B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I U XUN TU N Phân lập, xác định số ®Ỉc tÝnh sinh vËt hãa häc cđa vi khn Pasteurella multocida gây bệnh Tụ huyết trùng chim gà cảnh nuôi Vờn Thú Hà Nội nhằm chọn chủng chÕ vacxin phßng bƯnh LU N VĂN TH C SĨ NÔNG NGHI P Chuyên ngành : THÚ Y Mã s : 60.62.50 Ngư i hư ng d n khoa h c: PGS.TS CÙ H U PHÚ HÀ N I - 2010 Lêi cam ®oan Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên c u c a riêng tơi Các s li u, k t qu nêu lu n văn trung th c chưa t ng ñư c cơng b b t kì cơng trình khác Tơi xin cam đoan r ng thơng tin trích d n lu n văn đ u ñã ñư c ch rõ ngu n g c M i s giúp ñ ñã ñư c c m ơn Tác gi lu n văn Âu Xuân Tu n Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nụng nghi p i Lời cảm ơn hoàn thành lu n văn s c g ng c a b n thân nh n ñư c s quan tâm giúp ñ c a nhà trư ng, b n bè ñ ng nghi p Trư c tiên xin chân thành cám ơn s giúp ñ quý báu c a th y cô giáo b môn B nh lý, th y cô giáo khoa Thú y, Vi n sau ð i h c- Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i ñã dành nhi u th i gian cơng s c giúp đ tơi q trình h c t p th c hi n ñ tài Tơi xin bày t lịng bi t ơn sâu s c t i PGS TS Cù H u Phú PGS.TS Nguy n H u Nam ðã t n tình giúp đ , hư ng d n tơi qua trình th c hi n hoàn thành lu n văn Tơi xin chân thành c m ơn Ban giám đ c Vi n Thú y, anh ch em B môn Vi trùng- Vi n Thú y b n bè ñ ng nghi p gia ñình ñã giúp ñ đ ng viên tơi hồn thành chương trình h c t p cao h c hoàn thành Lu n văn t t nghi p Xin chân thành c m ơn! Hà N i, tháng 11 năm 2010 Tác gi lu n văn Âu Xuân Tu n Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p………… ii Mơc lơc Lêi cam ®oan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v ký hiệu v Danh mục bảng vi Danh mục ảnh viii Mở đầu i 1.1 TÝnh cÊp thiÕt cđa ®Ị t i 1.2 Mơc tiêu đề t i 1.3 ý nghĩa khoa häc v thùc tÕ cđa ®Ị t i 2 Tổng quan t i liệu 2.1 Tình hình nghiên cøu vỊ bƯnh Tơ hut trïng gia sóc, gia cÇm trªn thÕ giíi v n−íc 2.2 Mét sè đặc tính vi khuẩn Pasteurella multocida 2.3 Dịch tƠ häc v ®−êng trun bƯnh 22 2.4 TriƯu chøng, bƯnh tÝch bƯnh Tơ hut trïng gia cÇm 23 2.5 Tính mẫn cảm với kháng sinh vi khuẩn Pasteurella multocida 25 2.6 Vacxin phòng bệnh 26 Đối tợng - nội dung- nguyên liệu v phơng pháp nghiên cứu 30 3.1 Đối tợng nghiên cứu 30 3.2 Nội dung nghiên cứu 30 3.3 Nguyên liệu 30 3.4 Phơng pháp nghiên cứu 33 Kết nghiên cứu v thảo luận 44 4.1 Tình hình nhiễm bệnh v tỉ lƯ chÕt cđa chim, g c¶nh vi khn Pasteurella multocida Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p………… iii 44 4.2 Tû lƯ nhiƠm bƯnh Tơ hut trïng theo løa ti 4.3 47 Kết phân lập v xác định vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh Tụ huyết trùng đ n chim, g t¹i V−ên Thó H Néi 49 4.3.1 Kết phân lập vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh: 49 4.3.2 Kết kiểm tra đặc điểm hình thái khuẩn Pasteurella phân lập đợc 51 4.3.3 Kết nghiên cứu đặc tính sinh hóa của vi khuẩn 52 4.4 Kết định type chủng Pasteurella multocida phân lập đợc Vờn Thú H Nội 4.5 Kết xác định độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập đợc 4.6 65 Chế tạo thử nghiệm vacxin vô hoạt có bổ trợ keo phèn phòng bệnh Tụ huyết trùng cho chim, g cảnh Vờn thú H nội 4.8.2 62 Kết chế tạo thử nghiệm vacxin phòng bệnh Tụ huyết trùng chim, g cảnh nuôi Vờn Thú H Nội 4.8.1 60 Kết thử kháng sinh đồ chủng Pasteurella multocida phân lập đợc đ n chim, g nuôi Vờn thú h nội 4.8 58 Kết xác định LD50 chuột bạch (liều gây chết 50% động vật thí nghiệm 4.7 56 65 KÕt qu¶ kiĨm tra an to n v hiƯu lực vacxin động vật thí nghiệm 66 4.8.3 KÕt qu¶ kiĨm tra an to n v hiƯu lùc vacxin g thả vờn 68 4.7.4 Kết thử hiệu lực Vacxin chim, g vờn thú H Nội phơng pháp bảo hộ thụ động trªn chuét (Passive mouse protection test- PMPT) 71 KÕt luận v đề nghị 74 5.1 Kết luận 74 5.2 Đề nghị 75 T i liệu tham khảo Tr ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nụng nghi p iv 76 Danh mục chữ viết tắt ký hiệu P multocida: Pasteurella multocida LPS Lypopolysaccharides CPS Polysaccharide SDS- PAGE Nadodelcyl sulphate- polyacrylamide gel electrophoresis DNA Deoxyribonucleic Acid BHI Brain Heart Infusion EDTA Ethylene Diamine Tetra Acetic acid ELISA Enzyme – linked Immunosorbant assay IHA Indirect Haemagglutination test LPS Lypopolysaccaride MR Methyl red PBS Phosphat buffur solution PCR Polymerase Chain Reaction LD50 Lethal dosis 50 (Li u g©y ch t 50%) MLD: Minimal lethal Dosis (Li u chÝ t t i thi u) PMPT Passive mouse protection test NCCLS National Commitee of Clinical Laboratory Standards Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nơng nghi p………… v Danh mơc b¶ng STT Tờn b ng Trang 2.1 Các phản ứng sinh hoá học Pasteurella multocida 11 2-2 Đặc điểm phân biệt Pasteurella khác 12 2.3 Kết định type Pasteurella multocida theo Carter (1955) Namioka (1961) 20 2.4 Kết định type P multocida 21 3.1 Tiêu chuẩn đánh giá mức độ mẫn cảm v kháng số loại kháng sinh 4.1 43 Tình hình nhiễm bệnh v tØ lƯ chÕt tơ hut trïng cđa chim, g cảnh Vờn Thú H Nội 45 4.2 Tỉ lệ chim, g chÕt Tơ hut trïng theo ti ë Vờn Thú H Nội 47 4.3 Kết phân lập Pasteurella multocida gây bệnh từ chim, g Vờn Thú H Nội từ năm 2008- 2010 4.4 Kết kiểm tra số đặc tính sinh vật hóa học chủng vi khuẩn Pasteurella phân lập đợc 4.5 53 Kết kiểm tra khả lên men đờng chủng vi khuẩn P multocida phân lập đợc từ V−ên Thó H Néi 4.6 50 54 So s¸nh c¸c đặc tính sinh vật hoá học chủng vi khuẩn gây bệnh phân lập đợc với tác giả khác 55 4.7 Kết định type chủng P multocida phân lập đợc 57 48 Tổng hợp kết kiểm tra độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập đợc chuột bạch (n= 25) 4.9 59 Kết xác định liều LD50 chuột bạch chủng Pas.1VT phân lập đợc từ Vờn Thú H nội Tr ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nơng nghi p………… vi 61 4.10 KÕt qu¶ kháng sinh đồ chủng P.multocida phân lập đợc tõ V−ên Thó H Néi 63 4.11 KÕt qu¶ kiĨm tra số tiêu lô vacxin 66 4.12 Kết kiểm tra an to n vacxin cht 67 4.13 KÕt qu¶ kiĨm tra hiƯu lùc cđa vacxin chuột bạch 67 4.14 Kết thử hiệu lực vacxin Tụ huyết trùng g thả vờn 69 4.15 KÕt qu¶ kiĨm tra hiƯu lùc vacxin sau tiêm 21 ng y phản ứng bảo hộ thụ ®éng trªn cht Trư ng ð i h c nơng nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p………… vii 72 Danh mục hình STT Tên hình Trang Bệnh tích g cảnh nuôi vờn thú chết mắc bƯnh tơ hut trïng Tû lƯ nhiƠm bƯnh Tơ huyết trùng đ n chim, g cảnh theo lứa tuổi Vờn thú H nội 46 47 Hình th¸i vi khn P multocida chơp d−íi kÝnh hiĨn vi (độ phóng đại 1000 lần) 52 Vi khuẩn Pasteurella multocida nuôi cấy môi trờng thạch máu 52 Phản ứng Indol dơng tính 56 Phản ứng lên men đờng vi khuẩn P multocida 56 Các s¶n phÈm cđa ph¶n øng PCR 58 KÕt qu¶ thử kháng sinh đồ chủng P.multocida phân lập ®−ỵc Trư ng ð i h c nơng nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p………… viii 65 Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề t i Vờn Thú H Nội l sở nuôi dỡng v trng b y động vật phục vụ khách tham quan nâng cao dân trí Đây l sở để nghiên cứu khoa học động vật, l nơi bảo tồn v nhân nuôi, phát triển nguồn gen quý cđa n−íc ta Trong sè 96 lo i v ph©n lo i động vật đợc nuôi dỡng có 35 lo i thuộc diện quý v đặc hữu đợc ghi sách đỏ Việt Nam Trong nhiều năm qua vờn thú đ tập trung nghiên cứu bảo tồn đ n chim, thú đặc biệt l lo i chim v g cảnh Tuy nhiên khó khăn l dịch bệnh rải rác xảy quanh năm v l m n o để phòng chống dịch bệnh có hiệu điều kiện chăn nuôi vờn thú Lo i chim v g cảnh đợc đa v o nuôi nhốt không gian chật hẹp, chúng bị tác động c¸c yÕu tè stress nh−: Thêi tiÕt, khÝ hËu, thøc ăn v hoạt động x hội ngời l m thay đổi tập tính tự nhiên, ảnh hởng đến sức khoẻ, trạng thái sinh lý, dễ mắc c¸c bƯnh trun nhiƠm, dinh d−ìng, néi khoa v.v dÉn đến tử vong Chính việc nghiên cứu tìm giải pháp v phòng trị bệnh cho lo i n y điều kiện nuôi nhốt l cần thiết Một bệnh truyền nhiễm xảy với chim v g cảnh l bệnh Tụ huyết trùng (Pasteurellosis) Bệnh đ gây chết chim v g cảnh đặc biệt lo i quý nh g lôi lam m o trắng, g lôi lam đuôi trắng, trĩ khoang, công, trĩ v đ l m ảnh hởng lớn đến việc bảo tồn lo i n y Vì việc sử dụng vacxin tiêm phòng tạo miễn dịch chủ động l biện pháp quan trọng để phòng bệnh cho đ n chim, g cảnh nớc ta nh nhiều nớc giới đ ứng dụng nhiều phơng pháp chế tạo vacxin v việc chế vacxin ® cã nhiỊu c¶i tiÕn Nh−ng cho ®Õn viƯc dùng vacxin Tụ huyết trùng gia cầm phòng bệnh cho ® n chim, g c¶nh vÉn ch−a cho kÕt qu¶ phòng bệnh nh mong muốn Nguyên nhân chủ yếu l vi khuẩn Pasteurella có cấu trúc kháng nguyên phức tạp, độc lực Tr ng i h c nụng nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nơng nghi p…………… th¸ch cờng độc Nh hiệu lực bảo hộ vacxin chế thử g thả vờn từ 60100% so với kết nghiên cứu tác giả Phan Thanh Phợng (1993)[12]; Lê Lập (1996) [5] tiêm vacxin Tụ hut trïng keo phÌn chđng N 41 cho g tû lệ bảo hộ đạt 100%, bớc đầu nhận thÊy Vacxin chÕ tõ chđng Pas.1VT ph©n lËp tõ V−ên thú có khả bảo hộ tốt g thả vờn Từ kết đ xác định liều tiêm vacxin phù hợp cho g : lô thí nghiệm 1: với liều tiêm miễn dịch 0,5ml/g , tỷ lệ bảo hộ đạt 60% Theo với liều tiêm nh lợng kháng nguyên đa v o thể g cha đủ kích thích thể sản sinh lợng kháng thể để bảo vệ g sau đợc thử thách cờng độc Lô thí nghiệm 2: liều tiêm miễn dịch l 1ml /g v lô thí nghiệm với liều tiêm miễn dịch l ml/g , tỷ lệ bảo hộ đạt 100% Nh chứng tỏ lợng kháng nguyên đa v o thể đủ để kích thích thể sản sinh kháng thể kháng lại mầm bệnh Tuy nhiên lô thí nghiệm với liều tiêm miễn dịch l 2ml/ g dù tỷ lệ bảo hộ đạt 100% g thí nghiệm nhng theo chế miễn dịch cho dù đa lợng lớn kháng nguyên v o thể nhng kích thích thể sản sinh kháng thể mức giới hạn, tiêm cho g với lợng lớn ml vacxin dễ gây stress cho vật Từ kết xác định liều tiêm vacxin l 1ml (có 2,5 x 109 kháng nguyên) cho g l phù hợp Đánh giá kết thử an to n v hiệu lực g thả vờn cđa vacxin chÕ thư víi tiªu chn kiĨm tra hiƯu lùc vacxin cđa Trung t©m kiĨm nghiƯm thc thó y quốc gia vacxin Tụ huyết trùng gia cầm hiệu lực bảo hộ vacxin đạt tỷ lệ bảo hộ từ 50% trở nên l đạt tiêu chuẩn nh vacxin đạt tiêu an to n v hiệu lực Dựa kết thử hiệu lực bảo hộ vacxin g thả vờn l c¬ Trư ng ð i h c nơng nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nơng nghi p…………… 70 së, chóng tiến h nh xác định hiệu lực vacxin chế đợc lo i chim, g cảnh Vờn thó H néi 4.7.4 KÕt qu¶ thư hiƯu lùc cđa Vacxin chim, g vờn thú H Nội phơng pháp bảo hộ thụ động chuột (Passive mouse protection test- PMPT) Để kiểm tra khả tạo miễn dịch loại kháng nguyên loại vacxin P.multocia, sử dụng nhiều phơng pháp nh: công cờng độc động vật, phản ứng ELISA, phản ứng ngng kết hồng cầu gián tiếp IHA (Carter, 1955), phản ứng bảo hộ thụ động, bảo hộ chủ động chuột, nhng phản ứng bảo hộ thụ động chuột đợc nhiều tác giả giới sử dụng nhiều Đây l phơng pháp rẻ phơng pháp công cờng độc động vật, nhng lại đánh giá trực tiếp đợc khả sản sinh miễn dịch vật đợc tiêm vacxin, khả bảo hộ vật chủ chống lại vi khuẩn cảm nhiễm Để đánh giá hiệu lực vacxin chế tạo chim, g cảnh, đ tiêm vacxin cho chim, g nuôi Vờn thú H Nội Sau 21 ng y tiêm vacxin, tiÕn h nh lÊy m¸u cđa 10 g bÊt kỳ, chắt huyết vô trùng để l m thí nghiệm Mỗi mẫu huyết đợc tiêm cho chuột víi liỊu 0,2ml/con Sau 24 giê, dïng chđng P.multocida c−êng độc tơng ứng để thử thách với liều 100LD50 v o xoang Theo dâi 7-10 ng y KÕt đợc trình b y bảng 4.15 Tr ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nơng nghi p…………… 71 B¶ng 4.15 KÕt qu¶ kiĨm tra hiƯu lùc vacxin sau tiªm 21 ng y b»ng phản ứng bảo hộ thụ động chuột Số thứ tù Sè TT Gièng g mÉu huyÕt Sè chuét thí nghiệm Liều Kết thử thách công cờng Số chuột độc sống Tỷ lệ bảo hộ (%) Lôi lam m o tr¾ng 10LD50 100 G Lôi trắng 10LD50 100 Lôi lam h«ng tÝa 10LD50 100 C«ng tr¾ng 4 10LD50 75 G rõng tai ®á 10LD50 100 G rõng tai tr¾ng 10LD50 75 Chim trÜ 10LD50 100 G tiỊn mỈt v ng 10LD50 100 G rõng tai ®á 10LD50 100 10 10LD50 100 10LD50 0 10 G rõng tai tr¾ng 11 Đối chứng Kết bảng 4.15 cho thấy: Tỷ lệ bảo hộ chuột mẫu huyết cao tõ 75- 100 chuét thÝ nghiÖm Trong sè 10 mẫu huyết có mẫu đạt tỷ lệ bảo hộ 100% (chiếm tỷ lệ 80%) Có mẫu đạt tû lƯ b¶o 75% (chiÕm tû lƯ 20%) Trong lô đối chứng chuột không đợc tiêm huyết miễn dịch thử thách cờng độc với liều 10LD50 tất chuột chết chết hết với tỷ lệ 100% vòng 24h Mổ chuột đối chứng phân lập đợc vi khuẩn P.multocida khiết từ máu tim, chứng tỏ chuột chết l Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p…………… 72 vi khuÈn P.multocida cờng độc Từ kết cho thấy: mẫu huyết có khả bảo hộ 75100% chuột thí nghiệm, nh thấy sau đợc tiêm vacxin chim v g cảnh đ sản sinh kháng thể, có khả bảo hộ chim v g cảnh chống lại bệnh So sánh tỷ lệ bảo hộ víi tiªu chn kiĨm nghiƯm vacxin Tơ hut trïng (Quy trình kiểm nghiệm vacxin nh nớc) phơng pháp bảo hộ thụ động chuột lô chuột đối chứng chết 100%, lô chuột thí nghiệm bảo hộ đợc 50% với liều công 10LD50 vacxin đạt tiêu chuẩn hiƯu lùc, th× vacxin tơ hut trïng g v−ên thó chế tạo bảo hộ từ 75- 100% chuột lô thí nghiệm chứng tỏ vacxin có khả bảo hộ cho g cảnh vờn thú Kết bảo hộ chuột mẫu huyết g sau 21 ng y tiêm vacxin đạt tỷ lệ cao l phï hỵp víi quy lt vỊ thêi gian xuất kháng thể: kháng thể không hình th nh 24 giê sau tiªm m chØ xuÊt hiƯn tõ ng y thø ®Õn ng y thø 15 v đạt lợng cao sau 2- tuần Từ nhận xét đánh giá vacxin có khả bảo hộ tốt với đ n chim, g cảnh nuôi Vờn thú H Nội Tr ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nụng nghi p 73 Kết luận đề nghị 5.1 KÕt ln Tû lƯ chÕt bƯnh Tơ huyết trùng đ n chim v g cảnh nuôi Vờn thú H Nội từ 2008 đến 2010 l : 40,32% (Năm 2008 l : 43,75%, năm 2009 l : 38,46% v năm 2010 l 40%) Tỉ lệ nhiễm v chết bệnh Tụ huyết trùng đ n chim, g cảnh Vờn Thú H Nội theo lứa tuổi: - Giai đoạn dới 30 ng y tuổi th× tØ lƯ nhiƠm thÊp nhÊt l 4,0% - Giai ®o¹n 31-60 ng y ti tØ lƯ nhiƠm cã cao l 28,0% - Giai đoạn g 60 ng y ti tØ lƯ nhiƠm rÊt cao l 68,0 % Vi khuẩn gây bệnh tụ huyết trùng cho lo i chim, g cảnh phân lập đợc từ Vờn Thú H Nội có đặc điểm hình thái nuôi cấy, đặc tính sinh vật hoá học vi khuẩn Pasteurella multocida nh t i liệu đ công bố Vi khuẩn P multocida phân lập đợc từ chim, g mắc bệnh Tụ huyết trùng Vờn Thú H Néi thuéc serotype A Vi khuÈn P multocida gây bệnh đ n chim, g Vờn thú H Nội có độc lực cao động vật thí nghiệm Chọn đợc chủng P multocida Pas.1VT để chế thư nghiƯm vacxin phßng bƯnh Tơ hut trïng chim, g nuôi Vờn thú H Nội Vacxin chế dới dạng vô hoạt có bổ trợ keo phèn với liều tiêm ml/ có chứa 2,5 tỷ kháng nguyên Vacxin an to n v bảo hộ 100% chuột thÝ nghiƯm v g nh B»ng ph¶n øng bảo hộ thụ động chuột, đ khẳng định vacxin có khả kích thích thể chim, g cảnh nuôi Vờn thú H Nội sản sinh kháng thể, b¶o 75- 100% chuét Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p…………… 74 Vi khuẩn P multocida phân lập đợc từ chim, g cảnh Vờn Thú H Nội mẫn cảm víi c¸c kh¸ng sinh nh−: Nofloxacin, Ceftriaxone víi tû lƯ 100% v Amoxicillin v Amikacin tû lƯ 76% 5.2 §Ị nghị - Cần xác định rõ thêm type kháng nguyên thân P.multocida gây bệnh Tụ huyết trùng chim, g cảnh vờn Thú H Nội m trình thí nghiệm cha có điều kiện xác định - Tiếp tục thử nghiệm để đánh giá khả bảo hộ Vacxin với đ n chim, g cảnh nuôi vờn thú H Nội - Xác định ®é d i miƠn dÞch cđa vacxin ®Ĩ ®Ị xt quy trình sử dụng v lịch tiêm phòng vacxin phù hỵp Trư ng ð i h c nơng nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nơng nghi p…………… 75 tµi liƯu tham khảo I Tiếng Việt Nguyễn Xuân Bình- 1995 Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng gia cầm Long An v biện pháp phòng trừ thích hợp Luận án Phó tiến sĩ khoa học nông nghiệp, H Nội- 1995 Đặng Xuân Bình v cs- 2010 Khảo sát lu h nh vi khuẩn Pasteurella multocida ë gia sóc mét sè tØnh miỊn nói phÝa Bắc Việt nam Tạp chí KHKT thú y XVII, số 2- 2010 H Nội, tr 56-57 Sa Đình Chiến (2000) Nghiên cứu Bệnh Tụ huyết trùng g Sơn la, số đặc tính Pasteurella multocida phân lập đợc, biện pháp phòng trị Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp H nội 2000 Phạm Khắc Hiếu, Lê Thị Ngọc Diệp (1997) Giáo trình Dợc lý, thú y NXB N«ng nghiƯp - 1977, trang 89 - 94; 102 - 105 Lê Lập (1996) Nghiên cứu số đặc tÝnh sinh häc v miƠn dÞch cđa chđng vacxin N41 v chủng Pasteurella multocida phân lập gia cầm số tỉnh miền Trung, nhằm nâng cao hiệu qđa sư dơng vacxin Ln ¸n Phã TiÕn sÜ khoa học nông nghiệp, H Nội - 1996 Dơng Thế Long v Lê Văn Tạo (1995) Xác định serotype kháng nguyên capsullar vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập từ vật nuôi Sơn La Tạp chí nông nghiệp v c«ng nghiƯp thùc phÈm 1995, sè 1, trang 35 Nguyễn Ng (1994) Tính kháng nguyên v độc lực vi trùng khu vực miền Trung v biện pháp phòng trị - Báo cáo Hội nghị tổng kết công tác KHKT 1993 - 1994, Bộ nông nghiệp v công nghiƯp thùc phÈm Trư ng ð i h c nơng nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p…………… 76 Ho ng Đạo Phấn (1983) Nghiên cứu định type Pasteurella multocida LuËn ¸n Phã TiÕn sÜ khoa häc Xophia, Bungari 1983 Ho ng Đạo Phấn (1986) Về đặc tính cđa Pasteurella multocida v type hut cđa chóng T¹p chÝ KHKT thó y, 1986, trang - 10 Nguyễn Vĩnh Phớc (1978) Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia sóc, NXB N«ng th«n 1978, trang 223 - 231 11 Phan Thanh Phợng (1989) Cơ sở miễn dịch v dịch tễ điều khiển phòng chống đặc hiệu bệnh tụ huyết trïng gia sóc v gia cÇm ë ViƯt Nam Ln ¸n TiÕn sÜ khoa häc Matxc¬va, 1989 12 Phan Thanh Phợng (1993) Nghiên cứu chế tạo v sử dụng vacxin nhũ hoá tụ huyết trùng gia cầm Tạp chí nông nghiƯp v c«ng nghiƯp thùc phÈm, 1993, sè 9, trang 337 - 338 13 Nguyễn Thị Thanh, Lê Văn Phớc, Trần Đình Từ (1992) Nghiên cứu số đặc điểm sinh hoá v mẫn cảm kháng sinh chủng Pasteurella multocida phân lập Thừa Thiên Huế Kỷ yếu khoa học, Trờng Đại học Nông nghiệp Huế, 1992, trang 150 - 154 14 Ngun Thiªn Thu (1996) Nghiªn cứu khả mang khuẩn tụ huyết trùng trâu, bò miền Trung Luận án Phó Tiến sĩ khoa học nông nghiệp, H Nội - 1996 15 Đỗ Ngọc Thóy v céng sù (2007) øng dơng kü tht PCR để định type giáp mô chủng vi khuẩn P multocida phân lập đợc vật nuôi Tạp chí KHKT Thó y XIV- Sè 1- 2007 tr 38- 41 16 Đặng Gia Tùng (1998) Một số đặc điểm sinh thái học g lôi lam đuôi trắng Luận án th¹c sü sinh vËt häc H néi, 1998 Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p…………… 77 II.TiÕng Anh 17 Anonymou (1867) USDA Mouthly Rpt Pp 216- 217 US Agricuture, Washington, D.C USA 18 Bain R.V.S (1954) Studies on Haemorrhagic septicaemia of cattle I Naturally Acquired Immunity in Siamese burffaloes British Veterinary, 110, 1954, 481 - 484 19 Bain R.V.S, De Alwis M.C.L, Carter G.R and Gupta B.K (1982) Haemorrhagic septicaemia Animal production and Health Paper No 33, 1982, FAO, Rome 20 Bairey M.H (1975) Immune response to Fowl cholera antigens Am J.Vet Res, 1975, 36: 575 - 578 21 Bierer B.W and Derieux W.T (1972) Ummunologic response of turkeys to an avirulent Pasteurella multocida vaccine in the drinking water Poult Sci, 1972, 51: 408 - 416 22 Blackcall P.J., Feran N., Chew G.T., Hampson D.J (1998) Population structure and diversity of avian isolates of Pasteurella multocida from Australia Microbiology 144 (2), 279- 342 23 Breed R.S, Murray E.G.D and Smith N.R (1952) Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, 7th Ed Wiliams and Wilkins, Baltimore, MD, 1957 24 Carter G.R (1952) Type specific capsular antigens of Pasteurella multocida Canadian Journal of Medical Science, 30, 1952, 48 - 53 25 Carter G.R (1955) Studies on Pasteurella multocida I.A Haemagglutination test for identification of serological types American Journal of Veterinary Research, 1955, 16:481 - 484 26 Carter G.R (1958) British Veterinary Journal, 1958, 114: 356 Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p…………… 78 27 Carter G.R 1961) A new serological type of Pasteurella multocida from central Africa Veterinary Record, 1961, 73: 1052 28 Carter G.R.- 1963 Proposed modification of the serological classification of Pasteurella multocida Veterinary Record, 1963, 75: 1264 29 Carter G.R (1967) Pasteurellosis: Pasteurella multocida and P.haemolytica in advances in Veterinary Science Academic Press New York, 1967, 11: 321 - 379 30 Carter G.R and Subronto P (1973) Identification of type D strains of Pasteurella multocida with acriflavine American of Veterinary Research, 1973, 34: 293 - 294 31 Carter G.R and Rundell S.W (1975) Identification of type A strains of Pasteurella multocida using staphylococcal hyaluronidase The Veterinary Record, 1975, 96: 343 32 Carter G.R (1984) Pasteurella, Yersinia, and Franciella, P 111 - 121 in: Diagnostic Procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology 4th ed (Carter G.R, ed) Charles C, Thomas Publisher, Springfield, 1984 33 Cornelius J.T (1929) An investigation of serological relationships of 26 strains of Pasteurella multocida Journal of pathology and Bacteriology, 1929, 32: 335 - 364 34 Das M.S (1958) Studies on Pasteurella septica (Pasteurella multocida) Observation on some biophysical characteristics J Comp Pathol ther, 1958, 68: 288 - 294 35 De Alwis M.C.L (1992) Pasteurellosis in production animals: Areview An International workshop sponsored by ACIAR held at Bali Indonesia 10 - 13 August 1992, 14 - 24 36 De Jong M.F and Borst G.H.A (1985) Selective media for the isolation of Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p…………… 79 Pasteurella multocida and Bordetella bronchiseptica Vet Rec, 1985, 116: 167 37 Dorsey T.A (1963) Studies of fowl cholera I A biochemic study of avian Pasteurella multocida strain Avian Dis, 1963, 7: 386 - 392 38 Esslinger J, Selein R.S and Blobel (1992) Hyaluronic - acid midialed Adhesion of Pasteurella multocida to Hela cells ACIAR proceeding SN 43 Indonesia, 1992, P 40 - 43 39 Gray H (1913) Some diseases of birds In: E.W.Hoar (ed) A System of Veterinary Medicine, Alexander Eger Chicago, 1913, Vol 1, P 420 - 432 40 Hamon B.G, Glisson J.R, Latimer K.S, Steffens W.L, and Nunnally J.C (1991) Resistance of Pasteurella multocida A: 3,4 to phagocytosis by turkey macrophages and heterophils, American Journal of Vetermary research, 52, 1991, P 1507 - 1511 41 Heddleston K.L, Watko L.P, and Rebers P.A (1964) Dissociation of a fowl cholera strains of Pasteurella multocida Avian Dis., 1964, 8: 649 - 657 42 Heddleston K.L, Gallagher J.E and Rebers P.A (1972) Fowl cholera gel diffusion precipitin test for serotyping P multocida from avian species Avian diseases 16: 925 - 936 Jexp Med 1930, 1972, 57: 235 - 238 43 Heddleston K.L, Rebers P.A (1972) Fowl cholera: Cross - immunity induced in turkeys with formalin - killed in vivo propagated Pasteurella multocida Avian Dis, 1972., 16: 578 - 586 44 Heddleston K.L, Rebers P.A and Wessman G (1975) Fowl cholera ummunologic and serologic response in turkey to live Pasteurella multocida vaccine administered in the drinking water Poult Sci 1975, 54: 217 - 221 Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p…………… 80 45 Hudson L.R (1954) Pasteurella and Pasteurellosis Academic press London 1954, Cited by Rimler R.B, and Rhoades K.R, Inadlam C and Rutte J.M (eds) 46 Little P.A and Lyon B.M (1943) Demonstration of serological classifition of Pasteurella strains Journal of pathology and bacteriology, 1943, 4:203-206 47 Maheswaran S.K, Mc Dowell L.R and Pomeroy B.S (1973) Studies on Pasteurella multocida I Efficacy of an avirulent mutant as a live vaccine in turkeys Avian Dis, 1973, 17: 393 - 405 48 Manninger R (1919) Concerning a mutation of the fowl cholera bacillus Zentralbl Bakteriol Abt I Orig, 83, 1919, P 520 - 528 49 Mosier D.A (1992) Prevention and control of Pastuerella in production animals An international Workshop sponsored by ACIAR at Bali Indonesia, 10 - 13 August 1992, P 121 - 134 50 Namioka S and Murata M (1961) Serological Studies on Pasteurella multocida III “O” antigen method for capsule typing of the organism Cornel veterinarian, 1961, 51: 498 - 509 51 Namioka S characteristic (1987), and :"Pasteurella serotypes”, pp multocida 274-292 In Biochemical methods in Microbiology Vol, 10, Academic Press New York 52 Price G.H., and Smith J.E (1966) Antigen studies on Pasteurella multocida using immunodiffution techniques Identification and nommemclature of the soluble antigens of bovine Haemorrhagic septicaemia strain Jounrnal of comparative Phathology, 76.p 303- 314 53 Rhoader K.R and Rimler R.B (1992) Pasteurellosis: B.W Calneck (ed) Disease of poultry, 9th ed, Iowa state uni, press, Amer, Iowa, USA, Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p…………… 81 1992, 5: 145 - 162 54 Rhoades K.R, Rimler R.B and Sandhu T.S (1992) Pasteurellosis and pseudotuberculosis In: A laboratory manual for the isolation and identification of Avian pathogens 3rd, 1992, 3: 14 - 20 55 Rimler R.B (1987) Cross-protection factor (s) of Pasteurella multocida passive immunization of turkeys against fowl cholera caused by different serotypes Avian Dis, 1987, 31: 884 - 887 56 Rimler RB, Brogden KA (1986) Pasteurella multocida isolated from rabbits and swine: serologic types and toxin production Am J Vet Res 1986 Apr;47(4):730-7 57 Rimler R B and Rhoades K.R (1987) Serogroup F, a new capsule serogroup of Pasteurella multocida Journal of clinical Microbiology, 1987, 25: 615 - 618 58 Rimler R.B and Rhoades K.B (1989) Pasteurella multocida In: C Adlam and J.M.Rutter (eds) Pasteurella and Pasteurellosis Academic press, London, 1989, 37 - 73 59 Rimler R.B (1992) Pasteurella: Laboratory techniques for typing and Diagnosis of infection In Pasteurellosis in production animals: ACIAR proceedings No 43, 1992, P 199 - 202 60 Roberst R.S (1947) An immunological study of Pasteurella septica Journal of comparative pathology, 1947, 57: 24 - 28 61 Rosen, M (1971) Inspectious and Parasitic Diseases of Wil Birds (eds J.W Davis, L.H Karstan, D.O Trainer and P.C Anderson), pp 59, 74 Iowa State University Press Ames, Iowa USA 62 Rosenbusch C.T and Merchant I.A (1939) A study of the haemorrhagic septicaemia Pasteurella J Bacteriol, 1939, 37: 69 - 89 Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p…………… 82 63 Ryu H, Kacberle M.L, Roth J A and Griffish R.W (1984) Affect of type A Pasteurella multocida fraction on bovine polymorphonuclea leukocyte functions Infection and immunity, 43, 1984, P 66 - 71 64 Salmon D.E (1899) In the Deseases of Poultry Pp 232- 234 G.E Howard and Co…, Washington, D.C USA 65 Smith G.R (1959) Insolation of two types of Pasteurella haemolytica from sheep Nature (Lond), 183, 1959, P 1132 - 1133 66 Snipes K.B and Hirsh D.C (1986) Association of complement Sensitivity with virulence of Pasteurella multocida isolated from turkeys Avian Dis, 1986, 30: 500 - 504 67 Wei B.D and Carter G.R (1978) Live Streptomycine dependent Pasteurella multocida vaccine for prevention of haemorrhagic septicaemia American Journal of veterinary Research, 39: 1534 - 1537 68 Woolcock J.B (1992) The biology of Pasteurella multocida and Pasteurella haemolitica In: Pasteurellosis in production animals, ACIAR proceedings No 43, Indonesia, 1992, P 25 - 34 69 Yusef H.S (1935) A contribution to the serological Classification of Pasteurella strains Journal of pathology and Bacteriology, 1935, 41: 203 - 206 III TiÕng ph¸p 70 Lignieres J.M (1900) Contribution l’etude et la classification des Septicaemia Haemorrhagique des Pasteurellosis Ann Inst Pasteur (Paris), 1900, 15: 734 71 Pasteur L (1880) Sur la maladie appellÐe vulgarement cholera despoules C.R Acad Sci, 1980, 90: 239 - 248, 1030 - 1033 Trư ng ð i h c nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p…………… 83 ... khuẩn Pasteurella phân lập đợc 51 4.3.3 Kết nghiên cứu đặc tính sinh hóa của vi khuẩn 52 4.4 Kết định type chủng Pasteurella multocida phân lập đợc Vờn Thú H Nội 4.5 Kết xác định độc lực vi khuẩn. .. lực phòng bệnh vacxin phòng bệnh Tụ huyết trùng vi khuẩn Pasteurella gây đ n chim, g cảnh nuôi vờn thú H Nội l giải pháp tốt để bảo vệ cho đ n chim, g nuôi Vờn thú H Nội Dựa sở khoa học v đòi... nh đề t i: Phân lập, xác định số đặc tÝnh sinh vËt hãa häc cña vi khuÈn Pasteurella multocida gây bệnh Tụ huyết trùng chim v g cảnh nuôi Vờn Thú H Nội nhằm chọn chủng chế vacxin phòng bệnh" 1.2