Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN CHÍ DŨNG NGHIÊN CỨU VAI TRÒ GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN E. COLI TRONG HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở LỢN CON NUÔI TẠI TỈNH VĨNH PHÚC VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.64.01.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: TS. Ngô Nhật Thắng GS.TS. Nguyễn Thị Kim Lan Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ THÁI NGUYÊN - 2013 Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu này là của riêng cá nhân tôi. Các số liệu, kết quả nghiên cứu trong luận văn này là do tôi trực tiếp nghiên cứu dưới sự hướng dẫn của Thầy TS. Ngô Nhật Thắng, GS.TS. Nguyễn Thị Kim Lan và sự giúp đỡ chân tình của các cô, chú, anh, chị phòng Vi trùng – Trung tâm chẩn đoán Thú y Trung ương, Chi cục Thú y tỉnh Vĩnh Phúc. Các số liệu trong luận văn hoàn toàn trung thực, được rút ra từ tình hình thực tế của tỉnh Vĩnh Phúc trong những năm qua và chưa từng được sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đã được trích rõ nguồn gốc. Thái Nguyên, tháng 09 năm 2013 Tác giả luận văn Nguyễn Chí Dũng Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt 2 năm học tập, với sự nỗ lực của bản thân, tôi đã nhận được sự giúp đỡ, hướng dẫn tận tình của nhiều cá nhân và tập thể, đến nay luận văn của tôi đã được hoàn thành. Nhân dịp này, cho phép tôi được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: Ban Giám hiệu trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Khoa Sau đại học, Khoa Chăn nuôi – Thú y, các thầy cô giáo đã giúp đỡ, tạo điều kiện để tôi học tập và tiếp thu kiến thức trong suốt quá trình học tập. Các cán bộ thuộc phòng Vi trùng – Trung tâm chẩn đoán Thú y Trung ương. Ban lãnh đạo, cán bộ Chi cục Thú y tỉnh Vĩnh Phúc và một số bạn đồng nghiệp đang làm việc trong lĩnh vực Chăn nuôi – Thú y. Đặc biệt là thầy giáo hướng dẫn trực tiếp: TS. Ngô Nhật Thắng – Khoa Chăn nuôi Thú y và GS. TS. Nguyễn Thị Kim Lan – Khoa Sau Đại học – những người đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân cùng bạn bè đã động viên giúp đỡ tôi vượt qua mọi khó khăn trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và thực hiện đề tài Một lần nữa tôi xin bày tỏ lòng biết ơn, cảm ơn chân thành tới những tập thể, cá nhân đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành chương trình học tập. Thái Nguyên, tháng 9 năm 2013 Tác giả luận văn Nguyễn Chí Dũng Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ iii Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ iv MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iv Danh mục các chữ viết tắt viii Danh mục bảng biểu x Danh mục biểu đồ, sơ đồ xii MỞ ĐẦU 1 1. Đặt vấn đề 1 2. Mục tiêu nghiên cứu 2 3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn 2 Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Tình hình nghiên cứu về hội chứng tiêu chảy ở lợn 3 1.1.1. Nguyên nhân do vi khuẩn 3 1.1.2. Nguyên nhân do vi rút 5 1.1.3. Nguyên nhân do ký sinh trùng 6 1.1.4. Ảnh hưởng của môi trường, khí hậu 7 1.1.5. Ảnh hưởng của chăm sóc, nuôi dưỡng không đúng kỹ thuật 7 1.2. Tình hình nghiên cứu về vi khuẩn E.coli gây bệnh tiêu chảy ở lợn 8 1.2.1. Tình hình nghiên cứu trong nước 8 1.2.2. Tình hình nghiên cứu ở nước ngoài 11 1.3. Một số đặc tính sinh vật, hoá học của vi khuẩn E.coli 14 1.3.1. Đặc tính về hình thái 14 1.3.2. Đặc tính nuôi cấy 15 1.3.3. Đặc tính sinh hoá 16 1.3.4. Sức đề kháng 16 1.3.5. Cấu trúc kháng nguyên của vi khuẩn E.coli 17 Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ v 1.4. Các yếu tố gây bệnh của vi khuẩn E.coli 21 1.4.1. Các yếu tố không phải là độc tố 22 1.4.2. Các độc tố gây bệnh của vi khuẩn E. coli 26 1.5. Cơ chế gây bệnh của vi khuẩn E.coli 29 1.6. Bệnh tiêu chảy do E.coli ở lợn con 31 1.6.1. Triệu chứng 31 1.6.2. Bệnh tích 31 1.6.3. Điều trị 32 1.6.4. Phòng bệnh 33 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG, NGUYÊN LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1. Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu 36 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu 36 2.1.2. Địa điểm nghiên cứu 36 2.1.3. Thời gian nghiên cứu 36 2.2. Nội dung nghiên cứu 36 2.3. Phương pháp nghiên cứu 37 2.3.1. Phương pháp nghiên cứu dịch tễ học 37 2.3.2. Phương pháp phân lập vi khuẩn E. coli trên môi trường nuôi cấy 37 2.3.3. Phương pháp xác định đặc tính sinh hoá của vi khuẩn E. coli 38 2.3.4. Xác định serotype kháng nguyên O vi khuẩn E. coli bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính 39 2.3.5. Xác định kháng nguyên K88 bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính 40 2.3.6. Phương pháp xác định các yếu tố gây bệnh của vi khuẩn E. coli 40 2.3.7. Thử nghiệm các biện pháp phòng, điều trị bệnh tiêu chảy ở lợn con do vi khuẩn E. coli gây ra 43 2.3.8. Phương pháp xử lý số liệu 43 Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ vi 2.4. Nguyên liệu dùng trong nghiên cứu 44 2.4.1. Mẫu bệnh phẩm 44 2.4.2. Các loại môi trường, hoá chất 44 2.4.3. Động vật thí nghiệm 44 2.4.4. Các loại hoá chất môi trường 44 2.3.5. Các loại kháng huyết thanh chuẩn để định type vi khuẩn E. coli phân lập được 45 2.4.6. Các loại hoá chất và môi trường dùng trong phản ứng PCR 45 2.4.7. Máy móc thiết bị 46 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 47 3.1 Tình hình chăn nuôi và dịch bệnh ở Vĩnh Phúc 47 3.1.1. Tình hình chăn nuôi gia súc, gia cầm 47 3.1.2. Tình hình dịch bệnh trên đàn gia súc 48 3.2. Kết quả điều tra tình hình lợn con mắc bệnh tiêu chảy trong năm 2013 trên 3 huyện của tỉnh Vĩnh Phúc 48 3.2.1. Kết quả điều tra tỷ lệ lợn con mắc bệnh tiêu chảy và chết do tiêu chảy 48 3.2.2. Kết quả điều tra lợn con mắc bệnh tiêu chảy theo tuổi tại 3 huyện của tỉnh Vĩnh Phúc 52 3.2.3. Kết quả điều tra tỷ lệ lợn con mắc bệnh tiêu chảy theo các tháng trong năm tại 3 huyện của tỉnh Vĩnh Phúc 55 3.2.4. Kết quả điều tra tỷ lệ lợn con mắc bệnh tiêu chảy theo kiểu chuồng nuôi tại 3huyện của tỉnh Vĩnh Phúc 58 3.2.5. Kết quả điều tra lợn con mắc bệnh tiêu chảy theo giống lợn tại 3 huyện 61 3.3. Đặc điểm bệnh tích đại thể của lợn con mắc bệnh tiêu chảy do E. coli gây ra tại 3 huyện của tỉnh Vĩnh Phúc 63 3.4. Kết quả phân lập vi khuẩn E. coli ở lợn con theo mẹ tại Vĩnh Phúc 64 Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ vii 3.4.1. Kết quả nuôi cấy phân lập vi khuẩn E. coli gây bệnh tiêu chảy ở lợn con 64 3.4.2. Kết quả phân lập vi khuẩn E. coli từ các bệnh phẩm 66 3.5. Kết quả kiểm tra một số đặc tính sinh vật hoá học của vi khuẩn E. coli phân lập được 67 3.6. Kết quả xác định serotype kháng nguyên O của các chủng E. coli phân lập được 68 Biểu đồ 3.5: So sánh tỷ lệ các serotype kháng nguyên O phân lập được 69 3.7. Kết quả xác định khả năng bám dính và khả năng sản sinh độc tố của các chủng vi khuẩn E. coli nhóm ETEC 70 3.7.1. Kết quả xác định khả năng bám dính của các chủng vi khuẩn E. coli 70 3.7.2. Kết quả xác định khả năng sản sinh độc tố của vi khuẩn E. coli phân lập được 72 3.7.3. Tổ hợp các yếu tố gây bệnh mang trong các chủng E. coli phân lập được trên địa bàn 3 huyện tại Vĩnh Phúc 74 3.8. Kiểm tra độc lực của vi khuẩn E. coli bằng tiêm truyền chuột bạch 77 3.9. Kết quả xác định tính mẫn cảm của vi khuẩn E. coli phân lập được với một số loại kháng sinh và hoá dược 79 3.10. Kết quả đánh giá bước đầu hiệu lực của vacxin phòng bệnh tiêu chảy cho lợn con 81 3.11. Kết quả thử nghiệm một số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy do E.coli gây ra ở lợn con của 3 huyện tại Vĩnh Phúc 85 Chƣơng 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 88 4.1. Kết luận 88 4.2. Đề nghị 89 TÀI LIỆU THAM KHẢO 91 HÌNH ẢNH MINH HỌA Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ viii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AMP Adenosine 5’-monophosphate BHI Brain-heart infusion ColV Colicin V DGTP 2’ deoxy guanosine triphosphate DNA Deoxyribonucleic acid EaggEC Enteroaggregative E. coli Escherichia coli EMB Eosin Methylene Blue Agar Ent Enterotoxin (Độc tố đường ruột) EPEC Enteropathogenic Escherichia coli (Mầm bệnh độc tố đường ruột của E.coli ) ETEC Enterotoxigenic Escherichia Coli (Độc tố đường ruột của E.coli) Hly Haemolyzin F Fimbriae (Yếu tố bám dính) LT Heat-Labile enterotoxin (Độc tố không chịu nhiệt) LTa Heat-Labile enterotoxin a LTb Heat-Labile enterotoxin b PCR Polymerase Chain Reaction (Yếu tố bám dính) SLT Shiga-like toxin SLTI Shiga-like toxin I SLTII Shiga-like toxin II ST Heat-stable enterotoxin (độc tố chịu nhiệt) ST (a,b) Heat-stable enterotoxin (a,b) ST1 Shiga like toxin 1 ST2 Shiga like toxin 2 Stx2e Shiga toxin 2e VT2e Verocytotoxin 2e VTEC Verotoxigenic Escherichia Coli [...]... hành nghiên cứu đề tài Nghiên cứu vai trò gây bệnh của vi khuẩn E coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con nuôi tại tỉnh Vĩnh Phúc và biện pháp phòng trị 2 Mục tiêu nghiên cứu Xác định được một số yếu tố gây bệnh của vi khuẩn E coli phân lập được từ lợn con bị tiêu chảy nuôi tại 3 huyện tại Tỉnh Vĩnh Phúc Đề xuất phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy ở lợn con đạt hiệu quả cao 3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn... thấy hội chứng tiêu chảy của lợn là một hội chứng bệnh lý phức tạp ở đường tiêu hoá, do nhiều nguyên nhân, nhiều yếu tố tác động Trong phạm vi nghiên cứu của đề tài, chúng tôi xin trình bày vai trò gây bệnh của vi khuẩn E.coli ở lợn con trong thời gian bú sữa mẹ 1.2 Tình hình nghiên cứu về vi khuẩn E.coli gây bệnh tiêu chảy ở lợn 1.2.1 Tình hình nghiên cứu trong nước ở nước ta, bệnh tiêu chảy do vi khuẩn. .. trình đã chứng minh vai trò của vi khuẩn E coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con nuôi tại 3 huyện của tỉnh Vĩnh Phúc Kết quả nghiên cứu của đề tài là cơ sở khoa học cho các nghiên cứu tiếp theo, đồng thời bổ sung tài liệu tham khảo cho cán bộ thú y và người chăn nuôi Kết quả nghiên cứu đưa ra phác đồ điều trị có hiệu quả giúp cho thú y cơ sở các hộ chăn nuôi phòng trị bệnh tiêu chảy cho lợn, góp... trình nghiên cứu xác định được các kháng nguyên bám dính của E.coli như: F4 có ở E.coli gây bệnh tiêu chảy ở lợn con, F18 gây bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa, F5 có ở E.coli gây bệnh cho bê nghé, F41 có ở E.coli gây bệnh cho trẻ em (Nagy, 1999) [61] Lê Văn Tạo và cs (1996) [31] đã nghiên cứu về cấu trúc Fimbriae vai trò của K88 trong quá trình gây bệnh, về tổ hợp các yếu tố gây bệnh có trong một chủng E.coli. .. Tuy nhiên, trên địa bàn tỉnh Vĩnh Phúc, chưa có công trình nào nghiên cứu về bệnh tiêu chảy do E.coli gây ra ở lợn con và xây dựng các biện pháp phòng và điều trị có hiệu quả phù hợp với thực tế chăn nuôi của tỉnh Vĩnh Phúc 1.2.2 Tình hình nghiên cứu ở nước ngoài Tiêu chảy ở lợn con là căn bệnh phổ biến trên khắp thế giới, gây thiệt hại thường xuyên đối với tất cả các cơ sở chăn nuôi tập trung theo mọi... lệ lợn con mắc bệnh tiêu chảy theo các tháng trong năm 56 Bảng 3.6: Kết quả điều tra tỷ lệ lợn con mắc bệnh tiêu chảy theo kiểu chuồng nuôi 60 Bảng 3.7: Kết quả điều tra lợn con mắc bệnh tiêu chảy theo loại lợn 62 Bảng 3.8: Bệnh tích đại thể của lợn con mắc bệnh tiêu chảy tại 3 huyện của tỉnh Vĩnh Phúc 63 Bảng 3.9: Kết quả phân lập vi khuẩn E coli từ phân của lợn con. .. nhau Nhưng cho đến nay, bệnh tiêu chảy ở lợn con vẫn còn là bệnh gây thiệt hại lớn cho chăn nuôi lợn do tính chất phức tạp của mầm bệnh, với nhiều nguyên nhân và các yếu tố tác động Những nghiên cứu về bệnh do vi khuẩn E.coli gây ra như bệnh tiêu chảy và bệnh phù đầu ở lợn con, đã được các tác giả đã nghiên cứu ở một số tỉnh miền Bắc, đồng bằng sông Cửu Long, các tỉnh Đông Nam Bộ và đã có một số kết quả... nghiên cứu về E.coli và Samonella cho biết tỷ lệ nhiễm E.coli độc ở lợn bình thường là 14,66% và ở lợn tiêu chảy lên tới 33,84% Vũ Bình Minh, Cù Hữu Phú (1999) [16] khi nghiên cứu về E.coli và Samonella ở lợn tiêu chảy cho biết tỷ lệ phát hiện E.coli độc trong phân là 80% - 90% số mẫu xét nghiệm Ngoài vi khuẩn E.coli, một loại vi khuẩn gây bệnh tiêu chảy ở lợn cũng không kém phần quan trọng là vi khuẩn. .. và gây thiệt hại lớn về kinh tế Ở Vĩnh Phúc hội chứng tiêu chảy ở lọn con là một trong những nguyên nhân gây chết nhiều và điều trị ít hiệu quả nhất, là nỗi lo thường trực của người chăn nuôi lợn nái sinh sản Vì vậy, để có cơ sở khoa học cho vi c nghiên cứu, xây dựng biện pháp phòng và điều trị bệnh có hiệu quả, nhằm hạn chế những thiệt hại do vi khuẩn E.coli gây ra cho lợn con, chúng tôi tiến hành nghiên. .. chủ yếu gây vi m dạ dày- ruột và gây triệu chứng tiêu chảy đặc trưng ở lợn Các vi rút này tác động gây vi m ruột và gây rối loạn quá trình tiêu hoá, hấp thu của lợn và cuối cùng dẫn đến triệu chứng tiêu chảy Theo tài liệu của Bergeland (1980) (trích theo Đào Trọng Đạt 1996) [7] trong số những mầm bệnh thường gặp ở lợn trước và sau cai sữa bị bệnh tiêu chảy có rất nhiều loại vi rút: 20,9% lợn bệnh phân . lợn con, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài Nghiên cứu vai trò gây bệnh của vi khuẩn E. coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn con nuôi tại tỉnh Vĩnh Phúc và biện pháp phòng trị 2. Mục tiêu. triphosphate DNA Deoxyribonucleic acid EaggEC Enteroaggregative E. coli Escherichia coli EMB Eosin Methylene Blue Agar Ent Enterotoxin (Độc tố đường ruột) EPEC Enteropathogenic Escherichia coli. độc tố gây bệnh của vi khuẩn E. coli 26 1.5. Cơ chế gây bệnh của vi khuẩn E. coli 29 1.6. Bệnh tiêu chảy do E. coli ở lợn con 31 1.6.1. Triệu chứng 31 1.6.2. Bệnh tích 31 1.6.3. Điều trị 32