I HC M TP. HCM  BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHP  tài: SÀNG LC VI KHUN VÙNG R CÓ KH NG VÀ KHÁNG NM GÂY BNH COLLECTOTRICHUM SP. CHO CÂY T KHOA: CÔNG NGH SINH HC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGH VI SINH GVHD: ThS Nguyn Thanh Thun ThS Nguy SVTT: Lê Th Yn Nhi MSSV: 1053010532 Khóa: 2010  2014 Tp. H Chí Minh, Tháng 06 Nm 2014 LI CM N  hoàn thành đ tài này, em xin gi li cm n đn các Thy Cô khoa Công Ngh Sinh Hc, trng i hc M thành ph H Chí Minh đã ging dy và truyn đt kin thc cho em trong sut nhng nm va qua đ em làm tt đ tài khóa lun này. Em xin gi cm n sâu sc ti thy Nguyn Vn Minh đã tn tình hng dn, ch bo em trong sut thi gian em thc hin đ tài. Em xin cm cô Dng Nht Linh, ngi đã truyn đt cho chúng em nhiu kinh nghim quý báu. Em xin cm n anh an Duy Pháp, ch Võ Ngc Yn Nhi và ch Nguyn Th M Linh, nhng ngi anh, ngi ch luôn ng h, giúp đ em trong lúc làm đ tài. Bên cnh đó, tôi xin cm n các bn ca tôi, các bn sinh viên cùng làm đ tài trong cùng thi gian vi tôi, các bn sinh viên hc vic phòng thí nghim Công ngh Vi sinh đã luôn quan tâm, giúp đ tôi trong quá trình thc hin đ tài này. Cui cùng con xin cm n Ba, M, cm n gia đình đã luôn bên con, to mi điu kin tt nht đ con hoàn thành vic hc ca mình. Bn nm đi hc kt thúc, nhng vi tôi đó vn s mãi là k nim đp trong đi mình. Em xin gi li chúc sc khe đn tt c ngi thy, ngi cô đáng kính khoa Công ngh sinh hc, Trng i hc m thành ph H Chí Minh, xin chúc thy cô ngày càng gt hái đc nhiu thành công. Tôi xin chúc các bn ca tôi s luôn luôn thành công trên con đng bc vào đi, cng hin tài nng và sc tr cho tng lai đt nc. Xin chân thành cm n. Sinh viên thc hin Lê ThYn Nhi Tháng 06/2014 KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC SVTH: LÊ TH YN NHI i DANH MC CH VIT TT CFU Colony forming unit IAA Indole Acetic Acid MS Minimal Salt NA Nutrent Agar NB Nutrient Broth OD Optical Density PDA Potato Dextrose Agar PDB Potato Dextrose Broth PGPR Plant Growth Promotion Rhizobacteria TSA Trypticase Soy Agar TSB Trypticase Soy Broth KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC SVTH: LÊ TH YN NHI ii DANH MC HÌNH NH Hình 1.1: Hình nh t bào (a) và khun lc (b)ca vi khun Bacillussubtilis 13 Hình 2.1: Vòng kháng nm bng phng pháp khch tan đa 37 Hình 3.1: Quan sát đi th khun lc trên môi trng NA 53 Hình 3.2 Quan sát vi th vi khun di kính hin vi x100 55 Hình 3.3: Mt s mu bnh thu thp đc 56 Hình 3.4: Quan sát đi th nm trên môi trng PDA 57 Hình 3.5: Bào t nm bnh quan sát di kính hin vi quang hc 57 Hình 3.6: Triu chng bnh thán th trên qu t đc lây bnh nhân to 58 Hình 3.7: Khun lc chng T7 mc trên môi trng Ashby 60 Hình 3.8: Phn ng màu gia thuc th Nesler’s vi lng NH 3 sinh ra t các chng vi khun 63 Hình 3.9: Phn ng màu gia thuc th FeCl 3 -H 2 SO 4 và IAA sinh ra bi vi khun 66 Hình 3.10: Kh nng phơn gii Ca 3 (PO 4 ) 2 trong môi trng Pikovskaya 68 Hình 3.11: Phn ng màu gia các thuc th vi phospho hòa tan t các chng vi khun 70 Hình 3.12: Kh nng kháng nm gây bnh ca các chng vi khun vùng r qua phng pháp khuch tán đa 73 Hình 3.13: Kt qu phn ng Nitate, lên men đng, VP ca chng B6 77 Hình 3.14: Kt qu th đi kháng ba chng vi khun có hot tính mnh 78 KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC SVTH: LÊ TH YN NHI iii Hinh 3.15: So sánh chiu cao ca cơy đi chng vi hai nghiêm thc phi trn và chng vi khun B21 82 KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC SVTH: LÊ TH YN NHI iv DANH MC BNG Bng 2.1: Xây dng đng chun NH 3 29 Bng 2.2: Xây dng đng chun phospho 31 Bng 2.3: Xây dng đng chun IAA 34 Bng 3.1:Kt qu quan sát đi th khun lc 51 Bng 3.2: Kt qu quan sát vi th chng vi khun vùng r 53 Bng 3.3: Kt qu đnh tính kh nng c đnh đm 59 Bng 3.4: Kt qu đnh lng kh nng sinh NH 3 ca các chng 61 Bng 3.5: Kt qu đnh tính kh nng sinh IAA 63 Bng 3.6: Kt qu đnh lng IAA ca các chng 64 Bng 3.7: Kt qu đnh tính kh nng hòa tan Ca 3 (PO 4 ) 2 67 Bng 3.8: Nng đ phospho do các chng vi khun hòa tan đc 68 Bng 3.9: Kt qu kh nng kháng vi nm gây bnh ca vi khun vùng r 71 Bng 3.10: ng kính vòng kháng nm gây bnh ca vi khun vùng r cây t 72 Bng 3.11: Kt qu đnh danh sinh hóa chng T7 74 Bng 1.12: Kt qu đnh danh chng T16 75 Bng 3.13: Kt qu đnh danh chng B21 75 Bng 3.14: Kt qu đnh danh chng B6 76 Bng 3.15: Kt qu tng trng ca cây t 78 KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC SVTH: LÊ TH YN NHI v DANH MC BI Biu đ 3.1: Nng đ NH 3 ca các chng c đnh đm 62 Biu đ 3.2: Nng đ IAA ca vi khun 65 Biu đ 3.3: Nng đ phospho hoà tan ca vi khun 69 Biu đ 3.4: ng kính kháng nm gây bnh 72 Biu đ 3.5: Chiu cao cây ca các nghim thc 79 Biu đ 3.6: Khi lng ti, khi lng khô ca các nghim thc 79 Biu đ 3.7: Ch s GPE ca các nghim thc theo phn trm 80 KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC SVTH: LÊ TH YN NHI vi DANH M S đ 2.1: B trí thí nghim 23 S đ 2.2: Quy trình phân lp 24 S đ 2.3: Quy trình đnh lng NH 3 30 S đ 2.4: Quy trình đnh lng phospho 33 S đ 2.5: Quy trình đnh lng IAA 35 KHÓA LUN TT NGHIP MC LC SVTH: LÊ TH YN NHI vii MC LC DANH MC CH VIT TT i DANH MC HÌNH NH ii DANH MC BNG iv DANH MC BIU  v DANH M vi MC LC vii T V 1 PHN 1. TNG QUAN TÀI LIU 4 1.1 CÂY T VÀ BT 5 1.1.1 S lc v cây t 5 1.1.2 Bnh thán th trên cơy t 5 1.2 MT S VI KHUN VÙNG R 7 1.2.1 Khái nim vùng r 7 1.2.2 Mt s hot tính kích thích tng trng cây trng ca vi khun vùng r 7 1.2.3 Bacillus 13 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CU VI KHUN VÙNG R HIN NAY 15 1.3.1 Tình hình nghiên cu trên th gii 15 1.3.2 Tình hình nghiên cu ti Vit Nam 17 PHN 2: VT LI 19 2.1 M VÀ THI GIAN NGHIÊN CU 20 2.2 VT LIU 20 2.3 THIT B DNG C NG 20 2.3.1 Thit b 20 2.3.2 Dng c 21 2.3.3 Môi trng và hóa cht 21 KHÓA LUN TT NGHIP MC LC SVTH: LÊ TH YN NHI viii 2.4 U 22 2.4.1 B trí thí nghim 22 2.4.2 Phng pháp ly mu và làm thun 23 2.4.3 Tin hƠnh quan sát đi th và vi th 25 2.4.4 Xác đnh hot tính kích thích tng trng ca vi khun vùng r 28 2.4.5 Phng pháp thng kê s liu 38 2.4.6 nh danh 38 2.4.7 Thí nghim kho xác kh nng kích thích tng trng trên cây t 46 PHN 3: KT QU VÀ THO LUN 50 3.1 KT QU PHÂN LP 51 3.1.1 Quan sát đi th 51 3.1.2 Quan sát vi th 53 3.1.3 Kt qu phân lp và lây bnh nhân to nm Collectotrichum sp. trên t 56 3.2 KT QU KH NG 58 3.2.1 Kh nng c đnh nit phơn t 59 3.2.2 Kh nng sinh IAA 63 3.2.3 Kh nng hòa tan Ca 3 (PO 4 ) 2 66 3.2.4 Kt qu đnh tính kh nng kháng vi nm gây bnh ca vi khun vùng r t cây t. 70 3.3 KT QU NH DANH SINH HÓA 74 3.3.1 Chng T7 74 3.3.2 Chng T16 74 3.3.3 Chng B21 75 3.3.4 Chng B6 76 3.4 KT QU THC NGHIM 77 [...]... nghiên c u là có kh Bên c nh ng cho cây t trong nghiên c u c a Kanchana và cs (2013), ch ng Azospirillum sp phân l p t t vùng r cây t có kh m, sinh IAA và m t s ho t tính kích thích khác, nghiên c u c ch ng minh kh vi khu n vùng r cây u ki ng c a ng ru ng Vi c sàng l c ra các vi khu n có trong vùng r nh m t o ra m t ch ph m sinh h c chuyên d ng cho cây t v i kh gây có m t quan tr ng ng và kháng n m b... TV TV Vi khu n vùng r (Rhizobacteria) có kh v t g i là vi khu n khích thích s kích thích s ng c a th c phát tri n th c v t (Plant Growth Promotion Rhizobacteria = PGPR) Theo Saharan (2011), PGPR là nhóm vi khu tt ng tích c c cho vùng r cây và mang l i l i ích cho cây tr ng nh vào kh ng trong các cây h các ch c tìm th y m y vi khu n c m s ng t ng khác ng cung c p s n xu t kích thích t th c v ng vi khu... chúng tôi th c hi n và kháng n m Collectotrichum sp N i dung nghiên c u: Phân l p vi khu n vùng r cây t Collectotrichum trên t Sàng l c các ch ng vi khu n vùng r có kh tr ng (c m, hòa tan lân và sinh IAA, kháng n m) nh danh ch ng có ho SVTH: LÊ TH Y N NHI ng cây ng c l a ch n 2 KHÓA LU N T T NGHI P Th c nghi m kh SVTH: LÊ TH Y N NHI TV kích thích c a vi khu n có ho t tính cao trên cây t 3 KHÓA LU N T... Luân canh v i cây tr ng khác h B trí m tr ng thích h p Di t côn trùng h i qu Khi b nh xu t hi n có th phun m t vài lo i thu c sau: Benlate 50WP 1 kg/ ha; Topsin M 70WP 0,4 1.2 M TS u M n, 2007) VI KHU N VÙNG R 1.2.1 Khái ni m vùng r Vùng r t nr a vi sinh v t và cây tr ng di n ra m nh m Nh n s phát tri n và s d ng nh ng vi sinh v c a m t vài loài này khác, và có nh nh ng c a cây tr ng Vùng r nh tranh... i nhau và v i cây tr ng Ho n s phát tri n và ch c tính sinh lý, hóa h c có l 1.2.2 M t s ho ng m t c ng a nh ng loài t (Maheshwari, 2010) ng cây tr ng c a vi khu n vùng r SVTH: LÊ TH Y N NHI 7 KHÓA LU N T T NGHI P T NG QUAN TÀI LI U Vi khu n vùng r có th gây thông qua vi c c khoáng Ho ng tr c ti n s phát tri n c a cây tr ng ng h p hormon và enzym th c v t, hòa tan ng kích thích s phát tri n cây tr... TÀI LI U Nguy n Th dòng vi khu ti n hành phân l p và tuy n ch n các t vùng r lúa có kh c 15 dòng vi khu ng c ng h m cao nh t K t qu kh o sát kh ng có b sung L-Tryptophan (100mg/ L) c a 15 dòng vi khu n có kh có kh m và t ng h p IAA K t qu thu m cao nh t cho th y c 15 dòng vi khu u ng h p IAA Nghiên c u c ã phân l khu n và nh n di c 74 dòng vi c 54 dòng có kh h p NH4+ cao và có kh ng ng h p nitrogenase... trên r cây Trong s các vi khu n vùng r , Bacillus, Pseudomonas, Burkholderia c nghiên c u ph bi t tác nhân ki m soát sinh h n vi c s n xu t các h p ch t kháng khu n (Maheshwari, 2011) Bacillus cung c p m t vài l i th v kh do có kh i kháng l i các tác nhân gây b nh i bào t và các kháng sinh có ph ho ng khá r ng Các loài vi khu n Bacillus sinh ra kho ng 167 h p ch t sinh h c có ho t tính ch ng l i vi khu... Rhizopus, Fusarium t h i nghiêm tr lo i cây tr cây tr d i r , th i thân g c, khô v n, th i lá N m gây b nh làm ng và hi u qu kinh t nông nghi p có thi n v nhi u khu v c trên th gi i Nh ng i kháng, th c hi n luân canh và các bi n pháp hóa h ki m soát n m b nh cây tr ng Tuy nhiên các cây tr có hi u l c, và vi c luân canh cây tr kh t c a nhi u , cà chua, t, c i b p, xà lách, N m gây ra các tri u ch gi m s iv n... 2-3 ngày c v t b nh có th lên t i ng kính V t b phân ranh gi i gi a mô b nh là m ng có hình thoi, lõm, y d c theo v t b nh Trên b m t v t b nh có nh ng ch m nh a n m gây b nh Các v t b nh có th liên k t v i nhau làm qu b th i, qu khô có màu tr ng vàng b n N m có th gây h i trên m t s ch i non, gây hi ng th i ng n t Ch i b h i nh có th phát tri n n ng làm cây b ch t d n ho c cây b nh có qu t ng ph r t... Azotobacter Có r t nhi u các nghiên c u v vi c sàng l c các vi khu n có kh phospho, c m, và sinh c th c hi n, có th k ng th c v t IAA n m t s nghiên c M t báo cáo nghiên c u c a c các ch ng vi khu n Azotobacter, Bacillus, Pseudomonas, và Mesorhizopium, kh siderophore, kh m Nghiên c nh ng k t qu nh các vi khu n Bacillus phân l c c có kh s n ph m NH3, t l các ch ng Bacillus và Azotobacter có kh n Pseudomonas và .  tài: SÀNG LC VI KHUN VÙNG R CÓ KH NG VÀ KHÁNG NM GÂY BNH COLLECTOTRICHUM SP. CHO CÂY T KHOA: CÔNG NGH SINH HC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGH VI SINH . phospho do các chng vi khun hòa tan đc 68 Bng 3.9: Kt qu kh nng kháng vi nm gây bnh ca vi khun vùng r 71 Bng 3.10: ng kính vòng kháng nm gây bnh ca vi khun vùng r cây. cu là có kh nng kích thích tng trng cho cây t trong nghiên cu ca Kanchana và cs (2013), chng Azospirillum sp. phân lp t đt vùng r cây t có kh nng c đnh đm, sinh IAA và mt