: m  c thc   phòng thí nghim Hóa Hu c, Khoa Hóa, trng   Khoa  T nhiên, TP. HCM. M  c xem là không    LC 50 > 1000  g/ml.   c xem là có  ha  có    LC 50 < 200  g/ml. 1.5.  k ng gây   bào trên dòng t bào ung  vú MCF-7: gi m   thí nghim Công n sinh  phân t, Khoa Sinh, trng  KHTN. ghim c  hành  phng pháp MTT trên  ung  vú MCF-7. Phương pháp MTT: là phng pháp so màu  có tính  lng, dùng   s ng, ng sinh và  ng  t bào. Phng pháp  da trên  n nhng enzym dehydrogenase trong các t     hp  màu vàng,  c trong nc là bromur 3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium thành s formazan màu xanh  không tan trong nc. S lng formazan  thành  ánh trc  ng  không phân chia nhng v ng OD  các gng th nghm sau 72 gi. Các giá  thu c c     thí nghim là giá  I%,    ng kháng phân bào c hp  n v là %.   I% c tính theo công thc sau : I% = CT C     x 100 % I%: k ng kháng phân bào c hp  (%) C : giá    chng T : giá   TÀI  THAM  1. Tran Thanh Dao (2005), T. N. Tuyen, H. Park, Synthesis and iNOS inhibitory activities of thioflavones, Arch. Pharm. Res., 28, 652-656. 2. Phan c Bình (2000), Tạp chí Thuốc và Sức khỏe, 125, tr. 31. 3. Ho T-I., Chen G-P., Lin Y-C., Lin Y-M., Chen F-C. (1986), An anthraquinone from Hedyotis diffusa, Phytochemistry, 25, pp. 1988-1989. 4. Hong X.X., Min W., Boon N.L. (1996), Screening of traditional medicines for their inhibitory activity against HIV-1 protease, Phytother. Res, 10, pp. 207 - 210. 5. Kim Sung Hoon, Ahn Byung-Zun, Ryu Shiyong (1998), Antitumour effects of ursolic acid isolated from Oldenlandia diffusa, Phytother. Res, 12, pp. 553-556. 6.  Hoàng H Cây có vị thuốc ở Việt Nam, NXB  tr. 512-515. 7. Montagnac A., Provost J. T., Litaudon M., Pais M. (1997), Antimitotic and cytotoxic constituents, Myodocarpus gracilis, Planta. Med., 63, pp. 365-366. 8.   Li (1986), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Khoa    Hà  264 -268. 9.  Ng Kim  Ng Kim Phi g, Phm  Hùng (2005), Khảo sát thành phần hóa học của cây Hoa Kim Cương Hedyotis nigricans, họ Cà Phê (Rubiaceae),  Hóa   Nam, 43(6), 778-782. 10.  Ng Kim  Ng Kim Phi g, Phm  Hùng (2007), Khảo sát thành phần hóa học của cây An Điền Tai Hedyotis auricularia, họ Cà Phê (Rubiaceae),  chí Hóa   Nam, 45(2), 233-236,. 11. Phm Ng Kim Tuyn, Ng Kim Phi ng, Phm  Hùng, Poul Erik Hansen (2007), Khảo sát thành phần hóa học của cây An Điền hai hoa Hedyotis biflora, họ Cà phê (Rubiaceae), Tuy Các Công Trình  ng Khoa  và Công ng Hóa u  toàn    4, 252-255. 12. Phm Ng Kim  Ngu Kim Phi ng, Phm ình Hùng (2008), Cô lập một vài flavon và antraquinon từ cây Hedyotis auricularia, họ Cà phê (Rubiaceae),  chí Khoa  và Công ng 46, 237-243. 13. Pham Nguyen Kim Tuyen, Nguyen Kim Phi Phung, Fadhil S. Kamounah, Wei Zhang and Poul Erik Hansen, NMR of a series of novel hydroxyflavothiones, Magn. Reson Chem, Published online in Wiley Interscience, July 2009. . 25 127. 4'-Butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon 128. 50 129. 92,60 130. 26 131. 4'-Butyloxy-5,7-dihydroxythioflavon 132. 100 133. 28, 04 Riêng hp ct 5,7,4'-trihydroxyflavanon. tính g  tng  nhau, trong khi   4'-butyloxy-5,7- dihydroxythioflavon (I%= 28, 04) cho  tính  hn  so vi 4'-butyloxy-5,7- dihydroxyflavanon (I%=92,60). Bảng.  24.  25. Brine shrimp 26. LC 50 (g/ml) 27.   28.  vú 29. MCF-7 (I%) 30. 1 31.  32. 10 33. 97,10 34.