Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM  LƯU VĂN NGUYÊN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÂY NA LEO (KADSURA HETEROCLITA) HỌ SCHISANDRACEAE Ở TAM ĐẢO – VĨNH PHÚC Chuyên ngành : Hoá học Hữu cơ Mã số : 60.44.27 LUẬN VĂN THẠC SỸ HOÁ HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. PHẠM THỊ HỒNG MINH Thái Nguyên – 8/2011 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Các phương pháp sắc ký : CC : Column Chromatography (Sắc ký cột) TLC : Thin-layer Chromatography (Sắc ký lớp mỏng) SKLM : Sắc ký lớp mỏng HPLC : High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu năng cao) Các phương pháp phổ: MS : Mass Spectrometry (Phổ khối lượng) ESI-MS : Electron Spray Ionization Mass Spectroscopy (Phổ khối bụi electron) FT-IR : Fourier Transform Infrared Spectroscopy (Phổ hồng ngoại biến đổi Fourie) NMR : Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân) 1 H-NMR : Proton Magnetic Resonance Spectrometry (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) 13 C-NMR : Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon-13 DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer HSQC : Heteronuclear Single - Quantum Coherence HMBC : Heteronuclear multiple - Bond Correlation Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1: Một số hợp chất tritecpen phân lập được từ loài K. ananosma 5 Bảng 1.2: Một số hợp chất tritecpen phân lập được từ loài Kadsura ananosma 7 Bảng 1.3: Một số hợp chất tritecpen 7 Bảng 1.4: Một số hợp chất tritecpen phân lập được dạng seco 9 Bảng 1.5: Một số hợp chất tritecpen cầu CH 2 tại C-19 10 Bảng 1.6: Một số hợp chất tritecpen lacton 11 Bảng 1.7: Một số hợp chất tritecpen lacton 12 Bảng 1.8: Một số hợp chất tritecpen lacton cầu epoxide tại vị trí C 19 14 Bảng 1.9: Một vài đại diện các hợp chất cyclolignan có nhóm thế OCH 3 ở vị trí C-14 18 Bảng1.10: Một vài đại diện các hợp chất cyclolignan có nhóm thế hydroxy ở vị trí C-14. 21 Bảng 1.11: Một vài đại diện các hợp chất cyclolignan không đóng vòng tại C 12-13 . 23 Bảng 1.12: Một vài đại diện các hợp chất cyclolignan không đóng vòng tại C 12-13 , thế ở vị trí C-6 và C-9 . 24 Bảng 1.13: Một vài hợp chất oxocyclolignan phân lập được từ loài K.coccinea 26 Bảng 2.1: Khối lượng các cặn chiết thu được từ thân cây Na leo (Kadsura heteroclita) 44 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Bảng 2.2: Kết quả định tính các nhóm chất trong thân cây Na leo 46 Bảng 3.1: Độ dịch chuyển hóa học 13 C NMR của một số sterol trong K. heteroclita 56 Bảng 3.2: Số liệu phổ NMR và các tương tác xa của KhH.1 500MHz ( 1 H-NMR), 125MHz ( 13 C-NMR); Nội chuẩn TMS, dung môi CDCl 3 68 Bảng 3.3: Số liệu phổ NMR và các tương tác xa của KhE.3 70 Bảng 3.4: Số liệu phổ NMR và các tương tác xa của KhH.2 81 Bảng 3.5: Số liệu phổ NMR và các tương tác xa của Kh.E5 91 SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 2.1: Sơ đồ ngâm chiết mẫu cây Na leo 43 (Kadsura heteroclita)……………………… DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ BẢNG Trang Ảnh 2.1: Lá, hoa, thân cây Na leo (Kadsura heteroclita) 40 Ảnh 2.2: Lá, hoa, thân cây Na leo (Kadsura heteroclita) 40 Hình 3.1: Phổ FT-IR chất KhH.1 61 Hình 3.2: Phổ ESI-MS chất KhH.1 62 Hình 3.3: Phổ 1 H-NMRchất KhH.1 62 Hình 3.4: Phổ 13 C-NMR chất KhH.1 64 Hình 3.5: Phổ DEPT chất KhH.1 65 Hình 3.6: Phổ HSQC chất KhH.1 66 Hình 3.7: Phổ HMBC chất KhH.1 67 Hình 3.8: Phổ FT-IR chất KhE.3 72 Hình 3.9: Phổ ESI-MS chất KhE.3 73 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Hình 3.10: Phổ 1 H-NMR chất KhE.3 74 Hình 3.11: Phổ 13 C-NMR chất KhE.3 75 Hình 3.12: Phổ DEPT chất KhE.3 76 Hình 3.13: Phổ HSQC chất KhE.3 77 Hình 3.14: Phổ HMBC chất KhE.3 81 Hình 3.15: Phổ FT-IR chất KhH.2 82 Hình 3.16: Phổ ESI-MS chất KhH.2 83 Hình 3.17: Phổ 1 H-NMRchất KhH.2 84 Hình 3.18: Phổ 13 C-NMR chất KhH.2 85 Hình 3.19: Phổ DEPT chất KhH.2 86 Hình 3.20: Phổ HSQC chất KhH.2 87 Hình 3.21: Phổ HMBC chất KhH.2 88 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt dùng trong luận văn Danh mục các hình, bảng và sơ đồ Mở đầu Chương 1 TỔNG QUAN 1 1.1. Khái quát về các thực vật chi Kadsura 3 1.2. Những nghiên cứu hóa thực vật về chi Kadsura 5 1.2.1. Các hợp chất Các Sesquitecpenoit 5 1.2.2. Các hợp chất tritecpenoit khung lanostan 6 1.2.2.1. Các hợp chất lanostan đóng vòng ở vị trí C3 6 1.2.2.2. Các hợp chất lanostan mở vòng ở vị trí C3 (seco) 9 1.2.2.3. Các hợp chất lanostan mở vòng ở vị trí C3 (seco), vị trí C-19 là CH 2 . 10 1.2.3. Các hợp chất tritecpenlactone 11 1.2.4. Các hợp chất lignan 15 1.2.4.1. Hợp chất lignan 15 1.2.4.2. Các hợp chất cyclolignan 17 1.2.4.3. Các hợp chất oxocyclolignan 25 1.3. Hoạt tính sinh học của các tritecpenoit và lignan 27 1.3.1. Hoạt tính tritecpenoit 27 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.3.2. Hoạt tính của các hợp chất lignan 31 1.4. Tình hình nghiên cứu và sử dụng các thực vật Kadsura 37 1.4.1. Những nghiên cứu về cây Kadsura heteroclita trong nước. 37 1.4.2. Cây Kadsura heterclita (Na leo, Nắm cơm, Hải phong đằng). 37 1.4.2.1. Đặc điểm thực vật học, phân bố. 37 1.4.2.2. Đặc điểm sinh thái. 38 1.4.3. Những ứng dụng của cây Kadsura heteroclita trong y học cổ truyền Việt Nam. 38 Chương 2. PHẦN THỰC NGHIỆM 39 2.1. Đối tượng nghiên cứu 39 2.1.1. Thu mẫu cây, xác định tên khoa học và phương pháp xử lý mẫu 39 2.1.2. Thử tính chống oxi hoá 40 2.1.3. Phương pháp phân tích, phân lập các hợp chất từ dịch chiết 40 2.1.4. Phương pháp khảo sát cấu trúc hóa học các chất 41 2.2. Dụng cụ hóa chất và thiết bị nghiên cứu 41 2.2.1. Dụng cụ, hoá chất 41 2.2.2. Thiết bị nghiên cứu 42 2.3. Thu nhận các dịch chiết từ cây Na leo (Kadsura heteroclita) 42 2.3.1. Thu nhận các dịch chiết 42 2.3.2. Khảo sát định tính các dịch chiết 44 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.3.2.1. Phát hiện các hợp chất sterol 44 2.3.2.2. Phát hiện các ancaloid 44 2.3.2.3. Phát hiện các flavonoid 45 2.3.2.4. Phát hiện các cumarin 45 2.3.2.5. Định tính các glucosid tim 45 2.3.2.6. Định tính các saponin 46 2.3.3. Thử hoạt tính chống oxi hoá 47 2.4. Phân lập và tinh chế các chất 47 2.4.1. Cặn dịch chiết n – hexan 47 2.4.1.1.  - Sitosterol (KhH) 47 2.4.1.2. Axit kadsuric 24 (Z)-3,4-seco-lanosta- 4(28),9(11),24-triene-3,26-dioic axit (KhH1) 48 2.4.1.3. Hợp chất Heteroclitalignan D (KhH.2). 49 2.4.1.4. (Kí hiệu phổ: KhH.3)(KhH24) 50 2.4.1.5. (KhH6) (Kí hiệu phổ: KhH.4) 50 2.4.1.6. 3-O-β-sitosterol-glucopyranosid (KhH.5) 50 2.4.2. Cặn dịch chiết etylaxetat 51 2.4.2.1. Dihydroguaiaretic axit (4,4’-dihydroxy-3,3’- dimethoxy lignan) (KhE.3) 51 2.4.2.2. 3-O-β-sitosterol-glucopyranosid (KhE.1) 52 2.4.2.3. Triglycerit (Kí hiệu phổ : KhE.4) 52 2.4.2.4. Kadsuralignan B (KhE.5) 53 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chương 3. THẢO LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 54 3.1. Phát hiện các nhóm chất và thử hoạt tính sinh học dịch chiết của cây Na leo (Kadsura heteroclita) 54 3.2. Phân lập và nhận dạng các chất từ dịch chiết 54 3.2.1. Các hợp chất steroit 55 3.2.1.1. Hợp chất KhH : -Sitosterol hay stigmast-5-en- 24R-3-ol 55 3.2.1.2. -Sitosterol glucosid KhH.5 (II) (-sitosterol-3-O- -D-glucopyranosyl) 55 3.2.2. Hợp chất mạch dài: Triglycerit (KhE.4) 58 3.2.3. Hợp chất tritecpenoit khung lanostane: Axit Kadsuric 59 3.2.4. Các hợp chất lignan 69 3.2.4.1. Dihydroguaiaretic axit (4,4’-dihydroxy-3,3’- dimethoxy lignan) (KhE.3) 69 3.2.4.2. Các hợp chất C 18 dibenzocyclooctadiene lignan 79 3.2.4.2.1. Heteroclitalignan D (KhH.2) 79 3.2.4.2.2. Kadsuralignan B (KhE.5) 89 Kết luận 92 Danh mục các công trình đã công bố có liên quan đến luận văn 93 Tài liệu tham khảo 94 Phụ lục 100 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1 MỞ ĐẦU Các hợp chất thiên nhiên được phân lập từ cơ thể sống của sinh vật, từ bậc thấp đến bậc cao, ở trên cạn hay dưới nước luôn luôn thể hiện nhiều hoạt tính sinh học rất phong phú: kháng khuẩn, kháng nấm, kháng sinh, chữa các bệnh tim mạch, chống sốt rét, chống ung thư, kìm hãm HIV, có tác dụng chống oxy hoá.v.v.v…. Những kết quả nghiên cứu khoa học trong nhiều năm qua đã cho thấy các hợp chất thiên nhiên vẫn được coi là nguồn cấu trúc mới để tạo ra các dược phẩm mới. Đặc biệt rõ ràng nhất là trong lĩnh vực thuốc chống ung thư có tới 60%, trong bệnh truyền nhiễm là 70% có nguồn gốc từ tự nhiên. Ý nghĩa to lớn của những hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học là ở chỗ chúng không chỉ được sử dụng trực tiếp làm thuốc chữa bệnh, mà quan trọng hơn là có thể là những chất mẫu, chất dẫn đường để phát triển các thuốc mới hay là các chất dò sinh hoá để làm sáng tỏ các nguyên lý của dược lý học con người. Việt nam là nước có tiềm năng lớn về nguồn thực vật được sử dụng làm thuốc nhưng phần lớn chỉ được lưu truyền theo kinh nghiệm dân gian trong phạm vi cộng đồng. Trong khi đó nhu cầu sử dụng những loài thảo dược theo cách cổ truyền hay các hợp chất nguồn gốc thiên nhiên ở nước ta cũng như trên thế giới hiện nay đang được quan tâm. Có nhiều loài thực vật ở Việt Nam được sử dụng làm thuốc theo thói quen và kinh nghiệm có tác dụng rất tốt, tuy nhiên bản chất hoá học các hợp chất có trong những cây này còn chưa được nghiên cứu sâu. Việc sử dụng nguồn cây thuốc dân gian của đồng bào các dân tộc là kho tàng quí đầy tiềm năng để khám phá nhiều loại thuốc mới với hiệu lực cao trong phòng và chữa bệnh góp phần nâng cao bảo vệ sức khoẻ con người là hướng đi đúng đắn và phát triển bền vững. Nhằm đóng góp một phần hiểu biết thêm về thành phần hóa học của cây thuốc dân gian, đề tài: “Nghiên cứu thành phần hoá học cây Na leo (Kadsura heteroclita) họ Schisandraceae ở Vĩnh Phúc” là nội dung chính của luận văn. [...]... của nhà thực vật học Nguyễn Tiến Bân thì có khoảng 6 loài thực vật thuộc chi Kadsura [4] Nhiều loài cây thuộc chi Kadsura được sử dụng trong y học dân gian nhiều dân tộc, ở các nước Châu Á và Đông Nam Á Ở Trung Quốc đông y sử dụng thân và rễ cây Na leo (Kadsura heteroclita) chữa phong thấp tê đau, viêm loét dạ dày tá tràng cấp và mạn tính, phụ nữ đau bụng sau khi sinh nở Ngoài ra quả Na leo còn được dùng... KADSURA VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA NÓ 1.1 Khái quát về các thực vật chi Kadsura Các thực vật chi Kadsura thuộc họ Ngũ vị (Schisandraceae) trên thế giới có khoảng 13 loài [36], gặp phổ biến ở các vùng ôn đới, nhiệt đới của Đông và Đông Nam Á cũng như Caribe Theo Võ Văn Chi ở Việt Nam có 4 loài thuộc chi Kadsura [3] Còn Phạm Hoàng Hộ đã nghiên cứu mô tả được 5 loài thuộc chi này [1] Theo những nghiên cứu gần... Kadsurindutin B Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên O O Kadsurindutin A http://www.lrc-tnu.edu.vn 27 1.3 Hoạt tính sinh học của các tritecpenoit và lignan Những nghiên cứu về hoạt tính sinh học của dịch chiết các loài thuộc chi Kadsura và Schisandra đã cho những kết quả rất đáng quan tâm Điều đáng chú ý là hoạt tính lại tập trung ở các hợp chất lignan, chủ yếu là các chất cyclolignan cho nhiều... dihydro,6,17-dihydroxy,10,19epoxide 1.2.4 Các hợp chất lignan Phần lớn các chất phân lập được từ chi Kadsura là các lignan, trong đó các hợp chất cyclolignan là thành phần chủ yếu 1.2.4.1 Hợp chất lignan Từ thân loài K Heteroclita đã phân lập được hai hợp chất lignan Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 15 HO O O O O O O (4.1) 2,3',4,4',5-Pentahydroxylignan-9,9'-olide GlucO O O O O O... [13] Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3 Loài Kadsura interior ở phía nam Trung Quốc là thực vật đặc hữu được sử dụng trong y học cổ truyền để điều trị bệnh thiếu máu và rối loạn hooc mon ở nữ [7] Ở phía nam nước Nhật nhân dân sử dụng quả của loài Kadsura japonica để chữa ho, và còn làm thuốc bổ [30] Ở Trung Quốc người ta sử dụng thân và rễ cây Kadsura longipendunculata... 4',7-Dihydroxy-3'-methoxy-3,4-methylenedioxy-9,9'-epoxylignan Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 17 O O O HO OGluc O (4.6) 4'-hydroxy-3'-methoxy-9-O--D-glucopyranoside -3,4methylenedioxy-9,9'-epoxylignan 1.2.4.2 Các hợp chất cyclolignan Từ rễ loài K coccinea đã phân lập được 3-Hydroxy-3',4,5-trimethoxy4',5'-methylenedioxy-2,7'-cyclolignan (Kadsuralignan H) O O OH O (4.7) O O Kadsuralignan H Các hợp... cyclolignan rất đa dạng được phân thành từng nhóm như các hợp chất nhóm thế ở vị trí C-14 là nhóm thế OCH3, hydroxy (OH) , hay vị trí C-12 và C-13 có cầu peoxide (-O-CH2-O-) Dưới đây là đại diện một số hợp chất cyclolignan có vị trí nhóm thế ở C-14 là nhóm -OCH3 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 18 (5) Bảng 1.9 Một vài đại diện các hợp chất cyclolignan có... Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 22 Schizanrin D (7tigloyl) Schizanrin E (7benzoyl) Schizanrin N Kadsutherin A (7angeloyl) CH3 CH3 CH3 5.21 K matsudai [6] CH3 CH3 CH3 5.22 K matsudai [6] CH3 CH3 CH3 5.23 K japonica [6] OH CH3 CH3 5.24 K spp [6] O Một số hợp chất cyclolignan không có cầu peoxide tại vị trí C12-13 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái... tràng cấp và mạn tính, phụ nữ đau bụng sau khi sinh nở Y học cổ truyền Trung quốc còn dùng rễ và vỏ cây này để chữa viêm loét dạ dày, tá tràng, bệnh thấp khớp, và viêm khớp, chữa kinh nguyệt không đều và rối loạn hoocmon nữ [35], [6] Ở nước ta cũng có một vài loài thuộc chi Kadsura được dùng trong y học dân gian Cây nắm cơm hay Ngũ vị nam có tên khoa học Kadsura coccinea được nhân dân sử dụng quả dùng... hợp chất lignan khác là 3,7-Dihydroxy-3',4,4',5-tetramethoxylignan (Kadangustin H) Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 16 OH O O OH O (4.3) O Kadangustin H Từ loài K.longipedungculata phân lập được hợp chất lignan 3,3’,4,4’tetrahydroxylignan (3,4-methylene, 3’-methyl ether) O O O OH (4.4) Từ loài K.longipedungculata phân lập được hai hợp chất lignan dạng epoxy . CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÂY NA LEO (KADSURA HETEROCLITA) HỌ SCHISANDRACEAE Ở TAM ĐẢO – VĨNH PHÚC Chuyên ngành : Hoá học Hữu cơ Mã số : 60.44.27 LUẬN VĂN THẠC SỸ HOÁ HỌC . tài: Nghiên cứu thành phần hoá học cây Na leo (Kadsura heteroclita) họ Schisandraceae ở Vĩnh Phúc là nội dung chính của luận văn. Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn. mẫu cây Na leo 43 (Kadsura heteroclita) …………………… DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ BẢNG Trang Ảnh 2.1: Lá, hoa, thân cây Na leo (Kadsura heteroclita) 40 Ảnh 2.2: Lá, hoa, thân cây Na leo (Kadsura