i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CHẾ BIẾN o0o NGUYỄN THU NHƯỜNG NGHIÊN CỨU THU NHẬN ENZYME CHITINASE CỦA VI KHUẨN PHÂN LẬP TỪ ĐẤT THUỘC TỈNH KHÁNH HOÀ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM GVHD: Trần Thị Luyến MSSV: 46134262 ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN iv MỞ ĐẦU 1 Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. TỔNG QUAN VỀ CHITIN VÀ SẢN PHẨM TỪ CHITIN 3 1.2. KHÁI QUÁT CHUNG VỀ ENZYME 8 1.3. ENZYME CHITINASE: PHÂN LOẠI VÀ CƠ CHẾ TÁC ĐỘNG 14 1.3.1. Phân loại hệ thống enzyme thủy phân Chitin: 14 1.3.2. Cơ chế tác động của enzyme thủy phân Chitin: 17 1.4. CÁC NGHIÊN CỨU VỀ CHITINASE 18 1.4.1. Các công trình nghiên cứu ngoài nước. 18 1.4.2. Các công trình nghiên cứu trong nước. 18 1.5. PHÂN LOẠI VI KHUẨN THEO PHƯƠNG PHÁP CỔ ĐIỂN 20 Chương 2. ĐỐI TƯỢNG-VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU21 2.1. ĐỐI T ƯỢNG VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 21 2.1.1. Đối tượng 21 2.1.2. Vật liệu 21 2) Môi trường: 21 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1 Phương pháp phân lập chủng vi khuẩn 24 2.2.2. Phương pháp xác định hoạt tính enzyme 25 2.2.3. Phương pháp xác định số lượng tế bào 26 2.2.4. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định điều kiện nuôi cấy thích hợp 27 2.2.5. Bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố bên ngoài đến hoạt tính enzyme 28 2.2.6. Phương pháp xác định hoạt độ của enzyme chitinase theo phương pháp NELSON 29 2.2.7. Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu thu nhận chế phẩm enzyme kỹ thuật chitinase 29 1.Nuôi chủng vi khuẩn sinh enzyme chitinase 30 2.Tiến hành ly tâm 30 3.Kết tủa enzyme 30 2.2.8. Phương pháp phân loại chủng vi sinh vật 32 2.2.9. Phương pháp xử lý số liệu 34 Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1. KẾT QUẢ CỦA QUÁ TRÌNH PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN 35 3.2. ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY ĐẾN SINH TỔNG HỢP ENZYME CHITINASE CỦA CHỦNG VI KHUẨN LỰA CHỌN 36 3.2.1. Lựa chọn môi trường lên men thích hợp: 36 3.2.2. Ảnh hưởng của pH ban đầu 38 iii 3.2.3. Ảnh hưởng của nhiệt độ 39 3.2.4. Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy: 40 3.3. KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ENZYME TRONG LÊN MEN XỐP 42 3.4. ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ BÊN NGOÀI ĐẾN HOẠT TÍNH ENZYME CHITINASE 43 3.4.1. Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính chitinase 43 3.4.2. Ảnh hưởng của thời gian bảo quản đến hoạt tính chitinase 44 3.4.3. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính chitinase 45 3.5. THU NHẬN CHẾ PHẨM ENZYME KỸ THUẬT CHITINASE 46 3.6. PHÂN LOẠI CHỦNG VI KHUẨN THEO PHƯƠNG PHÁP CỔ ĐIỂN. 49 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 50 KẾT LUẬN 50 ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC 54 MỘT SỐ HÌNH ẢNH LIÊN QUAN ĐẾN QUÁ TRÌNH LÀM THÍ NGHIỆM 60 iv LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này Trước hết em xin bày tỏ sự biết ơn sâu sắc nhất đến cô giáo hướng dẫn: GS.TS. Trần Thị Luyến đã tận tình hướng dẫn và động viên em trong quá trình thực hiện đề tài. Em xin chân thành cảm ơn các thầy cô đã truyền đạt cho em những kiến thức quý báu trong suốt thời gian học tập trong trường. Em cũng xin bày tỏ lòng biết ơn tới các thầy cô trong khoa Chế biến, đặc biệt em xin chân thành cảm ơn các thầy cô thuộc Viện công nghệ sinh học và môi trường, ĐH Nha Trang đã tạo mọi điều kiện thuận lợi, giúp đỡ em trong quá trình thực hiện đề tài. Em cũng xin được ghi nhớ nhiều tình cảm, sự giúp đỡ của các bạn cùng lớp và gia đình đã luôn luôn chia sẻ cùng em trong suốt thời gian vừa qua. Một lần nữa em xin chân thành cảm ơn! Nha Trang, tháng 11 năm 2008 Sinh viên Nguyễn Thu Nhường 1 MỞ ĐẦU Trong những năm gần đây, ngành công nghệ sinh học đang có bước phát triển rất mạnh mẽ. Phát triển và ứng dụng công nghệ sinh học là một xu thế tất yếu trong điều kiện các ngành sản xuất truyền thống đang gây ô nhiễm môi trường nghiêm trọng. Các chế phẩm sản xuất bằng con đường sinh học không chỉ thân thiện với môi trường sống, mang lại giá trị kinh tế cao mà còn ứng dụng rất hiệu quả trong nhiều lĩnh vực đời sống. Và enzyme là một phần không thể thiếu được của ngành công nghệ sinh học. Hiện nay, có rất nhiều loại enzyme được nghiên cứu và ứng dụng của chúng ngày càng được mở rộng. Một trong số đó có enzyme chitinase với dẫn xuất quan trọng là chitosan đang được ứng dụng vào vô số các lĩnh vực khác nhau. Việt Nam có nguồn lợi thủy sản rất dồi dào, ngành công nghệ nuôi trồng và chế biến ngày càng phát triển mạnh. Nuôi tôm là một trong những nghề đã đem lại hiệu quả kinh tế cao vì tôm là mặt hàng hải sản có giá trị không những cho nguồn đạm động vật cao, mà còn là loại thực phẩm được nhiều người ưa thích và ngày càng có giá trị trên thị trường thế giới. Tuy nhiên, dịch bệnh là nỗi ám ảnh và gây thiệt hại lớn về kinh tế cho nghề nuôi tôm nói riêng và ngành thuỷ sản nói chung. Nguyên nhân gây bệnh chủ yếu là do lượng thức ăn hữu cơ dư thừa trong nước sẽ làm ô nhiễm, gây độc cho tôm, đồng thời vỏ tôm sau khi lột xác bị lắng đọng xuống đáy ao tạo điều kiện phát triển cho các sinh vật có hại cho sự phát triển của tôm. Trên thì trường đã xuất hiện nhiều chế phẩm vi sinh được nhập về nhưng quá đắt cho người nông dân sử dụng và không kiểm soát được các vi sinh vật có trong chế phẩm có ảnh hưởng gì đến sức khoẻ con người và môi trường không. Trong khi đó, việc sử dụng các chế phẩm sinh học có nguồn gốc tự nhiên lại cho hiệu quả hơn trong việc phòng và trị bệnh nhờ quá trình cạnh tranh sinh học. Khi ta thêm các vi sinh vật có lợi như các vi sinh vật có hoạt tính sinh học cao vào môi trường, chúng sẽ phân giải nhanh các chất hữu cơ, lấn át và ức chế mầm bệnh phát triển, vì thế sẽ ngăn ngừa được các mầm bệnh xảy ra. Mặt khác một trong những dạng phế liệu chiếm phần lớn từ ngành thuỷ sản là nguồn chitin từ vỏ loài giáp xác như tôm, cua. Tận dụng nguồn phế liệu này không những giải quyết triệt để vấn đề ô nhiễm môi trường mà còn tạo ra các chế phẩm mới có giá trị, làm tăng giá trị kinh tế cho ngành thủy sản. Để tạo ra các chế phẩm có khả năng hòa tan trong nước từ chitin, chitosan có thể dùng phương pháp hóa học, dùng các tia mang năng lượng cao và một số phương pháp khác để cắt đứt mạch polymer của chúng. Các phương pháp trên thu được sản phẩm với hiệu 2 suất cao nhưng có nhược điểm lớn là hoạt tính các chế phẩm thấp, nhiều tạp chất và gây độc cho người trực tiếp sản xuất. Sử dụng các enzyme chitinase, chitosanase thủy phân chitin, chitosan tạo ra các chế phẩm có hoạt tính sinh học cao không gây ô nhiễm môi trường và ít ảnh hưởng đến sức khỏe người lao động là hướng đi có lợi. Như chúng ta đã biết, trong số các vi sinh vật có khả năng sinh enzyme chitinase thì vi khuẩn đóng vai trò quan trọng. Nhiều nghiên cứu tiến hành ở trường Đại học Quốc Gia, Đại học Sư phạm Hà Nội và Viện Công nghệ Sinh học cho thấy tỉ lệ vi khuẩn sinh enzyme chitinase ở Việt Nam là khá cao (50-60%). Việt Nam là nước nhiệt đới có khí hậu nóng ẩm rất thuận lợi cho sự phát triển của vi sinh vật và đây được coi là một kho tàng vô giá về nguồn gen trong tự nhiên. Xuất phát từ những hiểu biết thực tiễn trên cùng với xu hướng nghiên cứu trên thế giới hiện nay, cũng như để góp phần khai thác nguồn vi sinh vật vô cùng phong phú của nước ta và Khánh Hoà nói riêng, tôi đã thực hiện đề tài: Nghiên cứu thu nhận enzyme chitinase của vi khuẩn phân lập từ đất thuộc tỉnh Khánh Hoà. Mục đích của luận văn: Nghiên cứu chủng vi khuẩn có khả năng sinh enzyme chitinase ngoại bào mạnh trong đất có khả năng ứng dụng thực tiễn cao. Nội dung nghiên cứu của luận văn: - Phân lập và xác định các điều kiện nuôi cấy thích hợp sinh tổng hợp enzyme chitinase. - Nghiên cứu ảnh hưởng cuả một số yếu tố bên ngoài đến hoạt tính enzyme chitinase - Bước đầu nghiên cứu thu nhận chế phẩm enzyme kỹ thuật chitinase 3 Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. TỔNG QUAN VỀ CHITIN VÀ SẢN PHẨM TỪ CHITIN Năm 1811, giáo sư Henri Braconnott là người đầu tiên nghiên cứu về Chitin, ông là người đã khám phá ra sự có mặt của chất này trong thành tế bào của một số loài nấm. Vào những năm 30 của thế kỷ 19, chất này đã được tách riêng biệt từ một loài côn trùng và được đặt tên là Chitin. Chitosan – một dẫn xuất của Chitin đã được sản xuất vào năm 1859. Sau đó có rất nhiều công trình nghiên cứu về đặc điểm và tính chất của Chitin và Chitosan nhằm áp dụng và phát triển chúng theo hướng thương mại. Chitin có ở nhiều nơi, trong thành tế bào của hầu hết các loại nấm (nấm sợi, nấm men, …), biểu bì các loài thuộc lớp nhện, côn trùng, trong mai của lớp giáp xác, các loài tảo cát, động vật nguyên sinh và giun tròn. Sự xuất hiện của Chitin ở các đối tượng khác nhau được trình bày ở bảng 1 [20]. Bảng 01. Hàm lượng Chitin ở các sinh vật Sinh vật Hàm lượng Chitin (%) Sinh vật Hàm lượng Chitin (%) Giáp xác Côn trùng Cancer 72,1 Periplaneta 2,0 Carcinus 64,2 Blatella 18,4 Paralithodes 36,0 Coleoptera 27-35 Callinectes 14,0 Diptera 54,8 Crangon 69,1 Pieris 64,0 Alaskan 28,0 Bombyx 44,2 Nephrobs 69,8 Calleria 33,7 Homarus 60-75 Nấm Lepas 58,3 Aspergillus niger 42,0 Động vật thân mềm Penicillum notatum 18,5 Clamshell 6,1 Penicillum hrysogenum 20,1 Oyster shell 3,6 Saccharomycescerevisiae 2,9 Squid skeletal pen 41,0 Mucor rouxii 44,5 Lactarius vellereus 19,0 4 Chitin có màu trắng, cứng, là polysaccarit cấu trúc thẳng, gồm các chuỗi N- acetyl glucosamin gắn với nhau nhờ liên kết glycozit. Công thức hóa học chung của Chitin là (C 6 H 9 O 4 -NHCOCH 3 ) n với tỉ lệ nitơ là 6,9%. Với sự tương đồng trong cấu trúc phân tử mà đôi lúc Chitin được xem như sản phẩm phụ của xenlulose. Chúng chỉ khác nhau ở vị trí cacbon C số 2 của đường glucose. Trong xenlulose vị trí này liên kết với một nhóm (-OH), còn trong phân tử Chitin nhóm (-OH) được thay thế bởi một nhóm phức acetylamin (-NH(CO)CH 3 ). Với rất nhiều cầu nối hydro giữa các nhóm N-acetyl của các chuỗi đã làm cho Chitin rất dai và cực bền. Chitin không hòa tan trong nước, trong dung môi hữu cơ, dung dịch kiềm hay acid vô cơ loãng, nhưng Chitin hòa tan trong dung dịch kiềm đặc nóng. Trong tự nhiên Chitin được phân giải bởi một hệ thống enzyme thủy phân của cơ thể sinh vật. Công thức cấu tạo chitin: Hình 1: Cấu trúc hóa học của Chitin Hình 2: Cấu trúc hóa học của xenlulose 5 Có 3 dạng cấu trúc dị hình của Chitin đó là Chitin, Chitin, Chitin trong đó dạng phổ biến nhất được biết đến là Chitin (hình 3), Chitin tìm thấy trong khoang của thủy tức, sinh vật phù du…. Và có trong biểu bì của động vật chân đốt, Chitin – một dạng kém bền vững và dễ thoái hóa của Chitin được tìm thấy ở mai mực, tảo cát, bộ xương ngoài côn trùng, kén và là thành phần chính trong thành tế bào của nấm (hình 4). Dạng thứ ba là Chitin, tìm thấy trong dạ dày của loài mực ống loligo, cấu trúc cụ thể của nó đến nay vẫn còn là một vấn đề gây tranh cãi. Trong hầu hết các cơ thể sinh vật, Chitin thường tồn tại ở dạng liên kết với các polyme khác như: glucan, protein …. Vì nó có khả năng phản ứng được với các hợp chất khác ở C thứ 2 của acid amin tự do. Điều này sẽ làm xuất hiện thêm số lượng lớn các đại phân tử có cấu trúc và tính chất lý hóa mới. Ví dụ, với lớp vỏ ngoài của côn trùng, khi Chitin liên kết với protein, cấu trúc của nó bị kéo căng ra làm tăng khả năng đàn hồi cho quá trình vận động [20]. Hình 3. Cấu trúc phân tử của Chitin Hình 4. Cấu trúc phân tử của Chitin 6 Sau khi phát hiện ra Chitin, vào những năm 40 của thế kỷ 20, có tới gần 50 sáng chế về các sản phẩm có liên quan đến Chitin. Chitin có mặt ở khắp nơi, với sự đa dạng và phong phú lớn, nó tham gia vào nhiều quá trình sinh học quan trọng trong tự nhiên. Đối với các sinh vật lột xác, hàng năm vỏ Chitin do chúng thải ra là rất lớn, vì vậy ngoài ý nghĩa của quá trình sinh trưởng, phát triển, thích nghi với môi trường sống của cơ thể sinh vật, vỏ Chitin tham gia vào quá trình tạo phản ứng miễn dịch chống lại các loài gây bệnh (nấm men, nấm mốc …). Chitin đã được ứng dụng rất nhiều ở các lĩnh vực khác nhau. Về lĩnh vực y học, từ rất sớm, người ta đã nhận ra chúng có khả năng chữa lành các vết thương. Vào giữa những năm 50 của thế kỷ 20, các đường khâu vết thương có phủ Chitin đã được sử dụng và đã làm tăng khả năng chữa trị vết thương lên tới 35-50%. Năm 1970, trường đại học Delaware đã nghiên cứu về phương pháp để tách các sợi Chitin tinh khiết. Các công ty của Nhật Bản đã mua lại bằng sáng chế này, những sợi dùng khâu vết thương bằng Chitin tinh khiết vẫn đang được sử dụng. Hơn nữa nguyên liệu này còn được sử dụng để bó các vết bỏng, bề mặt vết thương, trên vết cắt da của người cho da. Phương pháp này làm vết thương chóng bình phục hơn, giảm đau hơn so với các phương pháp điều trị thông thường. Ngoài ra, Chitin còn được dùng để sản xuất gạc chống khuẩn, y phục bệnh viện, túi đựng máu nhân tạo, thấu kính bằng chất dẻo, ức chế khối u, ngăn ngừa mảng bám răng, điều chỉnh lượng cholesterol trong máu. Các sản phẩm sử dụng trong gia đình có thể kể đến như: băng gạc, giấy vệ sinh, giấy ăn …. Trong lĩnh vực sản xuất mỹ phẩm có hàng loạt các sản phẩm có chứa Chitin như: phấn trang điểm, thuốc dưỡng móng tay, kem giữ ẩm da mặt, da tay, kem dưỡng thể, kem đánh răng …. Chitin được thêm vào hỗn hợp chứa nước sữa – một sản phẩm của ngành công nghiệp sản xuất pho mát. Nhiều động vật sẽ thấy khó tiêu hóa do hàm lượng lactoza trong nước sữa quá cao nhưng khi có mặt của Chitin, nó sẽ thúc đẩy sự hoạt động của các vi sinh vật có lợi trong bộ máy tiêu hóa sinh enzyme, kết quả là làm cho quá trình tiêu hóa tốt hơn rất nhiều. Các sản phẩm chuyển đổi từ Chitin có ý nghĩa thương mại rất cao nhất là trong sản xuất Chitooligosaccarit (COS). Dẫn xuất quan trọng nhất của Chitin phải kể đến là Chitosan. [...]... trí thí nghiệm nghiên cứu thu nhận chế phẩm enzyme kỹ thu t chitinase Nuôi sinh enzyme chitinase Ly tâm Dịch chứa enzyme -Tác nhân kết tủa: + Loại tác nhân + Nồng độ Kết tủa Chế phẩm enzyme chitinase kỹ thu t 30 1 Nuôi chủng vi khuẩn sinh enzyme chitinase Sau khi tìm được chủng vi khuẩn có hoạt tính enzyme chitinase cao ta đem bảo quản ở nhiệt độ thích hợp Chủng vi khuẩn dùng cho nghiên cứu được bảo... ở cây bông Vi khuẩn trong môi trường nước biển Aeromonas hydrophila sản xuất ChiA Vi khuẩn trong đất theo họ Bacillus sản xuất Chitinase trọng lượng phân tử 25-29 kDa Ba đồng dạng của Chitinase (L, M, S) được tinh chế từ vi khuẩn ưa nhiệt Bacillus sp Thu được exochitinase chịu nhiệt từ B.steraothermopholus phân lập từ phân compost chứa phế thải tôm của trong nông nghiệp Phân lập bốn dạng Chitinase chịu... điểm hoạt động của mỗi loại enzyme mà có thể khai thác chúng để sản xuất những hợp chất có nguồn gốc từ Chitin nhằm thu lại lợi ích thực tiễn 1.4 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ CHITINASE 1.4.1 Các công trình nghiên cứu ngoài nước Theo nghiên cứu của Masaru Mitsutomi (1997) đã nghiên cứu chitinase 19 (chitinase C-1) được chiết rút từ vi khuẩn streptomyces griseus HUT 6037 Enzyme chitinase C-1 là enzyme loại endo... điều khiển được hoạt động của nó theo các mục đích khác nhau của quá trình sản xuất [4] 1.3 ENZYME CHITINASE: PHÂN LOẠI VÀ CƠ CHẾ TÁC ĐỘNG 1.3.1 Phân loại hệ thống enzyme thủy phân Chitin: Enzyme thủy phân Chitinase là enzyme thu c hệ thống enzyme thủy phân (glycosyhydrolasa) Đến năm 2004, số lượng họ enzyme glycosyhydrolasa đã tìm được là 97 họ Chitinase thu c về họ 18 và 19 của glycosyhydrolasa [25]... Fukazawa đã nghiên cứu tinh chế và xác định tính chất của chitinase từ đậu tương (Báo cáo Khoa học Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc, Hà Nội) Cũng trong năm 1999, Nguyễn Thị Thu Trang, Nguyễn Lân Dũng đã nghiên cứu khả năng sinh tổng hợp chitinase của chủng vi khuẩn Bacillus Q3 có hoạt tính kháng nấm cao Trong nghiên cứu đã phân lập được 22 chủng vi khuẩn có khả năng phân giải chitin từ mẫu đất nông... thương mại của Chitinase vi khuẩn, cho nên vi c sử dụng vi sinh vật phân giải Chitin sẽ mở ra những triển vọng rất lớn trong vi c nghiên cứu và sản xuất 1.3.2 Cơ chế tác động của enzyme thủy phân Chitin: Hình 6: Cơ chế tác động của enzyme thủy phân Chitin IM: Màng trong (Inner membrain) OM: Màng ngoài (Outer membrain) Nói chung, sự phân giải Chitin của các vi sinh vật đều bắt nguồn từ sự tiết enzyme depolymease... LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI T ƯỢNG VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 2.1.1 Đối tượng Chủng vi khuẩn dùng trong nghiên cứu được tuyển chọn từ nhiều chủng vi sinh vật phân lập từ các mẫu đất trong đảo, vùng ven bờ biển thu c Khánh Hoà: Hồ cá Trí Nguyên, hòn Một, suối nước nóng Ninh Hoà, Trường Xuân - Ninh Hoà, hòn Chồng, bãi Dương, trại nuôi trồng thu sản - Cam Ranh 2.1.2 Vật liệu 1) Hoá chất  Các hóa... enzyme papain từ đu đủ, enzyme cellulase từ xạ khuẩn Trang Sĩ Trung (2005), nghiên cứu ứng dụng chitosan làm chậm quá trình phân rã của thức ăn tôm trong môi trường ao nuôi Một số nghiên cứu đã được triển khai như :Nghiên cứu thử nghiệm thu nhận chế phẩm enzyme chitinase kỹ thu t từ Streptomyces griceus Nghiên cứu enzyme chitinase từ nấm mốc Trichoderma harzianum và ứng dụng chúng trong một số lĩnh vực... Chitobiase [(NAG)2)] bởi enzyme Chitobiosidase; hoặc phân cắt Chitotriose [(NAG)3)] bởi enzyme Chitotriodase, từ các đầu tận cùng của chuỗi Chitin [23] - Ngoài endoChitinase và exoChitinase, sinh vật phân giải còn có Chitobiase, enzyme thủy phân Chitin hạng 3 nhằm biến đổi dimer NAG thành các monome Họ enzyme Chitinase 18 xuất hiện ở vi khuẩn, nấm và ở động vật, Chitinase thu c họ này được phân loại thành lớp... nhau về cơ chế acid-bazo * Vi khuẩn sinh enzyme Chitinase: Chitinase do vi khuẩn sinh ra có mặt trong các môi trường khác nhau như: nước, đất, phân trộn … Vi khuẩn sinh chitinase được sử dụng cho mục đích dinh dưỡng và mục đích kí sinh [5] Trong đó Bacillus và Streptomyces được nghiên cứu một cách sâu sắc về khả năng sản xuất mạnh Chitinase Một số vi khuẩn Gr – có hoạt tính thủy phân Chitin bao gồm: Aeromonas, . hiện đề tài: Nghiên cứu thu nhận enzyme chitinase của vi khuẩn phân lập từ đất thu c tỉnh Khánh Hoà. Mục đích của luận văn: Nghiên cứu chủng vi khuẩn có khả năng sinh enzyme chitinase ngoại. HỌC NHA TRANG KHOA CHẾ BIẾN o0o NGUYỄN THU NHƯỜNG NGHIÊN CỨU THU NHẬN ENZYME CHITINASE CỦA VI KHUẨN PHÂN LẬP TỪ ĐẤT THU C TỈNH KHÁNH HOÀ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH:. tinh chế từ vi khuẩn ưa nhiệt Bacillus sp. Thu được exochitinase chịu nhiệt từ B.steraothermopholus phân lập từ phân compost chứa phế thải tôm của trong nông nghiệp. Phân lập bốn dạng Chitinase