Cần Thơ,2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA SƯ PHẠM GÓP PHẦN KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ CÔ LẬP MỘT SỐ CHẤT TRONG CÂY CỎ MỰC (ECLIPTA PROSTRATA L. ), HỌ CÚC (ASTERACEAE) Luận văn Tốt nghiệp Ngành: SƯ PHẠM HÓA HỌC GV hướng dẫn: Sinh viên: Nguyễn Hửu Tài ThS. Nguyễn Văn Hùng Lớp: Sư phạm Hoá học K35 Mã số SV: 2091999 GVHD: Ths. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài Luận văn tốt nghiệp i LỜI CẢM ƠN  Qua tám tháng thực hiện đề tài luận văn tốt nghiệp “Góp phần khảo sát thành phần hoá học và cô lập một số chất trong cây cỏ mực (Eclipta prostrate L.), họ cúc (Asteraceae)”, ngoài sự nỗ lực, phấn đấu của bản thân, tôi đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ tận tình của quý thầy cô và bạn bè. Vì thế, trong trang đầu tiên này, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất đến:  Thầy Nguyễn Văn Hùng đã theo sát tôi trong suốt quá trình nghiên cứu, học tập, luôn đôn đốc, động viên và chỉ dạy tận tình, truyền đạt cho tôi nhiều kinh nghiệm, kiến thức hữu ích trong việc nghiên cứu.  Thầy Ngô Quốc Luân, cô Lê Thị Lộc, cô Thái Thị Tuyết Nhung và các thầy cô khác trong Bộ môn đã quan tâm, giúp đỡ và truyền đạt những kiến thức thức quý báu trong suốt thời gian học tập tại trường để tôi có thể thực hiện tốt đề tài.  Cô Nguyễn Thị Thu Thủy - Trưởng Bộ môn Hóa Học, Khoa Sư Phạm, Trường Đại học Cần Thơ đã quan tâm, tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ không chỉ riêng cá nhân tôi mà đối với tất cả các bạn sinh viên thực hiện đề tài.  Cha mẹ, gia đình đã ủng hộ, động viên cho tôi về tinh thần và vật chất giúp tôi hoàn thành luận văn tốt nghiệp.  Tập thể lớp Sư phạm Hóa học khóa 35 – những người đã luôn ở bên tôi, giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi để cho tôi được học tập, nghiên cứu, hoàn thành tốt luận văn. Xin chân thành cảm ơn! GVHD: Ths. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài Luận văn tốt nghiệp ii NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN  GVHD: Ths. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài Luận văn tốt nghiệp iii NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN  GVHD: Ths. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài Luận văn tốt nghiệp iv MỤC LỤC  LỜI CẢM ƠN i NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ii NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN iii MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC CÁC BẢNG, SƠ ĐỒ ix DANH MỤC CÁC HÌNH x TÓM TẮT NỘI DUNG ĐỀ TÀI xi LỜI MỞ ĐẦU xii Phần một: TỔNG QUAN I. TỔNG QUAN VỀ CÂY CỎ MỰC 1 I.1. Đặc điểm cây cỏ mực [ 1, 3, 4, 13, 14, 16] 1 I.2. Phân bố và sinh thái [3] 3 I.3. Tác dụng dược lý của cỏ mực [3] 4 I.3.1. Y học dân gian 4 I.3.1.1. Y học dân gian Việt Nam 4 I.3.1.2. Y học dân gian thế giới 6 I.3.1.2. Y học và hóa sinh hiện đại 8 II. CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ MỰC 10 II.1. Các công trình nghiên cứu tại Việt Nam 10 II.2. Các công trình nghiên cứu tiêu biểu trên thế giới 11 II.2.1. Thành phần hóa học của cây cỏ mực [3,18,22,30,31,32] 11 II.2.2. Các hợp chất tiêu biểu đã được cô lập từ cỏ mực 12 GVHD: Ths. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài Luận văn tốt nghiệp v Phần hai: THỰC NGHIỆM I. DỤNG CỤ - HÓA CHẤT 19 I.1. Dụng cụ 19 I.2. Hóa chất 20 II. NGUYÊN LIỆU 20 II.1. Quá trình thu hái và xử lí nguyên liệu 20 II.1.1. Thu hái nguyên liệu 20 II.1.2. Xử lí nguyên liệu 20 II.1.3. Xác định độ ẩm nguyên liệu 20 III. QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM 22 III.1. Sơ đồ điều chế cao Etyl acetat 22 III.2. Các bước tiến hành 23 IV. ĐỊNH TÍNH CÁC NHÓM HỢP CHẤT TRONG CỎ MỰC 23 IV.1. Xác định sự hiện diện của steroid 23 IV.2. Xác định sự hiện diện của flavonoid 24 IV.3. Xác định sự hiện diện của alkaloid 24 IV.4. Xác định sự hiện diện của saponin 25 IV.5. Xác định sự hiện diện của tamin 26 IV.6. Xác định sự hiện diện của glycosyde 26 IV.7. Xác định sự hiện diện của coumarine 27 IV.8. Kết quả định tính 28 V. QUÁ TRÌNH CÔ LẬP VÀ TINH CHẾ HỢP CHẤT TRÊN CAO ETYL ACETAT . 29 V.1. Quá trình điều chế cao PE 29 V.2. Quá trình điều chế cao Etyl acetat 29 V.3. Chọn hệ dung môi cho quá trình giải ly cột 29 V.4. Cô lập và tinh chế hợp chất từ cao Etyl acetat 30 V.5. Xác định các tính chất vật lí, cấu trúc của hợp chất và nhận danh 32 GVHD: Ths. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài Luận văn tốt nghiệp vi Phần ba: KẾT LUẬN I. KẾT LUẬN 38 II. KIẾN NGHỊ 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 PHỤ LỤC Phụ lục 1. Phổ IR của hợp chất EPT01 PL1 Phụ lục 2a. Phổ 1 H-NMR của hợp chất EPT01 PL2 Phụ lục 2b. Phổ 1 H-NMR của hợp chất EPT01 PL3 Phụ lục 2c. Phổ 1 H-NMR của hợp chất EPT01 PL4 Phụ lục 3. Phổ 13 C-NMR của hợp chất EPT01 PL5 Phụ lục 3a. Phổ 13 C- NMR mở rộng của hợp chất EPT01 PL6 Phụ lục 3b. Phổ 13 C- NMR mở rộng của hợp chất EPT01 PL7 Phụ lục 4a. Phổ DEPT kết hợp phổ 13 C- NMR của hợp chất EPT01 PL8 Phụ lục 4b. Phổ DEPT kết hợp phổ 13 C- NMR của hợp chất EPT01 PL9 Phụ lục 5. Một số hình ảnh minh họa thành phần hóa học trong cây Cỏ mực PL10 GVHD: Ths. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài Luận văn tốt nghiệp vii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT  δ : Chemical shift (Độ dịch chuyển hóa học). ν : Tần số dao động (Số sóng). λ max : Bước sóng hấp thu cực đại. µM : micromol/lít. 1 H-NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance (Phổ proton). 13 C-NMR : Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance (Phổ 13 C). Ace : Acetone. CDCl 3 : CHCl 3 đã thế hydro (H) bằng deuteri (D). MeOD : MeOH đã thế hydro (H) bằng deuteri (D). CHCl 3 : Chloroform. d : Doublet DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer. EtOAc : Ethyl acetate. g : Gam. J : Hằng số ghép spin. m : Multiplet (Mũi đa). mg : Miligam. MeOH : Methanol. MHz : Mega Hertz. NMR : Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân). PE : Petroleum Ether (Ether dầu hỏa). ppm : Part per million (Phần tỉ). R f : Retention factor. GVHD: Ths. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài Luận văn tốt nghiệp viii t : Trilet (Mũi ba) s : Singlet (Mũi đơn). Stt : Số thứ tự. TLC : Thin layer chromatography (Sắc ký bản mỏng). GVHD: Ths. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài Luận văn tốt nghiệp ix DANH MỤC CÁC BẢNG, SƠ ĐỒ  Bảng 1. Các dụng cụ sử dụng. Bảng 2. Các hóa chất sử dụng. Bảng 3. Xác định độ ẩm của nguyên liệu. Bảng 4. Kết quả định tính thành phần hóa học cây Cỏ mực. Bảng 5. Kết quả sắc ký quá trình sắc ký cột. Bảng 6. Kết quả đo nhiệt độ nóng chảy của hợp chất EPT01. Bảng 7. Phổ hồng ngoại của hợp chất EPT01. Bảng 8. Phổ 13 C–NMR của hợp chất EPT01. Bảng 9. So sánh phổ IR của EPT01 với 3-O-  -D-glucosyl-brassicasterol. Bảng 10. So sánh số liệu phổ NMR của hợp chất EPT01 với3-O-  -D-glucosyl- brassicasterol. Sở đồ 1. Quy trình thực nghiệm. [...]... Đã có rất nhiều công trình nghiên cứu về cây Cỏ mực ở các nước như: Ấn Độ, Trung Quốc, Pakistan, Thái Lan, Banglades,…Còn ở Việt Nam thì có rất ít công trình nghiên cứu Nhằm góp phần thêm cho những nghiên cứu về cây Cỏ mực Trong luận văn này, chúng tôi tiến hành khảo sát thành phần hóa học, đã cô l p và nhận danh cấu trúc một hợp chất tinh khiết từ cây Cỏ mực đó l 3-O-  -D-glucosyl-brassicasterol... phân l p được một flavone và một acid triterpenoic l 5-hyroxyl-7,8-dimethoxyflavone và 3β,16α-Dihyroxyolean-12-ene-28-oic acid (Echinocystic acid) Tác giả Nguyễn Thị Thơi bằng các phương pháp sắc ký cột gradient đã phân l p được 4 hợp chất β-sitosterol, metyl gallat, eclalbasaponin II và hesperidin từ các phần chiết n-hexan,điclometan và etyl acetat và 3 chất eclalbasaponin I, norwedelolacton và hesperidin... từ phần chiết nước II.2 Các công trình nghiên cứu tiêu biểu trên thế giới II.2.1 Thành phần hóa học của cây cỏ mực [3,18,22,30,31,32] Hiện nay chưa xác định được hết các hợp chất có trong cây cỏ mực Nhưng các công trình nghiên cứu trên thế giới đã cô l p được nhiều hợp chất như: - Các glycosides triterpene và saponins: 13 glycosides loại oleanane (Eclalbasaponins I→XIII), Echinocystic acid Alpha và. .. Eclalbatin, Eclalbasaponins B, C, D - Các flavonoids và iso Flavonoid: L và đọt l chứa Apigenin, Luteonin, và các dẫn xuất glucosides Toàn cây chứa các chất như: Wedeolactone, Demethyl Wedeolactone, Isodemethyl Wedeolactone, Quercetin, Orobol - Sesquiterpene lactone: Columbin - Các Sterols như: β-sitosterol, Stigmasterol và stigmasterol-3-O-glucoside - Các dẫn xuất của thiophene: α-terthiennyl; cliptal... Wedelolacton,stigmasterol, poriferasterol, 3-O-β-D-Glucopyranosyl, acid echinocystic Và đã thử nghiệm tính kháng khuẩn ở các hợp chất stigmasterol, poriferasterol, 3-O-βD-Glucopyranosyl Tác giả Trần Vũ Thiên từ cao EtOAc đã phân l p và nhận danh được một hợp chất coumarin và một triterpene đó l Wedeolactone và 3β-O-β-D-Glucopyranosyl-16αhyroxyl olean-12-ene-28-oic acid (Eclalbasaponin II) Từ cao CHCl3, đã nhận danh và. .. -D-glucosyl-brassicasterol xii Luận văn tốt nghiệp Phần một TỔNG QUAN GVHD: Ths Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài I TỔNG QUAN VỀ CÂY CỎ MỰC I.1 Đặc điểm cây cỏ mực [ 1, 3, 4, 13, 14, 16] Tên khoa học: Eclipta prostrata (L. ) hay [Eclipta alba (L. ) Hassk.] Giới: Plantae Ngành: Magnoliophyta L p: Magnoliopsida Bộ: Asterales Họ: Asteraceae Chi: Eclipta Loài: E.alba Tên khác: Cỏ nhọ nồi Cỏ mực, hạn liên thảo, l trường,... của khoa học, con người đã đi sâu hơn vào nghiên cứu các loài cây cỏ chữa bệnh và đã tìm ra được rất nhiều dược phẩm có giá trị cho y học Trong các loài cây Cỏ chữa bệnh truyền thống trên không thể không nhắc đến cây Cỏ mực Cỏ mực l một cây thuốc nam rất thông dụng, mọc hoang hầu như khắp nơi, hiện l một dược liệu đang được nghiên cứu về khả năng bảo vệ gan và trừ được nọc độc của một số loài rắn... và cao nước của cây cỏ mực trên đường huyết và đưa đến kết quả l cao chiếc cồn 450 của cỏ mực có tác dụng hạ đường huyết trên mô hình gây quá tải glucose, với thời gian có tác dụng l 45 phút sau khi uống và liều có tác dụng l 0,5 g/kg thể trọng - 10 - Luận văn tốt nghiệp GVHD: Ths Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài Tác giả Võ Thanh Thúy đã xác định một số hợp chất trong cây Cỏ mực như: Wedelolacton,stigmasterol,... 5-hydroxymethyl-(2,2’:5’,2’’)-terthienyl Angelate; 5-hydroxymethyl-(2,2’:5’,2’’)-terthienyl Acetate; 5-formyl-(2,2’:5’,2’’)-terthiophene; 5´-senecioyloxymethylen-2-(4-isovaleroxybut-3-ynyl) dithiophen; 5´-tigloyloxymethylen -2-(4-isovaleroxybut-3-ynyl) dithiophen; 5´-tigloyloxymethylen -2-(4-isovaleroxybut-1-ynyl) dithiophen; 5´-senecioyloxymethylen-2-(4-isovaleroxybut-1-ynyl) dithiophen; 5´-isovaleroyloxymethylen-2-(4-isovaleroxybut-1-ynyl)... 1 Cây Cỏ mực Hình 2 Thân Cỏ mực Hình 3 L Cỏ mực Hình 4 Hoa Cỏ mực Hình 5 Quả Cỏ mực Hình 6 Sắc kí l p mỏng chọn hệ dung môi giải ly cột Hình 7 Chất EPT01 Hình 8 Sắc kí l p mỏng trên 3 hệ dung môi Hình 9 TLC của EPT01 CLF : MeOH (8:2) Hình 10 3-O-  -D-glucosyl-brassicasterol x Luận văn tốt nghiệp GVHD: Ths Nguyễn Văn Hùng SVTH: Nguyễn Hửu Tài TÓM TẮT NỘI DUNG ĐỀ TÀI  -Cây Cỏ mực Eclipta . TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA SƯ PHẠM GÓP PHẦN KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ CÔ L P MỘT SỐ CHẤT TRONG CÂY CỎ MỰC (ECLIPTA PROSTRATA L. ), HỌ CÚC (ASTERACEAE) . Tài Luận văn tốt nghiệp i L I CẢM ƠN  Qua tám tháng thực hiện đề tài luận văn tốt nghiệp “Góp phần khảo sát thành phần hoá học và cô l p một số chất trong cây cỏ mực (Eclipta. Việt Nam thì có rất ít công trình nghiên cứu. Nhằm góp phần thêm cho những nghiên cứu về cây Cỏ mực. Trong luận văn này, chúng tôi tiến hành khảo sát thành phần hóa học, đã cô l p và nhận danh