KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU B GIÁO D C VÀ ÀO T O TR NG I H C M TP.HCM BÁO CÁO KHÓA LU N T T NGHI P Tên tài: KH O SÁT KH N NG GÂY B NH VÀ KHÁNG KHÁNG SINH C A TR C KHU N M XANH TRÊN B NH NHÂN T I B NH VI N 175 T 11/2013 – 5/2014 KHOA CÔNG NGH SINH H C CHUYÊN NGÀNH: VI SINH CBHD: TS-BS V B o Châu SVTH: Tr n Th Di m H MSSV: 1053010312 Khóa: 2010 – 2014 Tp H Chí Minh, tháng 05 n m 2014 SVTH: TR N TH DI M H NG ng KHÓA LU N T T NGHI P L IC M N th c hi n t t V B o Châu ng GVHD: TS.BS V B O CHÂU tài khóa lu n t t nghi p này, em xin chân thành c m n th y i ã tr c ti p ch d y h ng d n, t o i u ki n cho em hồn thành t t khóa lu n t t nghi p th i gian qua Em xin chân thành g i l i c m n toàn th cán b khoa vi sinh B nh vi n 175 ã t n tình giúp , ch b o chúng em nh ng ki n th c th c t m i b ích, t o i u ki n thu n l i nh t chúng em hoàn thành báo cáo khóa lu n C m n th y cô khoa công ngh sinh h c nhà tr ng ã gi ng d y trang b cho em ki n th c su t trình h c t p, t n tình quan tâm giúp em hồn thành khóa lu n Trong q trình th c hi n em khơng tránh kh i nh ng sai sót, r t mong nh n c s giúp , óng góp c a th y anh ch khóa lu n t t nghi p Em xin chân thành c m n SVTH: TR N TH DI M H NG em hồn thành t t KHĨA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU DANH M C CÁC T VI T T T WHO World Health Organization NNIS National Nosocomial Infecttion Surveillance NCCLS The National Committe for Clinical Laboratory Standards( y Ban Qu c Gia v Các Chu n M c Phịng Thí Nghi m Lâm Sàng) BA Blood agar BHI Brain Heart Infusion MHA Mueller Hinton Agar AN Amikacin CAZ Ceftazidime CTX Cefotaxime CIP Ciprofloxacin IPM Imipenem FT Nitrofurantoin CS Colistin MEM Meropenem PT Pristinamycin TM Tobramycin P.aeruginosa Pseudomonas aeruginosa S.aureus Staphylococcus aureus K.pneumoniae Klepsiella pneumoniae E.coli Escherichia coli E.faecalis Enterococcus faecalis S Susceptible (nh y c m) I Intermediate (trung gian) R Resistant ( N S ca d SVTH: TR N TH DI M H kháng) ng tính v i P.aeruginosa NG i KHĨA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU M CL C DANH M C CÁC T VI T T T i DANH M C HÌNH v DANH M C B NG BI U vi TV N Ph n I: T NG QUAN TÀI LI U I.1 TR C KHU N M XANH (Pseudomonas aeruginosa) I.1.1 L ch s phát hi n I.1.2 Danh pháp: I.1.3 c i m sinh v t h c I.1.3.1 Hình th I.1.3.2 Nuôi c y I.1.3.3 Tính ch t sinh hóa I.1.3.4 Kháng nguyên – enzym – c t I.1.4 D ch t h c I.1.5 Sinh b nh h c I.1.6 Bi u hi n lâm sàng I.1.6.1 Nh ng y u t liên quân t i nhi m khu n Pseudomonas aeruginosa I.1.6.2 Các b nh lý nhi m trùng Pseudomonas aeruginosa 11 I.1.6.3 Tình hình nhi m Pseudomonas aeruginosa 14 I.2 NHI M TRÙNG B NH VI N[2] 15 I.2.1 nh ngh a: 15 I.2.2 Ngu n lây nhi m 16 I.2.3 ng lây nhi m: 16 I.2.4 Các y u t nh h ng: 16 SVTH: TR N TH DI M H NG ii KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU I.2.5 Các nhi m trùng b nh vi n th ng g p 17 I.2.6 H u qu c a nhi m trùng b nh vi n 17 I.2.7 Các bi n pháp phòng ng a 17 I.2.8 Tình hình nhi m trùng b nh vi n c a P.aeruginosa 18 I.3 KHÁNG SINH 19 I.3.1 nh ngh a 19 I.3.2 Phân lo i kháng sinh 19 I.3.3 C ch tác ng c a kháng sinh 20 kháng kháng sinh:[14] 21 I.3.4 I.3.4.1 Hi n t ng kháng kháng sinh: 21 I.3.4.2 Nguyên nhân vi khu n kháng thu c kháng sinh: 22 I.3.4.3 C ch kháng thu c kháng sinh c a vi khu n 22 I.3.4.4 Tình hình PH N II: IT kháng kháng sinh c a Pseudomonas aeruginosa hi n 23 NG, V T LI U VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN C U 25 II.1 IT NG NGHIÊN C U: 26 II.2 A I M VÀ TH I GIAN NGHIÊN C U: 26 II.3 V T LI U NGHIÊN C U: 26 II.3.1 Mơi tr ng, hóa ch t ni c y vi khu n: 26 II.3.2 D ng c , trang thi t b 26 II.4 PH II.4.1 Ph NG PHÁP VÀ K THU T NGHIÊN C U 27 ng pháp nghiên c u: 27 II.4.2 K thu t nghiên c u: 28 II.4.2.1 i v i b nh ph m m d ch, ch t d ch ph qu n, n c ti u, d ch màng ph i, phân… 28 II.4.2.2 B nh ph m máu: 29 II.5 PH NG PHÁP NH DANH P.AERUGINOSA 32 II.5.1 Kh o sát khóm khu n th ch BA 32 SVTH: TR N TH DI M H NG iii KHÓA LU N T T NGHI P II.5.2 GVHD: TS.BS V B O CHÂU nh danh b ng môi tr ng Uriselect 32 II.5.3 Kh o sát khu n l c b ng ph ng pháp nhu m gram 33 II.5.3 Th nghi m Oxidase 35 II.6 K THU T KHÁNG SINH THEO PH NG PHÁP KIRBY-BAUER 36 II.6.1 Nguyên t c: 36 II.6.2 V t li u ph II.6.2.1 ng pháp 36 a kháng sinh 36 II.6.2.2 Môi tr ng 37 II.6.2.3 Cách ti n hành 37 PH N III: K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 41 III.1 K T QU PHÂN L P NH DANH 42 III.1.1 T l nhi m P.aeruginosa t m u b nh ph m : 42 III.1.2 T l phân l p c P.aeruginosa t m u b nh ph m 43 III.1.3 K t qu nhi m P.aeruginosa theo gi i tính: 46 III.1.4 K t qu nhi m P.aeruginosa theo III.2 M C tu i 47 KHÁNG KHÁNG SINH C A P.AERUGINOSA 49 PH N IV: K T LU N VÀ NGH 53 IV.1 K T LU N: 54 IV.2 NGH : 54 TÀI LI U THAM KH O I PH L C III SVTH: TR N TH DI M H NG iv KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU DANH M C HÌNH Hình 1: Pseudomonas aeruginosa Hình 2: P.aeruginosa tiêu huy t Hình 3: P.aeruginosa môi tr môi tr ng BA 32 ng Uriselect 33 Hình 4: Hình nh nhu m Gram P.aeruginosa 35 Hình 5: P.aeruginosa d ng tính v i oxidase 36 SVTH: TR N TH DI M H NG v KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU DANH M C B NG BI U B ng 1: B ng ký hi u kháng sinh làm kháng sinh cho P.aeruginose 40 B ng 2: C c u loài vi khu n gây b nh phân l p c 42 Bi u c 43 1: T l loài vi khu n gây b nh phân l p B ng 3: K t qu nhi m P.aeruginosa theo t ng m u b nh ph m 44 Bi u 2: K t qu nhi m P.aeruginosa theo t ng m u b nh ph m 45 B ng 4: T l nhi m P.aeruginosa theo gi i tính: 46 Bi u 3: K t qu nhi m P.aeruginosa theo gi i tính 47 B ng 5: K t qu nhi m P.aeruginosa theo tu i 47 Bi u tu i 48 4: T l nhi m P.aeruginosa theo B ng 6: T l Bi u kháng kháng sinh c a P.aeruginosa b nh nhân 50 5: T l kháng kháng sinh c a P.aeruginosa 51 SVTH: TR N TH DI M H NG vi KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU TV N Nhi m khu n b nh vi n m t nh ng thách th c m i quan tâm hàng u c a ngành y t t i Vi t Nam c ng nh toàn th gi i Trong ó, m t nh ng tác nhân ph bi n quan tr ng gây nhi m khu n b nh vi n hi n tr c khu n m xanh -Pseudomonas aeruginosa Nhi m khu n tr c khu n m xanh gây th ng n ng có t l t vong cao dovi khu n kháng l i h u h t lo i kháng sinh thông th ng Nh ng n m g n ây nhi m trùng tr c khu n m xanh ngày nhi u song song v i t l xu t hi n, m c kháng kháng sinh c a vi khu n c ng gia t ng i v i nhi u lo i kháng sinh Vi c phát hi n k p th i theo dõi, ánh giá th kh n ng ng xuyên m c gây b nh kháng kháng sinh c a tr c khu n m xanh r t c n thi t cho ch n oán i u tr Xu t phát t tình hình th c t ó, chúng tơi th c hi n tài nh m: M c tiêu: - Kh o sát tình hình nhi m khu n tr c khu n m xanh b nh nhân - Kh o sát tình hình kháng kháng sinh c a tr c khu n m xanh SVTH: TR N TH DI M H NG KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU Ph n I: T NG QUAN TÀI LI U SVTH: TR N TH DI M H NG KH HÓA LU N T T NGH P HI GV VHD: TS.BS V B O CHÂU S 14 12.5 12 10 2.9 2.6 0 M d ch Bi u N Máu c ti u Phân B nh ph m h khác 2: K t qu nhi m P.aerugin osa theo t ng m u b n ph m nh Trong b nh ph m xét ng m, t l b nh ph m nhi m P ghi P.aeruginosa chi m a t l cao nh t b nh ph m máu (12,5%), ti p theo m d ch (2 ( 2,9%) n c ti u 6%) (2,6 h u nosa có th xu t phát t vi c t Trên th c t , nhi m khu n huy t d P.aerugin t ng th , ng d n ti u ho c nhi m t v t b ng, v t m … n c SV VTH: TR N TH DI M H NG G 45 KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU III.1.3 K t qu nhi m P.aeruginosa theo gi i tính: B ng 4: T l nhi m P.aeruginosa theo gi i tính: Gi i tính N T l (%) Nam 16/438 3.7 P > 0.05 N 5/286 1.7 Theo k t qu th ng kê, p > 0.05 nên t l nhi m P.aeruginosa theo gi i tính khơng có s khác bi t v m t th ng kê Tuy nhiên, theo nghiên c u c a m t s tác gi , t l phân l p lo i b nh ph m th ng, v t th c P.aeruginosa nam cao h n so v i n nguyên nhân có th t l ch n ng lao ng, sinh ho t, tai n n qu c a chúng tôi, t l nhi m P.aeruginosa SVTH: TR N TH DI M H NG nam cao h n so v i n Theo k t nam cao h n chi m 3,7% 46 KH HÓA LU N T T NGH P HI GV VHD: TS.BS V B O CHÂU S 3.7 3.5 1.7 2.5 1.5 0.5 Nam m Bi u N 3: K t qu nhi m P.ae eruginosa t theo gi i tín nh III.1.4 K t qu nhi m P.aeruginos theo u P sa t i tu B ng 5: K t qu nhi m P.ae n eruginosa th heo tu i tu i N T l (%) 6 60 2/47 4.3 SV VTH: TR N TH DI M H NG G p > 0.05 47 KH HÓA LU N T T NGH P HI GV VHD: TS.BS V B O CHÂU S Theo k t qu , p > 0.05 nên t l nhi m P.aerugino theo t n nhóm tu i osa ng u ơng k khơ có s khác bi t v m t th ng kê 4.3 4.5 3.4 3.5 1.9 2.5 1.5 0.5 60 4: T l nhi m P.ae n eruginosa th heo tu i V m t lý thuy t, kh n ng nh m b nh t l ngh ch v i s c l k hi h t l thu n v i th i gia ti p xúc v i môi tr an - tu i t 20-60 h ch n th l tu i lao ng la ao kháng c a c th ng bên ng goài ng, ti p xúc nhi u v i bên ngoài, d g p i i n ng, sin ho t ho t nh ng khác V v y t l nhi m Vì kháng suy gi m y u i, th s n m c b nh lý m tính ng c mãn khu n r t cao l - tu i >60, s c ph i h p, kh n ng ch ng l i vi khu n gi m, th kh n ng m c b nh cao n Theo nghiên c u c a chúng tôi, t l nhi m b n n g nh tu i c nh t cao chi m 4,3% SV VTH: TR N TH DI M H NG G 48 KHÓA LU N T T NGHI P - tu i 0.05 nên t l nhi m theo gi i tính khơng có s khác bi t v m t th ng kê P.aeruginosa gây nhi m b nh cao nhóm tu i >60 (4,3%), p >0.05 nên t l nhi m theo nhóm tu i khơng có s khác bi t v m t th ng kê P.aeruginosa ã kháng h u h t kháng sinh nh Meropenem (90.48%), Ceftazidime (85.72%), Cefotaxime (85.71%) nh y v i Imipenem (4.76%), Ciprofloxacin (23.81%) IV.2 NGH : D a k t qu nghiên c u, chúng tơi xin có ki n ngh sau: - Nên theo dõi tình hình gây b nh kháng kháng sinh c a P.aeruginosa th t s d ng kháng sinh h p lý hi u ng xuyên có th có m t chi n l qu - C n t ng c ng giám sát v sinh khoa phòng, c bi t khu v c xung quanh phòng vi sinh, khu v c b nh nhân, nhà v sinh, th c hi n nghiêm ng t bi n pháp an toàn ( c bi t r a tay v i dung d ch sát khu n) s làm gi m khu n th - ng trú nh P.aeruginosa t i mơi tr Có nh ng bi n pháp tuyên truy n t i ng c vi ng b nh vi n i dân v vi c nhi m khu n vi c s d ng kháng sinh m t cách h p lý, úng cách úng li u SVTH: TR N TH DI M H NG 54 KHÓA LU N T T NGHI P - GVHD: TS.BS V B O CHÂU Do th i gian làm khóa lu n ng n nên k t qu c a ch a ph n ánh h t c tình hình gây b nh thêm kháng kháng sinh c a P.aeruginosa C n theo dõi có k t qu xác h n SVTH: TR N TH DI M H NG 55 KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU TÀI LI U THAM KH O Ti ng Vi t: Tr n Th Ng c Anh (2007), S g p t i b nh vi n Nhi kháng kháng sinh c a vi khu n gây b nh th ng ng 2, Y h c TP HCM Nguy n Thanh B o (2006), Vi khu n h c, Khoa Y, B môn vi sinh, ih cYD c HCM Thân c D ng (2007), Tác nhân vi khu n th ng g p nhi m trùng b nh vi n, H i th o Nhi khoa Vi t Nam- an M ch T Th c Linh, (2007), Kh o sát nh l ng s nh y c m kháng sinh c a Pseudomonas aeruginosa nhi m trùng hô h p b nh vi n t i b nh vi n Ch R y t tháng 03/2007-08/2007, lu n v n c nhân – Tr ng H M Tp HCM ùi ình Ngh a, Ph m Anh Tu n, Ph m Th Hu nh Giao, Nguy n H ng Tr Nguy n Thiên Bình, Nguy n Th Ph (2010), Kh o sát tình hình Ch ng ng Lan, Nguy n Anh Trí, Nguy n Ph c Huy, kháng kháng sinh c a vi khu n t i khoa H i s c tích c c c b nh vi n h i s c c p c u Tr ng V Tr n V n Ng c (2008), S b nh vi n ph ng, ng kháng kháng sinh c a vi khu n gây b nh viêm ph i ng pháp i u tr thích h p giai o n hi n H Y D c TP HCM Nguy n V n Minh, Th c t p vi sinh c s tr Nguy n V n Minh, D ng H M Tp HCM ng Nh t Linh (2008), Th c t p vi sinh gây b nh H M Tp HCM SVTH: TR N TH DI M H NG I KHÓA LU N T T NGHI P Hu nh Ph GVHD: TS.BS V B O CHÂU ng Trang (2008), Nhi m trùng huy t Pseudomonas spp tính kháng kháng sinh c a Pseudomonas spp lu n v n c nhân – Tr b nh vi n Nhi ng t 1/2007- 4/2008, ng H M Tp HCM 10 Nguy n S Minh Tuy t, V Th Châu H i, Tr ng Anh D ng, Lê Th Tuy t Nga (2009), Kh o sát vi khu n gây nhi m khu n b nh vi n t i b nh viên Nhân dân Gia nh 11 Ph m Hùng Vân nhóm nghiên c u MIDAS “Nghiên c u a trung tâm v tình hình kháng Imepenem Meropenem c a tr c khu n Gram (-) d m c k t qu 16 b nh vi n Vi t Nam” Phòng thí nghi m NK-BIOTEK Nguy n Tri Ph ng, iH cYD n v Vi sinh B nh viên c Tp HCM Ti ng Anh: 12 WHO(2001), “WHO Global Strategy for Containment of Antimicrobial Resistance” 13 CDC (2001) National Nosocomial Infection Surveillance (NNIS) system report, data summary from January 1992 June 2002, Am I infect control Internet: 14 http://glomedvn.vn/vn/san-pham.aspx?cate=23&thuoctiem&drugs=152&meropenem-500-glomed-bot-pha-tiem.html 15.http://idoc.vn/tai-lieu/giao-trinh-truc-khuan-mu-xanh.html 16.http://idoc.vn/tai-lieu/nhiem-khuan-do-pseudomonas.html 17.http://tudu.vn/vn/thong-tin-y-hoc/y-hoc-cho-moi-nguoi/y-hoc-thuong-thuc/nhiemtrung-benh-vien/ SVTH: TR N TH DI M H NG II KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU PH L C I Môi tr ng: BA (Blood agar) Enzymatic Digest of Casein 15 g Enzymatic Digest of Animal Tissue g Yeast Extract g Tinh b t b p g Sodium Chloride g Agar 14 g pH: 7.0 ± 0.2 at 25oC Cơng th c có th c i u ch nh / ho c b sung theo yêu c u áp ng k thu t th c hi n MHA (Mueller Hinton Agar) Beef Extract g Axit Hydrolysate of Casein 17,5 g Tinh b t 1,5 g Agar 17 g pH 7,3 ± 0,1 25 ° C Cơng th c có th c i u ch nh / ho c b sung theo yêu c u áp ng k thu t th c hi n SVTH: TR N TH DI M H NG III KHÓA LU N T T NGHI P GVHD: TS.BS V B O CHÂU BHI (Brain Heart Infusion) Brain Heart Infusion 17,5 g Enzyme Digest of Gelatin 10 g Dextrose g Natri clorua g Disodium Phosphate 2,5 g Th c pH: 7,4 ± 0,2 25 ° C Cơng th c có th c i u ch nh / ho c b sung theo yêu c u áp ng k thu t th c hi n SVTH: TR N TH DI M H NG IV ... I.3.4 kháng kháng sinh: [14] I.3.4.1 Hi n t ng kháng kháng sinh: kháng kháng sinh nói n kh n ng c a vi khu n ho c tác nhân gây b nh d ng vi khu n khác kháng l i hi u qu c a thu c kháng sinh Kháng. .. ng kháng kháng sinh: 21 I.3.4.2 Nguyên nhân vi khu n kháng thu c kháng sinh: 22 I.3.4.3 C ch kháng thu c kháng sinh c a vi khu n 22 I.3.4.4 Tình hình PH N II: IT kháng kháng sinh. .. có tính kháng kháng sinh m nh, c bi t kháng nhi u kháng sinh m t lúc ( a kháng) Tình hình kháng kháng sinh c a P.aeruginosa th gi i M t th ng kê sinh Canada cho th y: hàng n m có kho ng 25 tri