BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI HOÀNG THỊ THẾ NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY BA KÍCH (Morinda officianalis. How) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: TRỒNG TRỌT Mã số : 60.62.01 Người hướng dẫn khoa học: TS. NGUYỄN THỊ PHƯƠNG THẢO HÀ NỘI - 9/2012 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Kết quả nghiên cứu trong luận văn là kết quả lao ñộng của chính tác giả. Các số liệu và kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược ai công bố trong bất cứ công trình nào khác. Tôi xin cam ñoan rằng mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn này ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Hoàng Thị Thế Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii LỜI CẢM ƠN ðề tài tốt nghiệp: "Nghiên cứu nhân giống cây Ba kích (Morinda officianalis. How) bằng phương pháp nuôi cấy mô” ñược thực hiện từ tháng 7 năm 2011 ñến tháng 9 năm 2012. ðề tài hoàn thành nhờ sự cố gắng, nỗ lực của bản thân, sự hướng dẫn tận tình của TS. Nguyễn Thị Phương Thảo. Trong quá trình nghiên cứu, tác giả cũng nhận ñược những ý kiến chỉ bảo, ñóng góp của các thầy cô giáo Bộ môn Sinh lý thực vật - Khoa nông học, sự tạo ñiều kiện giúp ñỡ của Trung tâm Khoa học và sản xuất lâm nông nghiệp Quảng Ninh và các bè ñồng nghiệp. Nhân dịp này xin cho phép bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ñến TS. Nguyễn Thị Phương Thảo, các thầy cô giáo, Ban giám ñốc và Bộ môn nghiên cứu nuôi cấy mô Trung tâm Khoa học và sản xuất lâm nông nghiệp Quảng Ninh cùng các bè ñồng nghiệp - những người ñã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo, ñộng viên và ñóng góp ý kiến quý báu cho ñề tài này. Thiếu những sự ủng hộ ñó ñề tài chắc chắn không thể ñạt ñược như hiện hữu. Với kinh nghiệm và năng lực của bản thân, mặc dù ñã cố gắng hết mức, ñề tài chắc không thể tránh khỏi những thiếu sót nhất ñịnh. Tác giả rất mong ñược sự chỉ bảo của các thầy cô giáo, các bạn bè ñồng nghiệp và luôn coi ñó là sự tạo ñiều kiện, cơ hội ñể tác giả tiếp thu, học hỏi. Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 25 tháng 9 năm 2012 Tác giả luận văn Hoàng Thị Thế Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục các từ viết tắt vi Danh mục các bảng vii danh mục các hình ix 1 MỞ ðẦU 1 1 ðặt vấn ñề 1 2 Mục ñích, yêu cầu 3 2.1 Mục ñích 3 2.2 Yêu cầu 3 2 TỔNG QUAN VẤN ðỀ NGHIÊN CỨU 5 2.1 Giới thiệu về cây Ba kích. 5 2.2 Tình hình phát triển nguồn dược liệu và cây ba kích ở Việt Nam 8 2.3 Kỹ thuật nuôi cấy mô - tế bào. 11 2.4 Những nghiên cứu về nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy mô cây ba kích 18 3 ðỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 ðối tượng, vật liệu nghiên cứu. 21 3.2 Nội dung và phương pháp nghiên cứu 21 3.3 ðịa ñiểm và thời gian bố trí thí nghiệm 33 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 34 4.1 Giai ñoạn vào mẫu 34 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 4.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng trong thuỷ ngân clorua (HgCl2) 0,1% ñến khả năng khử trùng mẫu cấy. 34 4.1.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian khử trùng trong canxi hypoclorit Ca(HClO)2 10% ñến khả năng khử trùng mẫu cấy. 35 4.1.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của phương pháp khử trùng kép (kết hợp giữa HgCl 2 0,1% và Ca(HClO) 2 10%) ñến khả năng khử trùng mẫu cấy. 36 4.2 Giai ñoạn tái sinh chồi 38 4.2.1 Ảnh hưởng của tổ hợp KIN + BAP ñến khả năng tái sinh chồi từ mẫu cấy. 38 4.3 Giai ñoạn nhân nhanh 40 4.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của KIN ñến khả năng nhân nhanh và chất lượng chồi. 40 4.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của BAP ñến khả năng nhân nhanh và chất lượng chồi. 41 4.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp KIN và IBA ñến khả năng nhân nhanh và chất lượng chồi. 44 4.3.4 Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp KIN và NAA ñến khả năng nhân nhanh và chất lượng chồi. 45 4.3.5 Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp BAP và IBA ñến khả năng nhân nhanh và chất lượng chồi. 46 4.3.6 Nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp BAP và α -NAA ñến khả năng nhân nhanh chồi 47 4.3.7 Nghiên cứu ảnh hưởng của axit ascorbic ñến chất lượng chồi. 49 4.3.8 Nghiên cứu ảnh hưởng riboflavin (vitamin B2) ñến chất lượng chồi. 51 4.4 Giai ñoạn tạo cây hoàn chỉnh. 52 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v 4.4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của α-NAA tới khả năng ra rễ 53 4.4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của IBA ñến khả năng ra rễ của chồi 55 4.4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của than hoạt tính ñến chất lượng bộ rễ. 58 4.5 Giai ñoạn sau in vitro 60 4.5.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của tuổi cây mầm ra ngôi ñến tỷ lệ sống của cây con ngoài vườn ươm. 60 4.5.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của giá thể ñến tỷ lệ sống của cây con ngoài vườn ươm. 62 4.6 Sản xuất thử nghiệm, ñánh giá hiệu quả kỹ thuật, hiệu quả kinh tế. 64 4.6.1 Sản xuất thử nghiệm 64 4.6.2 Hiệu quả kỹ thuật 64 4.6.3 Hiệu quả kinh tế 64 5 KẾT LUẬN, ðỀ NGHỊ 67 5.1 Kết luận 67 5.2 ðề nghị 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 PHỤ LỤC 72 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT MS Murashige & Skoog, 1962 BAP 6-Bezyl amino purine KIN Kinetin (6 -furfurol amino purine) IBA Indole -3 -Butyric Acid α-NAA 1 -Naphthalene Acetic Acid CT Công thức ðC ðối chứng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 4.1 Ảnh hưởng của thời gian khử trùng trong HgCl 2 0,1% ñến khả năng khử trùng mẫu cấy 35 4.2 Ảnh hưởng của thời gian khử trùng trong Ca(HClO) 2 10% ñến khả năng khử trùng mẫu cấy 36 4.3 Ảnh hưởng của phương pháp khử trùng kép (kết hợp giữa HgCl 2 0,1% và Ca(HClO) 2 10%) ñến khả năng khử trùng mẫu cấy . 37 4.4 Ảnh hưởng của tổ hợp KIN + BAP ñến khả năng tái sinh chồi từ mẫu cấy 39 4.5 Ảnh hưởng của KIN ñến khả năng nhân nhanh và chất lượng chồi 41 4.6 Ảnh hưởng của BAP ñến hệ số nhân chồi 42 4.7 Ảnh hưởng của tổ hợp KIN + IBA ñến khả năng nhân nhanh và chất lượng chồi. 44 4.8 Ảnh hưởng của tổ hợp KIN + NAA ñến hệ số nhân nhanh và chất lượng chồi. 45 4.9 Ảnh hưởng của tổ hợp BAP + IBA ñến hệ số nhân nhanh và chất lượng chồi. 46 4.10 Ảnh hưởng của tổ hợp BAP và α -NAA ñến khả năng nhân nhanh chồi 48 4.11 Ảnh hưởng của axit ascorbic tới chất lượng chồi 50 4.12 Ảnh hưởng của riboflavin (vitamin B2) ñến chất lượng chồi 51 4.13 Ảnh hưởng của α-NAA tới khả năng ra rễ 54 4.14 Ảnh hưởng của IBA tới khả năng ra rễ 56 4.15 Ảnh hưởng của than hoạt tính tới chất lượng rễ 58 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… viii 4.16 Ảnh hưởng của tuổi cây mầm khi ra ngôi ñến khả năng sống sót và chất lượng của cây khi ñưa ra vườn ươm 61 4.17 Ảnh hưởng của giá thể ñến khă năng sống sót và sinh trưởng của cây ba kích ngoài vườn ươm sau 60 ngày 63 4.18 Tổng chi phí, giá thành sản phẩm cây nuôi cấy mô trước khi áp dụng kết quả nghiên cứu 64 4.19 Tổng chi phí, giá thành sản phẩm cây nuôi cấy mô khi áp dụng kết quả nghiên cứu 65 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ix DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình Trang 4.1 Chồi ba kích tái sinh từ mẫu cấy trên môi trường MS + 0,25 mg/l KIN +1,0 mg/l BAP sau 30 ngày 39 4.2 Cụm chồi ba kích trên môi trường MS + 3,0 mg/l BAP sau 45 ngày 43 4.3 Chồi trên môi trường MS + 3,0 mg/l BAP + 0,4 mg/l IBA sau 45 ngày nuôi cấy 47 4.4 Chồi ba kích trên môi trường MS + 3,0 mg/l BAP + 0,4 mg/l IBA + 10,0 mg/l riboflavin sau 45 ngày. 51 4.5 Rễ ba kích trên môi trường 1/2MS + 0,4 mg/l α-NAA sau 30 ngày cấy 55 4.6 Rễ ba kích trên môi trường 1/2MS + 0,2 mg/l IBA sau 30 ngày cấy 57 4.7 Rễ ba kích trên môi trường ½ MS + 0,2 mg/l IBA + 0,4 g/l than hoạt tính sau 30 ngày cấy 59 4.8 Cây ba kích in vitro (35 ngày tuổi) ra ngôi 61 [...]... phát tri n cây ba kích - cây dư c li u quý, ti n t i cung c p cho ngư i dân ngu n gi ng ch t lư ng cao và n ñ nh, tôi ti n hành ñ tài: "Nghiên c u nhân gi ng cây ba kích (Morinda officianalis How) b ng phương pháp nuôi c y mô" 2 M c ñích, yêu c u 2.1 M c ñích Xác ñ nh ñư c m t s y u t nh hư ng ñ n quá trình nhân gi ng cây ba kích (Morinda officianalis How) trên sơ s ñó ñ xu t quy trình k thu t nhân gi... 1mg/l BAP có hi u qu cho vi c tái sinh ch i, trên môi trư ng này 97,5% m u t o ch i [24] - Chen Wei XuLi, Zhiying Li Kelie (2006) nghiên c u nhân nhanh cây ba kích (Morinda officinalis How) k t lu n: môi trư ng nhân nhanh hi u qu là MS b sung 1,0 mg/l BA và 0,2 mg/l IBA v i h s nhân ch i ñ t 6 l n sau 50 ngày nuôi c y [21] - Huang Ning-Zhen và c ng s (2007) nghiên c u k thu t nhân gi ng cây ba kích (Morinda. .. soát, không có xu t x rõ ràng, giá thành l i khá cao Nh ng nghiên c u nhân gi ng ba kích b ng phương pháp nuôi c y nuôi c y mô trong nư c còn khá h n ch : - ð ng Ng c Hùng (2009) bư c ñ u nghiên c u môi trư ng nuôi c y in vitro cho cây ba kích ñã k t lu n môi trư ng nuôi c y thích h p là môi trư ng MS v i t l m u phát sinh ch i là 62% sau 60 ngày nuôi c y, s ch i trung bình trên m u ñ t 1,14 ch i, chi... 30 ngày nuôi c y [15] Tuy ñã ñư c m t s tác gi ñ c p ñ n, song các nghiên c u v nuôi c y mô cây ba kích ch y u quy mô phòng thí nghi m, ñ ng d ng vào s n xu t c n ph i có nh ng nghiên c u ki m ch ng, hoàn thi n Trên cơ s t ng h p nh ng thông tin v các công trình nghiên c u nhân gi ng cây ba kích b ng phương pháp nuôi c y mô trong và ngoài nư c, ñ tài chú tr ng ñ n ngu n tài li u nh ng k t qu nghiên. .. li u V nghiên c u nuôi c y mô cây ba kích ñã ñư c nhi u tác gi ñ c p ñ n: - Nghiên c u tái sinh cây ba kích (Morinda officinalis How) b ng phương pháp nuôi c y mô He Hong và c ng s (2000) cho r ng: v i v t li u là ño n ch i ng n khi kh trùng b ng HgCl2 0,1% t 10 ñ n 15 phút cho k t qu Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 18 32,8% m u ñ t Môi trư ng nuôi c... - Võ Châu Tu n, Huỳnh Minh Tư (2010) nghiên c u nhân gi ng in vitro cây ba kích (Morinda officianalis How) k t lu n: Môi trư ng cơ b n MS b sung 3,5 mg/l BAP và 0,2 mg/l IBA thích h p cho nhân nhanh ch i in vitro cây ba kích, s ch i trung bình trên m u ñ t 15 ch i, chi u cao trung bình ch i ñ t 1,97 cm sau 60 ngày nuôi c y Môi trư ng cơ b n MS b sung 0,2 mg/l IBA Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i –... n khác như v cây, lá non, thân m m (hypocotyl) v.v Song nuôi c y mô cho ch i bên và ch i b t ñ nh là nh ng phương pháp chính ñư c dùng trong nhân gi ng cây r ng [12] Ưu ñi m chính c a nuôi c y mô là cây mô ñư c tr hoá cao ñ và có r gi ng như cây m c t h t, th m chí không có s khác bi t ñáng k so v i cây m c t h t M t ưu ñi m khác c a nhân gi ng b ng nuôi c y mô là có h s nhân cao hơn nhân gi ng hom,... I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 3.1 ð i tư ng, v t li u nghiên c u 3.1.1 ð i tư ng nghiên c u Cây ba kích có ngu n g c t huy n Hoành B t nh Qu ng Ninh 3.1.2 V t li u nghiên c u - Là ch i ñ nh ho c ch i nách mang m t ng c a cây ba kích 1 năm tu i ñư c l y v tr ng t i vư n ươm ph c v vào m u - M u tái sinh t v t li u nhân gi ng ban ñ u ph c v nghiên c u nhân nhanh và t o cây hoàn ch nh - Cây con ra... o ra các cây s ch b nh virus nh m ph c tráng gi ng cây tr ng 2.4 Nh ng nghiên c u v nhân gi ng b ng phương pháp nuôi c y mô cây ba kích 2.4.1 Trên th gi i Ba kích phân b t nhiên các nư c ðông Nam Á, ch y u t p trung Lào, Trung Qu c, Vi t Nam Trung Qu c là nư c có n n ðông dư c phát tri n t r t lâu ñ i, ba kích là m t trong nhi u lo i dư c li u ñư c quan tâm khai thác và phát tri n t k thu t nhân gi... cây ba kích (Morinda officinalis How) b ng nuôi c y mô, các tác gi k t lu n: t o r cho cây ba kích in vitro hi u qu trên môi trư ng 1/2MS b sung 0,4-0,8 mg/l IBA v i t l ra r ñ t 100%, cây ra ngôi ñư c c y trên cơ ch t là cát ho c ñ t t l s ng ñ t 90% [27] 2.4.2 Vi t Nam Ngu n gi ng cây ba kích hi n nay ch y u ñư c nhân gi ng b ng phương pháp truy n th ng giâm cành t cây m ñ l i nh p n i gi ng (như . giống bằng phương pháp nuôi cấy mô cây ba kích 18 3 ðỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 ðối tượng, vật liệu nghiên cứu. 21 3.2 Nội dung và phương pháp nghiên cứu. …………………… ii LỜI CẢM ƠN ðề tài tốt nghiệp: " ;Nghiên cứu nhân giống cây Ba kích (Morinda officianalis. How) bằng phương pháp nuôi cấy mô ñược thực hiện từ tháng 7 năm 2011 ñến tháng 9. HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI HOÀNG THỊ THẾ NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY BA KÍCH (Morinda officianalis. How) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: