B GIÁO DC & O B Y T VIN DC LIU ==oo0oo== PHM VN VNG NGHIểN CU THÀNH PHN HịA HC VÀ MT S TÁC DNG SINH HC CA CÂY N KIM (BIDENS PILOSA L., H ASTERACEAE) LUN ÁN TIN S DC HC HÀ NI - 2014 B GIÁO DC & O B Y T VIN DC LIU ==oo0oo== PHM VN VNG NGHIểN CU THÀNH PHN HịA HC VÀ MT S TÁC DNG SINH HC CA CÂY N KIM (BIDENS PILOSA L., H ASTERACEAE) LUN ÁN TIN S DC HC   : 62.72.04.06 Ngi hng dn khoa hc: 1. GS.TS. Phm Thanh K 2. PGS. TS. Nguyn Th Bích Thu HÀ NI - 2014 LI CAM OAN Tôi xin cam đoan Lun án này là công trình khoa hc ca riêng tôi di s hng dn ca GS.TS. Phm Thanh K và PGS.TS. Nguyn Th Bích Thu. Các s liu, kt qu trình bày trong Lun án là trung thc, khách quan và cha tng đc ai công b trong bt k mt công trình nào khác. Tác gi lun án NCS. Phm Vn Vng LI CM N Trong quá trình nghiên cu và hoàn thành lun án này, tôi đã nhn đc rt nhiu s giúp đ quí báu ca các các tp th, thy cô giáo, các nhà khoa hc thuc nhiu lnh vc, cùng đng nghip, bn bè và gia đình. Trc ht, tôi xin bày t lòng bit n sâu sc ti GS.TS. Phm Thanh K, PGS.TS. Nguyn Th Bích Thu, nhng ngi thy đã tn tình hng dn, ht lòng ch bo và to mi điu kin giúp đ tôi trong sut quá trình hc tp, nghiên cu, hoàn thành lun án. Tôi xin trân trng cm n Ban lãnh o, Phòng Qun lý Khoa hc và ào to - Vin Dc liu; ng y, Ban giám đc Bnh vin Quân Y 17, đã to điu kin thun li cho tôi trong thi gian hc tp và và nghiên cu. Tôi cng xin bày t lòng bit n chân thành ti: GS.TS. Hoàng Vn Lng Ch huy trng Trung tâm Nghiên cu ng dng Sinh – Y – Dc, Phó giám đc Hc vin Quân Y. PGS.TS. V Mnh Hùng và các thy cô giáo, anh ch k thut viên - B môn Dc lý, Hc vin Quân Y. PGS.TS Phan Vn Kim và các cán b nghiên cu - Vin Hóa Sinh Bin, Vin Hàn lâm Khoa hc và Công ngh Vit Nam. PGS.TS Cao Vn Thu – B môn Vi sinh – Sinh vt, Trng i hc Dc Hà Ni. ã to mi điu kin giúp đ, đóng góp ý kin quí báu cho tôi hoàn thin lun án này. Cui cùng cho tôi gi li cm n sâu sc đn nhng ngi thân trong gia đình đã ng h và to mi điu kin tt nht cho tôi trong quá trình hc tp và hoàn thành lun án. Mt ln na tôi xin chân thành cm n tt c nhng giúp đ quí báu đó! NCS. Phm Vn Vng DANH MC CÁC KÝ HIU, CH VIT TT 13 C-NMR : Ph c ng t ht nhân carbon 13 (Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry) 1 H-NMR : Ph cng t ht nhân proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry) Abs :  hp th ABTS : 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) ALT : Alanin aminotransferase APPH -azobis-[2-amidinopropan]-dihydroclorid AST : Aspartate aminotransferase BHT : Butylat hydoxytoluen br : Rng (broad) CAT : Catalase CK-MB : Là mt trong ba isoenzym cc tìm thy ch y COX : cyclooxygenase CS : Cng s CTCT : Công thc cu to CTC 50 : Concentration of the sample tolerated by 50% of the cultures exposed CTPT : Công thc phân t d : doublet dd : doublet of doublet dt : doublet of triplet DC (D/C) : Dch chit DVN : n Vit Nam DL : c liu DEPT : Distortionless enhancement by polarisation transfer DMSO : Dimethylsulfoxyd DPPH : 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl EC 50 : N ng 50% EI : n t (Electro Ionization) ELISA : Enzyme-linked immunosorbent assay ESI - MS : Ph kh   n t (Electron Spray Ionization Mass Spectrometry ) GC-MS : Sc ký khí - khi ph GGT : Gamma-glutamyltransferase (Gamma-glutamyl transpeptidase) GPx : Glutathione peroxidase GSH : Glutathione GTD : Gc t do HE : Henatoxylin-Eosin HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Coherence HR : High Resolution (Phân gii cao) HPLC : Sc ký lng hi   -performance liquid chromatography) HSQC : Heteronuclear Single Quantum Coherence IC 50 : N c ch 50% IL : Interleukin INF : interferon iNOS : inducible nitric oxyd synthetase J : Hng s  KL : Khng LPS : Lipopolysarcharid m : u (multiple) MDA : Malonyldialdehyd MIC : Minimum Inhibitory Concentration (N c ch ti thiu) MS : Ph khi MTT : 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromid mult : multiplicity  bi tín hiu) m/z : Khn tích ion Na.CMC : Natri carboxy methyl cellulose NF-B : Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells NMR : Ph c ng t ht nhân (Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry) NOS : nitric oxyd synthetase NRU : Neutral red uptake OD : Optical density PG : Prostaglandin PTM : Phn trên mt RPMI : Rothwell Park Memorial Instiue RT-PCR : Reverse transcription polymerase chain reaction SKLM : Sc ký lp mng SOD : Superoxyd dismutase TBA : Thiobarbituric acid TCA : Tricloroacetic acid TFB : Total flavonoid Bidens bipinnata L. TKH : Tên khoa hc TNF- : Tumor necrosis factor alpha MC LC L LI C DANH MC CÁC KÝ HIU, CH VIT TT DANH MC CÁC BNG DANH MC CÁC HÌNH T V 1 . TNG QUAN 3 1.1. Vài nét v đc đim thc vt chi Song nha (Bidens L.) 3 1.2. Công dng ca mt s loài thuc Song nha (Bidens L.) 4 1.3. Thành phn hóa hc chi Song nha (Bidens L.) 7 1.3 7 1.3.2.  17 1.3.3. Nhóm phenylpropanoid 21 1.3.4. Nhóm terpenoid 22 1.3.5. Nhóm cht khác 24 1.4. Tác dng ca mt s loài chi Song nha (Bidens L.) 26 1.4.1. Tác dng ch. 26 1.4.2. Tác dng c ch ung  28 1.4.3. Tác dng chng oxi hoá 29 1.4.4. Tác dng bo v gan 31 1.4.5. Tác dng kháng khun, kháng nm và kháng virus 32 1.4.6. Tác dng kháng ký sinh trùng 35 1.4.7. Tác dng chng ting 36 1.4.8. Tác dng chng viêm loét d dày 37 1.4.9. Tác dng chng tiêu ch 37 1.5. Nhng nghiên cu v loài Bidens pilosa L……………………… 38 1.5.1. Trên th gii 38 1.5.2.  Vit Nam 39    T LI     C 43 2.1. Nguyên vt liu nghiên cu……………………………………… 43 2.1.1. Nguyên liu nghiên cu 43 ng vt, vi sinh vt, dòng t bào thí nghim 44 2.1.3. Dung môi, hóa cht 45 2.14. Thit b và dng c dùng trong nghiên cu 45 2.2. Phng pháp nghiên cu 46 2.2.1. Nghiên cu thành phn hoá hc 46 2.2.2. Nghiên cu tác dng sinh hc 47 2.2.2.1. Th c tính cp 47 2.2.2.2. Th tác dng kháng khun, kháng nm tinh du lá 47 2.2.2.3. Th tác dng gim . 49 2.2.2.4. Th tác dng chng viêm 40 2.2.2.5. Th tác dng bo v gan 52 2.2.2.6. Th tác dc t  54 2.2.3. X lý s liu 55 T QU NGHIÊN C 56 3.1. Kt qu nghiên cu v thành phn hóa hc …………………… 56 3.1.1. nh tính các nhóm cht hu c trong cây n kim…………… 56 3.1.1.1. Phn trên mt 56 3.1.1.2. R. 57 3.1.2. Xác đnh các nguyên t vô c trong cây n kim………………. 59 3.1.3. Nghiên cu v tinh du chit xut t lá cây n kim………… 60 3.1.3.1. Xng tinh du trong lá cây  60 3.1.3.2. Phân tích thành phn tinh du lá cây  61 3.1.4. Chit xut và phân lp các hp cht t cây n kim…………. 63 3.1.4.1. Chit và phân lp các cht t r 63 3.1.4.2. Chit và phân lp các cht t phn trên mt 66 3.1.5. Xác đnh cu trúc hóa hc ca các hp cht phân lp đc 68 3.1.5.1. Hp cht BP1 68 3.1.5.2. Hp cht BP2 70 3.1.5.3. Hp cht BP3 72 3.1.5.4. Hp cht BP4 74 3.1.5.5. Hp cht BP5 76 3.1.5.6. Hp cht BP6 78 3.1.5.7. Hp cht BP7 79 3.1.5.8. Hp cht BP8 82 3.1.5.9. Hp cht BP11 84 3.1.5.10. Hp cht BP13 86 3.1.5.11. Hp cht BP15 88 3.1.5.12. Hp cht BP17 90 3.1.5.13. Hp cht BP18 91 3.1.5.14. Hp cht BP19 93 3.1.5.15. Hp cht BP20 98 3.1.5.16. Hp cht BP22 103 3.1.5.17. Hp cht BP23 106 3.2. Kt qu nghiên cu v đc tính và tác dng sinh hc 108 3.2.1. Th c tính c 108 3.2.2. Th tác dng kháng khun, kháng nm 109 3.2.3. Th tác dng chng  109 3.2.4. Th tác dng gi 114 3.2.5. Th tác dng bo v  115 3.2.6. Th tác dc t  118  121 4.1. V đi tng nghiên cu………………………………………… 121 4.2. V thành phn hóa hc…………………………………………… 122 4.3. V tác dng sinh hc………………………………………………. 129 KT LU 145 KIN NGH 147 DANH M TÀI LIU THAM KHO PH LC DANH MC BNG Bng 1.1 Công dng ca mt s loài thuc chi Song nha (Bidens L.)  5 Bng 1.2. Các hp cht auron và auron glycosid phân lp t chi Bidens… 7 Bng 1.3. Các hp cht chalcon và chalcon glycosid phân lp t chi Bidens 9 Bng 1.4. Các hp cht flavon và flavon glycosid phân lp t chi Bidens…. 12 Bng 1.5. Các hp cht flavanon và flavanon glycosid phân lp t chi Bidens 13 Bng 1.6. Các hp cht flavonol và flavonol glycosid phân lp t chi Bidens 13 Bng 1.7. Các hp cht acetylenic phân lp t chi Bidens……………………. 17 Bng 1.8. Các hp cht nhóm phenylpropanoid phân lp t chi Bidens 21 Bng 1.9. Các hp cht nhóm terpenoid phân lp t chi Bidens. 22 Bng 1.10. Các hp cht khác phân lp t chi Bidens. 24 Bng 3.1. Kt qu nh tính các nhóm cht hc. 56 Bng 3.2. Kt qu nh tính các nhóm cht htrong r cây  57 Bng 3.3. ng các nguyên t  trong r và  cây  kim 59 Bng 3.4. ng tinh d 60 Bng 3.5. Thành phn hóa hc ca tinh du lá cây  61 Bng 3.6. D liBP1 69 Bng 3.7. D liBP2 72 Bng 3.8. D liBP3 73 Bng 3.9. D liBP4 75 Bng 3.10. D liBP5 76 Bng 3.11. D liBP6 78 Bng 3.12. D liBP7 80 Bng 3.13. D liBP8 83 Bng 3.14. D liBP11 85 Bng 3.15. D liBP13 86 Bng 3.16. D liBP15 89 Bng 3.17. D liBP17 90 Bng 3.18. D liBP18 92 [...]... chu t s ng và ch t sau 72 gi ng kính vòng kháng khu n; n m c a tinh d u lá Tác d ng ch ng viêm c a cao l ng r trên mô hình gây phù chân chu Tác d ng c a cao l ng r cây lên th tích d ch r viêm Tác d ng c a cao l ng r cây lên ng protein và albumin trong d ch r viêm Tác d ng c a cao l ng r và cây lên s ng b ch c u trong d ch r viêm Tác d ng c a cao l ng r và cây lên kh i ng uh t ng c a cao r cây lên s... AST và ALT các lô nghiên c u Ch s gan các lô nghiên c u N MDA và GSH d ng th gan các lô nghiên c u m mô b nh h i th gan chu Tác d c m t s dòng t a các ch c phân l p t cây kim 95 100 104 105 108 109 110 111 112 113 113 114 115 116 116 117 117 118 DANH M C HÌNH Hình 1.1 nh cây (Bidens pilosa L.) 39 Hình 3.1 chi t xu t, phân l p các ch t t r cây Hình 3.2 chi t xu t, phân l p các h p ch t t 65 cây. .. l p các h p ch t t 65 cây kim 67 Hình 3.3 C u trúc hóa h c c a h p ch t BP1 69 Hình 3.4 Các 70 Hình 3.5 C u trúc hóa h c và các a h p ch t BP1 a h p ch t BP2 72 Hình 3.6 C u trúc hóa h c c a h p ch t BP3 74 Hình 3.7 Các 74 Hình 3.8 C u trúc hóa h c c a h p ch t BP4 Hình 3.9 C u trúc hóa h c và các a h p ch t BP3 75 a h p ch t BP5 77 Hình 3.10 C u trúc hóa h c và các a h p ch t BP6 ... C u trúc hóa h c c a h p ch t BP7 81 a h p ch t BP7 82 Hình 3.13 C u trúc hóa h c c a h p ch t BP8 84 Hình 3.14 C u trúc hóa h c c a h p ch t BP11 85 Hình 3.15 C u trúc hóa h c c a h p ch t BP13 87 a h p ch t BP13 88 Hình 3.12 Hình 3.16 Hình 3.17 C u trúc hóa h c c a BP15 Hình 3.18 Hình 3.19 C u trúc và các a BP15 89 90 a h p ch t BP17 91 Hình 3.20 C u trúc hóa h c c... trúc hóa h c c a h p ch t BP19 95 Hình 3.22 a h p ch t BP19 95 phá m nh hình thành ion m3- 97 Hình 3.24 C u trúc hóa h c c a h p ch t BP20 100 Hình 3.25 a h p ch t BP20 101 Hình 3.26 phá m nh hình thành ion m1- 102 Hình 3.27 phá m nh hình thành ion m3- 103 Hình 3.23 Hình 3.28 C u trúc c a h p ch t BP22 106 Hình 3.29 C u trúc c a h p ch t BP23 108 1 theo Cây Song... pilosa L., và Bidens bipinnata L [136 , mãi 3, (Bidens [12] 136 Bidens biternata (Lour.) Merr & Sherff., Bidens leucorhiza DC và Bidens tripartite L., [12 Song nha (Bidens Bidens pilosa Kim Biên [3 [3 12 (Bidens pilosa Bidens pilosa var radiata Sch-Bip SONG NHA (BIDENS L.) Song nha (Bidens L.) Bidens nhân dân tài loài Bidens pilosa L., và 2 loài khác, [44] Song nha 5 S chi Song nha (Bidens L.) Tên cây TLTK... 3.23 Hình 3.28 C u trúc c a h p ch t BP22 106 Hình 3.29 C u trúc c a h p ch t BP23 108 1 theo Cây Song nha (Bidens L.), 6], [15], [19] [6] , cây C [27], [37], [57], [58] - oxy hóa [39], [73]; kháng [33], [41], [114] [25], [27] và [27] [131] [27] 2 cây (Bidens pilosa L 1 2 tinh - ; - ; - ; các - - - 3 1.1 T CHI SONG NHA (BIDENS L.) Chi Song nha (Bidens L.) (Magnoliophyta/ Angiospermae) [3] Chi... nói chung và loài Bidens pilosa , chi Bidens dân gian , h 7 1.3 SONG NHA (BIDENS L.) Chi Song nha (Bidens L.) chi Song nha úc, là nghiên các Bidens 4 lavonoid, acetylenic, phenylpropanoid, terpenoid và c 1.3.1 Nhóm flavonoid 1.3.1.1 Auron và auron glycosid B O A C O auron và auron glycosid phân STT 1 Bidens Loài [27], [106] B parviflora [81] [27], [106] B bipinnata methylen]-6-hydroxy-3(2H)- B pilosa... TLTK TT 1 dùng Bidens bipinnata L [130], [80] cây 2 Bidens cernua L [104] kinh, a, lao 3 Bidens tripartita L [125] 4 Bidens alba L [91] 5 Bidens campylotheca [28], Schulz [99] Bip subsp.campylotheca 6 6 Bidens parviflora [81] ordorata [32] Willd 7 Bidens Cav 8 lá Bidens pilosa L [23], lá, hoa, [24], [26], [27], [106] , 1.1 Song nha (Bidens L.) nói chung và loài Bidens pilosa , chi Bidens dân gian ,... (Z)-6-O-(3'',4'',6''-triacetyl- B pilosa -D-glucopyranosyl)- [27], [106] [123] 6,7,3',4'-tetrahydroxy 10 auron, (Z)-6-O-(6-O-p-coumaroyl-D-glucopyranosyl)-6,7,3',4'tetrahydroxy 1.3.1.2 Chalcon và chalcon glycosid O B pilosa [27], [106] 9 3 và chalcon glycosid STT Bidens B pilosa [27], [106] B pilosa [27], [106] [81] B pilosa [27], [106] B bipinnata 1-[2-( -D-gluco-pyranosyloxy)- TLTK B.parviflora 11 Loài [134] 4hydroxyphenyl]-2-hydroxy-3-(3hydroxyphenyl)- . dùng trong nghiên cu 45 2.2. Phng pháp nghiên cu 46 2.2.1. Nghiên cu thành phn hoá hc 46 2.2.2. Nghiên cu tác dng sinh hc 47 2.2.2.1. Th c tính cp 47 2.2.2.2. Th tác dng.   Nghiên cu thƠnh phn hóa hc vƠ mt s tác 2 dng sinh hc ca cây n kim (Bidens pilosa L., h Asteraceae)”   1. Xác đnh thành phn hóa. trong cây n kim ……………. 59 3.1.3. Nghiên cu v tinh du chit xut t lá cây n kim ……… 60 3.1.3.1. Xng tinh du trong lá cây  60 3.1.3.2. Phân tích thành