BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI TRẦN VĂN NÊN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BIẾN ðỔI BỆNH LÝ CỦA CHÓ MẮC BỆNH CARE VÀ ỨNG DỤNG KỸ THUẬT RT-PCR ðỂ CHẨN ðOÁN BỆNH LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI TRẦN VĂN NÊN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BIẾN ðỔI BỆNH LÝ CỦA CHÓ MẮC BỆNH CARE VÀ ỨNG DỤNG KỸ THUẬT RT-PCR ðỂ CHẨN ðOÁN BỆNH CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y MÃ SỐ : 60.62.50 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS. NGUYỄN THỊ LAN HÀ NỘI – 2013 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… i LỜI CẢM ƠN Mở ñầu của Luận văn cho tôi xin ñược chân thành cảm ơn sự giúp ñỡ của các thầy, cô giáo trong khoa Thú y, các cán bộ Ban quản lý ñào tạo, trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội, cùng toàn thể các thầy giáo, cô giáo ñã giảng dạy tôi trong thời gian học Cao học tại trường. ðặc biệt tôi xin chân thành cảm ơn PGS. TS. Nguyễn Thị Lan ñã tận tình hướng dẫn, ñóng góp nhiều ý kiến quý báu, tạo ñiều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn ñồng nghiệp, bạn bè và gia ñình ñã giúp ñỡ, ñộng viên ñể tôi có thể hoàn thành chương trình học tập và hoàn thành Luận văn tốt nghiệp. Hà Nội, ngày 20 tháng 09năm 2013 Tác giả Trần Văn Nên Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… ii LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và chưa từng được sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng, mọi sự giúp đỡ cho việc hoàn thành luận văn này đã được cảm ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn đã được ghi rõ nguồn gốc. Hà Nội, tháng 09 năm 2013 Tác giả luận văn Trần Văn Nên Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH, BIỀU ĐỒ vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ix MỞ ðẦU 1 1. Đặt vấn đề 1 2. Mục đích và yêu cầu 2 3. Ý nghĩa thực tiễn của đề tài 2 Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Đặc điểm một số giống chó hiện có tại Việt nam và trên thế giới 3 1.1.1. Các giống chó nhập ngoại 3 1.1.2. Các giống chó của Việt Nam 8 1.2. Bệnh Care 9 1.2.1. Căn bệnh học 10 1.2.1.1. Phân loại virus gây bệnh Care 10 1.3.2 Hình thái của virus Care 11 1.2.1.3. Cấu trúc của virus Care 11 1.2.1.4 Sức đề kháng của virus Care 12 1.2.1.5 Cơ chế sinh bệnh 13 1.2.2 Dịch tễ học 15 1.2.2.1 Loài vật mắc bệnh 15 1 2.2.2 Lứa tuổi mắc bệnh 16 1.2.2 3 .Mùa vụ mắc bệnh 16 1.2.3. Truyền nhiễm học 16 1.2. 3.1. Chất chứa virus 16 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… iv 1.2.2.3. Đường xâm nhập và cách thức lây lan 16 1.2.3.3. Tỷ lệ ốm, tỷ lệ chết 17 1.2.4. Triệu chứng, bệnh tích 17 1.2.4.1. Triệu chứng lâm sàng 17 1.2.4.2. Bệnh tích 19 1.2.5. Chẩn đoán bệnh 22 1.2.5.1. Dựa vào đặc điểm dịch tễ học của bệnh 22 1.2.5.2Dựa vào triệu chứng lâm sàng 22 1.2.5.3. Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm 23 1.2.6. Phòng và điều trị bệnh 26 1.2.6.1. Phòng bệnh 26 1.2.6.2. Điều trị 27 1.3. Phản ứng RT-PCR 27 1.3.1. Nguyên lý của phản ứng RT-PCR 27 1.3.2. Các bước tiến hành phản ứng PCR 29 Chương 2. ðỐI TƯỢNG, ðỊA ðIỂM, THỜI GIAN, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1. Đối tượng nghiên cứu 30 2.2 Địa điểm nghiên cứu 30 2.3. Thời gian nghiên cứu 30 2.4. Nội dung nghiên cứu 30 2.5. Nguyên liệu 30 2.5.1. Mẫu bệnh phẩm 30 2.5.2. Dụng cụ, thiết bị, máy móc 31 2.5.3. Hóa chất 31 2.6. Phương pháp nghiên cứu 31 2.6.1. Phương pháp điều tra dịch tễ học 31 2.6.2. Theo dõi triệu chứng lâm sàng của chó mắc bệnh Care 31 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… v 2.6.3. Mổ khám, quan sát bệnh tích đại thể và lấy mẫu chó mắc bệnh Care. 32 2.6.4. Phương pháp làm tiêu bản vi thể 33 2.7. Phương pháp tiến hành phản ứng RT – PCR 36 2.7.1. Chuẩn bị mẫu cho phản ứng RT – PCR 36 2.7.2. Tiến hành phản ứng 36 2.7.3 Điện di kiểm tra sản phẩm PCR 38 2.8. Phương pháp xử lý số liệu 38 Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 40 3.1. Khảo sát tỷ lệ mắc bệnh Care ở chó ở các giống, lứa tuổi và mùa vụ 40 3.1.1. Tổng hợp kết quả chó mắc bệnh ở các phòng khám bệnh chó trên địa bàn thành phố Hà Nội 40 3.1.2. Tỷ lệ bị bệnh Care ở các giống chó 41 3.1.3. Tỷ lệ mắc bệnh Care ở chó các lứa tuổi 44 3.1.4. Tỷ lệ chó mắc bệnh Care ở các mùa vụ trong năm 46 3.2. Triệu chứng lâm sàng của chó nghi mắc bệnh Care. 47 3.3 Biến đổi bệnh tích của chó mắc bệnh Care 54 3.4. Biến đổi bệnh tích vi thể chó mắc bệnh Care 60 3.5. Kết quả của phản ứng RT-PCR 66 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 70 1. Kết luận 70 2. Đề nghị 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 2.1. Chu trình nhiệt RT-PCR 38 Bảng 3.1: Kết quả chẩn đoán bệnh của chó đưa tới khám tại một số phòng khám 40 Bảng 3.2: Tỷ lệ chó mắc bệnh Care ở các giống 42 Bảng 3.3: Tỷ lệ chó mắc bệnh Care các lứa tuổi 44 Bảng 3.4: Tỷ lệ chó mắc bệnh Care ở các mùa vụ trong năm 46 Bảng 3.5. Chó nghi mắc bệnh Care được lựa chọn để nghiên cứu 48 Bảng 3.6. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của chó mắc bệnh Care 50 Bảng 3.7. Tỉ lệ biểu hiện triệu chứng lâm sàng chủ yếu của chó nghi mắc bệnh Care 52 Bảng 3.8. Biến đổi đại thể chủ yếu trên chó mắc bệnh Care 55 Bảng 3.9: Biến đổi bệnh tích vi thể chủ yếu ở chó mắc bệnh Care 61 Bảng 3.10: Kết quả của phản ứng RT-PCR 68 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC HÌNH, BIỀU ðỒ STT Tên hình Trang Hình 1.1. Hình thái của virus Care được chụp dưới kính hiển vi 11 Hình 1.2. Kit chẩn đoán nhanh bệnh Care 25 Hình 1 .3. Tets chó nghi mắc bệnh care 25 Hình 1.4. Kết quả âm tính với bệnh Care (1 vạch) 26 Hình 1.5. Kết quả dương tính với bệnh Care (2 vạch) 26 Hình 3.1: Chó mắc bệnh Care đang khám và điều trị 53 Hình 3.2: Kiểm tra thân nhiệt chó mắc bệnh Care 53 Hình 3.3: Chó mắc bệnh Care ỉa ra máu 53 Hình 3.4: Chó mắc bệnh Care phân dính hậu môn có màu cà phê 53 Hình 3.5: Chó mắc bệnh Care nôn 53 Hình 3.6: Chó mắc bệnh Care gan bàn chân sừng hóa 53 Hình 3.7: Chó mắc bệnh Care có triệu chứng thần kinh không đi lại được 54 Hình 3.8: Chó mắc bệnh Care, chảy dịch mũi, mắt có nhiều dử 54 Hình 3.9: Nổi mụn mủ ở vùng da mỏng 54 Hình 3.10: Nổi mụn mủ ở vùng da mỏng 54 Hình 3.11: Khí quản chứa đầy dịch 58 Hình 3.12: Phổi viêm 58 Hình 3.13: Hạch dưới hàm sưng chó mắc bệnh Care 58 Hình 3.14: Hạch màng treo ruột sưng chó mắc bệnh Care 58 Hình 3.15: Xuất huyết đại não và tiểu não ở chó mắc bệnh Care 59 Hình 3.16: Túi mật sưng 59 Hình 3.17: Mỡ vành tim và tim nhão Phổi sung và xuất huyết của chó mắc bệnh Care 59 Hình 3.18: Ruột non xuất huyết và bong hết niêm mạc 59 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp …………………… viii Hình 3.19: Cơ tim xuất huyết 59 Hình 3.20: Xoang ngực chứa nhiều dịch 59 Hình 3.21: Thận sưng 60 Hình 3.22: Xuất huyết ruột già 60 Hình 3.23: Khí quản bị xuất huyết chó mắc bệnh Care 60 Hình 3.24: Phổi viêm có mủ 60 Hình 3.25: Chó mắc bệnh Care bị viêm phế quản phổi (HE x 10) 64 Hình 3.26: Chó mắc bệnh Care lông nhung ruột đứt (HE x 10) 64 Hình 3.27: Cơ tim xuất huyết ở chó mắc bệnh Care (HE x10) 65 Hình 3.28: Nang lympho teo (HE x10) 65 Hình 3.29: Thâm nhiễm tế bào viêm ở phổi của chó mắc bệnh Care (HE x10) 65 Hình 3.30: Tế bào ruột xuất huyết và thoái hóa (HE x40) 65 Hình 3.31: Tế bào gan xuất huyết, thâm nhiễm tế bào gan ở chó mắc bệnh Care (HE x 40) 65 Hình 3.32: Tế bào hạch phổi xuất huyết lan tràn của chó mắc bệnh Care (HE x 10) 65 Hình 3.33 . Virus Care được phát hiện bằng phản ứng RT-PCR (Chó C01) 66 Hình 3.34 . Virus Care được phát hiện bằng phản ứng RT-PCR (Chó C02) 67 Hình 3.35 . Virus Care được phát hiện bằng phản ứng RT-PCR (Chó C04) 67 Biểu đồ 3.1: Tỉ lệ chó mắc bệnh Care ở chó các lứa tuổi 44 Biều đồ 3.2. Tỷ lệ chó mắc bệnh Care ở chó các lứa tuổi 46 Biều đồ 3.3 Tỉ lệ chó mặc bệnh Care ở các mùa vụ trong năm 47 [...]... trong nghiên c u và ch n ñoán b nh ñ ng v t, ñ c bi t là trong ch n ñoán b nh Care chó Xu t phát t yêu c u c p thi t trên, d a vào nh ng tính năng ưu vi t c a ph n ng RT- PCR chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: Nghiên c u bi n ñ i b nh lý c a chó m c b nh Care và ng d ng k thu t RT- PCR ñ ch n ñoán b nh” 2 M c ñích và yêu c u - Nh m làm rõ các tri u ch ng lâm sàng, bi n ñ i b nh lý ñ i th , vi th c a chó. .. Care trong nh ng năm g n ñây và ng d ng ñư c k thu t RT- PCR ñ ch n ñoán b nh Care chó 3 Ý nghĩa th c ti n c a ñ tài - K t qu nghiên c u ñ c ñi m b nh lý giúp cho Bác s Thú y có thêm kinh nghi m ñ ch n ñoán lâm sàng b nh Care, phát hi n s m nh ng chó nghi m c b nh Care - ng d ng ph n ng RT- PCR ñ phát hi n s m, chính xác nh ng chó b m c b nh Care T ñó, ñưa ra nh ng bi n pháp phòng, tr b nh k p th i và. .. d hơn chó 3 tu n tu i do chó 3 tu n tu i có mi n d ch th ñ ng thu nh n ñư c t m (H ðình Chúc và cs, 1993; Simpson và cs, 1994) Ngư i ta cũng ñã ghi nh n virus Care gây viêm não trên chó l n (Merchant và cs 1961 – 1969) 1.2.2 3 Mùa v m c b nh Tô Du và Xuân Giao (2006), khi nghiên c u v d ch t h c b nh Care cho r ng t t c các loài chó ñ u c m th b nh, nhưng m n c m hơn là loài chó lai, chó c nh, chó n... cu i ñuôi và chân ( Hapơ Hauxơ, 2002) 1.1.2 Các gi ng chó c a Vi t Nam - Chó vàng: Chó có t m vóc trung bình, cao 50 - 55 cm, n ng 12 - 15 kg, có b lông vàng tuy n là nòi chó săn, khá tinh khôn và qu n ch , ñư c nuôi nhi u kh p các ñ ng quê Chó ñ c ph i gi ng ñư c l a tu i 15 - 18 tháng Chó cái sinh s n l a tu i 12 - 14 tháng M i l a chó cái ñ 4 - 7 con, trung bình 5 con - Chó Mèo: Là gi ng chó c a ngư... sâu và thuôn ðuôi dài nhi u lông, lông dài và m m tr lông ph n ñ u ng n, th m chí lông còn ph kín chân, lông màu ñ g , nhu m vàng và sáng b c v i v t ñ m ñen Irish Setter c c kỳ nhanh nh n v i kh u giác t t và d thích nghi v i m i ñ a hình v i b t kỳ ñi u ki n khí h u nào Vào th k 18 nó ñư c dùng ñ tìm d u v t và làm chó săn Gi ng chó này có tu i th cao (Hapơ, Hauxơ, 2002) - Chó Boxer Là m t gi ng chó. .. ng chó này không d t n l m S hoàn h o v hình th và tính cách c a Boxer ñư c hoàn ch nh vào năm 1896 khi câu l c b Boxer ñ u tiên ñư c thành l p Boxer là gi ng chó lai t o ñ p nh t: ð u cân x ng v i thân và hơi d c Hàm th p và kéo dài u n cong lên trên Mũi to và ñen v i l mũi to Tai ñ nh ñ u và b c t c t phía trên C r ng kho săn ch c và không có y m ðuôi ng n và cong lên cao Chân trư c có th th ng và. .. có m t ñ i ngũ chó phong phú c v s lư ng và ch t lư ng ph c v cho v n ñ an ninh qu c phòng và th hi u c a ngư i dân 1.1.1 Các gi ng chó nh p ngo i - Chó German Shepher (Berger ð c) Có nhi u gi thuy t v ngu n g c c a gi ng chó này: có gi thuy t cho r ng nó là k t qu c a s pha t p gi a nhi u gi ng chó chăn c u s ng ð c ho c là k t qu c a s pha t p t phát gi a nh ng con chó cái chăn c u và chó sói Cho ñ... h c Nông nghi p …………………… 8 - Chó Phú Qu c: Là gi ng chó tinh khôn, dũng c m, chó Phú Qu c thư ng có b lông ñen, ñ m tr ng hay vàng, b ng thon, trên lưng lông m c có hình xoáy, hay l t theo ki u r ngôi, lông vàng xám có các ñư ng k nh t ch y d c theo thân Chó cao 50 - 60 cm, n ng 20 - 25 kg 1.2 B nh Care B nh Care hay b nh sài s t hi m thư ng x y ra chó non, lây lan nhanh và t l ch t r t cao ðây là m... Nông nghi p …………………… 10 phân l p và các type các khu v c ñ a lý khác nhau ñã ñư c nói t i Các type c a CDV bao g m: Asia 1 (Nh t B n, Trung Qu c), Asia 2 (ch có Nh t B n), B c C c, ñ ng v t hoang dã châu Âu, USA 1 và 2, CDV c ñi n (Onderstepoort, Convac, Rockborne và Snyder Hill) (Haas và cs, 1997; 1999; Harder và Osterhaus, 1997; Martella và cs, 2006; 2007; Yoshida và cs, 1998) Bên c nh ñó, d a trên... g c và nh n d n v dư i Lông ng n dày và mư t Màu cơ b n là màu tr ng v i v t ñen và b c Nh ng con m i sinh lông hoàn toàn tr ng Dalmatian trung thành, ñ c l p tr m tính nhưng r t linh ho t khi c n thi t Chúng thích s ng g n ngư i và thích ñư c vu t ve, thích chơi v i tr em Chó có trí nh t t và hay thù dai Nh ng con chó trư ng thành ñư c s d ng như chó săn Vào th k 19 ngư i ta dùng nó ñ ch hàng và săn . mắc bệnh Care ở các mùa vụ trong năm 46 3.2. Triệu chứng lâm sàng của chó nghi mắc bệnh Care. 47 3.3 Biến đổi bệnh tích của chó mắc bệnh Care 54 3.4. Biến đổi bệnh tích vi thể chó mắc bệnh Care. hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu biến ñổi bệnh lý của chó mắc bệnh Care và ứng dụng kỹ thuật RT-PCR ñể chẩn ñoán bệnh ”. 2. Mục ñích và yêu cầu - Nhằm làm rõ các triệu chứng lâm sàng, biến. đổi bệnh lý đại thể, vi thể của chó mắc bệnh Care trong những năm gần đây và ứng dụng được kỹ thuật RT-PCR để chẩn đoán bệnh Care ở chó. 3. Ý nghĩa thực tiễn của ñề tài - Kết quả nghiên cứu