Thông tin tài liệu
ĐẠI HỌC QUỐC GIA THNH PHỐ H CH MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN NGỌC NHƯ BĂNG THU NHẬN TẾ BÀO GỐC TỪ MÔ NHUNG HƯƠU SAO VIT NAM (Cervus nippon pseudaxis) Chuyên ngành: SINH L ĐNG VT M s: 60 42 30 LUN VĂN THẠC S SINH HỌC NGƯI HƯNG DN KHOA HỌC: 1. TS. Trn Hong Dng 2. TS. Lê Thanh Hưng THNH PHỐ H CH MINH – 2010 LỜI CẢM ƠN Trong sut thi gian hc tp v nghiên cu, tôi đ nhn đưc nhiu s quan tâm, gip đ t gia đnh, thy cô v bn b. Để có đưc kết quả như ngày hôm nay, tôi xin gửi li cảm ơn chân thnh v sâu sắc đến: B Mẹ v gia đình đ luôn l chỗ da vững chắc cho tôi, luôn ở bên, động viên và ủng hộ tôi. Thy Trn Hong Dng v Thy Lê Thanh Hưng l những ngưi đã đ ịnh hướng và tn tình chỉ dẫn, động viên tôi trong sut quá trình thc hiện lun văn, luôn to mi điu kiện tt nhất gip tôi hon thnh tt công việc. Thy Phan Kim Ngc, ngưi luôn cho tôi những li khuyên cùng kinh nghiệm quí báu. Riêng Thy là một tấm gương cho s say mê và nhiệt huyết của ngưi nghiên cu khoa hc. Các thy cô trong Khoa Sinh hc đã dy dỗ và truyn đt cho tôi những kiến thc bổ ích trong sut qu trnh thc hiện nghiên cu. Các anh chị và các bn trong Bộ môn Sinh l hc – Công nghệ sinh hc động vt v Phng th nghiệm Nghiên cu v ng dng Tế bo gc đ luôn động viên, chia sẻ v gip đ tôi hết lòng. Một ln nữa tôi xin chân thành cảm ơn mi ngưi đã hết lòng giúp đ tôi hoàn tất lun văn ny! TP. Hồ Ch Minh, thng 07 năm 2010 Nguyễn Ngc Như Băng Mc lc i Nguyn Ngc Như Băng MC LC Trang MC LC i DANH MC CC CÔNG TRNH CA TC GI iv DANH MC CC CH VIT TT v DANH MC BNG vii DANH MC HNH V, Đ TH viii M ĐU 1 Chương 1. TNG QUAN 1.1. Khi qut v nhung hươu 3 1.1.1. Sơ lưc v hươu sao Vit Nam 3 1.1.2. Sinh hc nhung hươu 4 1.1.2.1. Khi nim 4 1.1.2.2. Cc giai đon pht trin ca sng hươu 4 1.1.2.3. Thnh phn ha hc chnh trong nhung hươu 6 1.1.3. Mt s tc dng dưc l ca nhung hươu 6 1.2. Tnh hnh nghiên cu nhung hươu trong v ngoi nưc 8 1.2.1. Cc nghiên cu v nhung hươu thc hin Vit Nam 8 1.2.2. Cc nghiên cu v nhung hươu thc hin trên th gii 10 1.3. T bo gc nhung hươu v tim năng ng dng ca t bo 12 1.3.1. Khi qut v t bo gc 12 1.3.2. T bo gc nhung hươu – lưc s nghiên cu v 13 Mc lc ii Nguyn Ngc Như Băng Chương 2. VT LIU – PHƯƠNG PHP 2.1. Vt liu nghiên cu v tin trnh nghiên cu 19 2.1.1. Vt liu nghiên cu 19 2.1.2. Tin trnh nghiên cu 19 2.2. Dng c v thit b 20 2.3. Hóa chất 21 2.4. Các phương php thc nghim 25 2.4.1. Phương php thu nhn mẫu mô nhung hươu 25 2.4.2. Thu nhn t bo đơn từ mẫu mô nhung hươu 26 2.4.3. Nuôi cấy t bo đơn 28 2.4.4. Phương php nuôi cấy tăng sinh t bo v cấy chuyn 28 2.4.4.1. Quy trình cấy chuyền t bo 28 2.4.4.2. Phương php xc định các chỉ số t bào 29 2.4.5. Chng minh cc t bo thu nhn từ mẫu mô 30 2.4.5.1. Kim chng kh năng tăng sinh di hn – kh năng 30 2.4.5.2. Kim chng kh năng bit ha 30 Chương 3. KT QU – BIN LUN 3.1. Kt quả thu nhn mẫu mô nhung hươu 34 3.2. Kt quả thu nhn t bo đơn từ mẫu mô nhung hươu 35 3.3. Kt quả nuôi cấy sơ cấp t bo nhung hươu 37 3.4. Kt quả cấy chuyn và nuôi cấy tăng sinh t bo nhung hươu 43 3.5. Kt quả chng minh tnh gc ca cc t bo 50 3.5.1. Kh năng tăng sinh di hn – kh năng t lm mi 50 Mc lc iii Nguyn Ngc Như Băng 3.5.2. Kh năng bit hóa 51 3.5.2.1. Kt qu bit hóa thành t bào to xương 51 3.5.2.2. Kt qu bit hóa thành t bào to mỡ 54 3.6. Bin lun chung 57 Chương 4. KT LUN – Đ NGH 4.1. Kt lun 64 4.2. Đ ngh 65 TI LIU THAM KHO 66 Danh mc cc hnh v, đ th viii Nguyn Ngc Như Băng DANH MC CC HNH V, Đ TH Hình 1.1. Hươu sao v nhung hươu 3 Hình 1.2. Mt ct vng đnh đang tăng trưng ca nhung hươu 14 Hình 1.3. Các tế bo STRO – 1 + trong những vng khác nhau ca cuống 17 Hình 2.1. Sơ đ mô t các ni dung nghiên cu 19 Hình 2.2. Mẫu mô nhung hươu sao 20 Hình 2.3. Phn ngn ca nhung hươu 25 Hình 2.4. Quy trình đông lạnh mẫu mô nhung hươu 26 Hình 2.5. Quy trình thu nhận tế bo đơn từ mẫu mô nhung hươu 27 Hình 2.6. Quy trình nuôi cấy tế bo đơn 28 Hình 2.7. Quy trình cấy chuyền tế bo 29 Hình 2.8. Quy trình biệt hóa tế bo 30 Hình 2.9. Quy trình nhum Alizarin Red S 31 Hình 2.10. Quy trình nhum Oil Red O 33 Hình 3.1. Phn ngn ca nhung hươu 34 Hình 3.2. Mẫu mô nhung hươu được ct thành những mnh nhỏ 34 Hình 3.3. Các mnh mô nhung hươu có kích thước 2 – 4 mm 2 35 Hình 3.4. Các tế bo đơn thu nhận từ mô nhung hươu 37 Hình 3.5. Tế bo nhung hươu sau 24 giờ nuôi cấy 38 Hình 3.6. Tế bo nhung hươu sau 48 giờ nuôi cấy 39 Hình 3.7. Tế bào nhung hươu sau 72 giờ nuôi cấy 40 Hình 3.8. Tế bo nhung hươu sau 4 ngày nuôi cấy 41 Hình 3.9. Tế bo nhung hươu sau 7 ngy nuôi cấy 41 Danh mc cc hnh v, đ th ix Nguyn Ngc Như Băng Hình 3.10. Tế bo nhung hươu sau 10 ngy nuôi cấy 42 Hình 3.11. Tế bào nhung hươu sau khi cấy chuyền 0 giờ 44 Hình 3.12. Tế bào nhung hươu sau khi cấy chuyền 24 giờ 45 Hình 3.13. Tế bo nhung hươu sau khi cấy chuyền ngày 7 45 Hình 3.14. Tế bo nhung hươu qua 2 ln cấy chuyền 46 Hình 3.15. Tế bo nhung hươu qua 3 ln cấy chuyền 46 Hình 3.16. Tế bo nhung hươu qua 4 ln cấy chuyền 47 Hình 3.17. Tế bo nhung hươu qua 5 ln cấy chuyền 47 Hình 3.18. Các tế bo nhung hươu trước khi bt đu cm ng biệt hóa 51 Hình 3.19. Các tế bo nhung hươu sau 15 ngy 52 Hình 3.20. Các tế bo nhung hươu sau 20 ngy 52 Hình 3.21. Các tế bào nhung hươu sau 20 ngày 53 Hình 3.22. Các tế bo nhung hươu tích tụ git mỡ 55 Hình 3.23. Các tế bo nhung hươu sau 20 ngày 55 Hình 3.24. Các git mỡ tích tụ trong tế bo chất 56 Hình 3.25. Các tế bo nhung hươu sau 20 ngày 56 Hình 3.26. Tế bo nhung hươu 58 Hình 3.27. Tế bo nhung hươu 58 Hình 3.28. Tế bo nhung hươu sau khi cm ng biệt hóa tạo xương 60 Hình 3.29. Tế bo nhung hươu sau khi cm ng biệt hóa tạo mỡ 61 Hình 3.30. Tế bo nhung hươu 62 Đ thị 3.1. Sự tăng trưng ca tế bo nhung hươu 48 Đ thị 3.2. Đường cong tăng trưng ca tế bào nhung hươu dựa trên 49 Danh mc cc bng vii Nguyn Ngc Như Băng DANH MC CC BNG Bng 2.1. Danh mc cc dng c s dng trong đ ti 20 Bng 2.2. Danh mc cc thit b s dng trong đ ti 21 Bng 2.3. Danh mc cc ha cht s dng trong đ ti 21 Bng 3.1. Kt qu thu nhận t bo đơn từ mẫu mô nhung hươu tươi 36 Bng 3.2. Kt qu thu nhận t bo đơn từ mẫu mô nhung hươu đông lạnh 36 Bng 3.3. Số lượng mẫu nuôi sơ cp 38 Bng 3.4. Kt qu nuôi cy sơ cp t bo thu nhận từ nhung hươu 42 Bng 3.5. Kt qu nuôi tăng sinh t bo nhung hươu 48 Danh mc cc công trnh ca tc gi iv Nguyn Ngc Như Băng DANH MC CC CÔNG TRNH CA TC GI 1. Lê Quang Hưng, Nguyễn Ngọc Như Băng, Trần Lê Bảo Hà, Phan Kim Ngọc (2006), Khảo sát sự tăng trưởng của tế bào sừng người trong điều kiện in vitro, Hội nghị Khoa hc lần thứ 5, Trường Đại hc Khoa hc Tự nhiên, Tiu ban Sinh hc – Công ngh sinh hc. 2. Nguyễn Tiến Bằng, Nguyễn Ngọc Như Băng, Bùi Thị Ngọc Ánh, Phan Kim Ngọc (2008), Khảo sát hoạt tính kháng phân bào của cao chiết trái ớt (Capsicum frutescens) lên dòng tế bào ung thư gan Hep G2, Tp tm tt bo cáo, Hội nghị Khoa hc lần thứ 6, Trường Đại hc Khoa hc Tự nhiên, Tiu ban Sinh hc – Công ngh sinh hc, 295. 3. Lê Thanh Hưng, Nguyễn Ngọc Như Băng , Nguyễn Tiến Bằng (2009), Nghiên cu s dng hn hp mui sodium lactate và sodium acetate trong bảo quản chả la, Tuyn tp Hội nghị Công ngh sinh hc ton quc Khu vực pha Nam, 781 – 786. 4. Nguyễn Ngọc Như Băng , Trần Hoàng Dng , Lê Thanh Hưng (2010), Th nghiệm s dng nhung hươu sao (Cervus nippon pseudaxis) tạo mt s dạng thực phm chc năng, Tạp ch Khoa hc v Công ngh, 48 (2A), 615 – 622. Danh mc cc hnh v, đ th viii Nguyn Ngc Như Băng DANH MC CC HNH V, Đ TH Hình 1.1. Hươu sao v nhung hươu 3 Hình 1.2. Mt ct vng đnh đang tăng trưng ca nhung hươu 14 Hình 1.3. Các tế bo STRO – 1 + trong những vng khác nhau ca cuống 17 Hình 2.1. Sơ đ mô t các ni dung nghiên cu 19 Hình 2.2. Mẫu mô nhung hươu sao 20 Hình 2.3. Phn ngn ca nhung hươu 25 Hình 2.4. Quy trình đông lạnh mẫu mô nhung hươu 26 Hình 2.5. Quy trình thu nhận tế bo đơn từ mẫu mô nhung hươu 27 Hình 2.6. Quy trình nuôi cấy tế bo đơn 28 Hình 2.7. Quy trình cấy chuyền tế bo 29 Hình 2.8. Quy trình biệt hóa tế bo 30 Hình 2.9. Quy trình nhum Alizarin Red S 31 Hình 2.10. Quy trình nhum Oil Red O 33 Hình 3.1. Phn ngn ca nhung hươu 34 Hình 3.2. Mẫu mô nhung hươu được ct thành những mnh nhỏ 34 Hình 3.3. Các mnh mô nhung hươu có kích thước 2 – 4 mm 2 35 Hình 3.4. Các tế bo đơn thu nhận từ mô nhung hươu 37 Hình 3.5. Tế bo nhung hươu sau 24 giờ nuôi cấy 38 Hình 3.6. Tế bo nhung hươu sau 48 giờ nuôi cấy 39 Hình 3.7. Tế bào nhung hươu sau 72 giờ nuôi cấy 40 Hình 3.8. Tế bo nhung hươu sau 4 ngày nuôi cấy 41 Hình 3.9. Tế bo nhung hươu sau 7 ngy nuôi cấy 41 [...]... ix Hình 3.10 Tế bào nhung hươu sau 10 ngày nuôi cấy 42 Hình 3.11 Tế bào nhung hươu sau khi cấy chuyền 0 giờ 44 Hình 3.12 Tế bào nhung hươu sau khi cấy chuyền 24 giờ 45 Hình 3.13 Tế bào nhung hươu sau khi cấy chuyền ngày 7 45 Hình 3.14 Tế bào nhung hươu qua 2 lần cấy chuyền 46 Hình 3.15 Tế bào nhung hươu qua 3 lần cấy chuyền 46 Hình 3.16 Tế bào nhung hươu qua 4 lần... 47 Hình 3.17 Tế bào nhung hươu qua 5 lần cấy chuyền 47 Hình 3.18 Các tế bào nhung hươu trước khi bắt đầu cảm ứng biệt hóa 51 Hình 3.19 Các tế bào nhung hươu sau 15 ngày 52 Hình 3.20 Các tế bào nhung hươu sau 20 ngày 52 Hình 3.21 Các tế bào nhung hươu sau 20 ngày 53 Hình 3.22 Các tế bào nhung hươu tích tụ giọt mỡ 55 Hình 3.23 Các tế bào nhung hươu sau 20 ngày... sâu hơn được thực hiện 1.3 Tế bào gốc nhung hươu và tiềm năng ứng dụng của tế bào gốc nhung hươu 1.3.1 Khái quát về tế bào gốc Tế bào gốc là những tế bào chưa biệt hóa của cơ thể Những tế bào này có khả năng tự làm mới và biệt hóa thành các tế bào chuyên hóa với các chức năng riêng biệt [8], [16], [18], [46], [76] Khác với các loại tế bào khác của cơ thể, tất cả các tế bào gốc nói chung đều có hai đặc... từ vùng mô đang tăng trưởng của nhung hươu sao Việt Nam 2 Thu nhận các tế bào gốc ứng viên từ các các tế bào đơn nhung hươu được nuôi cấy dài hạn 3 Chứng minh các tế bào gốc ứng viên thu nhận được biểu hiện đặc điểm của tế bào gốc Nguyễn Ngọc Như Băng từ mô nhung hươu Tổng quan 3 1.1 Khái quát về nhung hươu 1.1.1 Sơ lược về hươu sao Việt Nam Tên thông thường: Hươu sao. .. tôi đưa ra đề tài Thu nhận tế bào gốc từ mô nhung hươu sao Việt Nam (Cervus nippon pseudaxis) Ở Việt Nam , nhung hươu đã đư ợc sử dụng từ rất lâu đời, nhưng các nghiên cứu in vitro về tế bào nhung hươu vẫn còn là một lĩnh vực khá mới mẻ Với mục đích chính là bước đầu tiếp cận nghiên cứu in vitro tế bào nhung hươu, đề tài này được tiến hành với các mục tiêu như sau: 1 Thu nhận và nuôi... sinh ở sừng hươu liên quan đến sự biệt hóa tế bào Nghiên cứu này cho rằng sự tái sinh sừng hươu là một hiện tượng dựa vào tế bào gốc, và phụ thu c vào sự hoạt động theo chu kỳ của các tế bào gốc nằm trong màng xương của cuống Cũng trong năm 2007, Berg D.K và cộng sự đã tiến hành nhân bản hươu đỏ từ tế bào gốc nhung hươu và các tế nào con cháu của chúng [17] Dòng tế bào cho được phân lập từ màng xương... điều hòa bởi tế bào gốc Tuy nhiên, cơ chế của nó vẫn chưa được hiểu rõ [34], [49], [69] Các nghiên cứu về tế bào gốc nhung hươu bắt đầu bằng việc nuôi cấy các tế bào được thu nhận từ vùng mô đang tăng sinh, khảo sát tác động của các nhân tố tăng trưởng lên sự phát triển của các tế bào này trong điều kiện in vitro [37] Bên cạnh đó, các nghiên cứu mô học của nhung hươu được tiến hành để từ đó tìm ra... thường: Hươu sao Việt Nam Tên khoa học: Cervus nippon pseudaxis Loài: Cervus nippon Giống: Cervus Họ: Cervidae Bộ: Artiodactyla Lớp: Mammalia Ngành: Chordata Giới: Animalia Hình 1.1 Hươu sao và nhung hươu Nguyễn Ngọc Như Băng Tổng quan 4 Hươu sao (còn được biết với tên gọi là hươu Nhật Bản) có nguồn gốc từ các nước Đông Á Hiện nay, hươu sao được chia thành 12 loài phụ Hươu sao Việt Nam là một trong... hoàn toàn phù hợp với giả thuyết sự tái sinh sừng được xây dựng từ các tế bào gốc hoặc tế bào tiền thân trung mô nằm ở lớp trong màng xương của sừng Các tác giả này cho rằng ổ tế bào gốc nằm ở lớp trong màng xương của sừng và sự tái sinh sừng phụ thu c vào sự hoạt động có tính chu kỳ của các tế bào gốc đó Trong cuống sừng, các tế bào STRO – 1+ cũng luôn nằm cạnh các sợi mô cơ (mô cơ xương trán) Trong... 56 Hình 3.25 Các tế bào nhung hươu sau 20 ngày 56 Hình 3.26 Tế bào nhung hươu 58 Hình 3.27 Tế bào nhung hươu 58 Hình 3.28 Tế bào nhung hươu sau khi cảm ứng biệt hóa tạo xương 60 Hình 3.29 Tế bào nhung hươu sau khi cảm ứng biệt hóa tạo mỡ 61 Hình 3.30 Tế bào nhung hươu 62 Đồ thị 3.1 Sự tăng trưởng của tế bào nhung hươu 48 Đồ thị . Hình 2.2. Mẫu mô nhung hươu sao 20 Hình 2.3. Phn ngn ca nhung hươu 25 Hình 2.4. Quy trình đông lạnh mẫu mô nhung hươu 26 Hình 2.5. Quy trình thu nhận tế bo đơn từ mẫu mô nhung hươu 27 Hình. Hình 2.2. Mẫu mô nhung hươu sao 20 Hình 2.3. Phn ngn ca nhung hươu 25 Hình 2.4. Quy trình đông lạnh mẫu mô nhung hươu 26 Hình 2.5. Quy trình thu nhận tế bo đơn từ mẫu mô nhung hươu 27 Hình. ca nhung hươu 34 Hình 3.2. Mẫu mô nhung hươu được ct thành những mnh nhỏ 34 Hình 3.3. Các mnh mô nhung hươu có kích thước 2 – 4 mm 2 35 Hình 3.4. Các tế bo đơn thu nhận từ mô nhung hươu
Ngày đăng: 13/10/2014, 20:42
Xem thêm: Thu nhận tế bào gốc từ mô nhung hươu sao việt nam (cervus nippon pseudaxis), Thu nhận tế bào gốc từ mô nhung hươu sao việt nam (cervus nippon pseudaxis)
