TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐÀ NẴNG KHOA HOÁ NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Đề tài: Nghiên cứu nhân giống vô tính in vitro giống lan Dendrobium “Sena Red” GVHD: Nguyễn Hoàng Trung Hiếu SVTH : Ngô Thị Trà Giang NỘI DUNG CHÍNH ĐẶT VẤN ĐỀ NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Hoa lan có khoảng 750 chi và 15.000–25.000 loài, trong đó Dendrobium in vitro có giá trị: ĐẶT VẤN ĐỀ Giá trị kinh tế cao. Số lượng lan lớn và bảo tồn giống quý. Tạo ra lan Dendrobium siêu bông. Sản xuất cây con quanh năm. Cung cấp cây con để bán. Hạn chế sự khai thác cây hoang dại. ĐẶT VẤN ĐỀ Giới thiệu một số dạng hoa đẹp của lan Dendrobium Orchidacea D. Sena red D. Salaya Gold D. Salaya White D. Pink Mini D. Chan Chao D. Negro VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Hoa lan Dendrobium Sena Red VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Bước 1: Nhân protocorm Bước 2: Nhân nhanh chồi Bước 3: tạo rễ Môi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) + chất điều hòa sinh trưởng, pH= 5.8 - Điều kiện nuôi cấy: to 25 ± 1 oC, ánh sáng 2000-3000 lux ` Cây non Tạo rễ Cụm chồi phát triển Cây con 5 - 7 cm và 3 – 4 lá Tách cụm protocorm chuyển sang môi trường nhân protocorm(tách 4 miếng) Nhân nhanh cụm chồi Môi trường nuôi cấy và cụm chôi (tách 4 miếng) Cụm protocorm phát triển chuyển sang môi trường nhân nhanh chồi (tách 4 miếng) Cụm chồi phát triển chuyên sang môi trường tạo rễ (tách 4 miếng) Cụm chồi gồm nhiều thể chồi Quy trình nghiên cứu Dendrobium Sena red KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Bảng 3.1. Kết quả nhân protocorm ở môi trường BA Ký hiệu Nồng độ mg/l Tình trạng Protocorm Ghi chú 2 tuần Sau 4 tuần M0 0 0 + Protocorm nhỏ ít có hiện tượng hoá vàng và đen. M1 0,5 + ++ Protocorm mới xanh nhưng ít. M2 1 ++ +++ Protocorm nhiều nhưng nhỏ. M3 2 ++ ++++ Protocorm xanh bóng to và rất mướt. M4 3 + + Protocorm xanh nhưng ít gần giống môi trường MS. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN M M0 M1M2 M3 M4 Hình 3.1. Kết quả nhân protocorm ở môi trường BA - M0 protocorm kém phát triển. - M3 protocorm phát triển nhanh và xanh mướt nhất. - M1, M2 xanh và chậm hơn còn M3 nhưng quá cao protocom nhỏ và trắng. Bảng 3.2. Kết quả nhân protocorm ở môi trường NAA KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Ký hiệu Nồng độ NAA (mg/l) Tình trạng Protocorm Ghi chú 2 tuần Sau 4 tuần M0 0 0 + Protocorm nhỏ ít có hiện tượng hoá vàng và đen. M5 0,1 ++ +++ Protocorm xanh mướt và nhiều phát triển chồi. M6 0,5 + ++ Protocorm xanh to và ít. M7 1 + ++ Protocorm xanh ít và nhỏ. M8 1,5 + + Protocorm nhỏ hơi vàng và ít. [...]... M0 0 0 MN1 0,1 79 NAA MN2 0,5 91 0 1,9 ± 0,63b 3 ± 0,45a 43 ± 0,61 4,5 ± 0,2c 8 ±1,0a 60± 0,65 52 ± 0 ,21 2, 53 ± - MN2, tỷ lệ 1cây ra rễ và rễ cao rễ0,65b dài, MN3 86 6,9 ± 0,5b mập và có màu xanh, cây con có nhiều lá và dài xanh mướt Môi trường Biểu đồ 3.3: Ảnh hưởng nồng độ chất điều hoà sinh trưởng NAA đến sự tạo rễ lan KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN M0 MN2 MN1 MN3 Hình 3.7 Cây lan in vitro được thu hoạch sau... 11,5±0,2b Môi trường 2 MB3 2. 86±0,79a 10,04±0,1 b 3 MB4 2. 28±0,65c 6ab 8 ,2 0,1c Biểu đồ 3.1: Ảnh hưởng nồng độ chất điều hoà sinh trưởng BA đến quá trình nhân nhanh chồi KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN MB - MB1 chồi phát triển nhanh nhất và xanh mướt MB1 MB0 MB2 - MB2, MB3, MB4 chồi phát triển nhỏ và thập hơn MB3 MB4 Hình 3.5 Kết quả nhân nhanh chồi ở môi trường nồng độ BA KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3 .2. 1 Khảo sát sự ảnh... việc nhân protocorm thì sử dung môi trường M3, M5, M9, M15 tốt - Sử dụng môi trường M3 là tốt nhất cho nhân protocorm KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3 .2. 1 Khảo sát sự ảnh hưởng của nồng độ BA đến sự nhân nhanh chồi Bảng 3.5 Kết nhân nhanh chồi trên môi trường MS bổ sung BA CĐH Nồng ST KH Chiều cao chồi/mẫu độ Số chồi(mm) cấy MS 0 M0 1,69 ± 6,7±0,15c 0,75c 0,5 BA 1 MB1 3,5±0,91a 12 0 ,28 a MB2 2. 93±0,82b 11,5±0,2b... rễ tốt nhất KẾT LUẬN 1 Môi trường nhân protocorm - Môi trương MS có bổ sung BA với 2mg/l nồng độ tốt nhất cho việc nhân protocorm 2 Môi trường nhân nhanh chồi - Thì môi trường tốt nhất cho việc nhân BA với nồng độ 0,5mg/l, và kết hợp giữa BA 0,5mg/l với NAA 0,1mg/l tốt nhân chồi tạo rễ 3 Môi trường tạo rễ - Môi trường tốt nhất cho việc tạo rễ lan Dendrobium Sena Red là môi trường có bổ sung NAA 0,5mg/l... Hình 3 .2 Kết quả nhân protocorm ở môi trường NAA KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Bảng 3.3 Kết quả nhân protocorm ở môi trường nồng độ 2mg/l BA với NAA Ký CĐHST hiệu (mg/l) BA Tình trạng Protocorm NAA 2 tuần Ghi chú Sau 4 tuần M0 0 0 0 + M9 2 0,1 ++ ++++ Protocor nhỏ ít Protocorm xanh mướt cụm chồi nhiều và to M10 2 0,5 ++ +++ Protocorm xanh to và ít hơn M11 2 1 + ++ Protocorm phát triển tương đối M 12 2 1,5 +... sung NAA 0,5mg/l ĐỀ NGHỊ Có thời gian tôi sẽ tiến hành giai đoạn huấn luyện và đưa cây ra vườn ươm Cần tiếp tục nghiên cứu thêm để tìm tỉ lệ phối hợp (auxin, giberelin, cytokinin) Áp dụng trên các đối tượng hoa lan Dendrobium lai khác nhằm đánh giá hiệu quả nông học và hiệu quả kinh tế XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN THẦY CÔ VÀ CÁC BẠN LẮNG NGHE! ... hợp NAA đến sự nhân nhanh chồi Bảng 3.6 Kết nhân nhanh chồi trên môi trường MS bổ sung BA kết hợp với NAA CĐHST Nồng Số Chiều cao Hiệu độ Ký chồi/mẫu chồi(mm) cấy MS 0 M0 1,59 ± 6,7±0,15c 0,73c BA 0,1 MBN5 0,5 a MBN6 2. 87±0,87b 11,5±0,18a 1 b MBN7 2. 74±0,76b 10,1±0,17b 0,5mg/l + NAA 0,1 MBN5 3.6±0,89a 3.6±0,89a 11,74±0 ,22 9,74±0 ,20 b Môi trường Biểu đồ 3 .2: Ảnh hưởng nồng độ chất điều hoà sinh trưởng0,5mg/l... rễ đạt 1-3 nhưng mập và dài, cây con thấp, lá có màu xanh đậm Môi trường Biểu đồ 3.4 Ảnh hưởng chất điều hoà sinh trưởng IAA đến sự ra rễ lan Dendrobium KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN M0 MI1 MI2 MI3 Hình 3.8 Cây lan in vitro được thu hoạch sau 1 tháng nuôi cấy trong môi trường bổ sung chất điều hoà sinh trưởng IAA KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN NHẬN XÉT MÔI TRƯỜNG TẠO RỄ Môi trường tốt nhất cho sự phát triễn rễ là môi... chồi của lan Dendrobium Sena Red - Khi kết hợp giữa hai chất điều hoà sinh trưởng thì nồng độ kết hợp NAA 0,1mg/l với BA 0,5mg/l thuận lợi cho việc phát triển chồi và tạo rễ sau này KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.3.1 Khảo sát sự ảnh hưởng của nồng độ NAA đến tạo rễ lan Bảng 3.7 Kết quả tạo rễ trên môi trường MS bổ sung NAA MT Ký hiệu Nồng độ Tỷ lệ Số rễ/cây Độ dài rễ Chiều cao (mm) cây (mm) 0 32, 4 ± 0,65... nồng độ quá cao protocom nhỏ và màu xanh hơi vàng bắt đầu hóa nâu M11 M 12 Hình 3.4 Kết quả nhân protocorm ở môi trường nồng độ BA 2mg/l kết hợp với NAA KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Bảng 3.4 Kết quả nhân protocorm ở môi trường nồng độ NAA 0,1mg/l kết hợp với BA đến sự nhân nhanh protocorm Ký CĐHST Tình trạng hiệu (mg/l) Protocorm NAA BA 2 Ghi cShú Sau 4 tuần tuần M0 0 0 0 + Protocor nhỏ ít M13 0,1 0,5 + ++ Protocorm . tính in vitro giống lan Dendrobium “Sena Red” GVHD: Nguyễn Hoàng Trung Hiếu SVTH : Ngô Thị Trà Giang NỘI DUNG CHÍNH ĐẶT VẤN ĐỀ NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KẾT LUẬN