BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI        LÊ QUANG HUY NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT VACXIN VÔ HOẠT TỤ HUYẾT TRÙNG GIA CẦM BẰNG CÔNG NGHỆ LÊN MEN SỤC KHÍ TẠI CÔNG TY TRÁCH NHIỆM HỮU HẠN DƯỢC VÀ VẬT TƯ THÚ Y HANVET LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI        LÊ QUANG HUY NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT VACXIN VÔ HOẠT TỤ HUYẾT TRÙNG GIA CẦM BẰNG CÔNG NGHỆ LÊN MEN SỤC KHÍ TẠI CÔNG TY TRÁCH NHIỆM HỮU HẠN DƯỢC VÀ VẬT TƯ THÚ Y HANVET CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà SỐ: 60.64.0101 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. BÙI TRẦN ANH ðÀO HÀ NỘI - 2013 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các kết quả, số liệu nêu trong bản luận văn này là hoàn toàn trung thực và chưa ñược bảo vệ ở một học vị nào khác. Tôi cam ñoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñược chỉ rõ nguồn gốc. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành luận văn này, ngoài sự cố gắng của bản thân tôi còn nhận ñược sự giúp ñỡ tận tình của nhiều cá nhân và tập thể. Nhân dịp này cho phép tôi ñược bày tỏ lòng biết ơn chân thành nhất tới: TS. Bùi Trần Anh ðào – Cán bộ giảng dạy bộ môn bệnh lý, khoa Thú y, trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội, thầy ñã trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo tận tình cho tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn này. Các thầy cô giáo trong khoa Thú y, trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội. Trung tâm nghiên cứu và sản xuất sinh phẩm, công ty Hanvet ñã tạo mọi ñiều kiện thuận lợi giúp ñỡ tôi trong quá trình học tập và nghiên cứu. Tôi xin cảm ơn tới gia ñình, bạn bè và ñồng nghiệp ñã giúp ñỡ, ñộng viên tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn tốt nghiệp. Hà Nội, Ngày 09 tháng 09 năm 2013 Tác giả Lê Quang Huy Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii Phần I. MỞ ðẦU 1 1.1. ðặt vấn ñề 1 1.2. Mục ñích của ñề tài 2 1.3. Ý nghĩa của ñề tài 2 Phần II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1. Vi khuẩn Pasteurella multocida và bệnh Tụ huyết trùng gia cầm 3 2.1.1. Hình thái và tính chất bắt màu 3 2.1.2. ðặc tính nuôi cấy 3 2.1.4. Kháng nguyên của vi khuẩn Pasteurella multocida 6 2.1.5. Bệnh Tụ huyết trùng gia cầm 8 2.2. Một số khái niệm cơ bản về vacxin 15 2.2.1. Khái niệm vacxin 15 2.2.2. ðặc tính cơ bản của vacxin 15 2.2.3. Thành phần của vacxin 17 2.2.4. Yêu cầu của một vacxin 21 2.2.5. Phân loại vacxin 22 2.3. Một số hiểu biết về miễn dịch học thú y 29 2.3.1. Khái niệm miễn dịch 29 2.3.2. Phân loại miễn dịch 30 2.4. Giới thiệu công nghệ lên men sục khí 33 Phần III. ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 3.1. ðối tượng nghiên cứu 35 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv 3.2. Nội dung nghiên cứu 35 3.2.1. Xác ñịnh môi trường thạch dùng ñể ñếm số lượng vi khuẩn 35 3.2.2. Khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng ñến sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida trong ñiều kiện nuôi lắc (nhân giống cấp I) 35 3.2.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của áp suất bề mặt, tốc ñộ khuấy ñến sự phát triển của vi khuẩn trong quá trình lên men (nhân giống cấp II, sản xuất) 35 3.2.4. Xác ñịnh nồng ñộ formol vô hoạt canh trùng 35 3.2.5. Sản xuất kháng nguyên Tụ huyết trùng gia cầm 35 3.2.6. Hóa nghiệm keo phèn 35 3.2.7. Phối trộn vacxin 35 3.2.8. Kiểm nghiệm vacxin 35 3.2.9. ðánh giá chất lượng vacxin trên thực ñịa 36 3.3. Thời gian và ñịa ñiểm nghiên cứu 36 3.3.1. Thời gian nghiên cứu 36 3.3.2. ðịa ñiểm nghiên cứu 36 3.4. Nguyên liệu nghiên cứu 36 3.5. Phương pháp nghiên cứu 37 3.5.1. Phương pháp chọn giống vi khuẩn cấy giống cấp I 38 3.5.2. Phương pháp xác ñịnh số lượng vi khuẩn 38 3.5.3. Phương pháp nhân giống cấp I 39 3.5.4. Phương pháp nhân giống cấp II và nhân giống sản xuất vi khuẩn bằng công nghệ lên men sục khí 39 3.5.5. Phương pháp chế tạo keo phèn 42 3.5.6. Phương pháp phối trộn, ra chai vacxin 43 3.5.7. Phương pháp kiểm nghiệm vacxin 44 3.5.8. Phương pháp xử lý số liệu 46 Phần IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 47 4.1. Xác ñịnh môi trường thạch dùng ñể ñếm số lượng vi khuẩn Pasteurella multocida 47 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… v 4.2. Khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng ñến sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida trong ñiều kiện nuôi lắc 49 4.2.1. Ảnh hưởng của tốc ñộ lắc ñến sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida 49 4.2.2. Ảnh hưởng của nồng ñộ huyết thanh ñến sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida 51 4.2.3. Ảnh hưởng của nồng ñộ ñường saccharose ñến sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida 53 4.2.4. Phối hợp các yếu tố ñể nâng cao hiệu quả nuôi cấy vi khuẩn Pasteurella multocida 55 4.3. Khảo sát ảnh hưởng của tốc ñộ khuấy, áp suất bề mặt ñến sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida trong ñiều kiện lên men 56 4.4. Xác ñịnh tỷ lệ formol vô hoạt canh trùng 57 4.5. Sản xuất kháng nguyên Tụ huyết trùng gia cầm 58 4.6. Hóa nghiệm các chỉ tiêu keo phèn 61 4.7. Phối trộn vacxin 61 4.8. Kiểm nghiệm vacxin Tụ huyết trùng gia cầm 62 4.8.1. Kết quả kiểm tra vô trùng 62 4.8.2. Kết quả kiểm tra an toàn 63 4.8.3. Kết quả kiểm tra hiệu lực 64 4.9. ðánh giá chất lượng vacxin trên thực ñịa 65 4.9.1. Kết quả kiểm tra an toàn trên thực ñịa 65 4.9.2. Kết quả kiểm tra hiệu lực trên thực ñịa 65 Phần V. KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 67 5.1. Kết luận 68 5.2. ðề nghị 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1. Kết quả xác ñịnh môi trường thạch dùng ñể ñếm số lượng vi khuẩn Pasteurella multocida 47 Bảng 4.2. Ảnh hưởng của tốc ñộ lắc ñến sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida 49 Bảng 4.3. Ảnh hưởng của nồng ñộ huyết thanh ñến sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida 51 Bảng 4.4. Ảnh hưởng của nồng ñộ ñường saccharose tới sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida 53 Bảng 4.5. Phối hợp các yếu tố ñể nâng cao hiệu quả nuôi cấy vi khuẩn Pasteurella multocida 55 Bảng 4.6. Ảnh hưởng của tốc ñộ khuấy và áp suất bề mặt ñến sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida 56 Bảng 4.7. Xác ñịnh tỷ lệ formol vô hoạt canh trùng Tụ huyết trùng gia cầm 58 Bảng 4.8. Sản xuất kháng nguyên Tụ huyết trùng gia cầm 60 Bảng 4.9. Kết quả hóa nghiệm các chỉ tiêu keo phèn 61 Bảng 4.10. Kết quả phối trộn vacxin 62 Bảng 4.11. Kết quả kiểm tra vô trùng 5 lô vacxin 62 Bảng 4.12. Kết quả kiểm tra an toàn vacxin Tụ huyết trùng gia cầm 63 Bảng 4.13. Kết quả kiểm tra hiệu lực vacxin Tụ huyết trùng gia cầm 64 Bảng 4.14. Kết quả kiểm tra an toàn trên thực ñịa 65 Bảng 4.15. Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin trên thực ñịa 66 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC HÌNH Hình 3.1. Hệ thống lên men tại công ty Hanvet 41 Hình 4.1. Sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida trên môi trường thạch NA (trái) và BA (phải) bổ sung 8% máu bò. 48 Hình 4.2. Ảnh hưởng của tốc ñộ lắc ñến sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida 50 Hình 4.3. Ảnh hưởng của nồng ñộ huyết thanh ñến sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida 52 Hình 4.4. Ảnh hưởng của nồng ñộ ñường saccharose tới sự phát triển của vi khuẩn Pasteurella multocida 54 Hình 4.5. Gà chết do Tụ huyết trùng 67 Hình 4.6. Mào, tích thâm 67 Hình 4.7. Xoang bao tim tích nước 67 Hình 4.8. Xuất huyết mỡ vành tim 67 Hình 4.9. Hoại tử ñinh ghim trên bề mặt gan 67 Hình 4.10. Phổi tụ máu 67 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… viii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BHI Brain Heart Infusion CFU Colony forming unit (ñơn vị hình thành khuẩn lạc) HLA Human leucocyte antigen Kháng nguyên bạch cầu ở người MHC Major Histocompatibility Complex Phức hợp tương ñồng tổ chức chính MLD Minimum Lethal Dose (liều gây chết tối thiểu) Rpm Rotation per minute (vòng/phút) TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam THT Tụ huyết trùng TK Thuần khiết VK Vi khuẩn [...]... ñang nghiên c u nhi u lo i vacxin quan tr ng cho gia súc, gia c m Bên c nh ñó, trung tâm v n nghiên c u s n su t và nâng cao ch t lư ng nhi u lo i vacxin truy n th ng, trong ñó có vacxin vô ho t T huy t trùng gia c m Xu t phát t th c ti n trên, chúng tôi ti n hành th c hi n ñ tài Nghiên c u s n xu t vacxin vô ho t T huy t trùng gia c m b ng công ngh men s c khí t i công ty trách nhi m h u h n dư c và. .. h n dư c và v t tư thú y Hanvet 1.2 M c ñích c a ñ tài Nghiên c u m t s y u t nh hư ng ñ n s phát tri n c a vi khu n Pasteurella multocida trong quá trình s n xu t vacxin X y d ng quy trình s n xu t vacxin vô ho t T huy t trùng gia c m b ng công ngh lên men s c khí 1.3 Ý nghĩa c a ñ tài Áp d ng công ngh lên men s c khí vào s n xu t vacxin Nâng cao ch t lư ng, h giá thành s n ph m vacxin giúp cho ngư... cho gia c m Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 13 nuôi th t và c n ch ñ nh trư c khi gi t th t 3 – 5 ng y (Nguy n Vĩnh Phư c, 1978) Phòng b nh b ng vacxin: Hi n nay có m t s lo i vacxin T huy t trùng vô ho t ñ phòng b nh cho gia c m như vacxin T huy t trùng gia c m vô ho t có keo phèn, vacxin T huy t trùng gia c m vô ho t nhũ hóa, vacxin T huy t trùng. .. i vacxin 2.2.5.1 Vacxin vô ho t (inactivated vaccines) Vacxin vô ho t là các vi sinh v t, trư c ñó là cư ng ñ c, ñã ñư c gi t ch t b ng hóa ch t ho c b ng nhi t Kháng nguyên ñ ch t o vacxin lo i n y thư ng là toàn thân virus hay vi khu n M t s lo i vacxin ch t thư ng dùng trong thú y: T huy t trùng gia c m, T huy t trùng l n, T huy t trùng trâu bò, l m m long móng, cúm gia c m H u h t các vacxin n y. .. c gia, t l ch t t khi m i n cho ñ n lúc trư ng thành c a gà th rông là 47%; chi phí thu c thú y tr b nh lên ñ n 10 – 12% giá thành Công ty trách nhi m h u h n dư c và v t tư thú y Hanvet là m t trong nh ng công ty thu c thú y l n trong nư c v i nhi u s n ph m ñư c ưa chu ng trên th trư ng như KTE Hi, KTG, KTV… V i ñ i ngũ chuyên gia giàu kinh nghi m cũng như trang thi t b hi n ñ i, trung tâm ñã và. .. , ngoài tính kháng nguyên m nh c n có tính ñ c hi u cao Tính ñ c hi u c a kháng nguyên ph thu c vào tính ch t và c u trúc c a các nhóm quy t ñ nh tính kháng nguyên Tính ñ c hi u c a kháng nguyên cao không ch ñ c trưng tư ng ñ i v i loài mà còn ñ c trưng v i c type và subtype Kháng nguyên ñ ch t o vacxin phòng b nh truy n nhi m có th bao g m kháng nguyên c a thân, lông, v b c và ñ c t c a chúng s n... long móng và b nh lư i xanh, vacxin Trovac phòng b nh cúm gia c m H5N1 và b nh ñ u cho gà Thành ph n hoá h c c a kháng nguyên vi sinh v t trong vacxin ñ u là protein, lypopolysaccarit, polysaccarit (kháng nguyên v b c) Trong các lo i kháng nguyên c a vi sinh v t, kháng nguyên có b n ch t là protein và lypopolysaccarit có tính kháng nguyên m nh, tính ñ c hi u cao Kháng nguyên có b n ch t polysaccarit... k t t a khu ch tán trên th ch ñ xác ñ nh serotype c a vi khu n P.multocida Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 7 Theo quy ñ nh c a FAO ñ xác ñ nh serotype c a P.multocida c n k t h p c hai h th ng ñ nh type kháng nguyên: ñ nh type kháng nguyên giáp mô và ñ nh type kháng nguyên thân Hi n nay hai h th ng ñ nh type c a P.multocida ñư c dùng ph bi n là: Namioka... nguyên khác nhau nên trong bào ch vacxin trư c tiên ph i làm sao cho ñáp ng mi n d ch ch ng l i nh ng nhóm quy ñ nh kháng nguyên thi t y u, nghĩa là n u ñánh vào ñó thì y u t g y b nh b tiêu di t ho c chí ít cũng không còn kh năng sinh h i n a Vì th , trong nghiên c u s n xu t vacxin hi n nay ngư i ta ñang có nh ng c g ng phân l p nh ng kháng nguyên hay nhóm quy ñ nh kháng nguyên thi t y u ñ làm cho vacxin. .. ng dùng vacxin ñơn gi n Vacxin ph i an toàn, an toàn là tiêu chu n ñánh giá khi s d ng vacxin trên chính ñ i tư ng ñư c tiêm phòng, t c là vacxin không g y nên b nh, các ph n ng có h i, ho c g y ch t con v t ñư c tiêm vacxin Vacxin ph i vô trùng, t c là vacxin ch ch a duy nh t m t hay m t lo i kháng nguyên ñư c dùng làm vacxin mà không b nhi m t p các lo i khác V m t th c hành, giá m t li u vacxin ph . QUANG HUY NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT VACXIN VÔ HOẠT TỤ HUYẾT TRÙNG GIA CẦM BẰNG CÔNG NGHỆ LÊN MEN SỤC KHÍ TẠI CÔNG TY TRÁCH NHIỆM HỮU HẠN DƯỢC VÀ VẬT TƯ THÚ Y HANVET CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y MÃ. sản xuất vacxin. X y dựng quy trình sản xuất vacxin vô hoạt Tụ huyết trùng gia cầm bằng công nghệ lên men sục khí. 1.3. Ý nghĩa của ñề tài Áp dụng công nghệ lên men sục khí vào sản xuất vacxin. . vacxin vô hoạt Tụ huyết trùng gia cầm. Xuất phát từ thực tiễn trên, chúng tôi tiến hành thực hiện ñề tài Nghiên cứu sản xuất vacxin vô hoạt Tụ huyết trùng gia cầm bằng công nghệ men sục khí tại