MỤC LỤC PHẦN 1: Công nghệ nuôi trồng nấm SHIITAKE I. Chu trình sống của nấm hương 4 II. Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng của sợi nấm và hình thành quả thể III. Kỹ thuật nuôi trồng nấm hương 7 IV. Tình hình sản xuất và tiêu thụ nấm hương 23 V. Phương pháp lai tao giống nấm hương 24 VI. Nghiên cứu khảo sát tốc độ phát Triển hệ sợi của các loài nấm hương. 28 VII. Thử nghiệm nuôi trồng 38 VIII. Công nghệ tích tụ Selenium vào nấm SHIITAKE 50 Phần II – Nuôi trồng Nấm ánh trăng Lampteromyces sp. & Ompahlotus sp. I. Phân lập và khảo sát tốc độ sinh trưởng của hệ sợi nấm trên môi trường PGA cải tiến 57 II. Nhân giống trên môi trường hạt lúa 58 III. Nghiên cứu nuôi trồng ra thể quả 60 Phần III – Nuôi trồng Nấm Macrocybe I. NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG NẤM MACROCYBE CRASSA 74 II. NGHIÊN CỨU NẤM LYOPHYLLUM 96 Phần IV – Nuôi trồng Nấm Mộc nhĩ I. Môi trường nuôi cấy 119 II. Phương pháp nghiên cứu 120 III.Kết quả nuôi trồng mộc nhĩ lưới 121 Phần V- Nuôi trồng Nấm Chân chim I. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU IV. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 140 V. KẾT QUẢ PHÂN LẬP TRÊN ỐNG NGHIỆM THẠCH NGHIÊNG PGA 145 VI. Khảo sát tốc độ lan tơ của(S. COMMUNE) 1 Trên môi trường PGA 145 VII. Khảo sát tốc độ ăn sâu của tơ nấm (S. COMMUNE) Trên môi trường hạt. 146 VIII. Khảo sát lên men dịch thể(S. COMMUNE) 148 IX. Nuôi trồng thử nghiệm (S. COMMUNE) 150 Phần VI . Nghiên cứu nuôi trồng nấm Lentinus gigantean và so sánh với Pleurotus I. Đối tượng nghiên cứu 157 II. Phương pháp nghiên cứu 158 III. Kết quả và thảo luận 162 PHẦN VII: PHÁT HIỆN VÀ NUÔI TRỒNG NẤM LÁ SEN KHỔNG LỒ Ở NAM VIỆT NAM: LENTINUS GIGANTEUS 164 PHẦN VIII: NUÔI TRỒNG NẤM CHÂN CHIM TRAMETES VERSICOLOR 173 Phần IX . Nghiên cứu nuôi trồng Nấm Bào ngư Pleurotus spp I. Công nghệ trồng nấm bào ngư 193 II. Nghiên cứu nấm bào ngư đen Coremio pleurotus 201 III. Một loài nấm bào ngư vua quý hiếm: PLEUROTUS ERYNGI được nuôi trồng ở Việt Nam IV. Nghiên cứu nấm phượng hoàng 239 PHẦN X: NUÔI TRỒNG NẤM LINH CHI GANODERMATACEAE I. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 245 II. Phân lập giống và nuôi trồng thử nghiêm 246 1. Tốc độ phát triển của hệ sợi trên môi trường PGA cải tiến 2. Tốc độ phát triển của hệ sợi trên môi trường hạt 251 3. Nghiên cứu thử nghiệm nuôi trồng nấm Linh chi. 4. KẾT QUẢ NUÔI TRỒNG 154 4.1. Kết quả nuôi trồng các chủng giống thuộc loài Ganoderma lucidum 157 4.2. Kết quả nuôi trồng nấm linh chi hoàng thành Ganoderma thanglongnensis 260 4.3. Kết quả nuôi trồng nấm hoàng chi 2 Tomophagus colossus và Tomophagus cattienensis. 262 4.4. Kết quả nuôi trồng nấm Hadowia longipes 265 4.5. Kết quả nuôi trồng nấm Ganoderma microsum 266 III. Thăm dò tác động của nước nặng D 2 O Lên nấm linh chi GANODERMA LUCIDUM 267 IV. Nghiên cứu ảnh hưởng của VANADIUM Trên nấm Linh chi Ganoderma lucidum (W. Curt. : Fr.) Karst 270 V. Khả năng sinh trưởng đặc biệt của loài nấm linh chi mới Humphreya sp. nov. 274 VI. Nghiên cứu khả năng sinh trưởng Và khả năng hấp thụ selenium Bằng kỹ thuật đánh dấu Se-75 275 VII. Nghiên cứu nuôi trồng nấm linh chi sò – GANODERMA CAPENSE (LLOYD) TENG Ở VIỆT NAM. 276 VIII. Nấm Kim GANODERMA AMBOINENSE (Lam.: Fr.) Pat. Được nuôi trồng ở Đà Lạt. 278 IX. Nghiên cứu nuôi trồng nấm tử chi Ganoderma japonicum (Fr.) Lloyd mới phát hiện ở Đà Lạt. 279 X. Góp phần khảo cứu nhóm nấm Cương chi - loài GANODERMA TORNATUM (Pers.) Bres. 280 XIII. Nghiên cứu nuôi trồng nấm Hoàng chi Ganoderma sp. Phát hiện ở Đà Lạt. 281 XII. Nghiên cứu thử nghiệm nuôi trồng, so sánh Nấm hồng chi và Hoàn chi 283 XIII. GANODERMA TERENGGANUENSE CORNER Một loại linh chi mới phát hiện ở Việt Nam 292 XIV. Nuôi trồng nấm linh chi đen AMAURODERMA SUBRESINOSUM 193 3 4.1: CÔNG NGHỆ NẤM SHIITAKE 4.1.1. Chu trình sống của nấm hương Nấm hương là một nấm đảm Basidiomycetes, chu kỳ sống của nấm hương (hình 1.1) bắt đầu khi quả thể trưởng thành phóng thích bào tử đảm (basidiospores) vào không khí và được phát tán nhờ gió. Gặp điều kiện thuận lợi như ẩm độ, nhiệt độ, ánh sáng, bào tử đảm sẽ nảy mầm và hình thành sợi nấm sơ cấp (primary mycelium), đơn nhân (monokaryons). Sợi nấm sơ cấp không có khả năng hình thành quả thể. Khi hai sợi nấm sơ cấp tương hợp (compatible) bắt cặp với nhau tạo nên hệ sợi song nhân (dikaryons), gọi là hệ sợi thứ cấp (secondary mycelium). Một tính chất đặc biệt để phân biệt hệ sợi thứ cấp với hệ sợi sơ cấp ở nấm hương cũng như nấm đảm Basidiomycetes là sợi nấm thứ cấp có hình thành các mấu liên kết (clamp connection). Hệ sợi thứ cấp có khả năng hình thành quả thể. Tính chất dị tản (heterothallism) khi vắt cặp của hệ sợi sơ cấp nấm đảm lần đầu tiên được nghiên cứu bởi Kniep (1920) ở nấm Schizophyllum commune và Bensaude (1918) ở nấm Coprinus fimetarius [99]. Năm 1961, Takemaru công bố hệ thống bắt cặp của nấm hương. Nấm hương là nấm dị tản hai yếu tố không liên kết với nhau đó là yếu tố A và yếu tố B [26], [129]. - Yếu tố A kiểm soát sự bắt cặp của nhân, hình thành mấu liên kết (clamp connection) và tạo vách ngăn giữa hai tế bào. - Yếu tố B làm tan vách ngăn, kiểm soát sự di chuyển nhân và tham gia tạo mấu liên kết. Khi dị alen ở cả hai locus thì hai sợi nấm sơ cấp, đơn nhân sẽ tương hợp và bắt cặp với nhau tạo thành sợi thứ cấp song nhân. Ví dụ: Một chủng có kiểu gen tương hợp là A x A y B x B y khi giảm nhiễm sẽ tạo ra 4 bào tử có kiểu gen là A x B x , A x B y , A y B x , A y B y Bảng 1.1: Sự tương hợp giữa các dòng đơn nhân trong cùng một chủng nấm A x B x A x B y A y B x A y B y A x B x - - - + A x B y - - + - A y B x - + - - A y B y + - - - Dấu + là tương hợp tạo thành sợi thứ cấp, song nhân. Dấu – là không tương hợp. Hệ sợi thứ cấp chiếm hầu hết chu kỳ sống của nấm hương. Ở giai đoạn sinh dưỡng này hệ sợi nấm sẽ hấp thu và tích lũy dinh dưỡng để chuẩn bị hình thành quả thể . Hệ sợi thứ cấp sẽ kết lại tạo thành những mấu nhỏ gọi là mầm quả thể (primordia). Khi môi trường thuận lợi, đủ ẩm và dinh dưỡng dồi dào, mầm quả thể sẽ tăng kích thước rất nhanh để tạo quả thể trưởng thành. Khi quả thể trưởng thành thì sự dung hợp của hai nhân xảy ra tạo nên tế bào sinh bào tử. Sau đó tế bào này phân chia hai lần trong đó có một lần phân bào giảm nhiễm. Kết quả tạo thành 4 4 nhân con di chuyển về 4 mấu lồi mọc ở đỉnh sợi nấm để hình thành 4 bào tử đơn nhân (n). Sau khi thành thục, bào tử được phóng thích ra môi trường, gặp điều kiện thuận lợi sẽ bắt đầu một chu trình sống mới. Hình 1. Chu trình sống của nấm hương 4.1.2. Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng của sợi nấm và hình thành quả thể 4.1.2. 1. Dinh dưỡng Nguồn dinh dưỡng carbon Nguồn carbon thích hợp cho sợi nấm hương phát triển bao gồm các monosaccharide, oligosaccharide và polysaccharide, như đường glucose, saccharose, galactose, tinh bột,cellulose. Nồng độ đường thích hợp cho sợi nấm sinh trưởng trong môi trường lỏng từ 3 – 5 % [150], [65]. Theo Khan (1991) trong nuôi trồng nấm, tinh bột là nguồn carbon thích hợp hơn hẳn so với glucose, saccharose và galactose [73]. Theo Sugimori (1971) nấm cũng có thể sử dụng một số nguồn carbon không phải là carbohydrate nhe ethanol, glycerin [125]. Ở giai đoạn mầm quả thể, sự tăng trưởng phụ thuộc rất nhiều vào nguồn dinh dưỡng carbon và nồng độ đường cao. Tokimoto và Kawai thấy rằng ở giai đoạn này nếu bổ sung dung dịch saccharose 8% làm tăng năng suất quả thể [135]. Nguồn dinh dưỡng nitơ Pepton, amino acid, urea, các muối amon là nguồn dinh dưỡng nitơ thích hợp cho sợi nấm phát triển. Theo Ishikawa (1967) nồng độ đạm thích hợp cho nấm hương ở dạng đạm amonium sulfate là 0,03 % và ở dạng amonium tactrate là 0,06 % [65]. Nghiên cứu của Khan (1991) thấy rằng urea là nguồn nitơ thích hợp nhất với nấm hương sau đó đến amino acid và cuối cùng là đạm nitrate [73]. 5 Lượng N tổng số trong gỗ và mùn cưa thấp, từ 0,03 – 0,30 % là một trong những yếu tố giới hạn sinh trưởng của sợi nấm. Một trong những nhu cầu cần đạm của nấm là tổng hợp enzyme cellulase để phân giải cellulose của gỗ [78]. Vì vậy để nuôi trồng nấm có năng suất cao cần bổ sung đạm. Tỷ lệ C/N cũng rất quan trọng đối với sinh trưởng của sợi nấm. Theo Chang (1993), tỷ lệ C/N thích hợp với nấm hương là 20 – 25/1, trong khi đó ở nấm rơm (V. volvacea) là 40 -60/1, ở nấm mỡ (A.bisporus) là 18/1 [31]. Khoáng chất và vitamin Trong môi trường nuôi nấm nhất thiết phải có các nguyên tố khoáng. Phospho cần thiết để tổng hợp ATP, nucleic acid, phospholipid. Theo Miles (1993) nồng độ phospho thích hợp là 0,004 M. Kali là nguyên tố khoáng đóng vai trò cofactor trong nhiều enzyme, nồng độ thích hợp từ 0,001 – 0,004 M [88]. Lưu huỳnh cũng rất cần thiết cho nấm hương. Nguồn cung cấp lưu huỳnh thường là MgSO 4 . Lưu huỳnh tham gia trong cấu tạo các amino acid chứa lưu huỳnh như cystein, methyonin và tham gia cấu tạo nên vòng chứa 5 nguyên tố lưu huỳnh của lenthionin, hợp chất tạo mùi thơm của nấm hương [91]. Magne tham gia hoạt hóa nhiều enzyme nên cần thiết cho quá trình trao đổi chất của nấm hương. Nồng độ magne thích hợp là 0,001 M [88]. Ngoài ra, các nguyên tố khoáng khác như mangan, đồng, kẽm, molypden cũng không thể thiếu đối với sinh trưởng của nấm hương. Theo Ishikawa (1967) nồng độ mangan, kẽm, sắt khoảng 2 mg/lit sẽ kích thích sợi nấm sinh trưởng [65]. Hầu hết nấm có khả năng tự tổng hợp các vitamine cần thiết. Hiroe và Ikuda (1960) khẳng định vitamin B 1 (thiamin) kích thích sợi nấm sinh trưởng, kích thích hình thành mầm quả thể. Nồng độ thiamin thích hợp cho nấm hương là 100 – 200 µg/lit [60]. Theo Ishikawa (1967), Tan và Chang (1989) một số chất kích thích sinh trưởng như gibberelin, IAA không có hiệu ứng kích thích sinh trưởng ở sợi nấm hương [65], [131]. 1.3.2. pH pH môi trường có ảnh hưởng rất lớn đến sinh trưởng của nấm hương do pH ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme, đến khả năng hòa tan của các hợp chất. pH thích hợp cho các loại nấm phá gỗ là 4,5 – 5,5 [110]. Tokimôt (1978) cho rằng pH thích hợp cho sự sinh trưởng của sợi nấm hương là 4,3 [137]. pH thích hợp cho sự hình thành quả thể trong nuôi cấy nấm hương trên môi trường nhân tạo ở phòng thí nghiệm là 3,5 – 4,5 [135]. Theo Han và Yeng (1981) trên môi trường mùn cưa pH tối thích là 5,0. 4.1.2. 2. Nhiệt độ Nhiệt độ ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme do đó ảnh hưởng đến trao đổi chất và sinh trưởng của nấm. Nấm hương có khả năng sống trong gỗ ở khoảng nhiệt độ từ - 30 0 C đến 45 0 C [79]. Tuy nhiên nếu ở nhiệt độ 35 0 C trong một khoảng thời gian dài thì sợi nấm bị chết. Nhiệt độ để nấm có thể sinh trưởng được là từ 4 – 35 0 C, nhiệt độ tối thích là 25 0 C [138], [148]. Nhiệt độ đóng vai trò rất quan trọng trong việc hình thành và phát triển quả thể. Nấm hương sẽ bị kích thích hình thành mầm quả thể nếu có sự giảm đột ngột của nhiệt độ, hoặc bởi một chu kỳ dao động nhiệt [76]. Theo Ohira (1982, 1984) nhiệt độ trong quá trình hình thành nụ nấm có tính quyết định đến năng suất, nhiệt độ thích hợp là 10 – 250C [103], [104]. 6 Nhiệt độ không chỉ ảnh hưởng đến năng suất mà cả hình thái quả thể. Nhiệt độ cao chân nấm dài, mũ nấm mỏng, ngược lại nhiệt độ thấp thì chân nấm ngắn và mũ nấm dày hơn [137]. 4.1.2. 3. Ẩm độ Ẩm độ có vai trò hết sức quan trọng trong quá trình nuôi trồng nấm hương. Nấm hương chiếm 85 – 95 % là nước, do đó dễ bị mất nước; cơ chất nuôi nấm cũng như vậy. Do đó nếu bị mất nước quá nhiều sẽ ảnh hưởng đến năng suất và cả chất lượng của nấm. Khi nuôi trồng trên gỗ khúc, ẩm độ thích hợp của gỗ là 35 – 55%. Ẩm độ quá cao, trên 75% sẽ cản trở quá trình khuếch tán của oxy vào cấu trúc gỗ và tăng mức độ nhiễm của trichoderma. Tuy nhiên, Akiyâm (1976) cho rằng ẩm độ gỗ 70% thích hợp nhất cho sợi nấm sinh trưởng [16]. Harris (1986) công bố ẩm độ thích hợp của gỗ là nhỏ hơn 50% [54]. Khi nuôi trồng trên môi trường nhân tạo, ẩm độ thích hợp của cơ chất là 70%. Nhìn chung, theo các tác giả thì ẩm độ thích hợp của cơ chất nhân tạo là 60 – 70% [73], [77], [108], [131]. Trong giai đoạn hình thành quả thể, nếu nuôi trồng trên bịch cơ chất nhân tạo, ẩm độ không khí thích hợp để ra quả thể là 85 – 90 %. Còn nuôi trồng trên gỗ thì ẩm độ nên thấp hơn, khoảng từ 60 – 85% để hạn chế sự lan nhiễm của Trichoderma [108]. 4.1.2. 4. Ánh sáng Nấm hương đòi hỏi ánh sảng cả trong giai đoạn lan tơ và giai đoạn ra quả thể. Theo Ishikawa (1967), Sheffer (1973) ánh sáng làm tăng quá trình phân huỷ gỗ và trong giai đoạn lan tơ ánh sáng là một yếu tố cần thiết chuẩn bị cho quá trình hình thành quả thể [65], [119]. Tuy nhiên Leatham và Stahmann (1987) cho rằng ánh sáng cường độ cao sẽ ức chế sợi nấm sinh trưởng và thời gian chiếu sáng trong giai đoạn này chỉ cần 20 phút / ngày [81]. Độ dài bước sóng cũng như cường độ của ánh sáng ảnh hưởng đến sinh trưởng của nấm hương. Nấm hương thích ứng với bước sóng ánh sáng từ 370 – 420nm [18], [65]. Theo Leatham và Stahmann (1987), ánh sáng đỏ (600 – 680nm) kích thích hình thành quả thể, ngược lại ánh sáng lục (400 -500 nm) ức chế hình thành quả thể trong môi trường thiếu canxi [81]. Cường độ ánh áng thích hợp trong giai đoạn lan tơ là 180 – 940 lux, tối thích là 550 lux [84]. Theo Chalmers (1989), ở giai đoạn hình thảnh quả thể cường độ ánh sáng thích hợp là 500 – 1000 lux [28]. Trong giai đoạn này, ánh sáng ảnh hưởng đến màu sắc và hình dạng của quả thể. 4.1.2.5. Không khí Nấm là sinh vật hiếu khí, sử dụng oxy và nhả khí carbonic. Thành phần của không khí, đặc biệt là nồng độ khí carbonic có ảnh hưởng rất lớn đến sinh trưởng của nấm. Các nghiên cứu cho thấy khi tăng nồng độ khí carbonic đến 0,6 % sẽ làm tăng sinh trưởng của sợi nấm. Ngược lại, nồng độ khí carbonic từ 0,4 – 0,6 % sẽ ức chế hoàn toàn sự hình thành mầm quả thể. Khi nồng độ carbonic từ 0,2 – 0,4 % quả thể nấm có chân dài, mũ mỏng. Theo Vedder (1978) và Roys (1985), nồng độ khí carbonic thích hợp nhất cho giai đoạn ra quả thể là dưới 0,2% [145], [112]. Vì vậy, nhà nuôi trồng nấm hương phải thoáng khí. 4.1.3. KỸ THUẬT NUÔI TRỒNG NẤM HƯƠNG 4.1.3.1. Nuôi trồng nấm hương trên gỗ khúc 7 Nuôi trồng nấm hương trên gỗ khúc là một phương pháp truyền thống, có bề dày lịch sử 1000 năm. Năm 1313, Wang Cheng (Trung Quốc) lần đầu tiên ghi chép kỹ thuật nuôi trồng nấm hương trong cuốn “Book of Agriculture” [30]. Kỹ thuật nuôi trồng thời kỳ này còn rất sơ khai, các loại cây lá rộng đươc hạ xuống, cắt khúc, phủ lên một lớp đất. Sau một năm, phủ lên các khúc gỗ này cành, lá cây và tưới nước thường xuyên. Vào khoảng năm 1500 – 1600 người Trung Quốc truyền bá kỹ thuật nuôi trồng nấm hương cho người Nhật. Từ kỹ thuật để nấm xâm nhiễm tự nhiên, người nông dân đã biết xếp chung những khúc gỗ mới này [108]. Vào những năm 1920, Kitayama bắt đầu phát triển kỹ thuật nuôi cấy giống thuần khiết, trong đó sợi nấm thuần được nuôi trồng trên những cơ chất thích hợp. Kỹ thuật nhân giống này đã cho phép nhân giống nhanh, chọn lọc được giống và năng suất nấm tăng lên. Vào năm 1943, Mori giới thiệu kỹ thuật nhân giống trên những nêm gỗ, sau đó cấy vào khúc gỗ. Kỹ thuật này giúp rút ngắn thời gian ủ, làm tăng năng suất đáng kể, sau đó giúp cho việc mở rộng nuôi trồng nấm hương với quy mô công nghiệp [108]. Ngày nay, nuôi trồng nấm hương trên gỗ khúc vẫn chiếm tỷ trọng chủ yếu trong sản lượng nấm hương thu hoạch hàng năm trên toàn thế giới. Ưu điểm của phương pháp này là khá đơn giản, có truyền thống nuôi trồng lâu đời, do đó người nuôi trồng có nhiều kinh nghiệm. Tuy nhiên phương pháp có nhược điểm là thởi gian ủ kéo dài (12 tháng), thời gian thu hoạch kéo dài (từ 5 – 6 năm), hiệu suất sinh học thấp (BE từ 15 – 33%) [108]. Điều quan trọng là trong xu thế bảo vệ rừng, bảo vệ môi trường sinh thái hiện nay việc chặt hạ cây rừng để trồng nấm ngày càng bị hạn chế. Kỹ thuật nuôi trồng nâm hương trên gỗ khúc gồm những giai đoạn sau: Chọn và chuẩn bị gỗ Nấm hương mọc tốt trên các loại cây lá rộng, gỗ cứng (hardwoods), thích hợp nhất là các loại cây thuộc họ sồi (Fagaceae) như cây sồi (Querus spp.), cây dẻ (Castanea spp.), cây trăn (Carpinus spp.), cây dẻ gai (Castanopsis spp.). Ngoài ra còn một số loài cây khác cũng có thể trồng được nấm hương như cây tổng quán sủi (Alnus spp.), cây thích (Acer spp.), cây bulo (Betula spp.), cây dương lá rung (Populus spp.), …[40], [66], [101], [118], [139]. Gỗ thích hợp cho nuôi trồng nấm hương có tỷ trọng riêng (specific gravity) từ 0,40 – 0,60, lượng nước từ 35 – 65%, không có hoặc có ít lõi gỗ [108]. Thời điểm hạ cây vào lúc cây trong giai đoạn ngủ, thông thường là vào cuối thu sang đông. Lúc này cây rụng lá, gỗ tích lũy nhiều dinh dưỡng và vỏ cây chắc chắn hơn để ngăn cản nhiễm tạp. Nên chọn những cây thẳng, ít cành rồi cắt khúc. Đường kính khúc gỗ thích hợp từ 8 – 15 cm, chiều dài gỗ khúc từ 1,2 – 1,5 m. Nếu lượng nước trong gỗ cao, cần làm giảm lượng nước trước khi cấy giống. Trong giai đoạn này cần bảo vệ gỗ tránh ánh sáng mặt trời trực tiếp [108]. Chuẩn bị giống Từ giống gốc trong ống nghiệm cấy sang môi trường ngũ cốc đã nấu chín, tiếp tục cấy sang môi trường mùn cưa hoặc nút gỗ đã khử trùng. Môi trường mùn cưa, hoặc nút gỗ nghèo dinh dưỡng sẽ hạn chế nhiễm trong quá trình cấy và ủ tơ. Có hai dạng giống thường sử dụng trong nuôi trồng trên gỗ khúc là giống nút gỗ (plug spawn) và giống mùn cưa (sawdust spawn) [66], [108]. 8 Giống nút gỗ: Ưu điểm của dạng giống này là đơn giản, dễ sử dụng, khi cấy không cần những dụng cụ chuyên dùng, giảm công lao động khi cấy giống vào gỗ. Dạng giống này chống mất nước tốt hơn giống mùn cưa. Giống mùn cưa: Sợi nấm được nuôi trên môi trường hỗn hợp gồm mùn cưa và cám theo tỷ lệ 4 : 1. Dạng giống này có dinh dưỡng, ẩm độ cao hơn gióng nút gỗ nên sợi nấm mọc nhanh hơn. Tuy nhiên để tránh nhiễm và mất nước cần phải hàn phủ miệng lỗ. Cấy giống vào gỗ Thời điểm cấy giống vào gỗ có nhiều quan điểm khác nhau. Một số tác giả cho rằng sợi nấm chỉ lan nhanh sau khi mô gỗ đã chết, vì vậy thời điểm cấy giống vào gỗ thích hợp là từ 4 – 8 tuần sau khi hạ cây. Một số tác giả khác lại cho rằng nấm hương có thể mọc tốt ngay sau khi cây hạ. Thời điểm cấy giống còn phụ thuộc vào lượng nước trong gỗ, thích hợp là từ 35 – 55% [66], [108]. Trước khi cấy giống, vỏ cây phải khô ráo, sạch sẽ. Rêu, địa y trên vỏ cây cần phải được chà sạch. Tất cả những biện pháp này nhằm làm giảm nguy cơ nhiễm khi cấy và ủ gỗ. Sau khi chuẩn bị gỗ xong tiến hành khoan lỗ bằng máy. Khoảng cách giữa các lỗ là từ 15 – 25 cm, giữa các hàng là từ 5 – 8 cm. Kích thước lỗ khoan là 8,5 mm đối với giống nút gỗ và 12 mm đối với giống mùn cưa, chiều sâu của lỗ gấp 1,5 – 2 lần so với nút gỗ giống. Sau khi khoan lỗ xong cần cấy giống ngay để hạn chế nhiễm và lỗ khoan mất nước. Giống cấy vào phải nằm dưới bề mặt vỏ cây. Đối với giống mùn cưa sau khi cấy phải hàn miệng lỗ. Ủ gỗ Là giai đoạn cho sợi nấm ăn lan vào gỗ. Đây là giai đoạn quan trọng, nếu điều kiện ủ gỗ tốt thì sợi nấm mọc nhanh, ít nhiễm và hứa hẹn cho năng suất cao. Nơi ủ gỗ thích hợp phụ thuộc vào khí hậu, số lượng gỗ ủ. Địa điểm ủ gỗ phải cao ráo, thoát nước, thoáng mát, dưới tán cây và không được gần nhà trồng nấm. Gỗ có thể được ủ dưới tán rừng (phương pháp này giảm được chi phí) hoặc trong nhà che, nhà kính có mức độ che bóng từ 65 – 80 %. Khi ủ, gỗ được xếp chồng thành đống, hoặc chụm đầu vào nhau sao cho thoáng, mát. Trong quá trình ủ phải theo dõi thường xuyên để điều chỉnh các điều kiện thích hợp và xử lý, loại bỏ những khúc nhiễm. Ủ lâu gỗ sẽ bị mất nước, do đó để duy trì lượng nước lý tưởng trong gỗ để nấm lan tơ cần phải tưới nước. Tùy theo thời tiết và ẩm độ trong gỗ mà 7 – 30 ngày tưới một lần. Sau khi tưới phải tiến hành thông gió để tránh bề mặt vỏ gỗ bị ẩm kéo dài, gâu nhiễm Trichoderma và mốc khác [108]. Thời gian ủ gỗ có thể kéo dài từ 6 – 24 tháng, đây là khoảng thời gian cần thiết để sợi nấm tích lũy dinh dưỡng mà hình thành quả thể [66], [108], [140]. Nếu thời gian ủ gỗ ngắn năng suất sẽ thấp, chất lượng nấm kém và dễ nhiễm bệnh. Khi thấy sợi nấm lan đầy mặt cắt khúc gỗ thì chuyển gỗ sang nhà trồng. Ra quả thể Nuôi trồng nấm hương trên khúc gỗ kéo dài từ 2 – 6 năm. Một chu kỳ ra quả thể của nấm hương có 4 giai đoạn: giai đoạn cảm ứng (induction) từ 1 – 3 ngày, giai đoạn hình thành mầm quả thể (pinning) từ 3 – 10 ngày, giai đọn ra quả thể (fruiting) từ 14 – 21 ngày, giai đoạn nghỉ (resting) kéo dài từ 21 – 180 ngày. Điều chỉnh 9 những điều kiện môi trường cho phù hợp với từng giai đoạn là cơ sở cho nuôi trồng nấm đạt năng suất cao. Giai đoạn cảm ứng: Là giai đoạn sợi nấm phân phối năng lượng và dinh dưỡng của nó cho sự hình thành quả thể. Trong giai đoạn này những biến đổi đột ngột của môi trường (stress) như nhiệt độ, ẩm độ, dinh dưỡng sẽ làm tăng quá trình cảm ứng ở nấm hương. Biện pháp kỹ thuật của giai đoạn này là phải đầy đủ ánh sáng (ánh sáng khuếch tán), điều chỉnh nhiệt độ xuống thấp hơn 15 0 C, hoặc ngâm nước cũng là một biện pháp vừa tăng ẩm độ, vừa hạ nhiệt độ nhanh nhất [71]. Tokimoto (1977) nghiên cứu thấy nếu bổ sung dinh dưỡng trong nước ngâm với hàm lượng 0,1% ammonium sulfate, 0,5 % glucose, sẽ làm tăng năng suất đến 71%. Tuy nhiên khi bổ sung dinh dưỡng có thể sẽ gia tăng nguy cơ gây nhiễm [136]. Giai đoạn hình thành mầm quả thể: Đây là giai đoạn rất nhạy cảm với sự thay đổi của môi trường. Hàm lượng nước trong gỗ lý tưởng là từ 55 – 65 %, nếu gỗ quá khô hoặc quá ướt thì mầm quả thể cũng sẽ không hình thành [66], [108]. Hầu hết của chủng trong giai đoạn này đều thích hợp nhiệt độ từ 12 – 20 0 C. Giai đoạn quả thể: Là giai đoạn mầm quả thể tăng kích thước và thành thục. Nhiệt độ giai đoạn này ít ảnh hưởng tới năng suất, nhưng có ảnh hưởng nhiều đến chất lượng nấm. Ở nhiệt độ cao, nấm sẽ thành thục nhanh do đó mũ nấm mỏng và ít thơm hơn so với nhiệt độ thấp. Ẩm độ không khí tương đối tối thích là từ 60 – 85%. Ẩm độ quá cao nấm có màu sẫm và úng nước, khó bảo quản, ít thơm và dễ nhiễm trichoderma. Ẩm độ quá thấp nấm sẽ không hình thành được mũ nấm. Nhu cầu ánh sáng trong suốt giai đoạn này cũng rất cần thiết, ánh sáng quyết định hình dạng, màu sắc nấm. Ánh sáng đầy đủ mũ nấm có màu nâu tối, ánh sáng quá nhiều cùng với nhiệt độ cao sẽ làm tăng quá trình tăng trưởng của mũ nấm [81], [108]. Thời điểm thu hái quả thể phụ thuộc vào thị hiếu tiêu dùng trên thị trường. Thông thường nấm được thu hái khi màng bao mở ra từ 1 -2 ngày. Chu kỳ nghỉ: Sai khi thu hái nấm, sợi nấm phải tích lũy dinh dưỡng trở lại để bắt đầu một chu kỳ ra quả thể mới. Hàm lượng nước trong gỗ điều chỉnh từ 30 – 40% để kích thích sợi nấm sinh trưởng và ức chế hình thành mầm quả thể. Nhiệt độ thích hợp là từ 15 – 25 0 C. Chu kỳ này thông thường kéo dài từ 3 – 5 tuần [108]. 4.1.3. 2. Bệnh, côn trùng gây hại nấm hương nuôi trồng trên gỗ Nấm gây bệnh Theo Lou (1981) có khoảng 150 loài có thể gây nhiễm trên gỗ, sợi nấm và nấm trong suốt quá trình nuôi trồng nấm [83]. Dựa trên mức độ gây hại người ta chia ra làm ba nhóm: Nhóm nấm gây bệnh, nhóm nấm cạnh tranh, nhóm nấm dại. Biện pháp phòng trừ chủ yếu là quản lý, kiểm soát bệnh, điều chỉnh các điều kiện môi trường như ẩm độ, ánh sáng, nhiệt độ, vệ sinh môi trường. Nhóm nấm gây bệnh là nhóm nấm có khả năng ký sinh, tấn công và tiêu diệt sợi nấm hương làm giảm sút năng suất nấm thu hoạch. Trong nhóm này chủ yếu là nhóm nấm túi (Ascomycetes) như các loài thuộc chi Trichoderma, Hypoxylon và Diatrype. Ngoài ra còn có những loài thuộc chi Cephalosporium, Stemonistis,…[108], [144]. Nhóm nấm cạnh tranh chủ yếu thuộc nhóm nấm đảm (Basidiomycestes). Chúng không có khả năng ký sinh trên sợi nấm hương mà chủ yếu xâm nhiễm gỗ, cạnh tranh dinh dưỡng với nấm hương. Các loài cạnh tranh thường là Coriolus versicolor, các loài thuộc chi Stereum. 10 [...]... nông nghiệp và phát triển nông thôn có chương trình hướng dẫn nuôi trồng nấm hương cho đồng bào dân tộc vùng cao để hạn chế trồng cây thuốc phiện Ở miền Nam, ngay từ những năm 70 một số nhà sản xuất từ Đài loan đã triển khai trồng nấm donko ở Dalat, mà sau đó Ban KHKT tỉnh Lâm đồng khi bắt đầu được thành lập đã tiếp tục mở rộng (1979) trồng trên gỗ dẻ Năm 1986 khoa Sinh học trường Đại học Tổng hợp Thành... các điều kiện nuôi trồng, chu kỳ nuôi trồng ngắn từ 6 – 12 tháng, nhưng năng suất sinh học rất cao, có thể đạt 145% trong 6 tháng [43], [114] Kỹ thuật nuôi trồng nấm hương trên mùn cưa bao gồm các bước sau: Chuẩn bị cơ chất 17 Nguồn cơ chất Cũng tương tự như nuôi trồng trên gỗ khúc, hầu hết các nước trên thế giới sử dụng mùn cưa của những loại cây gỗ lá rộng (gỗ cứng) như cây sồi, cây thích, ngoài ra... trị hàng tỷ USD [31] Tình hình nuôi trồng nấm hương ở Việt Nam Nấm hương chưa được nuôi trồng phổ biến ở Việt Nam Ở miền Bắc nấm hương chủ yếu mọc tự nhiên ở vùng núi Tây Bắc và Đông Bắc trên cây sồi (Quercus spp.), cây dẻ (Castanea spp.), cây côm (Elaeocarpus sylvestris) Thời điểm thu hái nấm tự nhiên từ tháng 12 đến tháng 4 năm sau Trước đây, Bộ Ngoại thương có trồng nấm hương ở Sa Pa để xuất khẩu,... bóc bỏ hết lớp màng mỏng) theo một góc khoảng 60 - 700 Mỗi luống xếp theo hàng ngang 8 – 10 túi (chiều dài luống tùy thuộc từng địa điểm) Chú ý để túi nọ cách túi kia khoảng 3 – 4 cm Trên 1ha đất có thể xếp được từ 120.000 đến 135.000 các túi hình ống 16 Từ khi cấy giống đến khi ra nấm hương trên các khúc “gỗ giả” này chỉ cần 80 90 ngày Từ lúc nụ nấm hương xuất hiện đến lúc thu hái được chỉ khoảng... thoái hóa sau một thời gian nuôi trồng liên tục và rất nhạy cảm với các điều kiện sinh thái Do đó công tác lai tạo giống mới phải được chú trọng và mỗi vùng sinh thái phải có một bộ giống phù hợp Tiêu chuẩn của một giống lai mới là phải phù hợp tốt nhất đối với nuôi trồng thương mại Một số tính chất mong muốn của giống nấm mới là năng suất cao, chất lượng tốt, thích ứng với các điều kiện nuôi trồng, kháng... nấm hương là một công nghệ mới, có thể sản xuất với quy mô công nghiệp, thu sinh khối sợi nấm trong một thời gian ngắn Đây thực sự là một công nghệ có nhiều triển vọng 4.1.4 Tình hình sản xuất và tiêu thụ nấm hương Tình hình sản xuất và tiêu thụ trên thế giới Nấm hương có lịch sử nuôi trồng khoảng 1000 năm (Wang, 1313) [30] Cho đến ngày nay, nấm hương chủ yếu vẫn được trồng trên gỗ khúc Đến những năm... đương với kết quả nuôi trồng của Nhật Bản, Trung Quốc Giá nấm tiêu thụ là từ 2 – 3 USD/kg tươi tại hai địa bàn là thành phố Hồ Chí Minh và Đà Lạt Tuy nhiên đang tiếc là trong 20 năm qua các kết quả này chỉ dừng ở các nghiên cứu khảo nghiệm mà không mở rộng sản xuất, bỏ trồng một tiềm năng to lớn 4.1.5 PHƯƠNG PHÁP LAI TẠO CHỌN GIỐNG NẤM HƯƠNG Trong nuôi trồng nấm hương, giống là một trong những yếu tố... Chu kỳ ra quả thể của nấm nuôi trồng trên mùn cưa cũng tương tự như nuôi trồng trên gỗ khúc, bao gồm có các giai đoạn cảm ứng, giai đoạn hình thành nụ nấm, giai đoạn quả thể thành thục và giai đoạn nghỉ Giai đoạn cảm ứng Cảm ứng có thể được khơi mào bằng cách thay đổi nhiệt độ từ nhiệt độ ủ tơ 0 (25 C) xuống nhiệt độ thấp hơn (160C) Một số chủng thì cảm ứng với sốc lạnh Để sốc lạnh có thể bằng cách làm... thấp, từ 1 – 10% Các khuẩn lạc mọc từ những đơn bào tử có tốc độ sinh trưởng rất khác nhau Một số khuẩn lạc bị chết sau khi hình thành những khuẩn lạc nhỏ Từ một chủng, Ellingboe tách được ít nhất 25 dòng đơn nhân [44] Sau khi tách các dòng đơn nhân, để tăng hiệu quả của chương trình lai người ta tiến hành xác định kiểu di truyền bất tương hợp của từng dòng Có hai phương pháp để xác định là tiến hành lai... hương muốn bảo quản được lâu dài cần đảm bảo độ ẩm không vượt quá 11 – 12% Nếu độ ẩm thấp hơn 10% nấm hương dễ gãy ròn nhưng nếu cao hơn 13% lại dễ bị mọc mốc Nếu sản lượng nấm hương cao có thể liên hệ với các nhà máy đóng hộp xuất khẩu để ký hợp đồng tiêu thụ sản phẩm Nhà máy sẽ hướng dẫn người nuôi trồng các điều kiện cụ thể để bảo quản và vận chuyển đến nhà máy 4.1.3 4 Kỹ thuật nuôi trồng nấm hương